2019高考生物二輪復(fù)習(xí) 專題九 現(xiàn)代生物科技專題 考點(diǎn)1 基因工程學(xué)案

《2019高考生物二輪復(fù)習(xí) 專題九 現(xiàn)代生物科技專題 考點(diǎn)1 基因工程學(xué)案》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《2019高考生物二輪復(fù)習(xí) 專題九 現(xiàn)代生物科技專題 考點(diǎn)1 基因工程學(xué)案（9頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 考點(diǎn)?1 基因工程 1．基因工程的?3?種基本工具 (1)限制性核酸內(nèi)切酶：識別特定核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)上切割?DNA?分子。 (2)DNA?連接酶：①E·coli?DNA?連接酶只能連接黏性末端；②T4?DNA?連接酶能連接黏性末端 和平末端。 (3)載體：①能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)

2、定存在并大量復(fù)制；②有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；③具 有特殊的標(biāo)記基因，以便對含目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選。 1 ?延伸：70～75??℃，在熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq?酶) 提醒 (1)限制酶≠DNA?酶≠解旋酶 限制酶是切割某種特定的脫氧核苷酸序列，并使兩條鏈在特定的位置斷開；DNA?酶是將?DNA 水解為基本組成單位；解旋酶是將?DNA?的兩條鏈間的氫鍵打開形成兩條單鏈。 (2)使用限制酶的注意點(diǎn)：a.一般用同種限制酶切割載體和目的基因；b.不同的限制酶也能 切割出相同的黏性末端。 (3)DNA?連接酶≠DNA?聚合酶

3、 DNA?連接酶連接兩個(gè)?DNA?片段，而?DNA?聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈 上。 2．基因工程的操作流程 (1)目的基因的獲取：①從基因文庫中獲取。②利用?PCR?技術(shù)擴(kuò)增。③化學(xué)方法人工合成。 提醒 ①PCR?技術(shù)擴(kuò)增 a．原理：DNA?雙鏈復(fù)制。 b．條件：模板?DNA、引物、游離的脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定?DNA?聚合酶。 ì變性：90～95?℃，DNA解鏈 ??↓ c．過程í復(fù)性：55～60?℃，引物與單鏈DNA結(jié)合 ↓ ? 作用下合成子鏈 ②化學(xué)方法人工合成：已知核苷酸序列的較小基因，直接利用 DNA

4、?合成儀用化學(xué)方法合 成，不需要模板。 (2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建——重組質(zhì)粒的構(gòu)建 ①基因表達(dá)載體的組成 ②構(gòu)建過程 提醒 ①基因工程中的載體與細(xì)胞膜上的載體不同。 2 ②啟動(dòng)子、終止子 a．啟動(dòng)子(DNA?片段)≠起始密碼子(位于?mRNA?上)。 b．終止子(DNA?片段)≠終止密碼子(位于?mRNA?上)。 ③目的基因插入位置：啟動(dòng)子與終止子之間。 (3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 根據(jù)受體

5、種類確定基因工程的受體細(xì)胞及導(dǎo)入方法。 ①植物：植物體細(xì)胞或受精卵——導(dǎo)入方法常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法、基因槍法 (本法針對單子葉植物)。 ②動(dòng)物：受精卵——導(dǎo)入方法為顯微注射法。 ③微生物：細(xì)菌——導(dǎo)入方法為感受態(tài)法。 (4)目的基因的檢測與鑒定的方法 ①檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞：DNA?分子雜交技術(shù)。 ②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出?mRNA：分子雜交技術(shù)。 ③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原—抗體雜交技術(shù)。 ④個(gè)體生物學(xué)水平鑒定：根據(jù)表達(dá)性狀判斷。 3．蛋白質(zhì)工程

6、 3 1．(2018·全國Ⅰ，38)回答下列問題： (1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌 細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了__________________ ________________________________________________________________________ _

7、_____________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。 (2)體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^?Ca2＋參與的________方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組的噬菌 體?DNA?通常需與______________組裝成完整噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌 體?DNA?導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是 ________。 (3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會被降解。為 防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用

