實驗室病原微生物危害評估報告.doc

實驗室病原微生物危害評估報告第1版生效日期：2016年08月02日XX市疾病預(yù)防控制中心綜合實驗室目 錄第一章 綜合實驗室實驗活動生物危害評估報告1第二章 結(jié)核分枝桿菌的生物危害評估報告7第三章 金黃色葡萄球菌的生物危害評估報告12第四章 副溶血性弧菌的生物危害評估報告15第五章 致瀉大腸埃希菌的生物危害評估報告17第六章 傷寒沙門氏菌的生物危害評估報告19第七章 志賀氏菌的生物危害評估報告22第八章 蠟樣芽胞桿菌的生物危害評估報告24第九章 單核增生李斯特菌的危害評估報告28第十章 流感病毒的危害評估報告31第十一章 禽流感病毒的危害評估報告33第十二章 腸道病毒71型的危害評估報告36第十三章 麻疹病毒的生物危害評估報告39第十四章 人類免疫缺陷病毒HIV的生物危害評估報告41第十五章 乙型腦炎病毒的生物危害評估報告43第一章 綜合實驗室實驗活動生物危害評估報告為保證實驗室工作人員在工作中不被危害性生物及物品所侵害，保證危害性物品不外泄，對實驗室工作環(huán)境進行評估，以鑒定生物安全防護等級，保證生物安全。一、危害程度分類及生物安全防護水平評估生物源危害主要是由各種檢驗標本中的微生物，尤其是病原微生物引起的，包括細菌、病毒、寄生蟲等，具有潛在危險性，可能引起實驗室感染；微生物室還進行一定數(shù)量的各種條件致病性細菌及真菌的分離培養(yǎng)工作，工作過程存在病原微生物對實驗人員、環(huán)境污染的風險；除之以外實驗室還存在觸電、火災(zāi)、化學品腐蝕、偷盜等危險。根據(jù)實驗室生物安全通用要求，本實驗室不涉及人間傳染的病原微生物名錄中高致病性微生物的分離培養(yǎng)及高致病性微生物的菌、毒種的保藏，實驗室采用一定防護措施就能控制感染或防范災(zāi)害，或者對相應(yīng)病原體存在有效的免疫方法。評估我實驗室生物安全防護水平按二級實驗室（BSL-2）生物安全要求。二、實驗人員和實驗室安全防護的一般要求1.吸煙危害評估及防護（1）實驗室工作區(qū)內(nèi)絕對禁止吸煙；（2）點燃的香煙是易燃液體的潛在火種；（3）香煙、雪茄或煙斗都是傳染細菌和接觸毒物的途徑。2. 實驗區(qū)內(nèi)食用食物、飲料及其它危害評估及防護（1）實驗工作區(qū)內(nèi)不得有食物、飲料及存在“手口”接觸可能的其它物質(zhì)（2）實驗室工作區(qū)內(nèi)的冰箱禁止存放食物。專用存放食物的冰箱應(yīng)放置在允許進食、喝水的休息區(qū)內(nèi)。3.使用化妝品危害評估及防護實驗工作區(qū)內(nèi)禁止使用化妝品進行化妝，但允許并建議經(jīng)常洗手的實驗人員使用護手霜。4. 實驗中眼睛和面部的風險評估及防護（1）處理腐蝕性或毒性物質(zhì)時，須使用安全鏡、面罩或其它保護眼睛和面部的防護用品。（2）工作人員在實驗室的危險區(qū)內(nèi)不要佩戴隱形眼鏡，除非同時使用護目鏡或面罩。（3）使用、處理能夠通過粘膜和皮膚感染的試劑，或有可能發(fā)生試劑濺溢的情況時，必須佩帶護目鏡、面罩或面具式呼吸器。5. 實驗中服裝和個人防護裝備的一般要求（1）應(yīng)穿著符合實驗室工作需要的服裝，工作服應(yīng)干凈、整潔。當工作中有危險物噴濺到身上的可能時，應(yīng)使用一次性塑料圍裙或防滲外罩。有時還需要佩戴其它防護裝備如：手套、護目鏡、披肩或面罩等。（2）采血員和其他需要接觸病員的工作人員，在接觸病員時需穿實驗服或工作服。（3）個人防護服裝應(yīng)定期更換以保持清潔，遇被危險物品嚴重污染，則應(yīng)立即更換。（4）不得在實驗室內(nèi)設(shè)值班床，嚴禁在實驗室內(nèi)住宿。6. 實驗中足部防護的一般要求在工作區(qū)內(nèi)，應(yīng)穿舒適、防滑、并能保護整個腳面的鞋。在有可能發(fā)生液體濺溢的工作崗位，可加套一次性防滲漏鞋套。帆布鞋可吸收化學物品和有傳染性的液體，所以最好穿皮革或其它防滲漏的合成材料的鞋。7. 實驗中頭發(fā)和飾物的風險評估及防護留長發(fā)的工作人員應(yīng)將頭發(fā)盤在腦后，以防止頭發(fā)接觸到被污染物和避免人體脫屑落入工作區(qū)。頭發(fā)不得垂肩，應(yīng)與離心機、切片機等正在運轉(zhuǎn)的器械保持一定距離8. 實驗中胡須的風險評估及防護蓄有胡須的男性工作人員必須遵守上項（7）的規(guī)定。9.洗手的要求實驗室工作人員在脫下手套后、離開實驗室前、接觸患者前后、以及在進食或吸煙前都應(yīng)該洗手。接觸血液、體液或其它污染物時，應(yīng)立即洗手。10.用口移液的危害評估及防護用口液移可導致多種病原體的實驗室感染。所有實驗室操作禁止用口液移，應(yīng)使用助吸器具。11.銳利物品的危害評估及防護謹慎處理針頭、解剖刀、和碎玻璃等銳利物品。使用后的針具不要折斷、彎曲、破損、重復(fù)使用或用手重裝在針管上。一次性注射器上的針頭用后不要取下。銳利物品應(yīng)立即放置在專用銳器盒內(nèi)，在完全裝滿之前或48小時之內(nèi)更換。12.隔離措施的要求接觸患者時，實驗室工作人員應(yīng)遵守醫(yī)院的隔離措施。13.工作環(huán)境的要求（1）“清潔”區(qū)和“非清潔”區(qū)根據(jù)實驗室的具體工作情況由主任選擇并確定“清潔”和“非清潔”工作區(qū)，在清潔區(qū)和非清潔區(qū)之間設(shè)“緩沖室”。被指定為“清潔”的區(qū)域，則應(yīng)努力保持清潔，如采取預(yù)防措施，防止電話、視頻顯示器終端、鍵盤、門柄及其它經(jīng)常被手或手上的手套觸摸的物品的污染，要求工作人員在觸摸設(shè)備（如計算機鍵盤及電話的保護罩等）前取下手套，制定儀器設(shè)備和工作面的常規(guī)消毒和清潔制度和對嚴重污染的緊急處理措施辦法。被指定為“非清潔”的區(qū)域，允許戴手套接觸所有物品（如電話、門柄、計算機終端和其它物品），所有這些物品的表面都認為是不清潔的。未戴手套的人員如果使用該區(qū)域內(nèi)的電話、計算機終端或其它設(shè)備，應(yīng)該戴上手套，或在使用后立即徹底洗手。“清潔”和“非清潔”區(qū)都應(yīng)保持整潔。實驗臺至少應(yīng)每天清潔、消毒一次，如有必要可以多次清洗、消毒。在處理濺溢的樣品或嚴重污染的工作面時，應(yīng)戴上手套和其它個人防護裝備、使用相應(yīng)合適的清潔劑清除所有的濺溢物。（2）冰箱、冷凍柜、水浴和離心機應(yīng)該定期清洗和消毒（時間由實驗室主任來決定），在發(fā)生嚴重污染后應(yīng)立即進行清洗和消毒。進行清洗、消毒時要戴上手套，穿上工作服或其它合適的防護服。（3）外衣：外衣（實驗服、工作服、和圍裙）應(yīng)懸掛在遠離散熱器、蒸汽管道、供暖裝置、以及有明火的地方，不要掛在壓縮氣瓶或滅火器上，也不要掛在門的玻璃隔板上，妨礙視線。“清潔”的和“非清潔”的個人防護服要分開存放。（4）垃圾處理：每天至少清理垃圾一次。