高考生物一輪復(fù)習(xí)資料 專題一微生物的利用課件 新人教版選修1

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1、最新考綱1微生物的分離與培養(yǎng)2某種微生物數(shù)量的測定3培養(yǎng)基對微生物的選擇作用4利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用考綱解讀1培養(yǎng)基的種類、營養(yǎng)要求及配制原則2無菌技術(shù)的具體操作及應(yīng)用3運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決微生物的分離與培養(yǎng)等實(shí)際問題知識點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)知識點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)答案：營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖水碳源氮源無機(jī)鹽特殊營養(yǎng)物質(zhì)氧氣 議一議：高溫滅菌的原理是什么？ 答案：高溫可以使菌體細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸變性失活， 從而達(dá)到滅菌的目的。想一想：接種過程為什么要在酒精燈的火焰旁進(jìn)行？答案：因?yàn)檫@里是一個(gè)無菌區(qū)，可以避免雜菌污染。查一查：什么是菌落？它有什么用途？答案：菌落是單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌

2、在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，形成的一個(gè)肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。不同細(xì)菌的菌落在大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等方面的特征不同，它可以作為鑒別菌種的重要依據(jù)。知識點(diǎn)二微生物的利用想一想：什么叫選擇培養(yǎng)基？答案：選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。目的是培養(yǎng)、分離出特定微生物?？匆豢矗豪w維素分解菌篩選的原理是什么？答案：剛果紅可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素，從而使菌落周圍形成透明圈。1培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制

3、時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：各種微生物適宜生長的pH范圍不同，如細(xì)菌為6.57.5，放線菌為7.58.5，真菌為5.06.0，培養(yǎng)不同微生物所需pH不同。2培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成(1)各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽；(2)不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。3配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項(xiàng)(1)倒平板的適宜溫度是50 左右，溫度過高會(huì)燙手，過低培養(yǎng)基又會(huì)凝固；(2)平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，

4、造成污染。4兩種純化細(xì)菌的方法的比較項(xiàng)目優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線法可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延適用于厭氧菌和兼性厭氧菌S161A.TIF小貼士小貼士1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 分類和應(yīng)用劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、鑒定固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化

5、學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類、鑒定用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽)鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素基本營養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽。此外還要滿足不同微生物生長對pH、特殊

6、營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。營養(yǎng)要素來源功能碳源無機(jī)氮源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無機(jī)物構(gòu)成細(xì)胞中的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；既是碳源又是能源有機(jī)碳源糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油、花生粉餅等氮源無機(jī)氮源無機(jī)氮：NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等將無機(jī)氮合成含氮的代謝產(chǎn)物有機(jī)碳源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物生長因子維生素、氨基酸、堿基酶和核酸的組成成分；參與代謝過程中的酶促反應(yīng)提醒微生物最常用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的有機(jī)化合物既是碳源，又是氮源、能源。有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)，生物

7、自己能合成，如大腸桿菌能合成某些維生素，作為特殊營養(yǎng)物質(zhì)。制備：計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板。(2)微生物培養(yǎng)的無菌技術(shù)進(jìn)行無菌操作主要是為了防止外來雜菌的入侵，重點(diǎn)是消毒和滅菌。消毒和滅菌的區(qū)別使用方法結(jié) 果常用的方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法等滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌三種常用滅菌方法的比較 滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌時(shí)間灼燒滅菌接種環(huán)、接種針或其他金屬工具酒精燈火焰的充分燃燒層直至燒紅干熱滅菌玻璃器皿(吸管

8、、培養(yǎng)皿)和金屬用具等干熱滅菌箱內(nèi)，160 170 1 h2 h高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基等高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100 kPa,121 15 min30 min2.微生物的純化培養(yǎng)及菌種的保藏(1)原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。(2)方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種(3

9、)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1 cm2 cm處(2)涂布平板時(shí)涂布器70%酒精消毒，取出用體積分?jǐn)?shù)為時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來的子細(xì)胞群體菌落培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染本考點(diǎn)內(nèi)容常以環(huán)境污染為背

10、景考查微生物的生存條件及分離、純化和培養(yǎng)條件等，復(fù)習(xí)中引起關(guān)注。【典例1】(2011新課標(biāo)全國)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。請回答下面的問題。(1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以_為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上。從功能上講，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即_和_。(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力_。(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、_和_。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈_附

