高中生物 專題五 課題2 多聚酶鏈式反應擴增dna片段課件 新人教版

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1、參與的組分在 DNA 復制中的作用解旋酶_DNA 母鏈_課題 2 2多聚酶鏈式反應擴增 DNA DNA 片段生物體內的 DNA 復制細胞核1DNA 復制的場所是_。2參與 DNA 復制的組成成分與反應條件打開 DNA 雙鏈提供 DNA 復制的模板參與的組分在 DNA 復制中的作用_合成子鏈的原料DNA 聚合酶_引物_續(xù)表4 種脫氧核苷酸催化合成 DNA 子鏈使 DNA 聚合酶能夠從引物的 3端開始連接脫氧核苷酸PCR 擴增技術1概念DNAPCR 技 術 是 _ 的 簡 稱 , 是 一 種 在_ 進行的迅速擴增 DNA 的技術。它能夠以極少量的_為模板在短時間內復制出上百萬份。2PCR 反應過程

2、(1)變性。(2)復性。(3)延伸。3結果兩個引物DNA 聚合酶只能特異性地復制在_之間的DNA 序列,使這段固定長度的序列呈指數擴增。多聚酶鏈式反應體外DNA 含量測定1原理:利用 DNA 在_的紫外線波段的吸收峰曲線來測定相應含量。260 nm2 計算公式 :DNA 含 量 (g/mL) 50(260 nm 讀數)(_)。稀釋倍數體內復制PCR 擴增解旋方式在解旋酶的作用下,細胞提供能量,部分解旋加熱至 90 左右,雙鏈全部解開,不需要解旋酶引物一小段 RNARNA 或者單鏈 DNA合成子鏈在引物的基礎上,一條鏈連續(xù)合成,另一條不連續(xù)合成分別從兩條鏈的引物端開始,連續(xù)合成,控制溫度條件在

3、72 特點邊解旋邊復制,半保留復制在體外迅速擴增DNA 聚合酶不需要耐高溫聚合酶耐高溫的 TaqDNA 聚合酶循環(huán)次數受生物自身控制30 多次相同點兩者都需要模板、四種脫氧核苷酸,都需要酶和能量,需要一定緩沖溶液環(huán)境DNA 的體內復制與 PCR 擴增的區(qū)別與聯(lián)系PCR 技術的原理及過程1PCR 原理PCR 技術利用了 DNA 的熱變性原理:在 80100的范圍內,DNA 的雙螺旋結構解體,雙鏈分開,當溫度緩慢降低時,兩條彼此分離的 DNA 鏈又會重新結合成雙鏈。2PCR 的反應過程(1)變性:當溫度上升到 90 以上時,雙鏈 DNA 解旋為單鏈。(2)復性:溫度下降為 50 左右時,兩種引物通

4、過堿基互補配對與兩條單鏈 DNA 結合。(3)延伸:當溫度上升至 72 左右時,四種脫氧核苷酸在DNA 聚合酶的作用下,合成新的 DNA 鏈。3PCR 反應的條件(1)穩(wěn)定的緩沖液環(huán)境。(2)DNA 模板。(3)分別與模板 DNA 兩條模板鏈相結合的引物。(4)A、T、C、G 四種脫氧核苷酸。(5)耐熱的 DNA 聚合酶,一般用 TaqDNA 聚合酶。(6)能嚴格控制溫度變化的溫控設施。PCR 擴增技術與 DNA 體內復制的區(qū)別【例 1 】下列屬于 PCR 擴增區(qū)別于 DNA 體內復制的是()需要解旋酶 需要引物 常溫常壓下進行以四種脫氧核苷酸為原料需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶邊解旋邊復

5、制可以短時間得到大量拷貝需要模板ACBD【名師點撥】:體內復制與 PCR 擴增既有區(qū)別又有聯(lián)系,PCR 體外擴增概念很明確,在體外,加熱解旋,因此需要耐高溫的 TaqDNA 聚合酶,它能以極少量的 DNA 為模板,在幾小時內復制出上百萬份的 DNA?!敬鸢浮浚篊【配對練習 1】真核生物細胞質中也有 DNA,例如葉綠體、線粒體等,關于細胞質 DNA 復制不正確的是()A需要解旋酶B需要 DNA 聚合酶C兩條鏈同時復制只有一個起點D不是半保留復制解析:真核生物細胞質中 DNA 復制需要解旋酶、DNA 聚合酶、兩條鏈同時復制只有一個起點,是半保留復制。答案:DPCR 擴增的條件【例 2】PCR 擴增

6、包括三個環(huán)節(jié),變性、復性(退火)、延伸,這三步的溫度依次是()A94 、55 、72 B72 、55 、94 C55 、94 、72 D80 、60 、72 【名師點撥】:PCR 擴增的原理就是利用 DNA 耐高溫的特性,使 DNA 在 94 左右雙鏈解螺旋,然后在低溫(3755 )的情況下,兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈 DNA模板結合,形成部分雙鏈;在 TaqDNA 聚合酶的最適溫度(72 )下,以引物 3端為合成的起點,以單核苷酸為原料,沿模板從子鏈的 53方向延伸,合成 DNA 新鏈?!敬鸢浮浚篈【配對練習 2】在下面哪個溫度范圍內,DNA 雙螺旋結構解開()A1020 B80100 C2030 D4060 解析:PCR 擴增在 80100 溫度范圍內,DNA 雙螺旋結構解開。 答案: B

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