（5）裝飾：不得在電燈、燈座或儀器上進行裝飾，更不要使用電子裝飾物、蠟燭、圣誕樹等有引起火災(zāi)危險的裝飾品。（6）為便于清潔消毒，實驗室內(nèi)不應(yīng)有織物裝飾的用具或椅子。（7）個人物品：實驗工作區(qū)不得存放個人物品，如錢包、外套、皮靴、咖啡杯、運動服、預(yù)包裝的食品和藥品等。（8）實驗室內(nèi)應(yīng)配備應(yīng)急設(shè)備，如應(yīng)急洗眼裝置，酒精等消毒用品。（9）實驗室應(yīng)安裝非手觸式洗手裝置。（10）實驗室內(nèi)應(yīng)安裝防蚊蠅裝置，應(yīng)定期投撒滅蟑螂、老鼠的藥物。（11）用后的廢棄物品：實驗工作區(qū)內(nèi)的用后廢棄物品存量不要太大。具危險性的液體如酸或堿性液體應(yīng)放在視平線以下。較大的廢棄物容器應(yīng)靠近地面存放。（12）出口通路：實驗室的出口和通道必須保持暢通無阻，不準堆放物品、垃圾、裝置、或設(shè)備。安全門必須保持暢通，不得堵塞。注意：無論任何時間、何種原因都不得阻塞通往滅火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。14.使用玻璃器具的危害評估及防護操作玻璃器具時應(yīng)遵循下述安全規(guī)則：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃試管上的塞子，粘緊的試管可用刀切開分離。（3）接觸過傳染性物的玻璃器具，清洗之前，應(yīng)先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片應(yīng)丟棄在有專門標記的、單獨的、不易刺破的容器里。（5）高熱操作玻璃器具時應(yīng)戴隔熱手套。（6）在不影響實驗質(zhì)量的前提下，應(yīng)盡量減少使用玻璃器具。15. 使用離心機的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少（1）氣溶膠：離心過程中應(yīng)控制氣溶膠的產(chǎn)生在最低水平。（2）操作：離心機只有在蓋好蓋板后，才能啟動。（3）傳染性物品：所有能夠產(chǎn)生氣溶膠進行播散的生物制品或標本，都應(yīng)使用密封的離心管，并在蓋緊的離心頭或轉(zhuǎn)頭中進行。（4）為防止氣溶膠飛溢，應(yīng)在離心停止30分鐘后打開離心物。（5）清洗：按照消毒隔離制度要求清洗離心機。（6）平衡：離心時應(yīng)保持合適的平衡，以保證離心的順利進行。16采集血樣的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）極少呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學腐蝕極少放射無（1）每天早晨用500mg/L的”84”消毒液擦拭抽血臺面及其它物表，并開紫外燈消毒至少30分鐘，并做好記錄。（2）工人每天早晨更換消毒液，包括浸泡銳器、止血帶的消毒液和手消毒液。（3）工作人員必須穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格的一次性用品。嚴禁使用包裝破損，超過有效期的一次性用品。（5）嚴格執(zhí)行無菌技術(shù)操作規(guī)程、靜脈采血必須一人一針一管一巾一帶。微量采血應(yīng)做到一人一針一管一片，對每位病人操作前洗手或手消毒。（6）無菌物品如棉球需每天更換，開啟后使用不得超過24小時。（7）工作人員需對銳器如采血針采取高度預(yù)防措施，用過的采血針需浸泡在含有消毒液的厚壁容器中。17. 標本(血清、血漿、全血、尿)上檢驗分析儀檢測過程的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學腐蝕無放射無（1）為了避免液滴和氣溶膠和擴散，實驗室儀器加樣、加液，清洗等過程應(yīng)在封閉罩內(nèi)進行的。（2）實驗中使后的比色盤，反應(yīng)杯等廢棄物應(yīng)當收集在封閉的容器內(nèi)，集中處置。（3）在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對對儀器進行消毒。血液、體液污染物表時，應(yīng)立即消毒。（4）工作人員要戴手套進行操作。18. 標本(血清、血漿、全血、尿、糞)手工檢測過程的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學腐蝕可能放射無（1）每天早晨做好實驗室的清潔消毒工作。（2）工作人員要戴口罩、手套進行操作。（3）實驗中使用的竹簽用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）廢棄的標本連同試管、蓋帽要用1000mg /L“84”消毒液浸泡，由工人統(tǒng)一清潔后進行無害化處理。（5）實驗中使用的吸頭、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（6）標本污染物表時，應(yīng)立即消毒。（7）離心時，發(fā)生試管破裂或標本濺出，由操作者負責用有效消毒劑對離心機內(nèi)部進行及時消毒處置。19微生物分離鑒定藥敏試驗及基因擴增試驗活動的危害評估及防護感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）可能盜竊可能化學腐蝕極少放射無（1）每天早晨開紫外燈消毒空氣至少30分鐘，同時做好各物表、儀器的清潔消毒工作。（2）實驗人員要戴手套、帽子進行操作。當估計會出現(xiàn)微生物和危險物濺出時要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用的接種環(huán)、鑷子等金屬物品要在酒精燈火焰上燒灼滅菌。（4）可能產(chǎn)生致病性微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作如涂片、接種時，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作，并使用個體防護設(shè)備。（5）實驗室內(nèi)的各種標本、菌種、培養(yǎng)基和其它廢棄物在運出實驗室前必須滅活（高壓、浸泡），需運出實驗室滅活的物品必須放在專用的密閉容器中。（6）操作過程中發(fā)生菌種污染物表時，應(yīng)馬上采取措施進行物表消毒。（7）當發(fā)生致病性微生物氣溶膠污染時，應(yīng)馬上進行人員疏散，通知負責人到現(xiàn)場進行指導消毒。（8）對菌種的保存應(yīng)嚴格遵守菌種保存制度，嚴禁擅自保存各種國家法定傳染病菌株或毒株。（9）實驗人員離開實驗室前要去除手套，確認無污染或污染已排除，后方可洗手離去。（10）微生物、PCR實驗室要設(shè)置紗窗、擋鼠板。