11、近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。解析(1)欲篩選出能降解原油的菌株，則培養(yǎng)基中應(yīng)只含有原油而無其他碳源，不能降解原油的細(xì)菌則在此培養(yǎng)基上不能生存，這類培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。(2)分離純化菌種時(shí)，接種的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，以便于純化菌種。(3)降解原油能力越強(qiáng)的菌株，在菌落周圍形成的分解圈就越大。答案(1)原油選擇(2)平板劃線法稀釋涂布平板法(3)強(qiáng)(4)干熱滅菌高壓蒸汽滅菌火焰知識拓展(1)高溫加熱滅菌，其原理就是使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)變性，而達(dá)到殺滅細(xì)菌的作用。(2)化學(xué)藥劑的滅菌消毒方法，其作用原理是使細(xì)菌體

12、內(nèi)蛋白質(zhì)變性，但是化學(xué)物質(zhì)很難透過孢子或芽孢的堅(jiān)硬外層進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此化學(xué)方法難以消滅孢子和芽孢。(3)體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇?xì)⒕Ч顝?qiáng)。濃度過低，殺菌力弱；濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固形成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其內(nèi)，殺菌效果受影響。對剛洗刷后未干的器皿，則可選擇75%的酒精進(jìn)行消毒。【訓(xùn)練1】(2007江蘇生物，22)不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述中，不正確的是()。A氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素B碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)C無機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)D水是該微生物的營養(yǎng)要素之一解析以CO2為唯一碳源可知該

13、微生物為自養(yǎng)型微生物，可以利用CO2合成有機(jī)物，該無機(jī)碳源不能為微生物提供能量，其能源來自于光能或分解有機(jī)物釋放出的化學(xué)能。答案B【訓(xùn)練2】如右圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列操作方法正確的是()。A操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌B劃線操作須在火焰上進(jìn)行C在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌解析在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法是在火焰上灼燒，接種時(shí)劃線操作是在火焰旁進(jìn)行。在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落。答案D1測定微生物數(shù)量的方法(1)直接計(jì)數(shù)法：常用的是顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。(

14、2)間接計(jì)數(shù)法：常用的是稀釋平板計(jì)數(shù)法。2測定微生物數(shù)量方法的實(shí)際應(yīng)用(1)土壤中好氧型細(xì)菌的計(jì)數(shù)制備土壤稀釋液：取土壤表層35 cm處的土樣；制備系列稀釋液。特定微生物的數(shù)量的測定特定微生物的數(shù)量的測定 (4)土壤中分解尿素細(xì)菌的計(jì)數(shù)某些細(xì)菌中含有尿素分解酶，能將培養(yǎng)基中的尿素分解成氨，該物質(zhì)的水溶液會(huì)使酚酞指示劑呈現(xiàn)紅色。3制備系列稀釋液的方法將1 g土樣放入99 mL無菌水中，制成102倍的稀釋液，用1 mL無菌移液管吸取上述濃度的溶液0.5 mL，移入裝有4.5 mL無菌水的試管中，即配制成103倍的稀釋液，用同樣的方法可以配制成104、105、106倍的稀釋液。將待測樣品進(jìn)行稀釋的目

15、的是使微生物細(xì)胞分散開，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更接近真實(shí)值。本考點(diǎn)多與微生物的生存及培養(yǎng)結(jié)合在一起考查。 【典例2】(2009廣東中山一中測試)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是()。A涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250，取平均值233解析在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂

16、布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，此時(shí)，不能簡單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。答案D知識拓展(1)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)在同一稀釋度下，至少對3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目，如果某個(gè)平板的菌落數(shù)與其他差別甚遠(yuǎn)，說明該平板操作過程中出現(xiàn)失誤，應(yīng)舍棄。(3)統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示?！居?xùn)練3】(2011煙臺模擬)可以鑒定出分解尿

17、素的細(xì)菌的方法是()。A以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹試劑D以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑解析在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中，不能分解尿素獲得氮源的細(xì)菌不能生長，而分解尿素的細(xì)菌能利用尿素作氮源，將尿素分解為氨，使pH升高。若培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑將變紅。此培養(yǎng)基既屬于選擇培養(yǎng)基，又屬于鑒別培養(yǎng)基。答案A1分離微生物的方法從混合樣品中獲得某種微生物的方法通常有兩種：(1)利用該分離對象對某一營養(yǎng)物質(zhì)有“嗜好”的原理，專門在培養(yǎng)基中加入該營養(yǎng)物質(zhì)，從而使它成為一種加富培養(yǎng)基。(2)利用該分離對

