新課標(biāo)創(chuàng)新人教生物選修1 專題2 課題3 分解纖維素的微生物的分離

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1、一、纖維素與纖維素酶1纖維素(1)化學(xué)本質(zhì)：由C、H、O三種元素組成，基本組成單位是葡萄糖，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。(2)來源：棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，此外木材、作物秸稈等也富含纖維素；纖維素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的主要成分之一。2纖維素酶(1)組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種組分，即C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶。(2)作用原理 (3)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證纖維素酶的作用試管濾紙條緩沖液pH4.8纖維素酶(7080 U/mL)條件結(jié)果11 cm6 cm10 mL1_mL將兩支試管固定在50 mL的錐形瓶中，在搖床上以140 r/min的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)1 h完全分解21 cm6 cm11

2、 mL/基本無變化二、纖維素分解菌的篩選1方法 2原理三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作1土壤取樣：選擇富含纖維素的環(huán)境。2選擇培養(yǎng)(1)目的：增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。(2)操作方法：將土樣加入裝有30 mL選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)12_d，直至培養(yǎng)液變混濁，也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。3梯度稀釋4涂布培養(yǎng)：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上。5篩選菌株：剛果紅染色法，挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。四、課題延伸纖維素分解菌的鑒定 1為確定得到的透明圈中的菌落是纖維素分解菌，需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。

3、2纖維素酶的測(cè)定方法，一般是采用對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定。 共研探究纖維素分子的結(jié)構(gòu)如圖所示，結(jié)合教材回答下列問題：1纖維素纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物產(chǎn)生的纖維素酶分解。2纖維素酶(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。(2)纖維素酶作用過程3纖維素分解菌的篩選(1)利用剛果紅染色法篩選纖維素分解菌。(2)纖維素分解菌的篩選常用的有兩種方法，一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)；另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅。(3)剛果紅染色法篩選的原理是

4、什么？(4)培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈不一定是纖維素分解菌的作用，因?yàn)閯偣t可與多糖類化合物產(chǎn)生紅色復(fù)合物，若多糖為淀粉，產(chǎn)生淀粉酶的微生物也可使培養(yǎng)基產(chǎn)生透明圈?？偨Y(jié)升華兩種剛果紅染色法的比較 項(xiàng)目?jī)?nèi)容方法一方法二過程培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落覆蓋質(zhì)量濃度為1 mg/mL的CR溶液倒去CR溶液加入NaCl溶液倒掉NaCl溶液出現(xiàn)透明圈配制CR溶液滅菌按照1 mL CR/200 mL培養(yǎng)基比例混勻倒平板培養(yǎng)出現(xiàn)透明圈優(yōu)點(diǎn)顯示出顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問題缺點(diǎn)制作繁瑣，加入剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜由于瓊脂、土豆汁中均含有淀粉類物質(zhì)，可能使產(chǎn)生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假陽性

5、反應(yīng)；有些微生物具有降解色素的能力，它們會(huì)降解剛果紅形成透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分對(duì)點(diǎn)演練1下列有關(guān)剛果紅染色法的敘述，不正確的是()A剛果紅可以在細(xì)菌菌落形成前倒平板時(shí)加入B剛果紅可以在菌落形成后加入C在菌落形成前倒平板時(shí)加入，剛果紅不需要滅菌D在菌落形成后加入剛果紅時(shí)，剛果紅不需要滅菌解析：選C利用剛果紅篩選纖維素分解菌時(shí)，剛果紅可以在細(xì)菌菌落形成前倒平板時(shí)加入，也可以在菌落形成后加入。在細(xì)菌菌落形成前倒平板時(shí)加入，要進(jìn)行滅菌，以防雜菌的侵入，影響纖維素分解菌菌落的形成；在菌落形成后加入剛果紅，則不需要滅菌。共研探究1實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣選擇培養(yǎng)(此步可省略)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素

