2022高考生物大一輪復(fù)習(xí) 生物技術(shù)實(shí)踐 第2講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用真題演練 新人教版選修1

2022高考生物大一輪復(fù)習(xí) 生物技術(shù)實(shí)踐 第2講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用真題演練 新人教版選修1 1(2017年全國(guó)新課標(biāo)卷)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生_。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是_，但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是_(答出兩點(diǎn)即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_。(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答出兩點(diǎn)即可)?！敬鸢浮?1)脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料(2)尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH的穩(wěn)定【解析】(1)能分解尿素的細(xì)菌體內(nèi)應(yīng)含有脲酶；能分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物，可用葡萄糖等有機(jī)物作為碳源。進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi)的葡萄糖既可為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，又可作為合成其他物質(zhì)的原料。(2)分解尿素的細(xì)菌能以尿素作為氮源，但其他細(xì)菌不能。以NH4NO3為氮源的細(xì)菌有很多種。如果選用含有NH4NO3的其他兩組，會(huì)在培養(yǎng)基中長(zhǎng)出以NH4NO3為氮源的雜菌，不能起到篩選作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4為無(wú)機(jī)鹽，可以提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并能維持滲透壓，同時(shí)HPO和H2PO為一對(duì)緩沖對(duì)，所以可以維持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH的穩(wěn)定。2(2017年江蘇卷)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_。(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_，以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集，應(yīng)進(jìn)一步_，以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加_。(3)下圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中_(填圖中序號(hào))區(qū)域更易獲得單菌落。(4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中第15號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為_(kāi)。管號(hào)123456苯酚濃度/(mg·L1)1如果廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_(填序號(hào)：51020)倍后，再進(jìn)行比色?！敬鸢浮?1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀釋涂布凝固劑(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8【解析】本題考查土壤微生物的分離及計(jì)數(shù)。(1)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一般都包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源，其中蛋白胨和苯酚中含有C元素，可作為碳源。(2)要富集該菌，應(yīng)提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量。若菌落過(guò)于密集，說(shuō)明稀釋倍數(shù)太小，應(yīng)進(jìn)一步稀釋?zhuān)缓笤賱澠桨?。制備固體培養(yǎng)基時(shí)需加入凝固劑瓊脂。(3)用平板劃線法接種菌體，隨劃線次數(shù)的增加，菌體數(shù)量逐漸減少，故區(qū)域更易獲得單菌落。(4)題中已給出6號(hào)比色管中的苯酚濃度為1 mg/L，根據(jù)濃度梯度的設(shè)計(jì)原則以及空白對(duì)照原則，15號(hào)比色管中的苯酚濃度應(yīng)依次為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L。若廢水中苯酚的濃度為50 mg/L，降解后約有21%的苯酚殘留，則降解后廢水中苯酚的濃度為50×21%10.5(mg/L)，因?yàn)楸壬苤斜椒拥臐舛确秶鸀?1 mg/L，若將降解后的廢水稀釋5倍或10倍，則稀釋后廢水中苯酚的濃度均大于1 mg/L，若稀釋20倍，則稀釋后廢水中苯酚的濃度為0.525 mg/L，介于01 mg/L之間，故需將降解后的廢水稀釋20倍后再進(jìn)行比色。3(2016年全國(guó)新課標(biāo)卷)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O); 制作無(wú)菌平板； 設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作； 將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于_。若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_。(2)步驟中，實(shí)驗(yàn)組的操作是_。(3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_現(xiàn)象。若將30(即366)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_(填“正確”或“不正確”)?！敬鸢浮?1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間(3)污染不正確【解析】(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。(2)實(shí)驗(yàn)探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中自變量為不同高度，故需在不同高度下放置開(kāi)蓋平板。同時(shí)，為了保證單一變量，需要保證開(kāi)蓋放置的時(shí)間一致。為了保證實(shí)驗(yàn)的可靠性，需要設(shè)置多個(gè)平行組。(3)在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，則表明操作過(guò)程中存在雜菌污染的現(xiàn)象，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。4(2016年全國(guó)新課標(biāo)卷)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用_對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)M(jìn)行梯度稀釋的理由是_。(2)推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有_和_。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出_的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在20 長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。【答案】(1)無(wú)菌水泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落(2)鑒別乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)具有透明圈(3)甘油【解析】(1)分離純化乳酸菌過(guò)程中，需要在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)乳酸菌并得到單菌落。由于泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落，故分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋。(2)由于乳酸菌代謝產(chǎn)生的乳酸可以溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，形成透明圈，故培養(yǎng)基中加入碳酸鈣可用于鑒別乳酸菌，同時(shí)碳酸鈣也可以中和乳酸菌產(chǎn)生的乳酸。(3)乳酸菌在20 長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中需要加入一定量的甘油，加甘油是為了避免水結(jié)冰產(chǎn)生冰晶損傷細(xì)胞。5(2016年四川卷)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_作為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加_作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周?chē)闹甘緞⒆兂蒧色。(2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是_，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_(kāi)×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較_。(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為_(kāi)，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含_個(gè)氨基酸?！敬鸢浮?1)尿素酚紅紅(2)稀釋涂布平板法1.75少(3)UGA115【解析】(1)脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。