第十四章超敏反應性疾病的免疫學檢驗

第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 返回總目錄返回總目錄目錄目錄 激發(fā)試驗激發(fā)試驗 1IgE的檢測的檢測2免疫復合物檢測免疫復合物檢測3抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗4藥物過敏篩選實驗藥物過敏篩選實驗 5第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l 超敏反應（超敏反應（hypersensitivityhypersensitivity）又稱變態(tài)反應，是又稱變態(tài)反應，是指機體再次接受相同抗原刺激后，發(fā)生的以組織細胞指機體再次接受相同抗原刺激后，發(fā)生的以組織細胞損傷或生理功能紊亂為主的特異性免疫應答。損傷或生理功能紊亂為主的特異性免疫應答。 l 變應原（變應原（allergenallergen）：）：引起超敏反應的抗原稱引起超敏反應的抗原稱之為變應原。之為變應原。 超敏反應超敏反應 第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 第一節(jié)第一節(jié) 激發(fā)試驗激發(fā)試驗激發(fā)試驗（激發(fā)試驗（provocation testprovocation test） 是模擬自然發(fā)是模擬自然發(fā)病條件，用少量超敏原引起一次較輕的超敏反應病條件，用少量超敏原引起一次較輕的超敏反應發(fā)作，達到確定超敏原的一種體內試驗。發(fā)作，達到確定超敏原的一種體內試驗。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l 非特異性激發(fā)：非特異性激發(fā)：是用組胺等刺激物做霧化吸入，是用組胺等刺激物做霧化吸入， 以觀察患者對以觀察患者對型超敏反應的敏感性，進而分型超敏反應的敏感性，進而分 析病因或判定療效。析病因或判定療效。l 特異性激發(fā)：特異性激發(fā)：是用抗原如塵螨等做試驗，對明確是用抗原如塵螨等做試驗，對明確 超敏原有一定價值。超敏原有一定價值。 用于用于型和型和型超敏反應性疾病的檢查。型超敏反應性疾病的檢查。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 一、皮膚試驗一、皮膚試驗是在皮膚進行的體內免疫學試驗，簡稱皮試。是在皮膚進行的體內免疫學試驗，簡稱皮試。機制：機制：型超敏反應型超敏反應第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 型超敏反應型超敏反應第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l皮內試驗皮內試驗l點刺試驗（挑刺或刺痕試驗）點刺試驗（挑刺或刺痕試驗）l斑貼試驗斑貼試驗（一）試驗類型及方法（一）試驗類型及方法 第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （二）結果判定及分級標準（二）結果判定及分級標準l速發(fā)型皮膚試驗結果判定速發(fā)型皮膚試驗結果判定 陽性反應以風團為主；陽性反應以風團為主； 點刺試驗的陽性反應以紅暈為主。點刺試驗的陽性反應以紅暈為主。l遲發(fā)型皮膚試驗結果判定遲發(fā)型皮膚試驗結果判定 陽性結果以紅腫和硬結為主。陽性結果以紅腫和硬結為主。 第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 相同超敏原不同稀釋度相同超敏原不同稀釋度 速發(fā)型速發(fā)型151530min30min內觀察內觀察 遲發(fā)型遲發(fā)型484872h72h內觀察內觀察0.010.03ml/針4mm/針針方法方法結果結果皮內試驗皮內試驗第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l 比皮內試驗敏感性稍低，但假陽性較少；比皮內試驗敏感性稍低，但假陽性較少；l 皮試液濃度要比皮內試驗高皮試液濃度要比皮內試驗高1010100100倍。倍。將試驗抗原與對照液分別將試驗抗原與對照液分別滴于試驗部位的皮膚上滴于試驗部位的皮膚上用針尖透過液滴輕挑一下用針尖透過液滴輕挑一下以刺破皮膚而不出血為度以刺破皮膚而不出血為度1min后拭（吸）去試驗抗原液后拭（吸）去試驗抗原液點刺試驗點刺試驗第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 速發(fā)型皮膚試驗的結果判定標準速發(fā)型皮膚試驗的結果判定標準分級 皮 內 試 驗 點 刺 試 驗- -無風團或小于陰性對照無風團或小于陰性對照無風團反應或小于陰性對照無風團反應或小于陰性對照+ +風團風團3 35mm5mm、紅暈、紅暈20mm20mm無風團無風團, ,陰性對照紅暈陰性對照紅暈20mm20mm+風團風團6 