6、分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。(1)涉及的生物技術(shù)主要有培養(yǎng)基的制作、無菌操作技術(shù)、稀釋涂布平板法、選擇培養(yǎng)基的作用、土壤取 樣等。(2)實(shí)驗(yàn)步驟剖析土壤取樣采取土樣時(shí)，可以選擇富含纖維素的環(huán)境。由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)較高，因此從這種環(huán)境中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境。選擇培養(yǎng)a目的：增加纖維素分解菌的濃度，確保能夠從樣品中分離得到所需要的微生物。b操作方法：將土樣加入裝有30 mL選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)12_d，直至培養(yǎng)液變混濁，也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。c在分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程中

7、，進(jìn)行選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度；使能夠適應(yīng)人工設(shè)置的營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速地繁殖，而不適應(yīng)的微生物的繁殖得到抑制。選擇培養(yǎng)的環(huán)節(jié)是否需要設(shè)置，可根據(jù)樣品中目的微生物數(shù)量的多少來確定。為什么對(duì)挑選產(chǎn)生透明圈的菌落作進(jìn)一步的鑒定？提示：產(chǎn)生透明圈的菌落可能是能產(chǎn)生淀粉酶的微生物，也可能是能降解剛果紅的菌種，所以需要進(jìn)一步鑒定。2兩種培養(yǎng)基纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基配方1纖維素粉5 gNaNO31 gNa2HPO47H2O1.2 gKH2PO40.9 gMgSO47H2O0.5 gKCl0.5 g酵母膏0.5 g水解酪素0.5 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL鑒別纖維

8、素分解菌的培養(yǎng)基配方2CMCNa510 g酵母膏1 gKH2PO40.25 g瓊脂15 g土豆汁100 mL將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL(1)功能方面：培養(yǎng)基配方1為纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的唯一碳源是纖維素粉，只有能利用它的纖維素分解菌才能生存。培養(yǎng)基配方2為纖維素分解菌的鑒別培養(yǎng)基。在該培養(yǎng)基中加入剛果紅溶液，在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的纖維素分解菌分泌纖維素酶，因此菌落周圍會(huì)形成透明圈。(2)物理性質(zhì)方面：培養(yǎng)基配方1為纖維素分解菌的液體培養(yǎng)基，利用這種培養(yǎng)基可以增加纖維素分解菌的濃度。培養(yǎng)基配方2為纖維素分解菌的固體培養(yǎng)基，原因是添加了瓊脂成分，可以在培養(yǎng)基上形成

9、我們?nèi)庋劭梢姷木洹?3)若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)控制的變量是將纖維素粉改為葡萄糖。3分解纖維素微生物的分離實(shí)驗(yàn)的三個(gè)易誤點(diǎn)(1)培養(yǎng)基的制作是否合格：對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)，則說明培養(yǎng)基制作合格。(2)選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落：如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。(3)分離的結(jié)果是否一致：由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。總結(jié)升華1對(duì)纖維素分解菌篩選流程的說明(1)為確定得到的細(xì)菌是否是纖維素分解菌，還需進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生纖維素酶的

10、實(shí)驗(yàn)。因?yàn)樾纬赏该魅Φ木渑c其他微生物菌落可能出現(xiàn)混雜現(xiàn)象，而且產(chǎn)生透明圈的菌落可能是產(chǎn)生淀粉酶的微生物，也可能是降解剛果紅的菌種。(2)流程中的“選擇培養(yǎng)”是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定。(3)本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2的流程有一定的區(qū)別。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上，分離得到菌落。本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在鑒別培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。2纖維素分解菌的篩選過程中所用兩種培養(yǎng)基的比較(1)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，利用液體培養(yǎng)基能使?fàn)I養(yǎng)成分充分消耗，以增加纖維素分解菌的濃度。(2)纖維素分解菌的鑒

