5.1《DNA的粗提取與鑒定》活動單李百勝

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1、DNA的粗提取和鑒定 知識要點：1. DNA的物理化學性質，尤其是DNA的溶解性; 2?二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。 、DNA的粗提取的原理 思考1 : DNA存在于真核生物細胞的哪些部位？ 思考2 :提取生物大分子的一般思路是什么？ 1、DNA的性質: 在NaCI溶液中的溶解度 對蛋白酶的耐受性 對高溫的耐受性 對洗滌劑的 耐受性 DNA 蛋白質 ①DNA和蛋白質的溶解性、對酶、高溫和洗滌劑的耐受性 ②DNA粗提取的原理有些哪些？ i、 DNA 在 mol/L NaCI 溶液中溶解度最小 ii、DNA不溶于 溶液，

2、而蛋白質等能夠溶解 2、DNA鑒定的原理： 在 的條件下，DNA遇 會被染成 cTSmol/L — 度 、DNA粗提取的主要步驟： 1 '材料選擇： 適于作實驗材的材料：選用 的生物材料；如雞（紅）血，其適 宜作為實驗材料的原因：①雞血（紅）細胞核的易 DNA含量豐富，材料易得；②雞血細胞極 吸水脹破。 哺乳動物紅細胞呢？ 2、主要實驗步驟（以雞血紅細胞為例） ： 廠方法：將5?10mL雞血細胞液 加入20mL 中；用玻棒同方向 攪拌5min ;用3?4紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質過濾； 收 ①破碎細胞，釋放Q

3、 方法：向濾液中加入2倍體積的 ―工詫” * 濾獲取 ；②溶解細胞核二1 內 DNAK ； mol/LNaCI 溶液，攪拌1min ；過 目的：使與DNA結合的_ J 高溶液NaCI溶液中 解聚，釋放出 ;DNA溶解于 注意：按同一方向攪拌

4、 廠方法：沿燒杯壁向濾液中緩慢加入蒸憎水， 并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析出, ③ DNA} 析出 直到 ;可以在玻棒上收集到黏稠物(或過濾或離心收集黏 稠物) 目的：降低NaCI溶液濃度達到 mol/L 皿V左右'使DNA析出 3min，使 .注意：加入的蒸幗水不能過多'使 NaCI溶液濃度過低，DNA又會 :④DNA的? :初步純化： DNA充分溶解；過濾，收集濾液；向濾液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95% 乙醇，并用玻棒按冋一方向緩慢、均勻地攪拌，在玻棒上收集白色絲狀物 (DNA ) 廣方法：向20mL 2mol/LNaCI溶液中加入黏稠物‘并按同一方向攪拌 I

5、原理：DNA不溶于 中，而蛋白質能溶于 歸納：①本實驗中幾次過濾？過濾的目的是什么？ 中O 過濾一： 過濾二： 過濾三：②本實驗中幾次加入蒸館水的目的各是什么？ 第一次：向雞血細胞液中加入蒸綢水，目的： 第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCI溶液中加入蒸f留水，目的： 拓展：1、以菜花為材料進行實驗時，如何獲得核物質？ 取材、剪碎7加入洗滌劑、食鹽7研磨、過濾 ▲加洗滌劑的目的： ▲加入食鹽的目的： 2、 分析教材中方案一、二、三的原理。 方案一： 方案二： 方案三： 3、 探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對 DNA粗提取量的影響（說說實驗思路）

6、 三、 DNA的鑒定： 1、 方法：①取甲、乙兩支試管，并向其中加入 5mL （等量）的2mol/LNaCI溶液；② 向甲試管中加入粗提取的 DNA并攪拌使DNA溶解；③向兩支試管中各加入 4mL （等量） 二苯胺試劑，混勻，沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色（藍色）變化。 2、 注意點：實 驗中需要對照，目的：證明 四、 實驗結果分析與評價 1、 實驗結果評價：是否提取到 DNA ①觀察提取的DNA顏色：如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質較多；②二苯胺鑒定：出現(xiàn)藍色說 明實驗基本成功，如果不呈現(xiàn)藍色，可能所提取的 DNA含量低，或是實驗 操作中出現(xiàn)

7、錯誤，需要重新制備。 2、 粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？ 實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質。 3、 影響絲狀物總量的因素有哪些？ 實驗材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時的NaCI 溶液濃度、實驗方法、攪拌方法（攪拌不當可能破壞 DNA） 五、案例：（快速閱讀、理解步驟原理）以菜花為實驗材料進行【實驗材料準備】將新鮮菜花和體積分 數(shù)為 DNA的粗提取 【提取DNA的具體步驟】 95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室 24 h 1、 取材稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。 2、 研磨 將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。 教材中建議采用