69mm9mm伴紅暈伴紅暈無風團，紅暈無風團，紅暈20mm20mm+風團風團101015mm15mm伴紅暈伴紅暈風團伴紅暈風團伴紅暈+風團風團15mm15mm伴紅暈和偽足伴紅暈和偽足風團伴紅暈和偽足風團伴紅暈和偽足第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 遲發(fā)型皮試結果判定標準遲發(fā)型皮試結果判定標準反應程度 結果判定 - -無反應或小于陰性對照無反應或小于陰性對照 + +僅有紅腫僅有紅腫 +紅腫伴硬結紅腫伴硬結 +紅腫、硬結、小皰紅腫、硬結、小皰 +大皰或大皰或/ /和潰瘍和潰瘍第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l第一次讀：第一次讀：4848小時打開斑試器小時打開斑試器, ,間隔間隔3030min待斑試器待斑試器 壓痕消失后判定結果。壓痕消失后判定結果。l第二次讀：第第二次讀：第3 3天或第天或第4 4天。天。l如懷疑光過敏，在斑貼試驗的基礎上給予紫外線照如懷疑光過敏，在斑貼試驗的基礎上給予紫外線照 射，操作過程相似。射，操作過程相似。 斑貼試驗斑貼試驗第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 斑貼試驗結果判定標準斑貼試驗結果判定標準反應程度反應程度結果判定結果判定 無反應或小于陰性對無反應或小于陰性對照照 + +輕度紅腫、搔癢輕度紅腫、搔癢 +明顯紅腫、時有紅斑明顯紅腫、時有紅斑 +紅腫伴皮疹、水皰紅腫伴皮疹、水皰 +紅腫、水皰伴潰瘍紅腫、水皰伴潰瘍第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （三）結果分析及注意事項（三）結果分析及注意事項 l假陰性出現的常見原因：假陰性出現的常見原因： 皮試液的濃度過低或失效；皮試液的濃度過低或失效； 老年患者或過敏性休克或哮喘大發(fā)作之后；老年患者或過敏性休克或哮喘大發(fā)作之后； 皮試前用過抗組胺藥或免疫抑制劑；皮試前用過抗組胺藥或免疫抑制劑； 操作不當將皮試液注入皮下或注入量過少等。操作不當將皮試液注入皮下或注入量過少等。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （三）結果分析及注意事項（三）結果分析及注意事項 l假陽性出現的常見原因：假陽性出現的常見原因： 皮試液含有非特異性刺激物；皮試液含有非特異性刺激物； 患者患有皮膚劃痕征；患者患有皮膚劃痕征； 操作手法較重；操作手法較重； 注入量較大或濃度過高；注入量較大或濃度過高； 注入少量空氣等。注入少量空氣等。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l詢問病史詢問病史陽性對照陽性對照l必備搶救藥品和設施必備搶救藥品和設施如何避免假性結果的出現：如何避免假性結果的出現：適應證適應證陰性對照陰性對照皮試液濃度皮試液濃度第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （四）應用與評價（四）應用與評價 l預防藥物或疫苗等過敏預防藥物或疫苗等過敏 l防治防治型超敏反應性疾病型超敏反應性疾病 l結核菌素試驗結核菌素試驗l評估機體細胞免疫功能評估機體細胞免疫功能 l預防皮膚接觸過敏預防皮膚接觸過敏第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 結核菌素試驗結核菌素試驗 l是用結核菌素進行皮膚試驗，通過觀察局部是否出是用結核菌素進行皮膚試驗，通過觀察局部是否出現遲發(fā)型超敏反應，判斷機體有無結核分枝桿菌感現遲發(fā)型超敏反應，判斷機體有無結核分枝桿菌感染和對該菌的免疫力。染和對該菌的免疫力。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l陽性：陽性：機體已感染過結核桿菌或機體已感染過結核桿菌或BCG接種成功；接種成功；l強陽性：強陽性：可能有活動性結核?。豢赡苡谢顒有越Y核??；l陰性：陰性：機體未感染過結核分枝桿菌，機體未感染過結核分枝桿菌， 但應考慮：但應考慮： 感染初期；感染初期； 老年人；老年人； 重度結核病患者，機體處于免疫反應低下狀態(tài)；重度結核病患者，機體處于免疫反應低下狀態(tài)； 患有其他疾病?；加衅渌膊?。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 二、二、支氣管激發(fā)試驗支氣管激發(fā)試驗手捏式霧化器手捏式霧化器 bronchial provocative test,BPTl 測定支氣管吸入某種刺激性物質后產生收縮反應程測定支氣管吸入某種刺激性物質后產生收縮反應程 度的方法，亦稱氣道反應性測定；度的方法，亦稱氣道反應性測定；l 吸入一定量的激發(fā)物；吸入一定量的激發(fā)物；l 比較吸入前后肺通氣功能指標；比較吸入前后肺通氣功能指標；l 判斷氣道高反應性程度。