11、別培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因?yàn)樾枰谂囵B(yǎng)基上形成我們?nèi)庋劭梢姷木洹?3)在上述選擇培養(yǎng)基中能以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長(zhǎng)，而其他絕大多數(shù)微生物不能正常生長(zhǎng)；而在上述鑒別培養(yǎng)基中，絕大多數(shù)微生物都可以正常生長(zhǎng)?！疽族e(cuò)易混】判斷某個(gè)選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用時(shí)，應(yīng)設(shè)立基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照；若判斷所使用的培養(yǎng)基滅菌是否徹底，應(yīng)設(shè)立不接菌種的該培養(yǎng)基進(jìn)行空白對(duì)照。對(duì)點(diǎn)演練2下列關(guān)于分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是()A經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上B選擇培養(yǎng)這一步可省略C經(jīng)稀釋涂布平板后，用剛果紅對(duì)長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基染色D對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)

12、基上解析：選A經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；選擇培養(yǎng)可省略；經(jīng)稀釋涂布平板后，用剛果紅對(duì)長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基染色；設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)選擇培養(yǎng)的確得到了欲分離的微生物。1鑒定纖維素分解菌時(shí)，可以使用剛果紅對(duì)其染色，剛果紅染色法有兩種常用方法，兩種剛果紅染色法的結(jié)果是()A均會(huì)出現(xiàn)透明圈 B方法一出現(xiàn)，方法二不出現(xiàn)C均不會(huì)出現(xiàn)透明圈 D方法一不出現(xiàn)，方法二出現(xiàn)解析：選A兩種剛果紅染色法染色的時(shí)間不同，但結(jié)果一樣，均出現(xiàn)透明圈。2下列為從土壤中篩選纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，其中正確的是()A土壤取樣梯度稀釋選擇培養(yǎng)涂布平板挑選菌落B土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋涂布平板挑選菌

13、落C土壤取樣梯度稀釋選擇培養(yǎng)挑選菌落D土壤取樣梯度稀釋涂布平板選擇培養(yǎng)挑選菌落解析：選B正確的流程是“土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋涂布平板挑選菌落”，其中選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，因此需要在稀釋涂布平板之前進(jìn)行，最后根據(jù)菌落的特征挑選纖維素分解菌。3纖維素分解菌的篩選原理是()A剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物B剛果紅可以與水解后的纖維二糖和葡萄糖形成紅色復(fù)合物C剛果紅可以與纖維素酶形成紅色復(fù)合物D剛果紅可以與纖維素分解菌結(jié)合形成紅色復(fù)合物解析：選A剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖及葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)，也不與纖維素酶或纖維素分解

14、菌結(jié)合形成紅色復(fù)合物。4生物乙醇是以生物為原料生產(chǎn)的可再生能源。我國(guó)利用農(nóng)作物廢棄物(秸稈)生產(chǎn)乙醇，其技術(shù)流程為：纖維素酶解酵母發(fā)酵蒸餾成品。獲取纖維素酶的成本能否下降，是能否實(shí)現(xiàn)生物乙醇工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵因素。纖維素酶可以從能分解纖維素的細(xì)菌的培養(yǎng)液中提取。某同學(xué)設(shè)計(jì)了如下分離土壤中纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋鑒別培養(yǎng)。(1)最好選擇怎樣的環(huán)境采集土樣？_。(2)以下是一種培養(yǎng)基的配方：纖維素粉5 g、NaNO3 1 g、Na2HPO47H2O 1.2 g、KH2PO4 0.9 g、MgSO47H2O 0.5 g、KCl 0.5 g、酵母膏0.5 g、水解酪素0.5 g(

