（江蘇專版）2019版高考生物二輪復(fù)習(xí) 專題七 生物技術(shù)實(shí)踐講義（含解析）.doc

生物技術(shù)實(shí)踐理清知識(shí)聯(lián)系記清主干術(shù)語(yǔ)1制作果酒、果醋、腐乳、酸奶(泡菜)利用的微生物分別是酵母菌、醋酸菌、毛霉(主要)和乳酸菌，異化作用類型分別是兼性厭氧型、需氧型、需氧型、厭氧型。2制作果酒和果醋的實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵。3制作果酒和果醋的發(fā)酵裝置中充氣口的作用是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣，排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)排出CO2，出料口用來(lái)取樣。 4制作果酒時(shí)溫度一般控制在1825 ，時(shí)間為1012 d，前期需氧后期不需氧；制作果醋時(shí)溫度控制在3035 ，時(shí)間為78 d，始終需氧。5毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。6腐乳制作的實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制。7加鹽腌制時(shí)間約為8 d，配制鹵湯中的酒的含量一般控制在12%左右。8用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量：鹽的濃度過(guò)低，不足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過(guò)高會(huì)影響腐乳的口味。食鹽的作用：抑制微生物的生長(zhǎng)，避免腐敗變質(zhì)；析出水分，使豆腐變硬，在后期制作過(guò)程中不易酥爛；調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味；浸提毛酶菌絲上的蛋白酶。9配制鹵湯：鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的，直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。酒的作用：防止雜菌污染以防腐；與有機(jī)酸結(jié)合形成酯，賦予腐乳風(fēng)味；酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時(shí)間的長(zhǎng)短有很大關(guān)系，酒精含量越高，對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過(guò)低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。10微生物培養(yǎng)基的成分一般包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及生長(zhǎng)因子等。11消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。12制備固體培養(yǎng)基的步驟包括計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板等。13純化微生物常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線法可以分離微生物但不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，稀釋涂布平板法既可分離微生物也可以對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)。14平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。15稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，即稀釋涂布平板法一般分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。16對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法；對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。17DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，在濃度0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。18DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可溶于酒精，可利用冷卻的酒精對(duì)提取的DNA進(jìn)行純化。19在雞血細(xì)胞液中加入一定量蒸餾水并用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液，可獲取含DNA的濾液；切碎洋蔥，加入一定量洗滌劑和食鹽，攪拌研磨，過(guò)濾后收集濾液，可獲取含DNA的濾液。20處理植物組織時(shí)需要進(jìn)行研磨，其目的是破碎細(xì)胞壁，使核物質(zhì)容易溶解在NaCl溶液中；研磨不充分會(huì)使DNA的提取量減少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致得不到絲狀沉淀物。21用二苯胺鑒定DNA，在沸水浴的條件下呈現(xiàn)藍(lán)色。22目前常用的加酶洗衣粉的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶，其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。23探究加酶洗衣粉與普通洗衣粉洗滌效果的實(shí)驗(yàn)自變量是洗衣粉的種類；探究加酶洗衣粉洗滌的最佳溫度條件實(shí)驗(yàn)的自變量是水的溫度。24一般來(lái)說(shuō)，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。這是因?yàn)榧?xì)胞個(gè)大，而酶分子很??；個(gè)大的難以被吸附或結(jié)合，而個(gè)小的酶容易從包埋材料中漏出。25酵母細(xì)胞固定化的步驟：酵母菌的活化配制CaCl2溶液配制海藻酸鈉溶液海藻酸鈉溶液與酵母菌細(xì)胞混合固定化酵母細(xì)胞。26如果制作的凝膠珠顏色過(guò)淺、呈白色，說(shuō)明海藻酸鈉的濃度偏低，固定的酵母細(xì)胞數(shù)目較少；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說(shuō)明海藻酸鈉的濃度偏高，制作失敗，需要再作嘗試。 澄清思維誤區(qū)關(guān)注點(diǎn)1誤認(rèn)為兼性厭氧與“有氧、無(wú)氧”都一樣澄清酵母菌在有氧條件下進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖；在無(wú)氧條件下，進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精和CO2，產(chǎn)生的酒精對(duì)其他微生物和酵母菌本身都具有毒害作用，所以在無(wú)氧條件下酵母菌不能大量繁殖。關(guān)注點(diǎn)2誤認(rèn)為釀酒和釀醋所利用的微生物類型相同澄清釀酒和釀醋所利用的微生物不同，前者為酵母菌真核生物；后者為醋酸菌原核生物。