判斷氣道高反應性程度。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 霧化抗原顆粒霧化抗原顆粒55微米微米測定肺功能指標：測定肺功能指標：用力肺活量用力肺活量(FVC)1 1秒用力呼氣容積秒用力呼氣容積(FEV1)最大呼氣流速最大呼氣流速(PEF)比氣道傳導率比氣道傳導率(sGaw)射流霧化器射流霧化器第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l 特異性特異性BPTBPT 將一定濃度的抗原刺激物裝入霧化器中將一定濃度的抗原刺激物裝入霧化器中 使受試者經口或鼻吸入霧化顆粒，其攜帶激發(fā)物在使受試者經口或鼻吸入霧化顆粒，其攜帶激發(fā)物在 支氣管樹及肺泡沉積而起作用。支氣管樹及肺泡沉積而起作用。l 非特異性非特異性BPTBPT 將一定濃度的激發(fā)物裝入霧化器中，將一定濃度的激發(fā)物裝入霧化器中， 進行同特異性進行同特異性BPTBPT的操作。的操作。l 吸氣流速、霧化顆粒直徑的大小以及氣道通暢與否吸氣流速、霧化顆粒直徑的大小以及氣道通暢與否 均可影響霧化顆粒在氣道的沉積，從而影響氣道的均可影響霧化顆粒在氣道的沉積，從而影響氣道的 反應性。反應性。（一）試驗類型及方法（一）試驗類型及方法第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 測基礎肺功能測基礎肺功能 激發(fā)物稀釋液：激發(fā)物稀釋液：低濃度低濃度/ /小劑量小劑量雙倍濃度雙倍濃度/ /劑量遞增劑量遞增陽性伴明顯氣促、喘息陽性伴明顯氣促、喘息口吸入口吸入1 11 1分半鐘分半鐘測定肺功能測定肺功能陽性標準陽性標準/ /明顯不適明顯不適/ /臨床癥狀臨床癥狀直至直至激發(fā)物達到最高濃度激發(fā)物達到最高濃度陰性反應陰性反應支氣管支氣管舒張劑舒張劑吸入吸入技術要點技術要點第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （二）測定指標及結果判斷（二）測定指標及結果判斷支氣管支氣管反應有三種類型：速發(fā)、遲發(fā)和雙重反應。反應有三種類型：速發(fā)、遲發(fā)和雙重反應。每次觀察不能小于每次觀察不能小于2424小時。小時。lFEV1：重復性好，結果穩(wěn)定；重復性好，結果穩(wěn)定；lPEF：峰流速儀價格低廉、方便、不受場地限制，峰流速儀價格低廉、方便、不受場地限制， 與與FEV1FEV1有較好的相關性，適合流行病學調查；有較好的相關性，適合流行病學調查；lsGaw：敏感性好，但重復性稍差。敏感性好，但重復性稍差。測定指標測定指標1第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 變應原的確定常以定性試驗判斷結果。變應原的確定常以定性試驗判斷結果。 陽性：陽性：氣道反應性增高氣道反應性增高 FEV1、PEF較基礎下降較基礎下降2020或或sGaw下降下降35%35%， 有時伴有明顯自覺癥狀或肺部聞及哮鳴音。有時伴有明顯自覺癥狀或肺部聞及哮鳴音。定性判斷定性判斷2（二）測定指標及結果判斷（二）測定指標及結果判斷第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 陰性：陰性：氣道反應性正常氣道反應性正常 FEV1、PEF或或sGaw上述標準，正常值為陰性。上述標準，正常值為陰性。 無論激發(fā)試驗陽性或陰性，均應排除氣道反應性的影無論激發(fā)試驗陽性或陰性，均應排除氣道反應性的影響因素?？梢烧?，間隔響因素。可疑者，間隔2 23 3周后復檢或周后復檢或2 2個月后再測。個月后再測。定性判斷定性判斷2（二）測定指標及結果判斷（二）測定指標及結果判斷第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （三）注意事項及禁忌證（三）注意事項及禁忌證 l受試者在心肺功能不全、高血壓、甲亢、妊娠、嚴受試者在心肺功能不全、高血壓、甲亢、妊娠、嚴重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情況下一般不適宜重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情況下一般不適宜作激發(fā)試驗；作激發(fā)試驗；l有過敏性休克，嚴重的血管性水腫及嚴重的喉頭水有過敏性休克，嚴重的血管性水腫及嚴重的喉頭水腫病史者；腫病史者；l一周之內預防接種、職業(yè)性過敏因素的接觸等。一周之內預防接種、職業(yè)性過敏因素的接觸等。禁忌證禁忌證1第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l受試者在檢查前：受試者在檢查前：4848小時：停小時：停！抗組胺藥、色甘酸鈉及皮質激素類藥抗組胺藥、色甘酸鈉及皮質激素類藥; ;1212小時：停小時：停！