8、?________________的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，在蛋白 質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加________的抑制劑。 答案 (1)體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá) (2)轉(zhuǎn) 化 外殼蛋白(或噬菌體蛋白) 細(xì)菌 (3)蛋白酶缺陷型 蛋白酶 解析 (1)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌中，該過程利用的技術(shù)是 基因工程。該研究除了證明質(zhì)?？勺鳛檩d體外，還證明了體外重組的質(zhì)粒可以進(jìn)入受體細(xì) 胞，真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)等。(2)重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞可采用?Ca2＋參與 的轉(zhuǎn)化方法；體外重組噬菌體要通過將體外重

9、組的噬菌體?DNA?和外殼蛋白(或噬菌體蛋白) 進(jìn)行組裝獲得；因?yàn)槭删w是專門寄生在細(xì)菌中的病毒，所以宿主細(xì)胞選用細(xì)菌。(3)為防 止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞；在蛋白質(zhì)純化 過程中，為防止目的蛋白質(zhì)被降解，需要添加蛋白酶的抑制劑。 方法技巧 (1)基因工程常用工具有?3?種——限制酶、DNA?連接酶、載體；(2)常用載體有?3 種——質(zhì)粒、λ?噬菌體衍生物、動(dòng)植物病毒；(3)獲取目的基因有?3?種方法——基因文庫、 PCR?擴(kuò)增、人工合成；(4)常用?3?類受體細(xì)胞及導(dǎo)入方法：植物細(xì)胞——農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；動(dòng) 物細(xì)胞—

10、—顯微注射法；微生物細(xì)胞——Ca2＋處理轉(zhuǎn)化法。 2．(2017·全國Ⅰ，38)真核生物基因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒有，原核生物 沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應(yīng)的?RNA?序列的機(jī)制。已知在人體中基因?A(有內(nèi)含子) 可以表達(dá)出某種特定蛋白(簡稱蛋白?A)。回答下列問題： (1)某同學(xué)從人的基因組文庫中獲得了基因?A，以大腸桿菌作為受體細(xì)胞卻未得到蛋白?A， 其原因是________________________________________________________________ _________________________

11、_______________________________________________。 (2)?若?用?家?蠶?作?為?表?達(dá)?基?因?A?的?受?體?，?在?噬?菌?體?和?昆?蟲?病?毒?兩?種?載?體?中?，?不?選?用 4 ________________作為載體，其原因是_____________________________________。 (3)若要高效地獲得蛋白?A，可選用大腸桿菌作為受體，因?yàn)榕c家蠶相比，大腸桿菌具有 ________________(答出兩點(diǎn)即可)等優(yōu)點(diǎn)。 (4)若要檢測基因?A?是否翻譯出蛋白?

12、A，可用的檢測物質(zhì)是________________(填“蛋白?A?的 基因”或“蛋白?A?的抗體”)。 (5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)為證明?DNA?是遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻(xiàn)，也可以說是 基因工程的先導(dǎo)，如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示 是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。

13、 答案 (1)基因?A?有內(nèi)含子，在大腸桿菌中，其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對應(yīng)的?RNA?序列不 能被切除，無法表達(dá)出蛋白?A (2)噬菌體 噬菌體的宿主是細(xì)菌，而不是家蠶 (3)繁殖 快、容易培養(yǎng) (4)蛋白?A?的抗體 (5)DNA?可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體 解析 (1)細(xì)菌是原核生物，原核生物沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應(yīng)的?RNA?序列的 機(jī)制，將完整的基因?A?導(dǎo)入大腸桿菌后，無法表達(dá)出蛋白?A。 (2)噬菌體是細(xì)菌病毒，專門寄生在細(xì)菌體內(nèi)；家蠶是動(dòng)物。因此用家蠶作為表達(dá)基因?A?的 受體，不選用噬菌體作為載體。

14、(3)原核生物常作為基因工程中的受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較 少，最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌。 (4)檢測目的基因?A?是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體 進(jìn)行抗原—抗體雜交。 (5)艾弗里實(shí)驗(yàn)表明加熱殺死的?S?型細(xì)菌的?DNA?可轉(zhuǎn)入?R?型菌中，這充分顯示“DNA?可以從 一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體”，因此，可為基因工程理論的建立提供啟示。 方法技巧 (1)基因組文庫中目的基因因有內(nèi)含子部分，所以在真、原核細(xì)胞之間只能部 分基因可以交流，但?cDNA?文庫中基因無內(nèi)含子部分，可以在不同物種之