二者本質(zhì)區(qū)別是有無(wú)以核膜為界限的細(xì)胞核。關(guān)注點(diǎn)3不明確腐乳前期發(fā)酵和后期發(fā)酵的作用澄清前期發(fā)酵的主要作用是創(chuàng)造條件讓毛霉生長(zhǎng)，使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過(guò)程，即通過(guò)各種輔料與腐乳的緩慢水解作用，生成腐乳的香氣。關(guān)注點(diǎn)4誤認(rèn)為腐乳制作中食鹽的作用只是調(diào)節(jié)風(fēng)味澄清食鹽在腐乳制作中的作用有：析出豆腐中的水分，有利于豆腐塊成形；抑制雜菌；形成腐乳的風(fēng)味；殺死毛霉等微生物，有利于菌體內(nèi)蛋白酶、脂肪酶等發(fā)揮作用。關(guān)注點(diǎn)5不明確影響腐乳口味的因素有哪些澄清影響腐乳口味的因素有：豆腐的含水量；鹽的用量；酒的用量；香辛料的種類和用量；其他輔料的種類；發(fā)酵溫度和時(shí)間。關(guān)注點(diǎn)6不能區(qū)分選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基澄清按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入或不加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。如在某培養(yǎng)基中加入青霉素，則能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，對(duì)真菌的生長(zhǎng)無(wú)影響。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。如伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基能指示大腸桿菌的存在。關(guān)注點(diǎn)7平板冷凝后，不明確平板倒置的目的澄清平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。關(guān)注點(diǎn)8不了解影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素澄清影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素有水溫、水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量，衣物的質(zhì)料、大小及浸泡時(shí)間和洗滌的時(shí)間等。在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)控制好自變量之外的無(wú)關(guān)變量。關(guān)注點(diǎn)9不明確酵母細(xì)胞固定化實(shí)驗(yàn)中，海藻酸鈉和氯化鈣的作用澄清海藻酸鈉作為酵母菌的包埋劑。氯化鈣能與海藻酸鈉反應(yīng)，形成凝膠珠。關(guān)注點(diǎn)10不明確DNA粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)中，兩次使用蒸餾水的作用澄清第一次加蒸餾水，使雞血細(xì)胞吸水漲破；第二次加蒸餾水，使含DNA的NaCl溶液濃度降低，析出DNA。關(guān)注點(diǎn)11不明確破碎動(dòng)植物細(xì)胞的方法澄清破碎植物細(xì)胞的方法用研磨法，在研磨之前，向研缽中加入食鹽、洗滌劑和植物材料。破碎動(dòng)物細(xì)胞的方法用滲透漲破法，過(guò)程是在雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水，用玻璃棒進(jìn)行快速攪拌。2個(gè)主攻點(diǎn)之(一)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)和微生物的利用1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用(填圖)(1)果酒和果醋的制作：(2)腐乳的制作：制作原理：實(shí)驗(yàn)流程及影響因素：2圖解識(shí)記微生物的培養(yǎng)、分離與計(jì)數(shù)(填圖)考向(一)果酒、果醋和腐乳的制作真題導(dǎo)向1(2018江蘇高考)某高校采用右圖所示的發(fā)酵罐進(jìn)行葡萄酒主發(fā)酵過(guò)程的研究，下列敘述錯(cuò)誤的是()A夏季生產(chǎn)果酒時(shí)，常需對(duì)罐體進(jìn)行降溫處理B乙醇為揮發(fā)性物質(zhì)，故發(fā)酵過(guò)程中空氣的進(jìn)氣量不宜太大C正常發(fā)酵過(guò)程中罐內(nèi)的壓力不會(huì)低于大氣壓D可以通過(guò)監(jiān)測(cè)發(fā)酵過(guò)程中殘余糖的濃度來(lái)決定何時(shí)終止發(fā)酵解析：選B利用酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵時(shí),一般將溫度控制在1825 ,因此夏季生產(chǎn)果酒時(shí)，需要對(duì)發(fā)酵罐體進(jìn)行降溫處理；發(fā)酵過(guò)程中，進(jìn)氣口閥門應(yīng)該關(guān)閉，以保證發(fā)酵罐的無(wú)氧環(huán)境，使酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精；正常發(fā)酵過(guò)程中，由于酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生CO2，所以發(fā)酵罐內(nèi)的壓力增大，高于大氣壓；葡萄酒的發(fā)酵過(guò)程消耗葡萄糖，所以可以通過(guò)監(jiān)測(cè)發(fā)酵過(guò)程中殘余糖的濃度來(lái)決定何時(shí)終止發(fā)酵。2(2017江蘇高考，多選)如圖是探究果酒與果醋發(fā)酵的裝置示意圖。下列相關(guān)敘述正確的是()A改變通入氣體種類，可以研究呼吸作用類型對(duì)發(fā)酵的影響B(tài)果酒發(fā)酵中期通入氮?dú)?，酵母菌將從有氧呼吸轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)氧呼吸C果醋的發(fā)酵周期與實(shí)驗(yàn)設(shè)定的溫度密切相關(guān)D氣體入口與氣體出口可以交換使用解析：選ABC改變通入氣體的種類，例如分別通入氮?dú)夂脱鯕?，可研究無(wú)氧呼吸和有氧呼吸對(duì)發(fā)酵的影響；果酒發(fā)酵中期通入氮?dú)?，更利于?chuàng)造無(wú)氧條件，酵母菌將從有氧呼吸轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)氧呼吸；果醋發(fā)酵的菌種是醋酸桿菌，其生長(zhǎng)的適宜溫度是3035 ，溫度能影響醋酸桿菌的代謝，從而影響果醋的發(fā)酵周期；氣體的入口必須伸入培養(yǎng)液中，氣體出口不能伸入培養(yǎng)液中，如果氣體的入口和出口交換，會(huì)導(dǎo)致發(fā)酵液噴出。3(2015江蘇高考，多選)下圖為蘋果酒的發(fā)酵裝置示意圖，下列敘述錯(cuò)誤的是()A發(fā)酵過(guò)程中酒精的產(chǎn)生速率越來(lái)越快B集氣管中的氣體是酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生的CO2C發(fā)酵過(guò)程中酵母種群呈“J”型增長(zhǎng)D若發(fā)酵液表面出現(xiàn)菌膜，最可能原因是發(fā)酵瓶漏氣解析：選ABC酵母菌發(fā)酵過(guò)程中因營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗、pH的變化等，酒精的產(chǎn)生速率會(huì)越來(lái)越慢。