支氣管擴張劑支氣管擴張劑; ;1515分鐘：實驗室休息分鐘：實驗室休息, ,病史、體檢排除病史、體檢排除BPTBPT的禁忌證。的禁忌證。注意事項注意事項2（三）注意事項及禁忌證（三）注意事項及禁忌證第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l基礎基礎FEV1占預計值占預計值70%70%以上才能進行試驗。以上才能進行試驗。l受試者應為哮喘患者病情穩(wěn)定時或緩解期。受試者應為哮喘患者病情穩(wěn)定時或緩解期。l吸入激發(fā)物的濃度應從小到大，逐漸遞增。吸入激發(fā)物的濃度應從小到大，逐漸遞增。l應備有急救器械、藥品和有經驗的臨床醫(yī)生在場。應備有急救器械、藥品和有經驗的臨床醫(yī)生在場。注意事項注意事項2（三）注意事項及禁忌證（三）注意事項及禁忌證第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （四）應用與評價（四）應用與評價有一定的危險性，但較皮膚試驗的特異性高有一定的危險性，但較皮膚試驗的特異性高與受試者的病史、癥狀和體征相關性較強與受試者的病史、癥狀和體征相關性較強確定支氣管哮喘的過敏原，尤其皮試結果不肯定時確定支氣管哮喘的過敏原，尤其皮試結果不肯定時排除皮試時的假陽性反應和假陰性反應排除皮試時的假陽性反應和假陰性反應檢測新制劑的抗原性、平喘藥療效及觀察脫敏效果檢測新制劑的抗原性、平喘藥療效及觀察脫敏效果缺點是每次僅能用一種抗原，要專門設備和技術，缺點是每次僅能用一種抗原，要專門設備和技術，并需對病人進行訓練并與之配合并需對病人進行訓練并與之配合第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 觀察癥狀觀察癥狀癥狀好轉癥狀好轉或減輕或減輕導致導致三、食物激發(fā)試驗三、食物激發(fā)試驗基礎基礎飲食飲食吃可疑的吃可疑的過敏食物過敏食物癥狀癥狀加重加重1 1周后周后疑似疑似過敏原，重復過敏原，重復3 3次次確定確定某食物為過敏原某食物為過敏原癥狀未減輕癥狀未減輕1 1周后周后排除排除 食物所致過敏食物所致過敏第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 四、其他方法四、其他方法口腔激發(fā)試驗口腔激發(fā)試驗將超敏原直接與口腔黏膜接觸，當口腔將超敏原直接與口腔黏膜接觸，當口腔黏膜出現腫脹和充血時，可判斷為陽性黏膜出現腫脹和充血時，可判斷為陽性反應。反應。 結膜激發(fā)試驗結膜激發(fā)試驗將超敏原滴于一眼，陽性反應為結膜充將超敏原滴于一眼，陽性反應為結膜充血、水腫、分泌增加、搔癢，甚至眼瞼血、水腫、分泌增加、搔癢，甚至眼瞼紅腫。注意假陽性對結果的干擾。紅腫。注意假陽性對結果的干擾。鼻黏膜激發(fā)試驗鼻黏膜激發(fā)試驗將抗原吸入將抗原吸入/ /滴入受試者鼻腔，出現鼻滴入受試者鼻腔，出現鼻黏膜水腫、蒼白、鼻癢、流涕、噴嚏為黏膜水腫、蒼白、鼻癢、流涕、噴嚏為陽性。陽性。 返回章目錄返回章目錄第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 第二節(jié)第二節(jié) IgE的檢測的檢測 一、一、IgE的測定的測定 CLIA敏感度更高，特異性高，定量敏感度更高，特異性高，定量 固相固相RIA是較傳統的是較傳統的IgE檢測方法檢測方法ELISA 雙抗體夾心法，操作簡便，敏感性很雙抗體夾心法，操作簡便，敏感性很高，是測定血清高，是測定血清IgE最常用的方法最常用的方法第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 臨床意義臨床意義 正常人群血清正常人群血清IgE水平受地域環(huán)境、種水平受地域環(huán)境、種 族、遺傳、年齡、性別、寄生蟲感染、測定法及取族、遺傳、年齡、性別、寄生蟲感染、測定法及取 樣等影響，結果有一定差異。樣等影響，結果有一定差異。 參考值參考值0.10.10.9mg/L0.9mg/L某些過敏體質者高于正常某些過敏體質者高于正常100010001000010000倍倍 血清血清IgE高高特應癥、支氣管肺曲菌病、特應癥、支氣管肺曲菌病、藥物性間質性肺炎、麻風、藥物性間質性肺炎、麻風、寄生蟲病及寄生蟲病及IgE型骨髓瘤等型骨髓瘤等第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 二、特異性二、特異性IgE的測定的測定l 用純化的過敏原去檢測相應的用純化的過敏原去檢測相應的IgE抗體的一類試驗?？贵w的一類試驗。酶聯免疫吸附試驗：酶聯免疫吸附試驗：常用間接法測特異性常用間接法測特異性IgE。免疫印跡技術：免疫印跡技術：操作簡單，能一次性測定多種變。操作簡單，能一次性測定多種變。應原的特異性應原的特異性IgE，故臨床已普遍采用，故臨床已普遍采用IBT法。法。