三、特定實驗活動危害評估見以下章節(jié)之各種病原體的危害評估四、工作人員素質(zhì)本實驗室共有技術(shù)人員10名，其中申請進入BSL-2實驗室10名。碩士學位3名，5名曾經(jīng)從事微生物學實驗，5名曾經(jīng)從事無菌實驗室活動經(jīng)歷，10名技術(shù)人員學習過生物安全手冊并通過定期培訓及考核成績合格，經(jīng)體檢無現(xiàn)患嚴重疾病，本實驗室無其他患傳染性疾病的技術(shù)人員，健康狀態(tài)良好。五、評估結(jié)論本次評估本實驗室共14項可能潛在危險的實驗活動，在實驗操作實驗施過程中在無控制措施情況下可能產(chǎn)生的高危害度2項，中度12項，低度0項；對危害發(fā)生的可能性分析，實驗危害較大可能發(fā)生的有0項，可能發(fā)生2項，較少可能發(fā)生12項；這些危害造成高度嚴重后果的2項，后果嚴重性中度的12項，后果嚴重性低度的0項。根據(jù)擬采取的預(yù)防控制措施后依然存在的殘留風險為高度0項，中度0項，低度危害12項。評 估：XX市疾病預(yù)防控制中心綜合實驗室評估人：審 核：XX市疾病預(yù)防控制中心生物安全管理委員會審核人： 2016年8月02日第二章 結(jié)核分枝桿菌的生物危害評估報告結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（偶爾可由牛型或非洲型分枝桿菌）引起的一種細菌性疾病。結(jié)核病可累及全身各個器官，但以肺結(jié)核最為常見。該病具有傳染性強，散播面廣，不分地域均可發(fā)生。結(jié)核病可由呼吸道、消化道、皮膚等途徑感染，但其主要傳播途徑是以空氣為傳播因子的呼吸道傳染，而排菌的肺結(jié)核病人傳染性更大，是傳播感染的主要傳染源。1. 傳播途徑呼吸道感染（respirator tract infection）是肺結(jié)核的主要傳染途徑（routes of infection），飛沬傳染（droplet infection）為最常見的方式。傳染源主要是排菌的肺結(jié)核患者（尤其是痰涂片陽性未經(jīng)治療者）。飛沬核（droplet nuclei） 10m時可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打噴嚏時噴出的帶菌飛沫而受感染。 2. 危害程度分級微生物按其是否致病、致病力強弱、危害人體的嚴重性、傳染性的大小、臨近人群的抵抗力、有無免疫制劑和特效治療藥物等綜合評價，可分為四個不同的危害等級。結(jié)核分枝桿菌屬于3級危險。3級危險（對個體具有極大危害，對群體具有較大的危害性）：指有特殊危險的致病菌。感染后癥狀較重，并可能危及生命，或者缺乏有效的預(yù)防方法、發(fā)病后不易治療的微生物。3. 實驗室感染的原因及預(yù)防（一）技術(shù)操作可能導致的感染及其預(yù)防措施。1. 接種：應(yīng)使用無彈力的鉑絲接種環(huán)，結(jié)核菌接種后接種環(huán)火焰滅菌易崩散，酒精燈燒灼時要特別注意。2. 混勻：吸管吸吹菌液時不要產(chǎn)生氣泡，應(yīng)沿容器壁排出。3. 研磨：最好使用組織研磨器，乳缽易產(chǎn)生氣溶膠。4. 移液：吸管上端的棉花松緊要適度，吸液時要從管底吸取，吹出時要輕緩，不要全部吹凈，以免產(chǎn)生氣泡，形成氣溶膠。5. 開封：要避免壓力和氣流的急劇變化。6. 離心：離心管套底墊要完好，使用匹配的管、套、離心頭，加蓋。7. 注射：做好個人防護，正確使用注射器。8. 搬運：室內(nèi)移動要避免滑落，移出室外要有堅實密閉的外包裝。（二）技術(shù)保障1. 雙人原則，不允許單人操作1、2類病原。2. 入口處應(yīng)有危險警示標識，并標明所操作的微生物的種類。3. 培訓考核上崗，掌握相關(guān)技術(shù)操作要領(lǐng)，熟悉規(guī)章制度，適應(yīng)工作環(huán)境。4. 完備的管理措施，技術(shù)操作規(guī)范。5. 良好的工作行為可降低生物危害風險。4. 實驗室中的分枝桿菌及分枝桿菌氣溶膠結(jié)核病實驗室工作人員，在分枝桿菌檢驗過程中，會接觸到各種潛在感染源標本和各種危險物，特別是許多操作易產(chǎn)生分枝桿菌氣溶膠。含有結(jié)核分枝桿菌的微滴核（1-5微米）通過呼吸進入人體肺泡，可以黏附在肺泡內(nèi)生長繁殖。因此，首先要對實驗室中生物危險物產(chǎn)生的途徑和存在的地點有充分的認識，以便明確生物安全防護的環(huán)節(jié)。(一) 分枝桿菌存在的地點1、各種臨床標本，通常是痰，胃或支氣管灌洗液、腦脊液、尿液等。2、被污染的操作臺、器械、儀器、試劑等。3、收集的結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌菌株等。4、細菌學實驗室的部分區(qū)域。(二) 產(chǎn)生分枝桿菌氣溶膠1、實驗室內(nèi)可疑肺結(jié)核患者痰標本的采集。2、樣本的制備和涂片的火焰固定。3、分離培養(yǎng)或接種培養(yǎng)物。4、用火焰燒灼接種環(huán)。5、使用移液器混合培養(yǎng)物。6、培養(yǎng)管或培養(yǎng)瓶中含有培養(yǎng)物的滴落物。7、溢出的分枝桿菌懸浮液。8、高速混合含有分枝桿菌的液體。9、轉(zhuǎn)移液態(tài)培養(yǎng)物和上清液，或培養(yǎng)液、上清液的傾倒。10、離心過程中離心管的破碎。11、用做原代培養(yǎng)所需的組織勻漿。5. 安全防護(一) 嚴格遵守實驗室安全操作規(guī)程，任何時侯都要警惕分枝桿菌氣溶膠的產(chǎn)生。實驗室的技術(shù)人員必須經(jīng)過生物安全培訓后方可上崗。(二) 實驗室應(yīng)嚴格限制非實驗人員進入，減少實驗室內(nèi)外交叉生物污染。完成實驗工作離開實驗室，要關(guān)好門窗。(三) 進入實驗室應(yīng)避免攜帶非必需物品。(四) 進入實驗室，工作人員應(yīng)穿著工作服，操作時應(yīng)穿戴防護隔離衣、口罩、帽子和手套，長發(fā)者應(yīng)將頭發(fā)裝束在帽子內(nèi)。(五) 實驗過程中絕對禁止吸煙、飲食等，不要以手撫頭面部等。(六) 試驗前須開啟紫外線燈對實驗室和操作區(qū)域進行照射消毒1小時以上；試驗結(jié)束后，立即開啟紫外燈進行照射消毒2小時以上。(七) 任何試驗的開始和結(jié)束后，操作人員要用70%酒精浸泡雙手或仔細擦后，用清潔劑或清水洗凈。(八) 每次試驗結(jié)束后，必須清理好實驗臺，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗實驗臺面。(九) 實驗室中的生物危險品要根據(jù)檢查項目和性質(zhì)不同，局限在相應(yīng)的試驗區(qū)間，不得隨意將其帶到其它的實驗室。(十) 實驗室內(nèi)任何微生物的樣本，廢棄物都必須經(jīng)高溫高壓滅菌后，方可按一般垃圾處理。6. 