15、蒸餾水定容到1 000 mL)。該培養(yǎng)基能夠增加樣品中纖維素分解菌的濃度，其原理是_。(3)為了鑒別纖維素分解菌和進(jìn)一步純化菌種，可以在鑒別培養(yǎng)基中加入_染液，將篩選獲得的菌液稀釋后用_法接種到鑒別培養(yǎng)基上，然后挑選產(chǎn)生_的菌落作為菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。(4)纖維素分解菌培養(yǎng)液中的纖維素酶產(chǎn)量如何呢？請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。_。解析：富含纖維素的土壤中，含有以纖維素為碳源的纖維素分解菌，且數(shù)量多。題目中纖維素為含纖維素酶的微生物提供碳源和能源，不能分解纖維素的微生物由于缺乏碳源而不能正常生長(zhǎng)繁殖，因此該培養(yǎng)基具有選擇作用。纖維素量一定，且時(shí)間一定時(shí)，纖維素酶產(chǎn)量與分解產(chǎn)生的葡萄糖數(shù)量成正比。答案：(1

16、)選擇纖維素豐富的土壤環(huán)境(2)培養(yǎng)基中纖維素是主要碳源，有利于纖維素分解菌生長(zhǎng)，同時(shí)抑制其他微生物生長(zhǎng)(3)剛果紅涂布平板透明圈(4)向定量纖維素分解菌培養(yǎng)液中加入定量纖維素，定時(shí)測(cè)量葡萄糖產(chǎn)量的變化【基礎(chǔ)題組】1不能與剛果紅反應(yīng)生成紅色復(fù)合物的是()A纖維二糖B纖維素CCMCNa D淀粉解析：選A剛果紅可以與多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但不與纖維二糖、葡萄糖、麥芽糖等發(fā)生反應(yīng)。2下列關(guān)于纖維素的敘述中，不正確的是()A纖維素是由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物B纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，是因?yàn)檫@些微生物能產(chǎn)生纖維素酶C植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素D自然界中的各種生物均能把

17、纖維素分解成葡萄糖，從而為生物體提供能量解析：選D自然界中部分能夠合成纖維素酶的生物才能分解纖維素。3微生物體內(nèi)能夠使纖維素分解成纖維二糖的酶是()AC1酶和CX酶BC1酶和葡萄糖苷酶CCX酶和葡萄糖苷酶DC1酶、CX酶和葡萄糖苷酶解析：選A纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種組分，其中C1酶和CX酶能將纖維素分解成纖維二糖，而葡萄糖苷酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。4要將能分解纖維素的細(xì)菌從土壤中分離出來，應(yīng)將它們接種在()A加入指示劑的鑒別培養(yǎng)基上B含有蛋白胨的固體培養(yǎng)基上C只含纖維素粉而無其他碳源的選擇培養(yǎng)基上D含四大營(yíng)養(yǎng)要素的培養(yǎng)基上解析：選C選擇纖維素分解菌的培養(yǎng)基中應(yīng)含有該種 菌生長(zhǎng)發(fā)育

18、所需的營(yíng)養(yǎng)條件，且其他菌種在這種培養(yǎng)基中不能生存。5加工橘子罐頭，采用酸堿處理脫去中果皮(橘絡(luò))，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重污染。目前使用酶解法去除橘絡(luò)，可減少污染。下列生長(zhǎng)在特定環(huán)境中的4類微生物，不能產(chǎn)生所用酶的有()A生長(zhǎng)在麥麩上的黑曲霉B生長(zhǎng)在酸奶中的乳酸菌C生長(zhǎng)在棉籽殼上的平菇D生長(zhǎng)在木屑上的木霉解析：選B橘絡(luò)的主要成分是纖維素，用纖維素酶就可處理；A項(xiàng)中生長(zhǎng)在麥麩上的黑曲霉，C項(xiàng)中生長(zhǎng)在棉籽殼上的平菇，D項(xiàng)中生長(zhǎng)在木屑上的木霉都生活在富含纖維素的環(huán)境中，都能產(chǎn)生纖維素酶。牛奶中不含纖維素，因此B項(xiàng)生長(zhǎng)在酸奶中的乳酸菌不能產(chǎn)生纖維素酶。6多選為了從牛的瘤胃中分離出能夠分解纖維素的微生物，下列實(shí)驗(yàn)操作