集氣管收集的氣體除酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生的CO2外，還有有氧呼吸產(chǎn)生的CO2。發(fā)酵過(guò)程中，隨著營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗、pH降低等，酵母菌的繁殖速度會(huì)變慢，其種群不會(huì)呈“J”型增長(zhǎng)。發(fā)酵液表面出現(xiàn)的菌膜可能是醋酸菌在有氧條件下繁殖產(chǎn)生的，說(shuō)明發(fā)酵瓶可能漏氣。裝置圖結(jié)構(gòu)或操作目的充氣口醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣排氣口酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出CO2長(zhǎng)而彎曲的膠管防止空氣中微生物的污染制酒時(shí)關(guān)閉充氣口制醋時(shí)充氣口連接氣泵，輸入無(wú)菌空氣過(guò)關(guān)練習(xí)1(2018南通調(diào)研)下列關(guān)于利用葡萄制作果酒過(guò)程的敘述，正確的是()A選用棕色玻璃瓶以防止光照抑制酵母菌發(fā)酵B將葡萄汁裝滿發(fā)酵瓶以保證無(wú)氧的發(fā)酵環(huán)境C將發(fā)酵瓶置于35 的恒溫環(huán)境中可加快發(fā)酵速度D要給發(fā)酵瓶適時(shí)排氣，后期可延長(zhǎng)排氣間隔時(shí)間解析：選D光照不影響酵母菌的發(fā)酵；葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有約1/3的空間，避免發(fā)酵液溢出；酒精發(fā)酵的最佳溫度是1825 ；要給發(fā)酵瓶適時(shí)排氣，后期可延長(zhǎng)排氣間隔時(shí)間。2(2018江浦高級(jí)中學(xué)段考)如圖表示工業(yè)上利用蘋果制備果酒、果醋的流程圖。下列敘述錯(cuò)誤的是()A過(guò)程所需的最適溫度不相同B過(guò)程需要在有氧氣的條件下進(jìn)行C若過(guò)程人工接種酵母菌可以縮短蘋果酒的釀制時(shí)間D整個(gè)發(fā)酵過(guò)程都必須在嚴(yán)格無(wú)菌條件下才能正常進(jìn)行解析：選D表示果酒發(fā)酵、表示果醋發(fā)酵。所用的菌種是酵母菌，其發(fā)酵的溫度是1825 ，所用的菌種是醋酸菌，其發(fā)酵的最適溫度是3035 ；果醋發(fā)酵需要醋酸菌，醋酸菌是需氧型生物，故果醋發(fā)酵要在有氧條件下進(jìn)行；果酒發(fā)酵若人工接種酵母菌，菌種的純度高，產(chǎn)生果酒的效率高，故可以縮短蘋果酒的釀酒時(shí)間；發(fā)酵前所有的器具和用品都要進(jìn)行無(wú)菌處理，接種酵母菌或醋酸菌后在無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在嚴(yán)格無(wú)菌條件下會(huì)殺死酵母菌和醋酸菌?？枷?二)腐乳的制作真題導(dǎo)向1(2017江蘇高考)下列關(guān)于“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)，敘述正確的是()A控制發(fā)酵溫度的主要目的是腐乳調(diào)味B腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用C毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉D成品腐乳表面的粘性物質(zhì)主要由細(xì)菌產(chǎn)生解析：選B控制發(fā)酵溫度主要目的是利于菌種繁殖和代謝；腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用；毛霉的作用主要是分解蛋白質(zhì)和脂肪；成品腐乳表面的粘性物質(zhì)主要是毛霉產(chǎn)生的菌絲，而毛霉屬于真菌。2(2016江蘇高考)下列關(guān)于中學(xué)“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)，敘述正確的是()A加鹽主要是為了調(diào)節(jié)水分，利于毛霉生長(zhǎng)B加料酒主要是為了滅菌，避免腐敗變質(zhì)C發(fā)酵過(guò)程中起主要作用的是乳酸桿菌D實(shí)驗(yàn)室制作的腐乳不宜直接食用解析：選D加鹽不僅能抑制雜菌的生長(zhǎng)也會(huì)抑制毛霉的生長(zhǎng)，另外加鹽還可析出豆腐中的水分，有利于腐乳成形。加料酒可以抑制微生物的生長(zhǎng)，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的風(fēng)味，但不能滅菌。在腐乳制作的發(fā)酵過(guò)程中起主要作用的是毛霉。實(shí)驗(yàn)室制作的腐乳因未經(jīng)質(zhì)量鑒定，不宜直接食用。 過(guò)關(guān)練習(xí)1(2018蘇錫常鎮(zhèn)四市調(diào)研)總狀毛霉和米根霉是常見(jiàn)的霉菌。研究人員將總狀毛霉和米根霉的孢子懸液分別接種到兩組豆腐切塊上，完成前期發(fā)酵后，分別測(cè)定兩組霉菌產(chǎn)生的蛋白酶的活力，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，下列有關(guān)敘述正確的是()A總狀毛霉與米根霉都能利用蛋白酶將分解產(chǎn)生的肽和氨基酸分泌到細(xì)胞外B總狀毛霉與米根霉接種量與蛋白酶活力呈正相關(guān)C相同適宜條件下接種等量的兩種菌，總狀毛霉使豆腐塊中的蛋白質(zhì)減少更多D接種量為5 CFU/mL時(shí)發(fā)酵制作的腐乳品質(zhì)最好解析：選C總狀毛霉與米根霉都能將蛋白酶分泌到細(xì)胞外，進(jìn)而將豆腐塊中的蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生肽和氨基酸；據(jù)圖分析，隨著接種量的增加，總狀毛霉與米根霉產(chǎn)生蛋白酶的活性都是先增加后減弱，并不是一直呈現(xiàn)正相關(guān)；相同適宜條件下接種等量的兩種菌,總狀毛霉的蛋白酶活性更高,因此使豆腐塊中的蛋白質(zhì)減少更多；圖示只能說(shuō)明接種量為5 CFU/mL時(shí)，蛋白酶的活性最大，但不能說(shuō)明發(fā)酵制作的腐乳品質(zhì)最好。2(2018江蘇高考沖刺預(yù)測(cè))下列關(guān)于“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()A為防止微生物污染應(yīng)加大用鹽量B含水量大于85%的豆腐利于保持濕度，適宜制作腐乳C裝壇階段加入料酒可有效防止雜菌污染D密封瓶口前瓶口不需要通過(guò)火焰滅菌解析：選C加鹽主要是為了抑制微生物生長(zhǎng)，防止豆腐腐敗變質(zhì)，但鹽量過(guò)多，會(huì)影響腐乳的成熟期和口感。豆腐含水量以70%為宜，毛霉為異養(yǎng)需氧型真菌，若含水量過(guò)高，會(huì)影響毛霉的有氧呼吸，豆腐不宜成塊；若含水量過(guò)少，則不利于毛霉的生長(zhǎng)，并且毛霉的代謝也離不開水。加料酒為了抑制微生物的生長(zhǎng)，同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。