18、象對某種抑菌物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中加入該抑制物，經(jīng)培養(yǎng)后，原來占優(yōu)勢的微生物生長受抑制，而分離對象卻可乘機(jī)大大增殖，在數(shù)量上占優(yōu)勢。培養(yǎng)基對微生物的選擇分析培養(yǎng)基對微生物的選擇分析 2選擇培養(yǎng)基及應(yīng)用實(shí)例(1)選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)需要的微生物的生長，目的是從眾多微生物中分離所需要的微生物。(2)選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。如石油是

19、唯一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，達(dá)到分離能消除石油污染的微生物的目的。改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。本部分知識常與前面兩考點(diǎn)綜合在一起考查，單科試卷中多有涉及，理綜考試中多以填空形式出現(xiàn)?！镜淅?】通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出()。大腸桿菌霉菌放線菌固氮細(xì)菌A B C D解析缺乏氮

20、源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長，而固氮細(xì)菌能生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌，霉菌能生長；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌，放線菌能生長。答案A【訓(xùn)練4】(2011寶雞調(diào)研)關(guān)于纖維素分解菌選擇培養(yǎng)的正確敘述是()。A可以增加纖維素分解菌的濃度B可以減少纖維素分解菌的濃度C所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基D所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基解析選擇培養(yǎng)是增加纖維素分解菌的濃度，所用的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，以便于下一步的稀釋涂布操作。答案A1(2011重慶卷)下列有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是()。A在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌B在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長C向液

21、體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長D在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌培養(yǎng)后可以觀察其運(yùn)動(dòng)解析菌落就是由單個(gè)細(xì)菌或同種細(xì)胞繁殖成的具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)特征的子細(xì)胞群體，一個(gè)菌落就是一個(gè)種群，所以單個(gè)菌落就只有一種細(xì)菌。青霉素能抑制細(xì)菌的細(xì)胞壁的形成從而抑制細(xì)菌的繁殖。破傷風(fēng)桿菌是厭氧型的生物。半固體培養(yǎng)基中可以觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)。答案D2(2009安徽理綜，6)下列是關(guān)于“檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是()。A用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上C將實(shí)驗(yàn)組和對照組平板倒置，37 恒溫培

22、養(yǎng)2448小時(shí)D確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)解析檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)，用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1 mL，分別涂布于各組平板上，將實(shí)驗(yàn)組和對照組平板倒置，37 恒溫培養(yǎng)2448小時(shí)，在確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30300的一組平板為代表進(jìn)行計(jì)數(shù)。答案D3(2011山東卷)研究發(fā)現(xiàn)柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白質(zhì))均有抑菌作用，兩者的提取及應(yīng)用如圖所示。(1)柚皮易焦糊，宜采用_法提取柚皮精油，該過程得到的糊狀液體可通過_除去其中的固體雜質(zhì)。(2)篩選乳酸菌A時(shí)可選用平板劃線法或

23、_接種。對新配制的培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是_。實(shí)驗(yàn)前需對超凈工作臺進(jìn)行_處理。(3)培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌A生長提供_。電泳法純化乳酸菌素時(shí)，若分離帶電荷相同的蛋白質(zhì)，則其分子量越大，電泳速度_。(4)抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，在長滿致病菌的平板上，會(huì)出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈?？赏ㄟ^測定透明圈的_來比較柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。解析本題考查選修1相關(guān)知識，對于柚皮精油的提取一般用壓榨法，再采用過濾去除其中的固體雜質(zhì)；對于篩選菌種一般用固體選擇培養(yǎng)基，通常接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，培養(yǎng)基滅菌通常用高壓蒸汽滅菌，對于工作臺一般消毒的方法處理，通常用紫外線消毒，尿素為微生物提供氮源和碳源，電

