高中生物 動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)課件 新人教版選修3

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1、 動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng) (基礎(chǔ))(基礎(chǔ))動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)定義定義從動物機(jī)體中取出相關(guān)的從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織組織,將它,將它分散成分散成單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖生長和增殖。(一)(一)動物動物細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)過程過程動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)過程過程5、培養(yǎng)的條件、培養(yǎng)的條件 氣體環(huán)境氣體環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境(培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理(培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理 措施:培

2、養(yǎng)液中加抗生素,定期更換培養(yǎng)液)措施:培養(yǎng)液中加抗生素,定期更換培養(yǎng)液)營養(yǎng)營養(yǎng)(糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、促生長因(糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、促生長因子和動物子和動物血清血清等)等)溫度和溫度和PH (36.50.5 7.2-7.4)(O2 CO2 95空氣空氣 5的的CO2)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)(二)原理:(二)原理:細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖(三)條件:(三)條件:糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等微量元素等+動物血清、血漿動物血清、血漿(四)、應(yīng)(四)、應(yīng)用用1、生產(chǎn)生物制品、生產(chǎn)生物制品 如如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等病毒疫苗、干擾素、單

3、克隆抗體等2、應(yīng)用于基因工程、應(yīng)用于基因工程3、用、用于檢測有毒物質(zhì)于檢測有毒物質(zhì)4、培養(yǎng)正?;虿∽兊募?xì)胞,用于生理、培養(yǎng)正?;虿∽兊募?xì)胞,用于生理、病理和藥理等方面的研究病理和藥理等方面的研究細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞或或細(xì)胞產(chǎn)物細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物葡萄糖、動物血清血清蔗糖、植物蔗糖、植物激素激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖原理原理動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目(五)植(五)植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較

4、物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較二、核移植技術(shù)二、核移植技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植 將動物的一個(gè)細(xì)胞的將動物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核細(xì)胞核移入一個(gè)已經(jīng)移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核去掉細(xì)胞核的的卵母細(xì)卵母細(xì)胞胞(減數(shù)第二次分裂的中期減數(shù)第二次分裂的中期)中,成為一個(gè)中,成為一個(gè)重組細(xì)胞重組細(xì)胞并并發(fā)育成一個(gè)發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動物個(gè)體動物個(gè)體(一)分類(一)分類用核移植的方法得到的動物稱為用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物克隆動物(M中期卵中期卵母細(xì)胞)母細(xì)胞)減數(shù)第二次分裂中期減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)胞去核的卵母細(xì)胞供體

5、細(xì)胞核注供體細(xì)胞核注入入去核卵母細(xì)胞去核卵母細(xì)胞胚胎移植胚胎移植(二)過程(二)過程卵巢卵巢卵細(xì)卵細(xì)胞胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞融合后的卵細(xì)胞多利的產(chǎn)生多利的產(chǎn)生是何種生殖是何種生殖的結(jié)果?的結(jié)果?多利的遺傳物質(zhì)多利的遺傳物質(zhì)與哪頭羊與哪頭羊基本基本一一致?致?(三)原理:(三)原理:動物細(xì)胞動物細(xì)胞核核的全能性的全能性(四)應(yīng)用:(四)應(yīng)用:3、轉(zhuǎn)基因克隆動物可作為生物反應(yīng)器,生產(chǎn)醫(yī)用蛋白、轉(zhuǎn)基因克

6、隆動物可作為生物反應(yīng)器,生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、轉(zhuǎn)基因克隆動物細(xì)胞、組織、器官可作為異種、轉(zhuǎn)基因克隆動物細(xì)胞、組織、器官可作為異種 生物移植的供體生物移植的供體1、促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育,加速家畜遺傳改良進(jìn)程、促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育,加速家畜遺傳改良進(jìn)程2、保護(hù)瀕危物種、保護(hù)瀕危物種5、人的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化可用于、人的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化可用于 自身的器官移植自身的器官移植體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題胚胎移植動物幼體產(chǎn)出胚胎移植動物幼體產(chǎn)出 概率概率10克隆動物存在著健康問題克隆動物存在著健康問題克隆動物的食品安全性問題存在爭議克隆動物的食品安全性問題存在爭議(四)應(yīng)用:(

7、四)應(yīng)用: 6、了解胚胎發(fā)育及衰老過程、做疾病模型等、了解胚胎發(fā)育及衰老過程、做疾病模型等第三節(jié)動物細(xì)胞工程三、動物細(xì)胞融合和單克隆抗體鼠鼠B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞鼠骨髓瘤細(xì)胞鼠骨髓瘤細(xì)胞人工誘導(dǎo)人工誘導(dǎo) 動物細(xì)胞融合(動物細(xì)胞融合(技術(shù)技術(shù)):是):是指(指(在一定的條件下在一定的條件下)兩個(gè)或)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)單核單核細(xì)細(xì)胞的過程。胞的過程。(一)動物細(xì)胞融合(一)動物細(xì)胞融合1、誘導(dǎo)融合的方法、誘導(dǎo)融合的方法物理物理:電激等電激等化學(xué)化學(xué): 聚乙二醇聚乙二醇(PEG)生物:生物: 滅活的病毒滅活的病毒 為什么滅活的為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑病毒能作誘導(dǎo)劑?滅活喪失