封瓶時(shí)，需要將瓶口通過(guò)酒精燈的火焰，這樣可以防止雜菌污染。考向(三)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和分離真題導(dǎo)向1(2016江蘇高考，多選)漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。如圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過(guò)程，相關(guān)敘述正確的是()A生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品B篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落C在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線進(jìn)一步純化D斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株解析：選BC生活污水中含木質(zhì)素的物質(zhì)相對(duì)較少，產(chǎn)漆酶菌株也較少，不宜作為分離產(chǎn)漆酶菌株的樣品；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時(shí)可通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落；在涂布后的平板上生長(zhǎng)的菌落可能還有其他雜菌，可再通過(guò)平板劃線法進(jìn)一步純化；對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法，即在20 的冷凍箱中保存。2(2015江蘇高考)做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是()A高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上解析：選D在高壓滅菌的操作過(guò)程中，加熱結(jié)束后應(yīng)讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，待壓力表的壓力降到零時(shí)，打開放氣閥，旋松螺栓，打開蓋子。倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后應(yīng)在火焰旁冷卻后，再用其挑取菌落。在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。3(2018江蘇高考)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的_，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行_滅菌。(2)取步驟中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，在步驟中將溫度約_(在25 、50 或80 中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。(3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有_。a為保證無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌b劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落c挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量d可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株(4)步驟中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和_供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1 000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用2516型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上_色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于_，才能達(dá)到每毫升3109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。解析：(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，進(jìn)行計(jì)算、稱量、溶解、定容后，需先調(diào)pH再分裝到錐形瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(2)倒平板時(shí)的培養(yǎng)基溫度約為50 ，冷凝后倒置培養(yǎng)。(3)平板劃線時(shí)，接種針、接種環(huán)使用前和每次劃線后都需要進(jìn)行灼燒滅菌，以免造成雜菌污染；劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面，否則不能形成正常菌落；挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)不同的菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中蛋白質(zhì)含量；逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，能篩選出耐受高甲醇的菌株。(4)酵母菌是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖。酵母擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣等條件。由題中信息“經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色”可知，計(jì)數(shù)室中培養(yǎng)液容積實(shí)際只有0.120.05(mm3)。設(shè)5個(gè)中方格中無(wú)色(活細(xì)胞不能被臺(tái)盼藍(lán)染色)的細(xì)胞數(shù)目為x個(gè)，則3109x5251 0001 0000.05，解得x30(個(gè))。