19、及敘述不科學(xué)的是()A在富含纖維素的培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落即為纖維素分解菌B將培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行嚴(yán)格的消毒滅菌C將提取的胃液進(jìn)行系列稀釋后接種培養(yǎng)D接種后在適宜溫度和充足氧條件下培養(yǎng)解析：選AD纖維素分解菌在富含纖維素的培養(yǎng)基上能夠形成生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，但并不是只有纖維素分解菌生長(zhǎng)，因此需要用剛果紅染色法進(jìn)行鑒別培養(yǎng)，A項(xiàng)錯(cuò)誤。牛胃的缺氧環(huán)境只允許厭氧型的纖維素分解菌生長(zhǎng)，因此培養(yǎng)牛胃中的纖維素分解菌應(yīng)提供適宜的溫度和無氧環(huán)境，D項(xiàng)錯(cuò)誤。培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)器材消毒滅菌是為了防止雜菌污染，B項(xiàng)正確。為了得到單細(xì)胞菌落，提取的胃液需先進(jìn)行系列稀釋后接種培養(yǎng)，C項(xiàng)正確。7在分離分解纖維素的微生物實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于土壤取樣

20、的敘述不正確的是()A可選取深層的土壤作為樣品B可選取樹林中多年落葉形成的腐殖土作為樣品C可選取樹林中多年積累的枯枝敗葉作為樣品D可把濾紙埋在土壤中經(jīng)過30天左右，再選取已爛的濾紙作為樣品解析：選A深層土壤中纖維素含量少，纖維素分解菌的數(shù)量也少。8在分離纖維素分解菌過程中往往需要振蕩，其作用不包括()A使細(xì)菌能與培養(yǎng)基混合均勻B使細(xì)菌能充分吸收氧氣C使細(xì)菌能快速繁殖D防止細(xì)菌失水解析：選D纖維素分解菌屬好氧型細(xì)菌，充分振蕩，一方面可促進(jìn)細(xì)菌與培養(yǎng)基混合均勻，有利于其吸收營(yíng)養(yǎng)，另一方面讓細(xì)菌能充分與空氣接觸，有利于吸收氧氣，以上兩方面都能促進(jìn)細(xì)菌快速繁殖?！灸芰︻}組】9選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某

21、一類微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢?、化學(xué)抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。為選擇酵母菌和硝化細(xì)菌，應(yīng)選用的培養(yǎng)基分別為()A伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、含青霉素培養(yǎng)基B含青霉素培養(yǎng)基、無機(jī)培養(yǎng)基C無機(jī)培養(yǎng)基、含青霉素培養(yǎng)基D含青霉素培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基解析：選B酵母菌是真菌，通?？梢杂煤嗝顾氐呐囵B(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，因?yàn)榍嗝顾匾种萍?xì)菌生長(zhǎng)，但不抑制真菌生長(zhǎng)。硝化細(xì)菌為自養(yǎng)型生物，能夠利用氨轉(zhuǎn)變?yōu)閬喯跛岷拖跛崴尫诺哪芰?，把無機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)物以維持自身生命活動(dòng)，利用無機(jī)培養(yǎng)基可進(jìn)行選擇培養(yǎng)。10在加入剛果紅的培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)透明圈，產(chǎn)生的透明圈是()A剛果紅與纖

22、維素形成的復(fù)合物B剛果紅與纖維二糖形成的復(fù)合物C纖維素分解后形成的葡萄糖導(dǎo)致的D以纖維素分解菌為中心形成的解析：選D剛果紅可以與纖維素結(jié)合形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。11使用剛果紅染色時(shí)，加入剛果紅應(yīng)在()制備培養(yǎng)基時(shí)梯度稀釋時(shí)倒平板時(shí)涂布時(shí)長(zhǎng)出菌落時(shí)A BC D解析：選C常用的剛果紅染色法有兩種，一種是先培養(yǎng)微生物，長(zhǎng)出菌落后再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)；另一種是倒平板時(shí)就加入剛果紅。最終，兩種染色法都可以在培養(yǎng)基上觀察到以纖維素分解菌為中心的透明圈。12下列有