安全保障(一) 首先各級實驗室應(yīng)按等級要求完善實驗設(shè)施，如簡易安全柜內(nèi)的抽氣排風功能、紫外燈消毒功能，生物安全柜維護與除菌濾膜定期更換等。(二) 實驗室采集病人痰標本時應(yīng)在戶外進行，避免因病人咳漱造成室內(nèi)氣溶膠污染。(三) 普通實驗室應(yīng)注意氣流方向，實驗過程中盡量避免強氣流變化而產(chǎn)生氣溶膠（如涂片、染色過程中）。(四) 細菌的分離培養(yǎng)、菌種開封、轉(zhuǎn)種、研磨、稀釋等操作，各級實驗室均應(yīng)在簡易安全柜或生物安全柜中進行。(五) 使用接種環(huán)進行操作時，接種環(huán)應(yīng)在工作燈的內(nèi)焰中燃燒，以避免菌液或菌塊飛濺。(六) 稀釋菌液時，吸管、針管要緩慢插入試管或燒瓶底部，小心操作避免產(chǎn)生氣泡或氣溶膠。 (七) 使用注射器加樣時，用過的針頭切勿再重新入套或拔開注射器與針頭，應(yīng)直接放入銳器收集器，以免劃破皮膚造成接種感染。(八) 菌株庫要設(shè)專人管理，并按照國家微生物菌毒種管理辦法執(zhí)行。(九) 進行毒菌操作過程中，不要穿戴巳經(jīng)污染的防護性手套觸摸門柄、儀器或毒菌區(qū)以外區(qū)域，避免由于粗心擴大污染范圍。(十) 試驗結(jié)束后，操作過程中所有可能與生物危險物接觸或被污染的試驗器械和物品，能夠高壓消毒的必須高壓消毒，不能進行高壓消毒的設(shè)備、儀器，應(yīng)使用有效的消毒劑擦洗后再以紫外燈近距離長時間消毒。 (十一) 實驗中發(fā)生意外污染情況，應(yīng)立即通知主管人員并做好處理污染物和相應(yīng)區(qū)域的準備，不得擅自采用其它禁止的方法進行消毒處理。(十二) 實驗室主任應(yīng)制定規(guī)章和程序，只有告知潛在風險并符合進入實驗室特殊要求(如，經(jīng)過免疫接種)的人，才能進入實驗室。(十三) 操作致病性微生物時，實驗室入口處應(yīng)貼有生物危險標志，并顯示以下信息：有關(guān)病原、生物安全級別、免疫接種要求、研究人員姓名、電話號碼、在實驗室中必須佩帶的個人防護設(shè)施、出實驗室所要求的程序。(十四) 實驗室主任為實驗室人員特別制定的標準操作程序或生物安全手冊中，應(yīng)包括生物安全程序。對于有特殊風險的人員，要求閱讀并在工作及程序上遵照執(zhí)行。(十五) 實驗室主任保證實驗及其輔助人員接受適當?shù)呐嘤枺ê凸ぷ饔嘘P(guān)的可能存在的風險、防止暴露的必要措施和暴露評估程序。(十六) 實驗室所用任何個人防護裝備應(yīng)符合國家有關(guān)標準的要求。實驗室應(yīng)確保具備足夠的有適當防護水平的清潔防護服供使用。還應(yīng)穿戴其它的個人防護裝備，如手套、防護鏡、面具、頭部面部保護罩等。(十七) 處理樣本的過程中易產(chǎn)生高危害氣溶膠時，要求同時使用適當?shù)膫€人防護裝備、生物安全柜和/或其它物理防護設(shè)備。如可產(chǎn)生含生物因子的氣溶膠，應(yīng)在適當?shù)纳锇踩裰胁僮鳌?十八) 實驗用鞋應(yīng)舒適，鞋底防滑。應(yīng)用皮制或合成材料的不滲液體的鞋類。在從事可能出現(xiàn)漏出的工作時可穿一次性防水鞋套。在實驗室的特殊區(qū)域（例如有防靜電要求的區(qū)域）或BSL-3和BSL-4實驗室要求使用專用鞋（例如一次性或橡膠靴子）。7. 結(jié)核病實驗室廢物處理 一、實驗室廢棄物處理的目的：(一) 將操作、收集、運輸、處理及處置廢棄物的危險減至最?。?二) 將實驗室廢棄物對環(huán)境的有害作用減至最小。二、實驗室污物處理及消毒(一) 實驗室含有生物危險物的臨床標本及被污染的一次性用品，試驗完成后，應(yīng)在操作臺或?qū)嶒瀰^(qū)域內(nèi)以紫外燈近距離照射消毒 2小時以上，再經(jīng)高壓消毒后方可丟棄或焚燒。 (二) 可重復(fù)使用的實驗用品及器材，完成實驗后，應(yīng)在操作臺或?qū)嶒瀰^(qū)域內(nèi)經(jīng)紫外燈近距離照射消毒2小時以上后，再交有關(guān)人員進行高壓消毒和煮沸洗刷。(三) 實驗用的試管、吸管、注射器，須裝在加蓋不漏的容器內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后取出。 (四) 培養(yǎng)物或?qū)嶒炇依趤G棄前必須經(jīng)高壓消毒和紫外燈近距離長時間照射處理。不允許積存垃圾和實驗室廢棄物。已裝滿的容器應(yīng)定期運走。在去污染或最終處置之前，應(yīng)存放在指定的安全地方，通常在實驗室區(qū)內(nèi)。(五) 實驗室廢棄物應(yīng)置于適當?shù)拿芊馇曳缆┤萜髦邪踩\出實驗室。有害氣體、氣溶膠、污水、廢液應(yīng)經(jīng)適當?shù)臒o害化處理后排放，應(yīng)符合國家相關(guān)的要求。 (六)實驗過程中，如標本或含標本的前消化處理液被打翻污染了操作臺或地面，應(yīng)以吸滿70%酒精的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘以后衛(wèi)生紙方可移去。 (七) 實驗室內(nèi)未經(jīng)消毒的污水，禁止直接排入公共排水系統(tǒng)，更不允許混入居民生活垃圾。 8. 意外事故的處理(一) 如果發(fā)生意外，必須立即通知實驗室主管人員，并在有關(guān)人員的指導監(jiān)督下對出事現(xiàn)場進行處理，絕對禁止未經(jīng)報告而私自對出事現(xiàn)場給予非規(guī)范的處理。 (二) 實驗過程中，如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應(yīng)立即停止實驗工作進行緊急處理，更換被污染的實驗服，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒或酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗。 (三) 如果發(fā)生菌液溢出，含菌種的培養(yǎng)管破碎等，造成中 、小面積污染，可用比污染面積大25%以上的紗布覆蓋污染區(qū)域，邊緣用脫脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小時以上（其間適量加溶液防止干燥），再經(jīng)紫外燈近距離（1米內(nèi)）照射2小時以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小時以上，實驗完成后再進行高壓消毒處理。 (四) 如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應(yīng)立即停止實驗并關(guān)閉實驗室，對污染區(qū)域進行紫外燈照射消毒過夜；第二天對污染區(qū)進行24小時封閉空氣熏蒸消毒（乙醛消毒法5ml乙醛2g高錳酸鉀/m3空間）。