答案：(1)pH高壓蒸汽(濕熱)(2)50 (3)a、b、d (4)氧氣無(wú)30方法平板劃線法稀釋涂布平板法圖示平板劃線法稀釋涂布平板法操作注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒：第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物之后每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來(lái)自上次劃線末端劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破(1)稀釋操作時(shí)，每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰12 cm處(2)涂布平板時(shí)：涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，取出時(shí)讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離既可以計(jì)數(shù)，又可以觀察菌落特征缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不顯著，容易蔓延適用范圍適用于好氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體菌落培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染過(guò)關(guān)練習(xí)1某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A，研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素等配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( )A培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源，目的是為了篩選目的菌B實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸C實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌污染D將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次上述實(shí)驗(yàn)的目的是獲得大量菌種解析：選D培養(yǎng)基中以化合物A為唯一碳源，可以篩選出能高效降解化合物A的細(xì)菌；實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，既可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸，又可以增加培養(yǎng)液中溶氧量；微生物培養(yǎng)過(guò)程中要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止外來(lái)雜菌的污染；將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次上述實(shí)驗(yàn)是為了純化高效降解化合物A的細(xì)菌。2(2017江蘇高考)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)如圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_。(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_，以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過(guò)于密集，應(yīng)進(jìn)一步_，以便于菌落計(jì)數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時(shí)除了需要水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加_。(3)右圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中_(填圖中序號(hào))區(qū)域更易獲得單菌落。(4)采用比色測(cè)定法(使用苯酚顯色劑)檢測(cè)降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中15號(hào)比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為_。管號(hào)123456苯酚濃度(mg/L)1如果廢水為50 mg/L苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,則需將殘留液稀釋_(填序號(hào)：51020)倍后，再進(jìn)行比色。解析：(1)富集培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚都是含碳的有機(jī)物，可作為碳源。(2)欲富集酚降解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加，應(yīng)逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚的含量；若接種培養(yǎng)后平板上菌落過(guò)于密集，則應(yīng)進(jìn)一步稀釋后再進(jìn)行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計(jì)數(shù)與分離；平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除含有水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等)外，還需添加瓊脂作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時(shí)，最后的劃線區(qū)域()中,菌體的密度較小,容易獲得單菌落。(4)因系列濃度梯度中6號(hào)比色管中苯酚濃度為1 mg/L，故15號(hào)比色管中的苯酚濃度應(yīng)分別為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L；根據(jù)題意，廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于01 mg/L，需將殘留液稀釋20倍左右。答案：(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀釋涂布凝固劑(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8一、選擇題1(2019屆高三蘇州調(diào)研)下列有關(guān)微生物發(fā)酵技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是()A傳統(tǒng)的發(fā)酵過(guò)程受技術(shù)條件限制，通常不進(jìn)行無(wú)菌操作B成品腐乳表面的皮膜是由毛霉等真菌的菌絲形成的，對(duì)人體無(wú)害C制備果酒、果醋和腐乳時(shí)，都是以建立種群優(yōu)勢(shì)作為發(fā)酵的基本條件D果醋的制備可以建立在果酒發(fā)酵的基礎(chǔ)上，也可以直接利用葡萄汁發(fā)酵解析：選A傳統(tǒng)的發(fā)酵過(guò)程受技術(shù)條件限制，通常滅菌不嚴(yán)格，但也進(jìn)行無(wú)菌操作。成品腐乳表面的皮膜是由毛霉等真菌的生長(zhǎng)，產(chǎn)生的菌絲進(jìn)入豆腐塊的深層而形成，對(duì)人體無(wú)害。制備果酒、果醋和腐乳時(shí)，建立的優(yōu)勢(shì)種群依次是酵母菌、醋酸菌、毛霉，以此作為發(fā)酵的基本條件。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將果汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)氧氣充足、缺少糖源時(shí)，醋酸菌可以先將酒精變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?，因此果醋的制備可以建立在果酒發(fā)酵的基礎(chǔ)上，也可以直接利用葡萄汁發(fā)酵。