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1、
5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（10 ml）
（本方案摘自《蛋白質(zhì)技術(shù)手冊》汪家政、范明）
組分：Tris-HCl pH6.8（60 mM）；SDS （2%）；溴酚蘭（0.1%）；甘油（25%）；β-巰基乙醇（14.4 mM）
配制過程：
1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油5 ml；10%的SDS溶液2 ml；1%的溴酚蘭1 ml；
2. 加入去離子水定容至10 ml；
3. 分裝；
4. 在4℃可保存數(shù)周，-20℃可保存數(shù)月之久。
你還可以參考下面這個配方：
2×SDS凝膠加樣緩沖液 組分（摘自
2、《分子克隆》第三版）
Tris-HCl pH6.8（100 mM）；SDS （4%）；溴酚蘭（0.2%）；甘油（20%）；β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇（200 mM）
不含硫代試劑的加樣Buffer可在室溫保存。β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇臨用前加入。
我想配點兒5X的loading buffer, 分子克隆上寫著10%SDS，我的配制思路是（200ml）25ml1M Tris pH6.8, 20gSDS, 及1g溴酚藍配制到100mL，然后再加100ml甘油，但是問題是20gSDS要溶解到那么小體積的水中實在是困難，我把SDS溶解（其實大部分是不溶的）放到65度烘箱里，放大概幾個小時，S
3、DS倒是溶了，但是變得非常黏稠，搖都搖不動的那種，跟果凍似的，請問這樣配法是不是正確，如果不正確應(yīng)該怎樣配，請配過的大蝦教教我，最好有詳細配制流程。
5X的loading buffer已經(jīng)配制成功，雖然SDS很難溶，但還是溶了。。。因為5X的上樣量可以大一些，做western的時候比較有用，2X的我有配好的，呵呵
我想說以下幾點：
1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的，5X loading buffer確實過于粘稠，且SDS在低溫下難溶于水，這就導(dǎo)致你配的buffer“搖都搖不動”了
2.不知你為何要配那么多l(xiāng)oading buffer（況且是5X
4、的），這些東西都是用量很少的，建議你少配些，比如……10 ml？
3.以下就以2X loading buffer（配制10 ml）為例說明配制步驟
首先配制1 mol/L Tris-HCl(pH6.8)，10%SDS溶液。
然后稱取0.02 g溴酚藍于小燒杯里，依次加入1 mol/L Tris-HCl(pH6.8) 1ml，10%SDS溶液4ml，甘油2ml，去離子水2ml，2-巰基乙醇1ml?；靹?，分裝成小份，-20度保存。用時溶解，與樣品1:1混合上樣。
需要說明的是，2-巰基乙醇是還原劑，也可用前加入，以防失效。
5×SDS-PAGE Loading Buffe
5、r TAKARA select
組分濃度：
· 250mM Tris-HCl（PH6.8）;
· 10%（W/V） SDS；
· 0.5%（W/V） BPB；
· 50%（V/V）甘油；
· 5%（V/V） 巰基乙醇（2-ME）
配制量：
· 5ml
配制方法：
1. 量取試劑（1M Tris-HCl（PH6.8） 1.25ml；SDS 0.5g；BPB 25mg；甘油 2.5ml），置于10ml 塑料離心管中。
2. 加去離子水溶解后定容至5ml。
3. 小份分裝后室溫保存。
4. 使用前加入2-ME（50ul/1ml）
5. 加入2-ME的Loading B
6、uffer可在室溫保存一個月左右。
5XSDS上樣緩沖液
0.5 mol/L Tris·HCl（pH6.8） 2.5ml 緩沖
二硫叔糖醇（DTT，MW154.5） 0.39g 維持蛋白穩(wěn)定
SDS 0.5g 形成SDS-PRO復(fù)合物，使pro帶負電
溴酚藍 0.025g 示蹤指示劑
甘油 2.5ml 增加樣品比重，利于加樣（膠中甘油可減少
電滲
· 我用的是10ml:
0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8) 1.0 ml
甘油 1.0ml
20%SDS(w/v) 1.0ml
β-巰基乙醇 0.5ml
0.1%溴酚藍（w/v） 0.25ml
雙蒸水 6
7、.25ml
· dog002?(2014-7-07 17:56:00)
My 2XSDS sample bffer配方是：
2.4 ml 0.5mol/L Tris-HCl(pH6.8)
4 ml 10% SDS
2ml 甘油
0.5ml 0.5% 溴酚藍
0.1 ml 雙蒸水
β-mercaptoethanol
必須在水浴之前新鮮加入， 終濃度是10%
5X Sample buffer (loading buffer):
10% w/v SDS
10 mM Dithiothreitol, or beta-mercapto-ethanol
20 % v/v Glycerol
0.2 M Tris-HCl, pH 6.8
0.05% w/v Bromophenolblue
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僅供借鑒#
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