(五) 絕對禁止使用的事故處理方法1. 任何有可能造成污染面積擴大的去污方法，如使用70%乙醇或甲酚皂液擦洗被污染的區(qū)域。2. 直接用火焰對未經(jīng)任何處理的污染地面、操作臺、器械等進行燒灼處理。3. 使用消毒效果未經(jīng)證實的消毒劑進行消毒。4. 使用低濃度的消毒劑和紫外燈進行短時間、長距離的照射。第三章 金黃色葡萄球菌的生物危害評估報告1. 生物學特性金黃色葡萄球菌是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬，可引起多種嚴重感染。金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8m左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生長pH 7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長?？煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。2. 危害程度分類根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部制定人間傳染的病原微生物名錄該菌危害程度為第三類。3. 致病性和感染劑量金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶，有報道目前出現(xiàn)越來越多的耐藥菌株，MRSA即耐甲氧西林金黃色葡萄球，菌致病性也隨著變強。4. 暴露的潛在后果暴露后可能引起感染，菌量大時可使實驗人員出現(xiàn)皮膚軟組織感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、腸炎等。被感染后，成為傳染源，可能對周圍及環(huán)境造成污染，應(yīng)及時得到治療和控制。5. 感染途徑通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，也可通過呼吸道和接觸傳播。6. 微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性葡萄球菌是無芽胞菌中抵抗力最強者，而干燥可達數(shù)月，加熱8030min才被殺死。5石炭酸，0.1升汞1015min死亡。1:1000001:200000龍膽紫溶液能抑制其生長。對磺胺增效劑、青霉素、紅霉素等較敏感，但耐藥株逐年增多，MRSA即為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌。7. 濃度和濃縮標本的容量一般樣本檢測。8. 自然和易感人群宿主金黃色葡萄球菌常存在于鼻咽喉、下消化道、毛發(fā)和皮膚上，在人類和普通的動物都有存在。致病性依照宿主狀狀，衛(wèi)生情況，皮膚和黏膜有否創(chuàng)傷而異。當宿主免疫力下降，皮膚黏膜有創(chuàng)傷或衛(wèi)生情況不好是易感染，特別是老人和嬰兒。9. 實驗操作活動巳有文獻證明，金黃色葡萄球菌可造成實驗人員化膿性和呼吸道感染，人類不是該菌在唯一傳染源，在許多動物身上都存在該菌。 這種病原體可以存在于受感染的人或動物的膿液，血液等多種體液中。通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，和通過呼吸道和接觸傳播是該菌的主要傳播方式，該菌也是引起院內(nèi)感染的主要細菌之一。暴露在氣溶膠中也可能引起感染。按照國家標準方法對樣本（糞便、食品、水樣）進行分離，培養(yǎng)，鑒定。建議采用BSL-2級水平的操作技術(shù)，防擴散設(shè)備和設(shè)施。一旦發(fā)生意外，按照本實驗室的意外事故應(yīng)對方案和應(yīng)急程序進行處理。10. 預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。目前疫苗還不可用于人類。該菌能對人體多部位的感染，所以跟據(jù)所致疾病的不同也應(yīng)采取不同的治療方案，主要是對癥處理和針對病原治療，大體用藥可選用紅霉素、新型青霉素、慶大霉素、萬古霉素或先鋒霉素治療。預(yù)防金黃色葡萄球菌感染，首先是要做好個人衛(wèi)生，和加強餐飲和食品衛(wèi)生的管理，及時發(fā)現(xiàn)帶菌者，做好各種動物的管理工作，把能傳播該菌的途徑有效的控制好。11. 工作人員素質(zhì)衛(wèi)生技術(shù)專業(yè)人員，并經(jīng)過生物安全培訓后獲得上崗證書。12. 評估結(jié)論該菌生物性狀較穩(wěn)定，但抗生素有濫用，也出現(xiàn)了不少的耐藥株。該菌主通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，也可通過呼吸道和接觸傳播，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。預(yù)防手段主要預(yù)防金黃色葡萄球菌感染，首先是要做好個人衛(wèi)生，和加強餐飲和食品衛(wèi)生的管理，及時發(fā)現(xiàn)帶菌者，做好各種動物的管理工作，把能傳播該菌的途徑有效的控制好。試驗過程建儀采用BSL-2級水平的操作技術(shù)、防擴散設(shè)備和設(shè)施。實驗室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護服。離開實驗室時，防護服必須脫下并留在實驗室內(nèi)。不得穿著外出，更不能攜帶回家。用過的工作服應(yīng)先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。 當手可能接觸感染材料、污染的表面或設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室。工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。操作臺面用70%酒精或含氯消毒劑擦拭，廢棄物處理按本實驗室廢棄物處理制度進行。第四章 副溶血性弧菌的生物危害評估報告副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus,VP）是一種嗜鹽性細菌。副溶血性弧菌食物中毒，是進食含有該菌的食物所致，主要來自海產(chǎn)品，如墨魚、海魚、海蝦、海蟹、海蜇，以及含鹽分較高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。本菌存活能力強，在抹布和砧板上能生存1個月以上，海水中可存活47天。臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。本病多在夏秋季發(fā)生于沿海地區(qū)，常造成集體發(fā)病。由于海鮮空運，內(nèi)地城市病例也漸增多。