2下列有關(guān)制作果酒、果醋和腐乳的敘述，錯(cuò)誤的是( )A果酒的制作過(guò)程中既涉及有氧呼吸又涉及無(wú)氧呼吸B果醋發(fā)酵溫度較高，且發(fā)酵過(guò)程要特別注意氧氣的供應(yīng)C變酸的酒表面的菌膜含醋酸菌，腐乳的“皮”為毛霉菌絲D發(fā)酵過(guò)程中所有的相關(guān)反應(yīng)都是在微生物的細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的解析：選D腐乳制作過(guò)程中，蛋白質(zhì)和脂肪的水解反應(yīng)發(fā)生在毛霉的細(xì)胞外。3(2018鹽城三模)下列有關(guān)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的敘述，正確的是()A果酒、果醋和腐乳制作中，利用的都是微生物胞內(nèi)酶B制作果醋的醋酸菌，屬于嚴(yán)格厭氧的微生物C青霉、毛霉、曲霉等均參與了腐乳的發(fā)酵D制作果酒、果醋和腐乳所需時(shí)間基本相同解析：選C果酒、果醋是微生物的代謝產(chǎn)物， 需要的酶為胞內(nèi)酶；腐乳制作是利用毛霉產(chǎn)生的蛋白酶、脂肪酶分解蛋白質(zhì)、脂肪，蛋白酶、脂肪酶是胞外酶。制作果醋需要醋酸菌，它是一種好氧的微生物。青霉、毛霉、曲霉等真核生物均參與了腐乳的發(fā)酵。制作果酒的時(shí)間一般為1012 d，制作果醋的時(shí)間一般為78 d，制作腐乳的時(shí)間稍長(zhǎng)。4.如圖裝置可用于生物技術(shù)實(shí)踐的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述正確的是( )A制作果酒、果醋或腐乳時(shí)，所需控制的溫度都是相同的B乙裝置可以先用于果酒的制作，后用于果醋的制作C用裝置甲制作腐乳時(shí)，自下而上隨著豆腐塊加高逐漸減少用鹽量D裝置乙中b為排氣口，c為充氣口，可防止空氣中微生物的污染解析：選B制作果酒、果醋或腐乳時(shí),控制的溫度分別是1825 、3035 、1518 ；用裝置甲制作腐乳時(shí)，越接近瓶口微生物感染機(jī)會(huì)越多，所以加鹽量應(yīng)增大；裝置乙中b為充氣口，c為排氣口，排氣口長(zhǎng)而彎曲可防止空氣中微生物的污染。5下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是()A培養(yǎng)基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌B各種微生物培養(yǎng)基的配方中必須包含碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽及瓊脂等成分C純化培養(yǎng)微生物常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法D以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇培養(yǎng)分解尿素的微生物解析：選B各種微生物培養(yǎng)基的配方中一般都包含碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等，但由于各種微生物生長(zhǎng)特點(diǎn)不同，培養(yǎng)基中添加的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也不相同，如以CO2為碳源的自養(yǎng)型生物，培養(yǎng)基中不必添加碳源，而一些能以N2為氮源的微生物，培養(yǎng)基中也不必加氮源；另外只有固體培養(yǎng)基中才常添加瓊脂做凝固劑。6養(yǎng)殖池中存在的有毒物質(zhì)主要是氨及亞硝酸，這兩種物質(zhì)可被硝化細(xì)菌吸收利用。若要對(duì)養(yǎng)殖池底泥中硝化細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)，則( )A需要配制添加一定濃度氨鹽的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以篩選硝化細(xì)菌B應(yīng)對(duì)采集底泥使用的工具進(jìn)行滅菌，全部接種過(guò)程均需在酒精燈火焰旁進(jìn)行C可以采用平板劃線法進(jìn)行計(jì)數(shù)，還需與未接種的空白培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)D應(yīng)將培養(yǎng)基置于30 恒溫下培養(yǎng)12 h后，統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基中全部菌落數(shù)解析：選B牛肉膏蛋白胨本身含有氮源，許多微生物都可以其作為氮源，因此加入牛肉膏蛋白胨無(wú)法篩選硝化細(xì)菌；平板劃線法可以分離菌種，但不能用于計(jì)數(shù)；培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)每隔一段時(shí)間觀察，直到菌落穩(wěn)定開始計(jì)數(shù)。7(2019屆高三南通調(diào)研)下列檢測(cè)某熟制食品中大腸桿菌是否超標(biāo)的實(shí)驗(yàn)操作，不合理的是()A待檢測(cè)食品需要經(jīng)過(guò)滅菌操作后取樣檢測(cè)B應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基，作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照C用稀釋涂布平板法接種、計(jì)數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù)D接種后將培養(yǎng)皿倒置并在適宜溫度下培養(yǎng)解析：選A 待檢測(cè)食品滅菌后會(huì)將大腸桿菌殺死，無(wú)法檢測(cè)大腸桿菌是否超標(biāo)；應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)照；應(yīng)用稀釋涂布平板法接種、計(jì)數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù)；接種后應(yīng)該將培養(yǎng)皿倒置，并在適宜溫度下培養(yǎng)。8.在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中，劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如右圖。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( )A接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落C接種過(guò)程中至少需要對(duì)接種環(huán)灼燒5次D甲中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置解析：選D在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中，接種前應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落；接種過(guò)程中，對(duì)接種環(huán)在接種前要灼燒，每次劃線后均需灼燒，因此至少需要灼燒5次；據(jù)乙中菌落分布特點(diǎn)可推知甲中d區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置。