23、關(guān)分解纖維素微生物的分離的敘述，不正確的是()A纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵B對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步篩選后，無需再進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)C纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定D纖維素酶是一種復(fù)合酶解析：選B初步篩選只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。13現(xiàn)在大力提倡無紙化辦公，但是仍然不可避免地每年要產(chǎn)生大量的廢紙，其主要成分是木質(zhì)纖維，人類正努力將其轉(zhuǎn)化為一種新的資源乙醇。如圖是工業(yè)上利用微生物由纖維素生產(chǎn)乙醇的基本工作流程，請(qǐng)回答相關(guān)問題：(1)自然界中環(huán)節(jié)需要的微生物大多分布在_的環(huán)境中。將從土壤中獲得的微生物培

24、養(yǎng)在以_為唯一碳源、并加入_的培養(yǎng)基上篩選周圍有_的菌落。(2)如上所述的篩選中獲得了三個(gè)菌落，對(duì)它們分別培養(yǎng)，并完成環(huán)節(jié)，且三種等量酶液中酶蛋白濃度相同，則你認(rèn)為三種酶液的活性_(填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”)，可以通過_進(jìn)行定量測(cè)定。(3)環(huán)節(jié)常選擇木霉，中獲得的酶是_酶。該酶至少包括_三個(gè) 組分。(4)生產(chǎn)中可以滿足環(huán)節(jié)的常見菌種是_，為了確保獲得產(chǎn)物乙醇，環(huán)節(jié)要注意_，過程要注意避免_。解析：(1)從富含纖維素的環(huán)境中可以獲得富含纖維素酶的微生物，這類微生物的純化培養(yǎng)是在以纖維素為唯一碳源，并加入剛果紅的培養(yǎng)基上篩選周圍有透明圈的菌落而獲得的。(2)由于三個(gè)菌落中的細(xì)菌數(shù)

25、目可能不同或者產(chǎn)酶能力不同，從三個(gè)菌落中獲得三種等量酶液中酶蛋白濃度相同，其活性也不一定相同；可以通過對(duì)纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定來確定三種酶液的活性。(3)木霉中產(chǎn)生的纖維素酶包括C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶三個(gè)組分。(4)生產(chǎn)中獲得乙醇的常見菌種是酵母菌，酵母菌在無氧條件下進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精，因此生產(chǎn)中注意保證無氧條件，還要注意避免雜菌的污染。答案：(1)富含纖維素(其他答案合理也可，如落葉較多等)纖維素剛果紅透明圈 (2)不一定相同對(duì)纖維素酶催化纖維素分解后所產(chǎn)生的葡萄糖(3)纖維素C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶(4)酵母菌發(fā)酵裝置密閉(或保證無氧條件等)雜菌污染14有些

26、微生物含有纖維素酶，通過對(duì)這些微生物的研究和應(yīng)用，使人們能夠利用秸稈等廢棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。纖維素酶可以通過微生物進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，為了提高酶的產(chǎn)量，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，利用誘變育種的方法，獲得產(chǎn)生纖維素酶較多的菌株。(1)寫出實(shí)驗(yàn)步驟：第一步：將培養(yǎng)好的生產(chǎn)菌株分成A、B兩組，_，B組不作處理。第二步：制備含有_的固體培養(yǎng)基。第三步：把A組的大量菌株接種到多個(gè)含有_的固體培養(yǎng)基上，同時(shí)接種_，把它們置于相同的條件下培養(yǎng)。第四步：一段時(shí)間后，取培養(yǎng)基用_染色，觀察記錄_。(2)預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論：aA組中菌落周圍的透明圈與B組相比較大，說明 _。b_。c_，說明誘變育種獲得了低纖