15、間交流。(2)病毒 做載體時(shí)，運(yùn)載目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞時(shí)具有特異性。?(3)要提取細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)如?mRNA、 色素、H2O2?酶等要做的是破碎細(xì)胞這一步，常用的方法為研磨，為研磨充分常加?SiO2。 3．(2017·全國Ⅱ，?38)幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水 解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉? 題： (1)在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的?mRNA，常選用嫩葉而不選用 老葉作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是___________________________________

16、______________。 提取?RNA?時(shí)，提取液中需添加?RNA?酶抑制劑，其目的是__________________________。 (2)以?mRNA?為材料可以獲得?cDNA，其原理是________________________________ 5 ________________________________________________________________________。 (3)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w 細(xì)胞，原因是__________________

17、____________________________________________ ______________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。 (4)?當(dāng)?幾?丁?質(zhì)?酶?基?因?和?質(zhì)?粒?載?體?連?接?時(shí)?，?DNA?連?接?酶?催?化?形?成?的?化?學(xué)?鍵?是 __________________。 (5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提 高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是_______________________

18、________________ ________________________________________________________________________。 答案 (1)嫩葉中基因表達(dá)強(qiáng)烈，相應(yīng)的?mRNA?多(或嫩葉組織細(xì)胞易破碎?) 防止提取的 mRNA?被?RNA?酶降解 (2)在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以?mRNA?為模板按照堿基互補(bǔ)配對原則合成 cDNA (3)質(zhì)粒載體中有啟動(dòng)子、終止子，便于目的基因的表達(dá)；質(zhì)粒中有標(biāo)記基因，便于 篩選；質(zhì)粒中含有復(fù)制原點(diǎn)等 (4)磷酸二酯鍵 (5)幾丁質(zhì)酶基因沒有轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的?mRNA 沒有翻譯

19、 解析 (1)由于嫩葉中幾丁質(zhì)酶轉(zhuǎn)錄的?mRNA?較多，因此在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，常選用嫩 葉而不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料。提取RNA?時(shí)，提取液中需添加?RNA?酶抑制劑，其目的是防止 提取的?mRNA?被?RNA?酶降解。 (2)以?mRNA?為材料可以獲得?cDNA，原理是?mRNA?可根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則逆轉(zhuǎn)錄為?cDNA。 (3)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w 細(xì)胞，原因是質(zhì)粒載體中有啟動(dòng)子、終止子，便于目的基因的表達(dá)；質(zhì)粒中有標(biāo)記基因， 便于篩選；質(zhì)粒中含有復(fù)制原點(diǎn)等。 (4)DNA?連接酶催

20、化形成的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵。 (5)基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)步驟，若獲得的轉(zhuǎn)基因植株?(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植 物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高，其可能的原因是幾丁質(zhì)酶基因沒有轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的 mRNA?沒有翻譯。 4．(2018·湖北七市教科研協(xié)作體高三聯(lián)考?)?基因工程是從分子水平對基因進(jìn)行操作，從 而實(shí)現(xiàn)人們定向改造生物，得到人們所需要的生物性狀或生物產(chǎn)品的技術(shù)。目的基因的獲 取是基因工程的第一步，常見的方法是構(gòu)建基因組文庫。請分析并回答下列問題： (1)構(gòu)建基因組文庫的一般步驟： ①提取某種生物體內(nèi)的?________________

21、__，用適當(dāng)?shù)南拗泼柑幚恚玫揭欢ǚ秶笮〉? DNA?片段； ②DNA?片段分別與載體結(jié)合，得到重組載體； ③重組載體導(dǎo)入到________的群體中儲存，基因組文庫構(gòu)建完成。 (2)與基因組文庫相比，cDNA?文庫的基因數(shù)相對要少。其原因是_____________________ 6 →發(fā) 導(dǎo) 乙肝病毒――???有關(guān)基因――???細(xì)菌――???大量生產(chǎn)疫苗離分 入 酵 ______________________________________________。 (3)載體與?DNA?片段結(jié)合前，需要使用同種限制酶處理。其目的是_