9(多選)下列有關(guān)“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是()A高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)應(yīng)按順時(shí)針?lè)较蛞来涡o螺栓B選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類C待培養(yǎng)基冷卻至室溫時(shí)倒平板D統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)量時(shí)，接種方法可采用稀釋涂布平板法解析：選ABC高壓蒸汽滅菌鍋加蓋時(shí)，將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致；鑒別培養(yǎng)基可以鑒定培養(yǎng)基中某種微生物的種類；待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時(shí)倒平板；稀釋涂布平板法可用于活菌數(shù)量的計(jì)數(shù)。10(2017南通二模，多選)下列有關(guān)果酒、果醋和腐乳制作的比較，正確的是( )A主要菌種不一定是真核生物B溫度控制必須保證微生物繁殖最快C發(fā)酵過(guò)程會(huì)釋放熱量D可通過(guò)色、香、味等對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行評(píng)價(jià)解析：選ACD果醋制作利用的菌種是醋酸菌，是原核生物；發(fā)酵溫度和微生物繁殖最快的溫度不一定相同，如腐乳制作的發(fā)酵溫度為1518 ，此溫度并不是毛霉繁殖最快的溫度；三種發(fā)酵過(guò)程中，菌種都會(huì)進(jìn)行細(xì)胞呼吸釋放熱量。二、非選擇題11(2018江蘇六市二模)圖1表示研究人員為篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株進(jìn)行的相關(guān)實(shí)驗(yàn)流程，其中透明圈是微生物在固體培養(yǎng)基上消耗特定營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)形成的。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)本實(shí)驗(yàn)中，選擇蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)作為纖維素酶高產(chǎn)菌株的來(lái)源，這是因?yàn)開。(2)篩選用的培養(yǎng)基應(yīng)以_作為唯一碳源，并在配制培養(yǎng)基時(shí)加入_作為凝固劑。篩選時(shí)應(yīng)選擇D/d較大的菌株，因?yàn)檫@一指標(biāo)值越大說(shuō)明_。(3)圖2、圖3是研究纖維素酶的最適溫度和熱穩(wěn)定性的結(jié)果。研究纖維素酶的熱穩(wěn)定性時(shí)，首先將纖維素酶液置于3565 的不同溫度條件下保溫2 h，再取上述不同溫度處理的纖維素酶液和 _，并在_下測(cè)定纖維素酶的催化速率，計(jì)算酶活性殘留率。生產(chǎn)中使用該纖維素酶時(shí)，最好將溫度控制在40 左右，依據(jù)是_。解析：(1)蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)中富含纖維素，會(huì)聚集較多的纖維素分解菌，因此本實(shí)驗(yàn)中選擇蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)作為纖維素酶高產(chǎn)菌株的來(lái)源。(2)篩選纖維素分解菌，用的培養(yǎng)基應(yīng)以纖維素作為唯一碳源，這樣纖維素分解菌能正常生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)。篩選用的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，應(yīng)加入瓊脂作為凝固劑(絕大多數(shù)微生物不能利用瓊脂)。篩選時(shí)應(yīng)選擇D/d較大的菌株，因?yàn)檫@一指標(biāo)值越大說(shuō)明單個(gè)菌體產(chǎn)生的纖維素酶的活性越強(qiáng)。(3)根據(jù)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的基本原則，應(yīng)選擇上述不同溫度處理的纖維素酶液和經(jīng)相應(yīng)保溫處理的纖維素液，又據(jù)圖2可知，在50 酶的活性最高，因此在50 下測(cè)定纖維素酶的催化速率，計(jì)算酶活性殘留率。據(jù)圖3可知，在40 左右，纖維素酶的熱穩(wěn)定性高，作用時(shí)間持久，且酶活性相對(duì)較高，因此生產(chǎn)中使用該纖維素酶時(shí)，最好將溫度控制在40 左右。答案：(1)蘑菇培養(yǎng)基質(zhì)中富含纖維素，會(huì)聚集較多的纖維素分解菌(2)纖維素瓊脂單個(gè)菌體產(chǎn)生的纖維素酶的活性越強(qiáng)(3)經(jīng)相應(yīng)保溫處理的纖維素液50該溫度下，纖維素酶的熱穩(wěn)定性高，作用時(shí)間持久，且酶活性相對(duì)較高12(2015江蘇高考)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動(dòng)物的胃，可用來(lái)發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。為了增強(qiáng)發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對(duì)其降解纖維素能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項(xiàng)不需要的是_(填序號(hào))。酒精燈培養(yǎng)皿顯微鏡無(wú)菌水(2)在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過(guò)多的原因是_。(3)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原因是_。(4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩選到了幾株有透明降解圈的菌落(見(jiàn)下圖)。圖中降解圈大小與纖維素酶的_有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是_(填圖中序號(hào))。(5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4，在不同溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見(jiàn)下圖，推測(cè)菌株_更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由是_。解析：(1)在樣品稀釋和涂布平板過(guò)程中，需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行操作，培養(yǎng)皿用于盛放培養(yǎng)基并培養(yǎng)細(xì)菌，無(wú)菌水做稀釋的溶劑，此處唯一用不到的是顯微鏡。