(2)用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為(156178191)÷3÷0.1×1051.75×108(個(gè))。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)計(jì)的是一個(gè)菌落，故用此方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)偏少。(3)密碼子由三個(gè)相鄰的堿基組成，271個(gè)堿基和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成91個(gè)密碼子，插入的70個(gè)核苷酸和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成24個(gè)密碼子，緊隨其后的是UGA，應(yīng)為終止密碼，翻譯結(jié)束，因此突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含115個(gè)氨基酸。6(2015年全國(guó)新課標(biāo)卷)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)。回答有關(guān)問(wèn)題：(1)顯微觀察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通?？捎胈染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用_(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。(2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以_為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。(3)若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用_直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用_法進(jìn)行計(jì)數(shù)。(4)為了確定微生物B產(chǎn)生脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35 、40 、45 溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個(gè)溫度中，_條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞_設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)?！敬鸢浮?1)蘇丹(或蘇丹)萃取法(2)油脂(3)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板稀釋涂布平板(4)4540【解析】本題主要考查了植物油脂的染色和提取方法、選擇培養(yǎng)基的配制、微生物的計(jì)數(shù)以及確定酶的最適溫度的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)等。(1)脂肪可用蘇丹(或蘇丹)染液進(jìn)行染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，不能用水蒸氣蒸餾法提取，應(yīng)用萃取法加以提取。(2)能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B可存在于含有油料作物種子的腐爛物的土壤中，為了選擇培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基上應(yīng)以油脂作為唯一碳源。(3)測(cè)定培養(yǎng)液中的微生物的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定活菌數(shù)，則可利用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)。(4)酶量需要最多的溫度下，其酶活力最小，即酶活力最小的溫度應(yīng)為45 。三個(gè)溫度下酶活力最大的溫度是40 ，但40 不一定是該酶的最適溫度，故為了確定酶的最適溫度應(yīng)圍繞40 設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。7(2014年全國(guó)新課標(biāo)卷)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成_。(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成_色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見(jiàn)下表)：培養(yǎng)基酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水甲乙注：“”表示有，“”表示無(wú)。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_；培養(yǎng)基乙_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_?！敬鸢浮?1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌【解析】(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分：C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。用含有剛果紅的纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，由于纖維素被分解，紅色復(fù)合物無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌的菌落為中心的透明圈。(3)培養(yǎng)基甲未使用瓊脂，為液體培養(yǎng)基，不能用于分離單菌落。含有纖維素和剛果紅(CR)的培養(yǎng)基可分離和鑒別纖維素分解菌。8(2014年全國(guó)新課標(biāo)卷)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是_；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)個(gè)。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)_滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是_。(3)下圖A和B中，_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)的利用率。【答案】(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8×107(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落(3)B(4)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)【解析】(1)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，可依據(jù)是否產(chǎn)生菌落確定培養(yǎng)基的滅菌效果是否合格。由樣品中菌株數(shù)計(jì)算公式(C÷V)×M知：1 mL水樣中菌株數(shù)為(38÷0.1)×1003.8×104(個(gè))，故每升水樣中的活菌數(shù)為3.8×107(個(gè))。(2)利用接種環(huán)接種時(shí)，接種環(huán)需灼燒滅菌。利用平板劃線法分離細(xì)菌時(shí)，在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始，可以將聚集的菌體逐步稀釋以便得到單個(gè)菌落。(3)稀釋涂布平板法是用涂布器將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面，故培養(yǎng)后產(chǎn)生的菌落應(yīng)隨機(jī)分布在培養(yǎng)基表面，即B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)液體培養(yǎng)基通過(guò)振蕩可提高溶氧量，同時(shí)使菌體與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，從而提高細(xì)菌的生長(zhǎng)速率。9(2014年四川卷)有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖甲、乙所示。(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、_四類(lèi)，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和_，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成_保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有_ _。(4)為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是_，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？_?！敬鸢浮?1)氮源和無(wú)機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液(3)接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對(duì)照【解析】(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽；在培養(yǎng)基中加入苯磺隆作為唯一碳源，可將只能利用此碳源的菌種篩選出來(lái)。(3)純化菌株時(shí)，通常用接種環(huán)進(jìn)行劃線操作；第二區(qū)域劃第一條線時(shí)，接種環(huán)灼燒后未冷卻，致使所劃第一條線上無(wú)菌落，或若第二次劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始，則也會(huì)導(dǎo)致第二劃線區(qū)域第一條線上無(wú)菌落。(4)由圖乙可知本實(shí)驗(yàn)的目的是探究能降解苯磺隆的物質(zhì)是否是該菌種所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。為使實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)更合理還需再設(shè)置一個(gè)對(duì)照組，將蛋白酶溶液改為等量的蒸餾水，其余設(shè)置不變。