22、__________________ _____________________________________________________。 (4)將重組?DNA?導(dǎo)入受體菌之前，常用________處理，提高導(dǎo)入的成功率。 答案 (1)①全部?DNA?或全部基因 ③受體菌 (2)cDNA?文庫只能收集到生物發(fā)育到某時(shí)期已發(fā)生轉(zhuǎn)錄的基因，而基因組文庫能收集到全 部基因 (3)以獲得與?DNA?片段相同的黏性末端 (4)Ca2＋ 解析 (1)構(gòu)建基因組文庫的一般步驟為： ①提取某種生物體內(nèi)的全部?DNA?或全部基因，用適當(dāng)?shù)南拗泼柑幚恚玫揭欢ǚ秶?/p>

23、大小的 DNA?片段； ②DNA?片段分別與載體結(jié)合，得到重組載體； ③重組載體導(dǎo)入到受體菌的群體中儲存，基因組文庫構(gòu)建完成。 (2)cDNA?文庫只能收集到生物發(fā)育到某時(shí)期已發(fā)生轉(zhuǎn)錄的基因，而基因組文庫能收集到全 部基因，因此與基因組文庫相比，cDNA?文庫的基因數(shù)相對要少。 (3)載體與?DNA?片段結(jié)合前，需要使用同種限制酶處理，以獲得與?DNA?片段相同的黏性末 端。 (4)將重組?DNA?導(dǎo)入受體菌群之前，常用鈣離子(Ca2＋)處理，以提高導(dǎo)入的成功率。 5．(2018·菏澤高三模擬)乙肝病毒是一種?DNA?病毒。中國的乙肝病毒攜

24、帶者約占總?cè)丝诘? 10%。我國科學(xué)家通過基因工程生產(chǎn)出乙型肝炎病毒疫苗，為預(yù)防乙肝提供了有力的保障。 回答下列問題： (1)乙肝病毒專一侵染肝細(xì)胞的原因是________________________________________ ________________________。 (2)乙肝病毒的基因組可編碼的蛋白質(zhì)及功能如下：Core?蛋白是外殼蛋白；Pre—core?與抑 制宿主的免疫反應(yīng)有關(guān)；X?蛋白與病毒復(fù)制有關(guān)；S?蛋白是病毒的包膜蛋白，與病毒進(jìn)入細(xì) 胞有關(guān)。通過基因工程生產(chǎn)的乙肝疫苗的有效成分是上述病毒蛋白中的 ________

25、________________________________________________________________。 (3)通過基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗的過程如圖所示： ① ② ③ → → a．若要獲得大量的目的基因，可采用 PCR?技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，該技術(shù)中使用的引物有 ________________________________________________________________________種?，?其 作用是_____________________________________________________________

26、_______。 b?．?在?①②?過?程?中?需?使?用?的?工?具?酶?是?________________?。?②?過?程?中?常?用?的?載?體?是 ________________。 7 c．為提高②過程的轉(zhuǎn)化效率，常采用的方法是______________________________。 (4)使用酵母菌作為受體菌生產(chǎn)乙肝疫苗的效果更好，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角度分析，原因是 ____________________。 答案 (1)肝細(xì)胞表面有乙肝病毒的受體 (2)Core?蛋白和?S?蛋白 (3)a.2 使?DNA?聚合酶

27、 能夠從引物的結(jié)合端開始連接脫氧核苷酸 b．限制酶和?DNA?連接酶 質(zhì)粒 c．用?Ca2＋ (CaCl2)溶液處理細(xì)菌 (4)酵母菌具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，可以對核糖體合成的肽鏈進(jìn)行 剪切、折疊、加工、修飾等處理 解析 據(jù)題圖分析可知，①表示從乙肝病毒中分離有關(guān)抗原基因；②過程包括基因表達(dá)載 體的構(gòu)建以及導(dǎo)入細(xì)菌；③可用特定抗體篩選含目的基因的細(xì)菌，并作為微生物發(fā)酵的工 程菌。 (1)由于肝細(xì)胞表面有乙肝病毒的受體，所以乙肝病毒專一侵染肝細(xì)胞。 (2)根據(jù)題意分析可知，乙肝病毒作為抗原的部分應(yīng)該是其外殼蛋白和包膜蛋白，即通過基 因工程生產(chǎn)的乙肝

