《藥物分析》第12章：維生素類藥物的分析.ppt

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1、第12章 維生素類藥物的分析,維生素： 是維持人體正常代謝所必需的一類微量元素 分類： 脂溶性：維生素A、維生素D2、D3、維生素E、維生素K1； 水溶性： B族 (維生素B1、B2、B6、B12)、維生素C、葉酸、煙酸和煙酰胺,,第1節(jié) 維生素A的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),維生素A的醋酸酯,具有共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯,二、鑒別試驗(yàn),1.三氯化銻反應(yīng) ：維生素A在飽和無(wú)水三氯化銻的無(wú)醇三氯甲烷溶液中，顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。 溶劑采用飽和無(wú)水三氯化銻的無(wú)醇氯仿溶液。 2.光譜法 ：維生素A分子中含5個(gè)共軛雙鍵，其無(wú)水乙醇液在326nm波長(zhǎng)處有最大吸收。 3.色譜法 ：英國(guó)藥典（BP）和美國(guó)藥

2、典（USP）中維生素A 采用薄層色譜法鑒別,維生素A的紫外光譜圖,圖12-1,三、含量測(cè)定,中國(guó)藥典 2005版：采用紫外-可見分光光度法測(cè)定維生素A 及其制劑的含量，以單位表示。 制劑：由于制劑中含有稀釋用油和維生素A 原料藥中混有其他雜質(zhì)，采用紫外-可見分光光度法測(cè)得的吸光度不是維生素A 獨(dú)有的吸收。在規(guī)定的條件下，非維生素A 物質(zhì)的無(wú)關(guān)吸收所引入的誤差可以用校正公式校正，以便得到正確結(jié)果。,測(cè)定方法 中國(guó)藥典2005版附錄對(duì)維生素A的測(cè)定收載了“第一法”和“第二法”兩種方法。 合成維生素A和天然魚肝油中的維生素A均為酯式維生素A。 如供試品中干擾的雜質(zhì)較少，采用第一法（直接測(cè)定法，適用

3、于高純度的維生素A醋酸酯）測(cè)定；否則按第二法（皂化法，適用于維生素A醇）測(cè)定。,第2節(jié) 維生素B的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),氨基嘧啶環(huán)CH2噻唑環(huán)(季銨堿),維生素B1,B族維生素主要有B1（鹽酸硫胺）、B2（核黃素）、B6（吡多辛）、B12（氰鈷胺）、煙酸及煙酰胺等。本節(jié)主要介紹維生素B1,性質(zhì)：,1.共軛雙鍵：UV （max = 246nm） 2.噻唑環(huán)含S原子：硫色素?zé)晒夥? 分解產(chǎn)物與Pb(AC)2反應(yīng) 3.堿性N原子：嘧啶環(huán) 伯氨 噻唑環(huán) 季銨 可與酸成鹽；可與生物堿沉淀劑反應(yīng)（鑒別和硅鎢酸重量法）,二、鑒別試驗(yàn),1.硫色素反應(yīng) ：維生素B1溶于氫氧化鈉溶液中，噻唑環(huán)被氧

4、化開環(huán)，生成硫醇化合物，經(jīng)鐵氰化鉀氧化成硫色素，產(chǎn)物溶于正丁醇中，顯藍(lán)色熒光，加酸酸化后熒光即消失，再加堿，熒光又復(fù)顯。 2.沉淀反應(yīng)：可與多種生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成不同顏色的沉淀 3.氯化物反應(yīng) ：水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng),三、雜質(zhì)檢查,1.硝酸鹽： 維生素B1在合成時(shí)需要使用硝酸鹽，因此可能會(huì)引入硝酸鹽雜質(zhì)。采用靛胭脂法檢查，限量為0.25%。 2.總氯量： 本品為鹽酸鹽，需檢查總氯量。藥典采用銀量法檢查，按干燥品計(jì)算，含總氯量應(yīng)為20.6%21.2%。,四、含量測(cè)定,中國(guó)藥典2005版規(guī)定 維生素B1原料藥：非水滴定法 （加入醋酸汞消除鹽酸鹽的干擾，喹哪啶紅亞甲藍(lán)混合指示液 ）

5、 片劑、 注射液：紫外分光光度法 （具共軛雙鍵，在紫外區(qū)246nm處有最大吸收 ）,,維生素B1片的含量測(cè)定,取本品20片，精密稱定，研細(xì)， 精密稱取適量（約相當(dāng)于維生素 1 25mg），置100ml 量瓶中，加鹽酸溶液(91000) 約70ml，振搖15分鐘使維生素1 溶解，加鹽酸溶液(91000) 稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置另一100ml量瓶中，再加鹽酸溶液(91000) 稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法在246nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系數(shù)為 421計(jì)算，即得。 計(jì)算：,,,第3節(jié) 維生素C的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),

6、L-抗壞血酸,1.多羥基化合物：具糖類似的性質(zhì) 2. 具連二烯醇結(jié)構(gòu)：強(qiáng)還原性，貯存過(guò)程中易變色 氧化還原滴定法,(O),,3 .酸性：連二烯醇，可與Na2CO3成鹽,4.旋光性：具手性C原子（C4、C5）， L(+)抗壞血酸活性最強(qiáng),二、鑒別試驗(yàn)（2005版中國(guó)藥典）,1.氧化反應(yīng) 與硝酸銀反應(yīng) ：+AgNO3 Ag （黑色） 與2，6-二氯靛酚的反應(yīng) ：+ 2，6-二氯靛酚鈉 藍(lán)色消失 與堿性酒石酸銅的反應(yīng)：維生素C鈉+堿性酒石酸銅 紅色沉淀 2.光譜法 :紅外光譜法,,,,,HCI,三、雜質(zhì)檢查,1.鐵鹽和銅鹽的檢查：原子吸收分光光度法 2.溶液顏色與澄清