此菌對酸敏感，在普通食醋中5分鐘即可殺死；對熱的抵抗力也較弱。副溶血性弧菌食物中毒多發(fā)生在610月，海產(chǎn)品大量上市時。中毒食品主要是海產(chǎn)品，其次為咸菜、熟肉類、禽肉、禽蛋類，約有半數(shù)中毒者為食用了腌制品后。中毒原因主要是烹調(diào)時未燒熟煮透或熟制品被污染。1. PCR檢測用于檢測Vp的PCR方法主要有任意引物PCR(abritrarilyprimedPCR，Ap-PCR)、針對副溶血性弧菌任意引物PCR、多重PCR(muhiplex-PCR)、實時PCR(Real-timePCR)。實時PCR常規(guī)PCR檢測，需要從反應(yīng)體系中吸取產(chǎn)物做電泳或Southern雜交等試驗進行鑒定，轉(zhuǎn)移過程中易污染，造成假陽性，而且耗費時間。1996年，Tyagi開創(chuàng)了一種實時PCR(Real-timePCP,)。實時PCR是在，PCR反應(yīng)體系中加入標記有報告基團和淬滅基團的線性Taqman。探針或莖環(huán)型熒光分子信標探針，在墓因擴增過程中，與產(chǎn)物雜交，此時，報告基團和淬滅基團分開，根據(jù)能量共振轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，報告基團發(fā)出熒光而被檢測。這種方法操作簡單，閉管檢測，減少污染，靈敏度高，并且可以在PCR結(jié)束或PCR過程進行同步定性或定量檢測，面且可以進行臨床大規(guī)?？焖贆z測。2. 流行病學傳染源傳染源為病人，集體發(fā)病時往往僅少數(shù)病情嚴重者住院，而多數(shù)未住院者可能成為傳染源，但由于病人僅在疾病初期排菌較多，其后排菌迅速減少，故不至因病人散布病菌而造成廣泛流行。傳播途徑本病經(jīng)食物傳播，主要的食物是海產(chǎn)品或鹽腌漬品，常見者為蟹類、烏賊、海蜇、魚、黃泥螺等，其次為蛋品、肉類或蔬菜。進食肉類或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起。地區(qū)分布特點：日本及我國沿海地區(qū)為副溶血性孤菌食物中毒發(fā)病率的高發(fā)區(qū)。據(jù)調(diào)查，我國沿海水域、海產(chǎn)品中副溶血性弧菌檢出率較高，尤其是氣溫較高的夏秋季節(jié)。但近年來隨著海產(chǎn)食品的市場流通，內(nèi)地也有副溶血性弧菌食物中毒的散在發(fā)生。季節(jié)性特點及易感性：79月常是副溶血性弧菌食物中毒的高發(fā)季節(jié)。男女老幼均可患病，但以青壯年為多，病后免疫力不強，可重復(fù)感染。食物的種類：主要是海產(chǎn)品，其中以墨魚、帶魚、蝦、蟹最為多見，如墨魚的帶菌率達93%，其次為鹽漬食品。食品中副溶血性弧菌的來源：人群帶菌者對各種食品的直接污染。沿海地區(qū)飲食從業(yè)人員、健康人群及漁民副溶血性弧菌帶菌率為11.7%左右，有腸道病史者帶菌率可達31.688.8%。間接污染，沿海地區(qū)炊具的副溶血性弧菌帶菌率為61.9%，被副溶血性弧菌污染的食物，在較高溫度下存放，食用錢加熱不徹底或者生吃，或熟制品受到帶菌者、帶菌的生食品、帶菌容器及工具等的污染。3. 治療措施支持及對癥治療 脫水者需輸入生理鹽水及葡萄鹽水，或口服補液鹽，以糾正失水。血壓下降者，除被動補充血容量，糾正酸中毒等外，可酌用血管活性藥?？咕幬?輕度患者可不用抗菌藥物，較重者可給復(fù)方新諾明或慶大霉素、阿米卡星和諾氟沙星等喹諾酮類抗菌藥物【上述抗生素類可能使細菌產(chǎn)生耐藥性，使用須謹慎】。發(fā)生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品，并到醫(yī)院醫(yī)治。副溶血性弧菌對氯霉素敏感。嘔吐、腹瀉嚴重者要補充水和鹽。4. 中毒預(yù)防加工海產(chǎn)品的案板上副溶血弧菌的檢出率為87.9%。因此，對加工海產(chǎn)品的器具必須嚴格清洗、消毒。海產(chǎn)品一定要燒熟煮透，加工過程中生熟用具要分開。烹調(diào)和調(diào)制海產(chǎn)品拼盤時可加適量食醋。食品燒熟至食用的放置時間不要超過4個小時。主要病理變化為空腸及回腸有輕度糜爛，胃粘膜炎、內(nèi)臟（肝、脾、肺）淤血等。第五章 致瀉大腸埃希菌的生物危害評估報告1. 生物學特性大腸埃希氏菌更習慣稱為大腸桿菌，分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬，統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，一般包括五種：即腸毒素性大腸桿菌（ETEC）、致病性大腸桿菌（EPEC）、出血性大腸桿菌（EHEC）、侵襲性大腸桿菌（EIEC）和粘附性 大腸桿菌（EAEC）。大腸埃希氏菌為兩端鈍圓的短小桿菌，一般大小約0.5-0.8m*1.0m-3.0m,因生長條件不同，個別菌體可呈近似球狀或長絲狀。此菌多單獨存在或成雙，但不呈長鏈狀排列。約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運動，但多數(shù)菌體只有1-4根，一般不超過10根，故菌體動力弱；多數(shù)菌株生長有比鞭毛細、短、直且數(shù)量多的菌毛，有的菌株具有莢膜或微莢膜；不形成芽胞，對普通堿性染料著色良好，革蘭氏染色陰性。此菌合成代謝能力強，在含無機鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好。最適生長溫度為37，在42-44條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46。在普通營養(yǎng)瓊脂上生長表現(xiàn)3種菌落形態(tài)：光滑型、粗糙型、粘液型。大腸埃希氏菌兼性厭氧，在有氧條件下生長良好，最適生長pH為6.8-8.0，所用培養(yǎng)基pH為7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0則生長緩慢。大腸埃希氏菌生華物性是，發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，分解蔗糖因菌株而異，錄素酶試驗陰性，IMVi試驗+-，有些菌株如堿性異型菌群，微產(chǎn)堿，不產(chǎn)氣，無動力，易與志賀菌混淆。大腸埃希氏菌的抗原構(gòu)造主要由菌體抗原(O)，鞭毛抗原(H)和莢膜抗原(K)三部分組成。現(xiàn)巳知有171個O抗原、99個K抗原和56個H抗原。2. 危害程度分類根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部制定人間傳染的病原微生物名錄該菌危害程度為第三類。3. 