8、洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細胞膜破碎，釋放 學生可以設置對照實驗，比較哪一種方法可以提取到純度更高的高純度的 DNA。一般實驗室提取 DNA都采用一種陽離子去污劑一一十六烷三甲基澳化鞍分離緩沖液， （體積比為24 ： 1） DNA。 碎，同時將DNA與植物中多糖等雜質分開， 再用氯仿一異丙醇混合液 使細胞膜破 抽提去除雜質蛋白，得到高純度的 DNAo  （有條件的學?？蓪? 2?5 min，取上清液放入 95%的預冷乙醇溶液中， ）°沉淀3?5 min后、可 3、過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中 濾液倒入塑料離心管中進行離心，用 10

9、00 r/mi n的轉速，離心 燒杯中）。在4 C冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。 4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數(shù)為并用 見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉，將絮狀物纏繞在玻璃棒上。 八訓練題： '在DNA粗提取的過程中，兩次向燒杯中加入蒸憎水的作用分別是 A. 稀釋血液；沖洗樣品 B .使血細胞破裂；降低氯化鈉的濃度 C.使血細胞破裂；增大DNA的溶解度 D .使血細胞破裂；沖洗樣品 2. 下列實驗中所用試劑錯誤的是 A. 在觀察植物細胞有絲分裂實驗中，使用醋酸洋紅溶液使染色體著色 B. 在提取葉綠體色素實驗中，使用丙酮提取色素 DNA C

10、. 在DNA的粗提取與鑒定實驗中，使用氯化鈉溶液析出 3 D.在蛋白質的鑒定實驗中，使用蘇丹川染液鑒定蛋白質 NaCI的物質量為多少mol/L時，DNA的溶解度最小 4- A. 0.12 B . 0.13C . 0.14 D . 0.15在提嫩酌姍蔽幡苗飜網(wǎng)耐閔的是 A.溶解雜質從細胞核中癩解蛋白質 C .析出DNA .溶解DNA 5. A. NaCI溶液提瑕翻?OW溶液是 A . NaCI溶液 B .酒精C 蒸憎水 .檸檬酸鈉 6. DNA所用的溶液 B .冷卻90%的酒精 .加熱 95%的酒精 D .冷卻95%的酒精 玻

11、璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液（玻璃棒不要直插到燒杯底部 7 .DNA遇一苯胺（沸水?。r，會染成 A .磚紅色B .紅色C .紫色&可以鑒定DNA的物質是 藍色 rm i i A ?斐林試劑B . 95%的酒精C .甲基綠溶液 D9.破譯生苯胺溶液 物基因組DNA的遺傳信息或進行基因操作，首先要提取細胞核DNA下列不適宜作為DNA提取的實驗 材料是 A .雞血細胞 B .蛙的紅細胞 C.人的成熟紅細胞 D .菜花 操作及其作用的表述.正 10 .（多選）下表是尖于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、 確的是 試劑 操作

12、作用 A 檸檬酸鈉溶液 與雞血混合 防止血液凝固 B 蒸館水 與雞血細胞混合 保持細胞形狀 C 蒸館水 加入到溶解有DNA的NaCI中 析出DNA絲狀物 D 冷卻的酒精 加入到過濾后DNA的NaCI中 產(chǎn)生特定的顏色反應 門?（多選）下列矢于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是 A. 溶液中的溶解度 洗滌劑能瓦解細胞膜，同時也能控制DNA在NaCI (I )實驗材料選用雞血球液，而不用雞全血，主要原因是雞血球 (2)在圖A所示的實驗步驟中加蒸憎 Tf 5f島昨液 懸中c所示實驗步娠 (3) 為鑒定實驗所得絲狀物主要成分是 溶液

13、，結果絲 B. 在探究洗滌劑對植物細胞 DNA提取的影響實驗中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細胞 C. 常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍色 D. 將濾 液放在60?75 C的恒溫水浴箱中保溫10?15分鐘能去除濾液中的雜質， 其原 理是利用了 DNA和蛋白質對高溫耐受性的不同 12 ?如圖所示是尖于“ DNA的粗提取和物理性狀觀察”實驗： 液中含有較高含量的 水的目的是 ，通 過圖B所示的步驟取得濾液，再在溶液中加入2 mol/L NaCI溶液的目的是 中加蒸憎水的目的是 。 DNA可滴加 狀物被染成 少年智則國智，少年富則國富，少年強則國強，少年獨立則國獨立，少年自由則國自由，少年進步則國進 步，少年勝于歐洲，則國勝于歐洲，少年雄于地球，則國雄于地球。