7、度的檢查 ：紫外-可見分光光度法，在420nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，不得過(guò)0.03。 3.熾灼殘?jiān)?：不得過(guò)0.1 % 4.重金屬：不得過(guò)百萬(wàn)分之十 5.細(xì)菌內(nèi)毒素（注射劑）,四、含量測(cè)定,直接碘量法： （原料藥及其制劑均采用此法） 1.原理 維生素C具有較強(qiáng)的還原性，在稀醋酸酸性溶液中，可被碘定量氧化，以淀粉為指示劑，終點(diǎn)顯藍(lán)色。 2.注意事項(xiàng)： （1）溶劑：加新沸冷H2O，減少水中溶解氧對(duì)測(cè)定的影響 （2）酸性環(huán)境：HAC，減慢VitC被O2氧化速度 （3）立即滴定：減少O2的干擾 （4）附加劑干擾的排除 片劑 滑石粉 過(guò)濾 注射劑 抗氧劑 ,丙酮,,3.測(cè)定方法,

8、取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過(guò)的冷水100ml 與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml ，立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)色并在30秒鐘內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg 的C6H8O6。 計(jì)算：,,第4節(jié) 維生素D的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),維生素D2,維生素D3,甾醇的衍生物,,主是維生素D2和維生素D3,性質(zhì)： 1.旋光性：具手性碳原子，有旋光性，D2的比旋度為+102.5+107.5；D3比旋度為+105+112。 2.穩(wěn)定性：含有多個(gè)雙鍵，極不穩(wěn)定，在空氣、日光下，遇酸或氧化劑，均能發(fā)生氧化反應(yīng)而變質(zhì)。 3.醋酐-濃硫酸顯色反應(yīng)

9、 ：本品的氯仿溶液，加入醋酐-濃硫酸溶液，搖振后，顯色。 4.紫外吸收特性 ： D2和D3均含共軛體系，有紫外吸收，,二、鑒別試驗(yàn)（2005版藥典）,1.醋酐-濃硫酸顯色反應(yīng) ： 維生素D2或D3 +氯仿+醋酐-濃硫酸 初顯黃色，漸變紅色，迅即變?yōu)樽仙?D2最后成綠色 2.光譜法 ：維生素D2和維生素D3的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜一致。,,,D3再變?yōu)樗{(lán)綠色，最后變?yōu)榫G色,三、雜質(zhì)檢查,維生素D2原料藥中應(yīng)檢查麥角甾醇。 檢查方法：取本品10mg，加90乙醇2ml 溶解后，加洋地黃皂苷溶液（取洋地黃皂苷20mg，加90乙醇2ml ，加熱溶解制成）2ml ，混合，放置18小時(shí)，不得發(fā)

10、生渾濁或沉淀。,四、含量測(cè)定,中國(guó)藥典2005版附錄中收載了維生素D的含量測(cè)定方法 采用高效液相色譜法 分三法,,第一法：無(wú)維生素A醇及其他雜質(zhì)干擾的供試品,第二法：有干擾的,第三法：按第二法處理后前維生素D峰仍受雜質(zhì)干擾，僅維生素D峰可以分離時(shí),維生素D對(duì)光敏感，測(cè)定應(yīng)在暗室中進(jìn)行。,第5節(jié) 維生素E的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),維生素E,苯并二氫吡喃類 帶有脂肪側(cè)鏈R1、R2和乙?；恿u基，又稱生育酚醋酸酯。,性質(zhì)： 1.水解性：乙?；姆恿u基（酯鍵） ，易水解成游離生育酚 2.還原性：游離生育酚易被氧化，遇光易變質(zhì) 3.旋光性：天然具旋光性 合成品無(wú)旋光性 4.紫外吸收：具有苯環(huán),,圖

11、12-2,維生素E的紫外吸收?qǐng)D譜,,0.01%無(wú)水乙醇中 max = 284nm min = 254nm,二、鑒別試驗(yàn),1.硝酸反應(yīng) ： 維生素E在酸性條件下加熱，先水解生成游離生育酚，再進(jìn)一步被硝酸氧化成生育紅而顯橙紅色。 方法：取本品約30mg，加無(wú)水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75加熱約15分鐘，溶液顯橙紅色。 2.光譜法 ：本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照?qǐng)D譜一致。,三、雜質(zhì)檢查,游離生育酚的檢查 ： 1.來(lái)源：制備中未酯化的或貯存中分解的生育酚 2.方法：硫酸鈰滴定法（鈰量法） 3.原理：利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰。終點(diǎn)時(shí)過(guò)量硫酸鈰與二苯胺（指示劑）反應(yīng)，顯藍(lán)色。 取本品0.10g ，加無(wú)水乙醇5ml 溶解后，加二苯胺試液1 滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L) 滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L) 不得過(guò)1.0ml 。,四、含量測(cè)定,中國(guó)藥典2005版： 維生素E及其制劑含量：均采用氣相色譜法。 加校正因子內(nèi)標(biāo)法： 條件： 載氣：N2 固定相：硅烷化硅藻土上涂布硅酮（OV-17） 柱溫：265 檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器(FID) 內(nèi)標(biāo)：正三十二烷 n 500 R2,是樣品中不存在的物質(zhì) 與被測(cè)組分峰靠近 能與各組分完全分離 與被測(cè)組分的量接近,內(nèi)標(biāo)物,,