致病性和感染劑量致瀉大腸埃希氏菌在人和動物的大便中大量存在，引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病，其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大。其中有少數(shù)幾種引起人類食物中毒，部分埃希氏菌株與嬰兒腹瀉有關(guān)，並可引起成人腹瀉或食物中毒的暴發(fā)，感染劑量約為107108。盡管目前報道各地主要腹瀉病是由志賀氏菌或輪狀病毒引起的，但是，多年來，致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉病例始終位于第二位，可見大腸桿菌腸道傳染的廣泛性。還有，致瀉性大腸桿菌亦可常年引發(fā)人體腹瀉，以夏秋季為高峰，在患者感染住院率中，嬰幼兒占60%以上4. 暴露的潛在后果攝入是主要的實驗室危害，可引起實驗人員感染。暴露在氣溶膠中能否造成危害尚不清楚。5. 感染途徑通過污染食品和水源經(jīng)口傳播。6. 微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性此菌對理化因素的抵抗力，在無芽胞菌中是最強的一種，在室溫可存活數(shù)周，在土壤、水中存活數(shù)月，耐寒力強，但是在30分鐘內(nèi)快速冷凍，將37降至4的過程，可殺死此菌。加熱60，30分鐘，此菌可滅活。此菌對青霉素有中等抵抗力，對一般消毒劑都比較敏感對漂白粉，酚、甲醛等較敏感，水中1ppb氯可殺死此菌。此菌耐膽鹽，在一定程度上能抵抗煌綠等染料的抑菌作用7. 濃度和濃縮標本的容量一般樣本檢測。8. 自然和易感人群宿主致瀉大腸埃希氏菌的宿主主要為牛、豬、羊、雞等家禽家畜，許多被該微生物污染的食物都不得可以作為傳播媒介，幼兒、老人及免疫缺陷者更為易感。9. 實驗操作活動致瀉大腸埃希氏菌巳證明會對實驗人員造成危害。攝入是主要的實驗室危害，暴露在氣溶膠中能否造成危害尚不清楚。按照國家標準方法對樣本（糞便、食品、水樣）進行分離，培養(yǎng)，鑒定。建議采用BSL-2級水平的操作技術(shù)，防擴散設(shè)備和設(shè)施。一旦發(fā)生意外，按照本實驗室的意外事故應(yīng)對方案和應(yīng)急程序進行處理。10. 預(yù)防和治療致瀉大腸埃希氏菌引起人體以腹瀉癥狀為主疾病，根據(jù)菌型不同可引起如一些疾?。狠p度水瀉，痢疾樣腹瀉、出血性腹瀉，也可引起食物中毒性疾病。目前尚無可用于人類的疫苗。對本病的治療，病人應(yīng)予胃腸道隔離，除一般治療外，可根據(jù)大便細菌培養(yǎng)及藥物敏感試驗選用適當?shù)目咕幬镒鞑≡委?，如選用慶大霉素、丁胺卡那霉素等。預(yù)防致瀉大腸埃希氏菌的感染，首先是要做好個人衛(wèi)生。切實做好飲食衛(wèi)生、水源及糞便管理,消滅蒼蠅,切斷傳播途徑，防止病從口入。第六章 傷寒沙門氏菌的生物危害評估報告?zhèn)抽T菌，又稱傷寒桿菌，屬沙門菌屬D組。革蘭染色陰性，呈短桿狀，周有鞭毛，能活動，不產(chǎn)生芽孢，無莢膜。在普通培養(yǎng)基上能生長，在含有膽汁的培養(yǎng)基中生長更好。傷寒桿菌在自然界中的生活力較強，在水中可存活23周，在糞便中能維持12個月，在牛奶中不僅能生存，且可繁殖。耐低溫，在冰凍環(huán)境中可存活數(shù)月，但對光、熱、干燥及消毒劑的抵抗能力較弱，日光直射數(shù)小時即死，加熱至60C后30分鐘或煮沸后立即死亡，消毒飲水余氯可迅速致死。傷寒桿菌只感染人類，在自然條件下不感染動物。傷寒桿菌具有菌體(“O”)抗原、鞭毛(“H”)抗原和表面(“i')抗原，均能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，但這些并非保護性抗體。由于“O”和“H”抗原性較強，故常用于血清凝集試驗(肥達反應(yīng))以輔助臨床診斷，亦可用以制備傷寒菌苗供預(yù)防接種。 “i'抗原見于新分離(特別是從病人血液分離)的菌株，能干擾血清中的殺菌效能和吞噬功能，是傷寒桿菌的重要毒力因子，但其抗原性不強，所產(chǎn)生的“i'抗體的凝集效價一般較低且為時甚短。當病原菌從人體中清除后，“i'抗體滴度迅速下降，故“i'抗體的檢出雖對本病的診斷無多大幫助，但有助于發(fā)現(xiàn)帶菌者。傷寒桿菌在菌體裂解時可釋放強烈的內(nèi)毒素，對本病的發(fā)生和發(fā)展起著較重要的作用。1. 流行病學(一)傳染源：為病人及帶菌者。病人從潛伏期開始即可從糞便排菌，從病程第1周末開始經(jīng)尿排菌，故整個病程中均有傳染性，尤以病程的24周內(nèi)傳染性最大。慢性帶菌者是本病不斷傳播或流行的主要傳染源。原有慢性肝膽管疾病(如膽囊炎、膽石癥等)的傷寒病人易成為慢性帶菌者，約14患者在腸道和膽囊中隱藏傷寒桿菌達數(shù)月或數(shù)年之久。(二)傳播途徑 傷寒桿菌隨病人或帶菌者的糞、尿排出后，通過污染的水或食物、日常生活接觸、蒼蠅和蟑螂等傳播。其中，水源污染是本病傳播的重要途徑，亦是暴發(fā)流行的主要原因。食物污染也可引起本病的流行，而散發(fā)病例一般以日常生活接觸傳播為多。(三)人群易感性 人對傷寒普遍易感。病后可獲得持久性免疫，再次患病者極少。(四)流行特征 世界各地均有本病發(fā)生，以熱帶、亞熱帶地區(qū)多見，可散發(fā)、地方性流行或暴發(fā)流行。在發(fā)展中國家主要因為水源污染而暴發(fā)流行，發(fā)達國家則以國際旅游感染為主。本病終年可見，但以夏秋季最多。其中以兒童和青壯年居多。局部地區(qū)流行的傷寒耐藥菌株有所增加，耐藥譜也在逐漸擴大。除耐氯霉素、復(fù)方磺胺甲嗯唑、氨芐西林外，少數(shù)菌株對頭孢菌素及喹諾酮類抗菌藥物也產(chǎn)生耐藥性。2. 實驗室檢查（一）常規(guī)檢查：血白細胞大多為3×109/L4×109/L，伴中性粒細胞減少和嗜酸粒細胞消失，后者隨病情的好轉(zhuǎn)逐漸回升。極期嗜酸粒細胞2%，絕對計數(shù)超過4×108/L者可基本除外傷寒。高熱時可有輕度蛋白尿。糞便隱血試驗陽性。（二）細菌學檢查：血培養(yǎng)是確診的論據(jù)，病程早期即可陽性，第710病日陽性率可達90%，第三周降為30%40%，第四周時常陰性；骨髓培養(yǎng)陽性率較血培養(yǎng)高，尤適合于已用抗菌素藥物治療，血培養(yǎng)陰性者；糞便培養(yǎng)，從潛伏期起便可獲陽性，第34周可高達80%，病后6周陽性率迅速下降，3%患者排菌可超過一年；尿培養(yǎng)：病程后期陽性率可達25%，但應(yīng)避免糞便污染；玫瑰疹的刮取物或活檢切片也可獲陽性培養(yǎng)。（三）免疫學檢查1.肥達氏試驗：傷寒血清凝集試驗即肥達反應(yīng)陽性者對傷寒，副傷寒有輔助診斷價值。檢查中所用的抗原有傷寒桿菌菌體（O）抗原，鞭毛（H）抗原，副傷寒甲，乙，丙鞭毛抗原共5種，目的在于用凝集法測定病人血清中各種抗體的凝集效價。病程第1周陽性反應(yīng)不多，一般從第2周開始陽性率逐漸增高，至第4周可達90%，病愈后陽性反應(yīng)可持續(xù)數(shù)月之久。