8、感染性滅活喪失感染性保留融合活性保留融合活性2 2、動物細(xì)胞融合原理:、動物細(xì)胞融合原理:細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性3 3、意義:意義:4 4、應(yīng)用:、應(yīng)用:突破有性雜交方法的局限,使突破有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能遠(yuǎn)緣雜交成為可能制備單克隆抗體制備單克隆抗體(二)單克隆抗體(二)單克隆抗體問題:問題:抗體由什么抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生?其化學(xué)細(xì)胞產(chǎn)生?其化學(xué)本質(zhì)是什么?與抗本質(zhì)是什么?與抗原作用的特點(diǎn)?原作用的特點(diǎn)?1抗體抗體抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點(diǎn):該法制備抗體的特點(diǎn): 產(chǎn)量低、純度低,且抗產(chǎn)量低、純度低,且抗體的特異性差

9、、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動動物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 讀下面一段文字資料,讀下面一段文字資料,找出單克隆抗體的概念找出單克隆抗體的概念 人們發(fā)現(xiàn),在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中,體內(nèi)的人們發(fā)現(xiàn),在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中,體內(nèi)的B B細(xì)胞細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體,但是每個(gè)可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體,但是每個(gè)B B細(xì)胞只細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體,必須用單個(gè)單一抗體,必須用單個(gè)B B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖,即克隆。細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖,即克隆。1、

10、單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單單: : 單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞 克隆克隆: : 無性繁殖無性繁殖單克隆單克隆抗體抗體: :單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì) 單一、特異性強(qiáng)單一、特異性強(qiáng)的抗體的抗體提示:對提示:對B B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎?細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎?提示:我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的?提示:我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的?問題:問題:如何大量生產(chǎn)單克隆抗體?如何大量生產(chǎn)單克隆抗體?單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備2 2、相關(guān)常識:、相關(guān)常識:(效應(yīng))(效應(yīng))B B細(xì)胞:每個(gè)細(xì)胞:每個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體,淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體,

11、 但不能增殖但不能增殖骨髓瘤細(xì)胞:能無限增殖,但不能產(chǎn)生抗體骨髓瘤細(xì)胞:能無限增殖,但不能產(chǎn)生抗體 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? :制備單克隆抗體制備單克隆抗體. .一個(gè)效應(yīng)一個(gè)效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞只分泌一種特異性抗體只分泌一種特異性抗體 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)思路:思路:動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體,既能產(chǎn)生特異性抗體, 又能大量繁殖的細(xì)胞又能大量繁殖的細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖能無限增殖注射抗原注射抗原效應(yīng)效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1抗原抗原-

12、 -抗體檢測抗體檢測克隆化培養(yǎng)克隆化培養(yǎng)單克隆單克隆抗體抗體 篩選篩選2 23、過程:、過程:能分泌所需能分泌所需抗體的雜交抗體的雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞效應(yīng)效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞注射抗原注射抗原骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合B-BB-B細(xì)胞細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞瘤瘤- -瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1多種雜交瘤細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞符合要求的雜交符合要求的雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞抗原抗原- -抗抗體雜交法體雜交法 篩選篩選2 2克隆化克隆化體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體單克隆抗體4 4、雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn):、雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn):單克隆抗體的制備過程中共需單

13、克隆抗體的制備過程中共需進(jìn)行幾次篩選?目的相同嗎?進(jìn)行幾次篩選?目的相同嗎?單克隆抗體制備中包括幾個(gè)階段?單克隆抗體制備中包括幾個(gè)階段?既可以產(chǎn)生特異性抗體,既可以產(chǎn)生特異性抗體,又可以大量增殖又可以大量增殖5 5、原理:、原理: 膜的流動性、細(xì)胞增殖膜的流動性、細(xì)胞增殖6 6、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng),靈敏度高,產(chǎn)量大特異性強(qiáng),靈敏度高,產(chǎn)量大思考:可以口服治療嗎?思考:可以口服治療嗎?動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備 看書上看書上53頁圖,分組討論,單抗制備過程分哪幾步?頁圖,分組討論,單抗制備過程分哪幾步?請用箭頭

14、把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是?字母按正確順序連接起來。順序是? 6:單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用1、作為診斷試劑、作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速 (“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” 單抗單抗+藥物藥物)比較植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合用用 途途 原原 理理 誘導(dǎo)融合誘導(dǎo)融合的方法的方法處處 理理動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交去壁(酶?)去壁(酶?)細(xì)胞分散細(xì)胞分散(酶?)(酶?)物理法、化學(xué)法物理法、化學(xué)法物理法、化學(xué)法、生物法物理法、化學(xué)法、生物法膜的流動性、植膜的流動性、植物細(xì)胞的全能性物細(xì)胞的全能性膜的流動性膜的流動性克服遠(yuǎn)緣雜交不克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,得親和的障礙,得雜種植株雜種植株制備單克隆抗制備單克隆抗體體

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