28、疫苗的有效成分是上述病毒蛋白中的?Core?蛋白和?S?蛋白。 (3)a.PCR?技術(shù)中，需要?2?種不同的引物，使?DNA?聚合酶能夠從引物的結(jié)合端開始連接脫氧 核苷酸。 b．在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程中，需要使用的工具酶是限制酶和?DNA?連接酶，常用的載體 是質(zhì)粒。 c．為了提高將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率，常用?Ca2＋(CaCl2)溶液處理細(xì)菌，使之成為 感受態(tài)細(xì)胞。 (4)酵母菌具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，可以對核糖體合成的肽鏈進(jìn)行剪切、折疊、加工、修飾 等處理，因此使用酵母菌作為受體菌生產(chǎn)乙肝疫苗的效果更好。 6．(2018·咸陽二模

29、?)科學(xué)家從某細(xì)菌中提取抗鹽基因，轉(zhuǎn)入煙草并培育成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙 草。下圖是轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程，含目的基因的?DNA?和質(zhì)粒上的實(shí)線箭頭表示相關(guān) 限制酶的酶切位點(diǎn)，虛線箭頭表示轉(zhuǎn)錄的方向。請分析回答下列問題： (1)在該過程中，研究人員首先獲取了抗鹽基因(目的基因)，并采用______________技術(shù)對 目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，該技術(shù)需要的條件是?______________、酶、原料、模板，該技術(shù)必須 用__________________酶；然后構(gòu)建基因表達(dá)載體，基因表達(dá)載體中除了具有目的基因、

30、 啟動(dòng)子和終止子之外，還需具有__________________。 (2)?用?圖?中?的?質(zhì)?粒?和?目?的?基?因?構(gòu)?建?重?組?質(zhì)?粒?，?不?能?使?用?Sma?Ⅰ?酶?切?割?，?原?因?是 8 ____________________________。圖中①②過程為防止質(zhì)粒和含目的基因的外源?DNA?片段 自身環(huán)化，應(yīng)選用____________________酶對外源?DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割。 (3)為確定轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草是否培育成功，可用放射性同位素標(biāo)記的____________作探針進(jìn) 行分子雜交檢測，還需要在個(gè)體水平

31、上鑒定，后者具體過程是______________________ ________________________________________________________________________。 答案 (1)PCR(或多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 引物 熱穩(wěn)定?DNA?聚合(或?Taq) 標(biāo)記基因 (2)SmaⅠ 會破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源?DNA?中的目的基因?BamHⅠ和?HindⅢ (3)抗鹽基因(或目的 基因) 將培育的煙草幼苗栽培于含有一定鹽的土壤中，觀察煙草植株的生長狀態(tài) 解析 (1)在該過程中，研究人員首先獲取了抗鹽基因?(目的基因)，并采用

32、?PCR(或多聚酶 鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)對目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，該技術(shù)需要的條件是引物、酶、原料、模板，該技術(shù) 必須用熱穩(wěn)定?DNA?聚合酶；然后構(gòu)建基因表達(dá)載體，基因表達(dá)載體中除了具有目的基因、 啟動(dòng)子和終止子之外，還需具有標(biāo)記基因。 (2)從圖中信息可知，SmaⅠ酶的切割位點(diǎn)位于目的基因和?M?抗生素抗性基因上。分析抗鹽 基因的?DNA?片段，可知該?DNA?含四種限制酶切點(diǎn)，其中?SmaⅠ位于目的基因上，不宜采用。 EcoRⅠ位于目的基因兩側(cè)，若用?EcoRⅠ切割則目的基因會自身環(huán)化。BamH?Ⅰ與?HindⅢ位于 目的基因兩端，且質(zhì)粒中也有相應(yīng)的適合的切割位點(diǎn)，因此用BamH?Ⅰ和?HindⅢ才能完整地 切下該抗鹽基因，同時(shí)防止自身環(huán)化，保證目的基因與質(zhì)粒連接方式的唯一性。 (3)為確定轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的抗鹽基因(或目的基因) 作探針進(jìn)行分子雜交檢測，又要在個(gè)體水平上鑒定，后者具體過程是將培育的煙草幼苗栽培 于含有一定鹽的土壤中，觀察該煙草植株的生長狀態(tài)。 秀 9