有少數(shù)病人抗體很遲才升高，甚至整個病程抗體效價很低（14.4%)或陰性（7.8%10%），故不能據(jù)此而排除本病。Widal試驗已沿用近100年，60年代曾有人對其特異性提出異議，認為其結(jié)果存在著混亂模糊的情況，非傷寒發(fā)熱性疾病Widal's試驗也呈陽性結(jié)果，如各種急性感染，腫瘤，結(jié)締組織病性疾病，慢性潰瘍性結(jié)腸炎，均可出現(xiàn)陽性結(jié)果。Perlnan等認為無菌的結(jié)腸細胞和腸桿菌可能有共同的抗原，結(jié)腸粘膜損害所產(chǎn)生的抗結(jié)腸抗體與沙門菌菌體抗原起交叉反應(yīng)，因此對肥達氏反應(yīng)結(jié)果的判定宜審慎，必須密切結(jié)合臨床資料，還應(yīng)強調(diào)恢復(fù)期血清抗體效價的對比，有人提出應(yīng)用流行菌株抗原與國際菌株相比，陽性率可提高，建議用當?shù)亓餍芯耆〈鷩H標準菌株，以提高流行區(qū)域傷寒診斷的陽率。2.其他免疫學檢查（1）被動血凝試驗（PHA）：用傷寒桿菌菌體抗原致敏紅細胞，使之與被檢血清反應(yīng)，根據(jù)紅細胞凝集狀況判斷有無傷寒特異性抗體存在，國內(nèi)外報道陽性率90%98.35%，假陽性率5%左右。鮑行豪等曾報道LSP-PHA對傷寒血培養(yǎng)患者的檢出率為89.66%，早期病人90.02%，臨床確診者為82.5%，且主要檢測的是特異IgM抗體，故可用于早期診斷。（2）對流免疫電泳（CIE）：本方法可用于血清中可溶性傷寒抗原或抗體的檢測，操作簡便，便于基層推廣，特異性較高；但敏感性較低，不同作者報道為24%92%，主要受采集血清時間的影響，發(fā)病初期最易測出，故可用于傷寒的早期診斷。（3）協(xié)同凝集試驗（COA）：利用金葡菌的葡萄球菌A蛋白（SPA）可（2）對流免疫電泳（CIE）：本方法可用于血清中可溶性傷寒抗原或抗體的檢測，操作簡便，便于基層推廣，特異性較高；但敏感性較低，不同作者報道為24%92%，主要受采集血清時間的影響，發(fā)病初期最易測出，故可用于傷寒的早期診斷。（4）免疫熒光試驗（IFT）：Doshi等用傷寒桿菌菌體Vi懸液作抗原進行間接免疫熒光抗體檢測，140例血培養(yǎng)陽性的傷寒患者134例（95.7%）陽性；394例對照者僅4例（1%）假陽性，目前有關(guān)本法的報道尚少，傷寒疫預(yù)防接種和其它沙門氏菌感染是否會影響本試驗特異性，尚需進一步研究。（5）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：ELISA的基本原理是用酶促反應(yīng)的放大作用來顯示初級免疫學反應(yīng)，既可檢測抗原，又可檢測抗體，用ELISA法檢測傷寒患者Vi抗原，靈敏性達1ng/ml，高于CoA法9100ng/ml，并可檢測到11024稀釋后尿液中的Vi抗原。國內(nèi)、外用ELISA檢測過臨床標本中的Vi抗原，V9抗原，LPS，H抗原等，敏感性在62.5%93.1%，因檢測抗原的不同而異，多數(shù)在80%以上。杭州鮑行豪等應(yīng)用ELISA同時檢測IgM和IgG抗體，LPS-IgM-ELISA的敏感性為91.38%，特異性為99.02%，LPS-IgG-ELISA分別為93.1%和98.02%，在傷寒的血清免疫學診斷方法中，ELISA方法簡便，快速，敏感，特異性高，是公認較好的一種診斷方法。（四）分子生物學診斷方法1.DNA探針（DNA Probe） DNA探針是用DNA制備的診斷試劑，用于檢測或鑒定特定的細菌，方法是用一段已標記的特定的DNA片段（探針）與標本中已變性的細菌DNA雜交，通過測定是否發(fā)生雜交反應(yīng)來達到檢測目的，由于此探針是以細菌專有的特異性基因片斷制備，故特異性很高。用DNA探針對培養(yǎng)所得的傷寒桿菌進行檢測，敏感性需標本中達1000個細菌才能檢出。DNA Probe的特異性高而敏感性低，一般用于菌種鑒定及分離。2.聚合酶鏈反應(yīng)（PCR） PCR方法是80年代中后期發(fā)展起來的一種分子生物學方法，它能在數(shù)小時內(nèi)在體外將目標基因或DNA片段擴增到數(shù)百萬倍，檢出率較DNA探針高10010000倍，國外Jae HS等用PCR方法擴增傷寒的鞭毛抗原編碼基因，敏感度能檢出10個傷寒菌，特異性為100%，PCR方法因其高度敏感，易出現(xiàn)產(chǎn)物污染，所以控制PCR方法的假陽性及假陰性，是提高準確度的關(guān)鍵。3. 細菌的生物安全防護在實驗室操作上對于有高風險的人員，如免疫缺陷者，要嚴格限制進入。對于針頭和銳器要有警示，要用專門存放銳器的容器盛裝。在個人防護上，要求穿隔離衣，出實驗室時應(yīng)將隔離衣脫下；在可能接觸病原時要戴一次性使用的手套，但不要戴手套接觸清潔表面（如電話等），脫去手套后要洗手；在BSC外面進行操作時，要進行面部保護，如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼臺，還要有高壓消毒器第七章 志賀氏菌的生物危害評估報告1. 生物學特性志賀氏菌屬（Shigella） 的細菌（通稱痢疾桿菌），是細菌性痢疾的病原菌人類對痢疾桿菌有很高的易感性。在幼兒可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。志賀氏菌和大腸桿菌都屬于腸桿菌科，根據(jù)DNA雜交研究結(jié)果表明，志賀氏菌屬的四個種和大腸桿菌屬在生化上是難以區(qū)分的，因為有產(chǎn)氣的志賀氏菌，也有乳糖陰性、不產(chǎn)氣、不運動的大腸桿菌，有些大腸桿菌也能引起痢疾狀的腹瀉。志賀氏菌屬細菌的形態(tài)與一般腸道桿菌無明顯區(qū)別，為革蘭氏陰性桿菌，長約2-3 m ,寬0.5-0.7 m 。不形成芽胞，無莢膜，無鞭毛，不運動，有菌毛。志賀氏菌需氧或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長，最適溫度為37，最適pH為6.4-7.8。37培養(yǎng)18-24小時后菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤、無色、半透明、邊緣整齊，直徑約2nm，宋內(nèi)氏菌菌落一般較大，較不透明，并常出現(xiàn)扁平的粗糙型菌落。在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長，無菌膜形成。根據(jù)抗原構(gòu)造的不同，按最新國際分類法，將本屬細菌分為四個群、39個血清型。2. 危害程度分類根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部制定人間傳染的病原微生物名錄該菌危害程度為第三類。3. 致病性和感染劑量志賀氏菌引起的細菌性痢疾，主要通過消化道途徑傳播。根據(jù)宿主的健康狀況和年齡，只需少量病菌