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （+ +）E EE EE EE EE EE E洗滌洗滌洗滌洗滌洗滌洗滌結果結果ELISA間接法檢測特異性間接法檢測特異性IgE第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 特異性變應原加入待檢血清特異性變應原加入待檢血清+- 轉印至轉印至NC膜膜NC膜膜多種特異性變應原+ + +- - - +分離特異性變應原條帶待檢血清待檢血清特異性特異性IgE抗抗-IgEHRP底物底物特異性抗原特異性抗原條帶顯色條帶顯色NC膜膜變應原變應原特異性特異性IgE抗抗-IgEHRPIBT檢測特異性檢測特異性IgE返回章目錄返回章目錄第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 第三節(jié)第三節(jié) 免疫復合物檢測免疫復合物檢測l免疫復合物免疫復合物（immune complex, IC）:指由抗原與相應指由抗原與相應的抗體結合而成的復合物。的抗體結合而成的復合物。l局部免疫復合物：局部免疫復合物：沉積在機體的某一局部。沉積在機體的某一局部。l循環(huán)循環(huán)IC（circulating IC, CIC）：）：血液中存在的血液中存在的IC。 l型超敏反應：型超敏反應：在傳染病或性病時，在傳染病或性病時，IC沉淀于局部后沉淀于局部后激活補體，最終導致組織損傷，形成激活補體，最終導致組織損傷，形成IC病。病。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 抗原特異性抗原特異性IC抗抗原非特異性原非特異性IC不考慮形成不考慮形成IC抗原的性質，抗原的性質，檢測未知抗原檢測未知抗原與相應抗體形與相應抗體形成的成的IC總量總量第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 一、抗原非特異性一、抗原非特異性CIC檢測技術檢測技術CIC：分子量分子量600kDa以上，沉降系數以上，沉降系數19S；熱聚合人熱聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG)： 作為參考標準品，繪制標準曲線進行作為參考標準品，繪制標準曲線進行CIC定量或測定定量或測定 A值代表值代表CIC相當于相當于HAHG的含量。的含量。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 CIC的檢測方法：的檢測方法：按抗體分子在結合抗原后發(fā)生的按抗體分子在結合抗原后發(fā)生的物理學和生物學特性的改變而設計。物理學和生物學特性的改變而設計。 PEG比濁法比濁法; ;ELISA法法; ;胞法胞法Raji細胞法細胞法; ;抗球蛋白技術抗球蛋白技術mRF凝膠擴散試驗。凝膠擴散試驗。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （一）（一）PEG比濁法比濁法1.1.基本原理基本原理 聚乙二醇聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）為）為 不帶電荷、直鏈大分子結構的多糖，有強脫水作用，不帶電荷、直鏈大分子結構的多糖，有強脫水作用， 利用利用2%2%4%4%濃度的濃度的PEG可選擇性沉淀大分子可選擇性沉淀大分子CIC。2.2.技術要點技術要點 生物化學檢驗。生物化學檢驗。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 2%PEG沉淀大分子沉淀大分子CIC； 4%PEG沉淀較小分子沉淀較小分子CIC； 超過超過5%PEG選擇性沉淀選擇性沉淀CIC的特性消失；的特性消失； 溫度影響極大，需進行溫差校正；溫度影響極大，需進行溫差校正； 低密度脂蛋白使?jié)岫仍黾?，空腹采血；低密度脂蛋白使?jié)岫仍黾樱崭共裳?高高球蛋白血癥和標本反復凍融濁度增加。球蛋白血癥和標本反復凍融濁度增加。3.3.注意事項注意事項第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （二）（二）ELISA法法1.1.基本原理基本原理 ELISA法測定的法測定的CIC，是能夠結合，是能夠結合C1q的的 IgG類抗體與其特異性抗原形成的類抗體與其特異性抗原形成的CIC。2.2.技術要點技術要點 將聚苯乙烯包被上將聚苯乙烯包被上C1q，加入受檢血清，加入受檢血清， CIC中中IgG的的Fc段與段與C1q結合，再加抗人結合，再加抗人IgGHRP， 形成形成C1q-CIC-抗人抗人IgGHRP復合物，加底物顯色。復合物，加底物顯色。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 靈敏度高于靈敏度高于PEG比濁法，檢測到比濁法，檢測到0.1mg/L，重重復性好等優(yōu)點；復性好等優(yōu)點； C1q制品不易精制制品不易精制, 純品不穩(wěn)定，只能檢出與補純品不穩(wěn)定，只能檢出與補體結合的體結合的CIC。3.3.