27、維素酶產(chǎn)量的菌種。(3)若要獲得純凈的高產(chǎn)菌株，需進(jìn)行_或_操作。解析：(1)要得到高產(chǎn)纖維素酶的菌株，必須先進(jìn)行誘變處理，而突變是不定向的，所以要經(jīng)過篩選。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)要遵循對(duì)照原則和單一變量原則。實(shí)驗(yàn)分兩組，實(shí)驗(yàn)組用誘變劑處理，對(duì)照組不作處理。要檢測(cè)纖維素分解菌產(chǎn)纖維素酶的能力，應(yīng)用含纖維素的鑒別培養(yǎng)基，根據(jù)形成的透明圈的大小，來判斷產(chǎn)纖維素酶能力的高低。整個(gè)過程中，注意對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的其他條件應(yīng)完全相同。(2)預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，誘變組和對(duì)照組相比，透明圈大小可能相同，可能較大，可能較小，所以需要分情況討論，當(dāng)然，真正想得到的是透明圈較大的菌株，即產(chǎn)纖維素酶能力強(qiáng)的菌株。(3)一般初次分離得到的都

28、不是純凈的細(xì)菌，需進(jìn)一步純化培養(yǎng)，可通過平板劃線法或稀釋涂布平板法進(jìn)行純化培養(yǎng)。答案：(1)A組用一定劑量的誘變劑處理纖維素纖維素B組(未處理)的菌株剛果紅菌落周圍透明圈的大小情況(2)a.誘變育種獲得了纖維素酶產(chǎn)量高的菌種bA組中菌落周圍的透明圈與B組相同，說明誘變育種沒有使菌株發(fā)生變化cA組中菌落周圍的透明圈與B組相比較小(3)平板劃線稀釋涂布平板15.一種廣泛使用的除草劑(含氮有機(jī)物)在土壤中不易被降解，長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌(已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明)。(1)制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度

29、過高，需將浸出液進(jìn)行_處理。(2)要在長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離出目的菌，從物理性質(zhì)、用途方面來看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是_。(3)在劃線培養(yǎng)時(shí)，只有很少的菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是_或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。 (4)在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明圈菌落利用的氮源主要是_，有透明圈菌落利用的氮源主要是_，據(jù)此可篩選出目的菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖，AE五種菌株中，_是最理想菌株。(5)科研人員用射線處理該細(xì)菌獲得兩個(gè)突變株M和N，然后對(duì)突變株M和N進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示：接種的菌種一般培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)處理及結(jié)果M不生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長(zhǎng)N不生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，能生

30、長(zhǎng)MN能生長(zhǎng)不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲、乙，都能生長(zhǎng)突變株M不能在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因是_。突變株M和N混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的最可能原因是_。解析：(1)制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進(jìn)行稀釋處理。(2)從物理性質(zhì)方面來看，題圖中的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；從用途方面來看，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。該除草劑為含氮有機(jī)化合物，降解該除草劑的細(xì)菌可以該除草劑為氮源。故該培養(yǎng)基中除加入除草劑外，不能再含有其他氮源，以選擇出能降解該除草劑的細(xì)菌。(3)在以該除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基上，不能降解該除草劑的細(xì)菌(除具有固氮能力的細(xì)菌外)是不能生長(zhǎng)的。(4)含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明，形成透明圈是該除草劑被某些細(xì)菌降解的結(jié)果。(5)突變株M的生長(zhǎng)依賴于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株N的生長(zhǎng)依賴于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙。不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲和乙，二者混合培養(yǎng)時(shí)都能生長(zhǎng)，最可能的原因是突變株M為突變株N提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株N為突變株M提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲。答案：(1)稀釋(2)在無氮固體培養(yǎng)基中添加了該除草劑(3)培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源(4)氮?dú)庠摮輨〦(5)突變株M缺乏合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶突變株M生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株N可以提供；突變株N生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株M可以提供版權(quán)所有:中國(guó)好課堂