24、泳法純化乳酸菌素時(shí)，若分離帶電荷相同的蛋白質(zhì)，則其分子量越大，電泳速度越慢；抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，在長滿致病菌的平板上，會(huì)出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈，可通過測定透明圈的大小來比較柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。答案(1)壓榨過濾(2)稀釋涂布平板法高壓蒸汽滅菌鍋?zhàn)贤饩€消毒(3)碳源和氮源越慢(4)大小(直徑)4(2007寧夏理綜，32A)某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察與計(jì)數(shù)。請回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問題。(1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了_和_。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是_和_。(2)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用

25、的方法是_。(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于_中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種_作為對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(4)培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有_種細(xì)菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越_。(5)如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐_細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為_。解析蛋白胨來源于動(dòng)物原料，含有維生素、糖和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)，此培養(yǎng)基主要是為微生物提供氮源，微生物的培養(yǎng)基一般都要含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽。實(shí)驗(yàn)室的滅菌方法一般有灼燒滅菌(適合于接種工具的滅菌)、

26、干熱滅菌(適合于耐高溫的、需要保持干燥的物品的滅菌)、高壓蒸汽滅菌(適合于培養(yǎng)基等物體的滅菌)。要想使微生物快速繁殖，就要置于適宜的條件下，特別是溫度要適宜，所以要置于恒溫培養(yǎng)箱中，對照實(shí)驗(yàn)就是要設(shè)置一個(gè)無菌的加以比較，進(jìn)行觀察。不同的細(xì)菌形成的菌落具有不同的形態(tài)，細(xì)菌菌落的特征是識別不同細(xì)菌的主要依據(jù)。菌落是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的，菌落多則說明細(xì)菌的數(shù)目多。加入了特定的物質(zhì)，用于篩選各種特定細(xì)菌的培養(yǎng)基就是選擇培養(yǎng)基。例如加入了NaCl就可以用于篩選耐鹽細(xì)菌。答案：(1)氮源(碳源不作要求)碳源無機(jī)鹽水(2)高壓蒸汽滅菌(3)恒溫培養(yǎng)箱無菌水(4)多高(5)鹽(或NaCl)選擇培養(yǎng)基5(2

27、010山東理綜，34)生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應(yīng)用在一定程度上能夠減緩人類對化學(xué)燃料的消耗?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)，在微生物M產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油(如下圖)。(1)用于生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā)，宜選用_、_方法從油料作物中提取。(2)篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時(shí)，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供_，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是_法。(3)測定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用_法直接計(jì)數(shù)；從微生物M分離提取的脂肪酶通常需要檢測_，以確定其應(yīng)用價(jià)值；為降低生物柴油生產(chǎn)成本，可利用_技術(shù)使脂肪酶能夠重復(fù)使用。(4)若需克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用耐熱DNA聚合酶催化的_技術(shù)。

28、解析(1)因?yàn)橹参镉筒灰讚]發(fā)，不能選用蒸餾法，可以用壓榨法、萃取法從油料作物中提取。(2)微生物的生長需要水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供碳源。分析灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌等實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方法的特點(diǎn)可知，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是高壓蒸汽滅菌法。(3)測定培養(yǎng)液中微生物的數(shù)量，可選用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)。提取的脂肪酶在應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)之前，要先檢測其活性，以確定其應(yīng)用價(jià)值。固定化酶技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)酶的反復(fù)利用，降低了生產(chǎn)成本。(4)在應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA片段時(shí)，DNA合成(延伸)時(shí)溫度要控制在72 ，需要具有較強(qiáng)耐熱性的DNA聚合酶催化。答案(1)

29、壓榨萃取(注：兩空順序無先后)(2)碳源高壓蒸汽滅菌(3)顯微鏡直接計(jì)數(shù)酶活性(或酶活力)固定化酶(或固定化細(xì)胞)(4)PCR(或：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))6(2009寧夏理綜，40)(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。(2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行_(消毒、滅菌)；操作者的雙手需進(jìn)行清洗和_；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能_。(3)若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要

30、想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_。(4)通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的_。(5)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_。(6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過_處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。解析(1)大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)，培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。(2)滅菌是用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，所以對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；消毒是用較為溫和

31、的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒；紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。(3)稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)保證樣品稀釋的比例適合。(4)對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。(5)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(6)因?yàn)橛械拇竽c桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素，并可能導(dǎo)致腸管出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。答案(1)溫度酸堿度易培養(yǎng)生活周期短(2)滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)(3)比例合適(4)鑒定(或分類)(5)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(6)滅菌