方法評價方法評價第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （三）細胞法（三）細胞法Raji細胞法細胞法 Raji細胞是從細胞是從Burkitt淋巴瘤分離建株似淋巴瘤分離建株似 B細胞系，在體外繁殖傳代，細胞表面有高密度的細胞系，在體外繁殖傳代，細胞表面有高密度的 C1q、C3b、C3d等補體受體，而且不易脫落。等補體受體，而且不易脫落。1.1.基本原理基本原理第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 將定量待檢血清、將定量待檢血清、HAHG和和Raji細胞混合，使補細胞混合，使補體、體、CIC或或HAHG與與Raji細胞形成復合物，加入細胞形成復合物，加入抗人抗人IgGFIC，形成形成Raji細胞細胞補體補體CIC(或或 HAHG)抗人抗人IgG FIC復合物，檢測熒光強度。復合物，檢測熒光強度。2.2.技術要點技術要點第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 培養(yǎng)條件能改變培養(yǎng)條件能改變Raji細胞細胞其其表面受體的數表面受體的數量及親和性，影響檢測敏感性量及親和性，影響檢測敏感性; ;待檢血清中如有抗淋巴細胞的抗體，能和待檢血清中如有抗淋巴細胞的抗體，能和Raji細胞反應細胞反應; ;SLE血清中的抗血清中的抗DNA也能和也能和Raji細胞反應，細胞反應，使測定結果偏高。使測定結果偏高。 3.3.影響因素影響因素第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 敏感性高敏感性高(6mg/L HAHG)，實用性強；實用性強；缺點需培養(yǎng)缺點需培養(yǎng)Raji細胞和同位素標記抗人細胞和同位素標記抗人IgG，操作繁瑣操作繁瑣;Raii細胞培養(yǎng)較困難，不易長期穩(wěn)定保持細胞培養(yǎng)較困難，不易長期穩(wěn)定保持其特性，培養(yǎng)條件受限。其特性，培養(yǎng)條件受限。4.4.方法評價方法評價第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 （四）抗球蛋白技術（四）抗球蛋白技術mRF凝膠擴散試驗凝膠擴散試驗1.1.基本原理基本原理 IgG或或IgM類自身抗體與類自身抗體與IC中中IgG的的Fc段結合而不與游離段結合而不與游離IgG結合的特性，結合的特性，mRF與與CIC親和親和力較強。力較強。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 2.2.技術要點技術要點 將將mRF和待檢血清中的和待檢血清中的CIC在瓊脂凝在瓊脂凝膠中擴散，膠中擴散，mRFCIC結合形成沉淀現象，進行結合形成沉淀現象，進行CIC定性或定量定性或定量。3.3.方法評價方法評價 敏感度較低敏感度較低100mg/L（HAHG），），mRF來源受限，操作費時，難于常規(guī)應用。來源受限，操作費時，難于常規(guī)應用。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 CIC檢測方法的基本原理及敏感性比較檢測方法的基本原理及敏感性比較方法方法原理原理 敏感性敏感性(mg/L HAHG)PEG比濁法比濁法溶解度溶解度2020超速離心超速離心分子大小分子大小- -分子超濾分子超濾分子大小分子大小- -凝膠過濾凝膠過濾分子大小分子大小3030ELISA法法結合結合C1q0.10.1C1q液相法液相法結合結合C1q1010C1q偏離試驗偏離試驗結合結合C1q1 15 5抗補體實驗抗補體實驗固定補體固定補體0.10.1mRF凝膠擴散法凝膠擴散法結合結合RF100100mRF固相抑制法固相抑制法結合結合RF1 12020抗抗體法抗抗體法結合結合Ig2 23 3Raji細胞法細胞法補體受體補體受體6 6花環(huán)抑制試驗花環(huán)抑制試驗補體受體補體受體1010第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 二、二、CIC檢測方法評價及應用檢測方法評價及應用自身免疫性疾病病程中連續(xù)動態(tài)觀察或輔助診斷：自身免疫性疾病病程中連續(xù)動態(tài)觀察或輔助診斷：試驗方法本身不完善；試驗方法本身不完善；IC形成的復雜性，如在生理狀態(tài)下形成的復雜性，如在生理狀態(tài)下IC是由各種抗原是由各種抗原 與相應抗體所構成的，維持動態(tài)平衡。在病理狀態(tài)與相應抗體所構成的，維持動態(tài)平衡。在病理狀態(tài) 下往往是單一種類下往往是單一種類IC增高，而此種單一成分增高發(fā)增高，而此種單一成分增高發(fā) 展到足以影響展到足以影響IC總體水平情況下，才能被試驗檢出?？傮w水平情況下，才能被試驗檢出。（一）檢測方法評價（一）檢測方法評價第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 腎臟疾?。杭毙阅I小球腎炎、移植腎、腎臟疾?。杭毙阅I小球腎炎、移植腎、IgA腎病；腎病；消化系統疾病：慢活肝炎、原發(fā)性膽淤性肝硬化；消化系統疾?。郝罡窝?、原發(fā)性膽淤性肝硬化；皮膚?。菏n麻疹、天皰瘡、皮疹性皮炎；皮膚?。菏n麻疹、天皰瘡、皮疹性皮炎；型超敏反應性疾病型超敏反應性疾病：SLE、RA、硬皮癥、自身硬皮癥、自身 免疫性溶血性貧血等。免疫性溶血性貧血等。此外，此外，CIC的檢測對于腫瘤、肝癌、白血病、霍奇金的檢測對于腫瘤、肝癌、白血病、霍奇金病、神經肌肉萎縮性側索硬化癥等疾病的診斷。病、神經肌肉萎縮性側索硬化癥等疾病的診斷。( (二二) )臨床應用臨床應用第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 固定或沉積于病變局部組織中的固定或沉積于病變局部組織中的IC測定常用免測定常用免疫組化技術，如熒光免疫組化技術檢測到組織標本疫組化技術，如熒光免疫組化技術檢測到組織標本有有Ig和補體。受累組織的成分、構型和特定的部位和補體。受累組織的成分、構型和特定的部位可為疾病的嚴重程度和預后提供依據?？蔀榧膊〉膰乐爻潭群皖A后提供依據。三、沉積于組織中三、沉積于組織中IC 的測定的測定返回章目錄返回章目錄第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 類型類型第四節(jié)第四節(jié) 抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗(Coombs試驗試驗)l不完全抗體：不完全抗體：抗體分子較短小，只能與顆粒抗原抗體分子較短小，只能與顆粒抗原一方相結合，不出現可見的凝集現象，但能封閉一方相結合，不出現可見的凝集現象，但能封閉抗原決定簇，使其不能再與完全抗體結合?？乖瓫Q定簇，使其不能再與完全抗體結合。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗（antiglobulin test,AGT）：）：將人將人 球蛋白注入異種動物，誘導動物產生抗人球蛋白球蛋白注入異種動物，誘導動物產生抗人球蛋白血清血清 （antiglobulin serum，AGS)，AGS加入表加入表面結合有不完全抗體的紅細胞復合物中，就能出面結合有不完全抗體的紅細胞復合物中，就能出現可見的凝集現象?，F可見的凝集現象。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 作用：作用：檢測紅細胞表面結檢測紅細胞表面結合的不完全抗體。合的不完全抗體。臨床意義：臨床意義：新生兒溶血癥新生兒溶血癥和自身免疫性溶血性貧血和自身免疫性溶血性貧血的診斷。的診斷。RBC為為Rh+7S7S的的IgG體內發(fā)生體內發(fā)生+抗抗IgG體外測試體外測試抽血抽血一、直接抗球蛋白試驗一、直接抗球蛋白試驗第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 檢測游離在血檢測游離在血清中的不完全清中的不完全抗體或紅細胞抗體或紅細胞表面的抗原表面的抗原RBC為為Rh+ 不完全抗體試劑不完全抗體試劑+抗抗IgG體外測試體外測試二、間接抗球蛋白試驗二、間接抗球蛋白試驗第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 間接間接Coombs試驗各反應物加入量試驗各反應物加入量反應物反應物受檢管受檢管陽性對照陽性對照陰性對照陰性對照血清（受檢或已知）血清（受檢或已知）2 2滴滴5%5%紅細胞懸液紅細胞懸液( (已知或受檢已知或受檢) )1 1滴滴不完全抗不完全抗D血清血清2 2滴滴AB型血清型血清2 2滴滴5% 5% Rh陽性紅細胞懸液陽性紅細胞懸液1 1滴滴1 1滴滴1技術要點技術要點第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 凝集為陽性，表明受檢血清有不完全抗體或紅細凝集為陽性，表明受檢血清有不完全抗體或紅細胞上有相應抗原；同時具備陽性對照管凝集陰性對照胞上有相應抗原；同時具備陽性對照管凝集陰性對照管不凝集，如有不完全抗體，可將血清以作倍比稀釋管不凝集，如有不完全抗體，可將血清以作倍比稀釋進行效價測定。進行效價測定。2結果判斷結果判斷第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 在在37水浴中，抗體吸附相應紅細胞上的結合程水浴中，抗體吸附相應紅細胞上的結合程 度，與致敏的時間、離子強度有關；度，與致敏的時間、離子強度有關； 離心速度和時間十分重要，原則應以最小的離心離心速度和時間十分重要，原則應以最小的離心 力和最短的離心時間使陽性對照管出現反應為宜。力和最短的離心時間使陽性對照管出現反應為宜。34 是一種極為敏感的檢查不完全抗體的方法，也是是一種極為敏感的檢查不完全抗體的方法，也是RhD 檢出的確證試驗。操作繁雜，受試驗條件影響較大。檢出的確證試驗。操作繁雜，受試驗條件影響較大。注意事項注意事項方法評價方法評價第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l血液病的檢測；血液病的檢測；l鑒定血型和檢查血清中不完全抗體；鑒定血型和檢查血清中不完全抗體；l有助于有助于RhD的檢出，多用于檢測母體的檢出，多用于檢測母體RhD抗體；抗體；l輸血前交叉配血試驗及其他特殊研究；輸血前交叉配血試驗及其他特殊研究；l及早發(fā)現和避免新生兒溶血癥的發(fā)生；及早發(fā)現和避免新生兒溶血癥的發(fā)生；l紅細胞不相容的輸血所產生的血型抗體進行檢測。紅細胞不相容的輸血所產生的血型抗體進行檢測。5返回章目錄返回章目錄臨床意義臨床意義第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l 方法：熒光分光光度法、放射免疫分析法及酶免疫方法：熒光分光光度法、放射免疫分析法及酶免疫 分析法測定。分析法測定。l 變應原刺激劑致嗜堿粒細胞釋放組胺，可以檢測出嗜變應原刺激劑致嗜堿粒細胞釋放組胺，可以檢測出嗜 堿粒細胞的釋放能力，變應原刺激劑可以特異性確定堿粒細胞的釋放能力，變應原刺激劑可以特異性確定 變應原的類型。變應原的類型。類型類型第五節(jié)第五節(jié) 藥物過敏篩選實驗藥物過敏篩選實驗一、組胺含量測定一、組胺含量測定第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 l BHRT是變應原刺激劑刺激純化、洗滌后的嗜堿粒細是變應原刺激劑刺激純化、洗滌后的嗜堿粒細 胞懸液而后釋放化學介質組胺，通過測定組胺的量來胞懸液而后釋放化學介質組胺，通過測定組胺的量來 反映嗜堿粒細胞的釋放能力。反映嗜堿粒細胞的釋放能力。l BHRT的結果可以從細胞釋放一定量的組胺所需要的的結果可以從細胞釋放一定量的組胺所需要的 變應原濃度或在一定濃度的變應原作用下細胞所釋放變應原濃度或在一定濃度的變應原作用下細胞所釋放 定量的組胺量來表達。定量的組胺量來表達。l 實驗的靈敏度高，結果可靠，但價格較高。實驗的靈敏度高，結果可靠，但價格較高。嗜堿粒細胞組胺釋放嗜堿粒細胞組胺釋放(basophil histamine release test，BHRT)第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 (human basophil degranulation test，HBDT)人嗜堿粒細胞脫顆粒試驗人嗜堿粒細胞脫顆粒試驗嗜堿粒細胞胞質中硫酸肝素顆?？梢员粔A性染料嗜堿粒細胞胞質中硫酸肝素顆?？梢员粔A性染料( (甲苯胺藍、阿利新藍等甲苯胺藍、阿利新藍等) )染色。當嗜堿粒細胞表染色。當嗜堿粒細胞表面結合的面結合的IgE與過敏原結合后，嗜堿粒細胞脫顆粒，與過敏原結合后，嗜堿粒細胞脫顆粒，則不再被染色，染色完整的細胞減少，從減少的則不再被染色，染色完整的細胞減少，從減少的完整細胞判斷變應原引起的過敏狀況。完整細胞判斷變應原引起的過敏狀況。第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 類胰蛋白酶類胰蛋白酶類胰蛋白酶：類胰蛋白酶：是是MC更具有選擇性的標志，更具有選擇性的標志，類胰類胰蛋白酶儲存于分泌顆粒中，蛋白酶儲存于分泌顆粒中，MC激活時，被釋放至激活時，被釋放至細胞外；細胞外；類胰蛋白酶原以酶原的形式存在，它的類胰蛋白酶原以酶原的形式存在，它的釋放不需要釋放不需要MC的激活，所以它的血清水平可以反的激活，所以它的血清水平可以反映體內映體內MC數目。嗜堿粒細胞幾乎不含類胰蛋白酶。數目。嗜堿粒細胞幾乎不含類胰蛋白酶。返回章目錄返回章目錄第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 小小 結結 超敏反應性疾病通過體內和體外實驗，可進行變超敏反應性疾病通過體內和體外實驗，可進行變應原的相關檢測，包括應原的相關檢測，包括激發(fā)試驗激發(fā)試驗（根據刺激物不同（根據刺激物不同分為非特異性和特異性激發(fā)試驗，按檢測部位又分分為非特異性和特異性激發(fā)試驗，按檢測部位又分為皮膚試驗、為皮膚試驗、支氣管激發(fā)試驗支氣管激發(fā)試驗、食物激發(fā)試驗等）；、食物激發(fā)試驗等）；IgEIgE檢測檢測（總（總IgE和特異性和特異性IgE檢測）檢測）；免疫復合物檢免疫復合物檢測測主要針對抗原非特異性主要針對抗原非特異性CICCIC；抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗（直接（直接法和間接法）；法和間接法）；藥物過敏篩選實驗藥物過敏篩選實驗（組胺含量測定（組胺含量測定和特異性抗體測定和特異性抗體測定 ）。）。返回章目錄返回章目錄第十四章第十四章 超敏反應性疾病的免疫學檢驗超敏反應性疾病的免疫學檢驗 THANK YOU FOR YOUR ATTENTION!返回總目錄返回總目錄