(2)在涂布平板時(shí)，要取少量菌懸液滴加到培養(yǎng)基表面，因?yàn)槿绻渭泳鷳乙毫窟^(guò)多，菌懸液就會(huì)堆積在培養(yǎng)基表面影響分離效果。(3)在向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時(shí)，如果試管口粘附有培養(yǎng)基，就很容易使棉塞受到污染，因此,需要用無(wú)菌的酒精棉球?qū)⒃嚬芸诓潦酶蓛簟?4)因?yàn)閯偣t可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但不與纖維素降解產(chǎn)物反應(yīng)，所以在剛果紅培養(yǎng)基平板上菌落周圍有透明降解圈是纖維素被降解的結(jié)果。降解圈大小由纖維素酶的活性和量決定，圖中菌落周圍的降解圈最大而菌落較小，因此其降解纖維素的能力最強(qiáng)。(5)考慮到人工瘤胃的發(fā)酵過(guò)程會(huì)使發(fā)酵液酸性增加，溫度升高，在這個(gè)前提下觀察在不同溫度和pH條件下測(cè)得的發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果圖可以看出，在高溫和低pH條件下都是J4菌株中的纖維素酶的活性較高，因而該菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。答案：(1)(2)培養(yǎng)基表面的菌懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積,影響分離效果(3)避免培養(yǎng)基污染棉塞 (4)量與活性(5)J4發(fā)酵過(guò)程會(huì)產(chǎn)熱和產(chǎn)酸，J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高13下圖為果酒、果醋工廠化生產(chǎn)流程。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題：(1)家庭自制葡萄酒所用菌種常來(lái)自_，圖中的候選菌A、B經(jīng)篩選和純化分別獲取_和_菌種。 (2)圖中所用的培養(yǎng)基都需要在接種前用_法進(jìn)行滅菌。 (3)在純化菌種A時(shí)接種了5個(gè)平板，每個(gè)平板均接種0.1 mL樣品并培養(yǎng)。其中乙平板的菌落分布如圖，純化菌種A的接種方法是_，推測(cè)出現(xiàn)平板乙可能的操作失誤是_。其余的甲、丙、丁、戊平板操作正常，其菌落數(shù)分別是210、230、470、190，則樣品中菌種A的數(shù)量為_個(gè)/mL。 (4)果酒發(fā)酵罐與果醋發(fā)酵罐需要控制的溫度條件差異是_。解析：(1)家庭自制葡萄酒所用菌種常來(lái)自葡萄皮表面的酵母菌。候選菌A、B篩選和純化后可以分別用于制作果酒和果醋，所以分別獲取的是酵母菌和醋酸菌。(2)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。(3)分析乙平板的菌落分布結(jié)果，可推知采用的純化菌種的接種方法是稀釋涂布平板法。出現(xiàn)乙平板結(jié)果可能的操作失誤是涂布不均勻。平板上菌落數(shù)量在30300之間可以用于計(jì)算，所以有效的菌落數(shù)是210、230、190，平均值為210。因?yàn)榻臃N了0.1 mL，所以菌種A的數(shù)量為2 100個(gè)/mL。(4) 果酒發(fā)酵的適宜溫度是1825 ，果醋發(fā)酵的適宜溫度是3035 。答案：(1)葡萄皮表面的酵母菌酵母菌醋酸菌 (2)高壓蒸汽滅菌(3)稀釋涂布平板法涂布不均勻 2 100(4)前者1825 ，后者3035 14(2018徐州考前模擬)圖1為某同學(xué)設(shè)計(jì)的用于制作果酒和果醋的發(fā)酵裝置。圖2為某研究小組的同學(xué)在對(duì)楊梅酒和楊梅醋的生產(chǎn)工藝進(jìn)行考察后，繪制出的基本工藝流程圖。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)圖示發(fā)酵過(guò)程中所需的酵母菌可以從自然界中分離出來(lái)，要得到較純菌種，應(yīng)配制_培養(yǎng)基(按培養(yǎng)基的功能分)，常采用_法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。滅菌后用平板劃線法或稀釋涂布平板法進(jìn)行接種。(2)用圖1裝置制作果酒過(guò)程中，要關(guān)閉_(填“充氣”或“排氣”)管上的夾子。(3)用圖1裝置制作果酒過(guò)程中，因某一步驟操作失誤導(dǎo)致發(fā)酵瓶瓶塞被沖開，該操作失誤是_。對(duì)該裝置進(jìn)行的改進(jìn)是_。(4)圖2中甲罐頂上的排氣管被設(shè)計(jì)成了彎曲狀的管，其目的是_。發(fā)酵一定時(shí)間后，觀察到發(fā)酵罐內(nèi)液面不再有_產(chǎn)生，說(shuō)明發(fā)酵基本完畢。(5)在制備楊梅醋過(guò)程中，乙罐內(nèi)先填充經(jīng)滅菌處理的木材刨花，然后加入含_菌的培養(yǎng)液，使該菌附著在刨花上，再讓甲罐中發(fā)酵完畢的楊梅酒流入乙罐進(jìn)行楊梅醋發(fā)酵。解析：(1)分離得到較純的菌種用的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基，對(duì)培養(yǎng)基滅菌采用的方法是高壓蒸汽滅菌法。滅菌后用平板劃線法或稀釋涂布平板法進(jìn)行接種。(2)果酒發(fā)酵是無(wú)氧發(fā)酵，充氣管上夾子在其發(fā)酵過(guò)程中要關(guān)閉。(3)用圖1裝置制作果酒的過(guò)程中，因某一步驟操作失誤導(dǎo)致發(fā)酵瓶瓶塞被沖開，該操作失誤是未及時(shí)排氣。可將該裝置中排氣管改成長(zhǎng)而彎曲的管道，并適時(shí)打開排氣管上的夾子。(4)圖2中甲罐頂上的排氣管被設(shè)計(jì)成了彎曲狀的管，其目的是防止空氣中的微生物進(jìn)入后污染培養(yǎng)液，并放出發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的CO2。發(fā)酵一定時(shí)間后，觀察到發(fā)酵罐內(nèi)液面不再有氣泡產(chǎn)生，說(shuō)明發(fā)酵基本完畢。(5)在制備楊梅醋過(guò)程中，乙罐內(nèi)先填充經(jīng)滅菌處理的木材刨花，然后加入含醋酸菌的培養(yǎng)液，使該菌附著在刨花上，再讓甲罐中發(fā)酵完畢的楊梅酒流入乙罐進(jìn)行楊梅醋發(fā)酵。答案：(1)選擇高壓蒸汽滅菌(2)充氣(3)未及時(shí)排氣排氣管改用長(zhǎng)而彎曲的膠管(4)防止空氣中的微生物污染，并放出發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的CO2氣泡(5)醋酸2個(gè)主攻點(diǎn)之(二) 酶的應(yīng)用和DNA的粗提取與鑒定1圖解酶的應(yīng)用與固定化(填圖)2DNA粗提取與鑒定(填圖)考向(一)探究加酶洗衣粉的洗滌效果真題導(dǎo)向1(2018江蘇高考，多選)下列關(guān)于加酶洗衣粉的敘述，錯(cuò)誤的是()A洗衣粉中添加的酶通常是由微生物發(fā)酵生產(chǎn)而來(lái)B洗衣粉中的蛋白酶通常會(huì)將添加的其他酶迅速分解C在50 熱水中用加酶洗衣粉洗衣時(shí)，其中的酶會(huì)迅速失活D加酶洗衣粉受潮后重新晾干保存，不會(huì)影響其中酶的活性解析：選BCD洗衣粉中添加的酶通常由微生物發(fā)酵生產(chǎn)而來(lái)；洗衣粉中的酶往往通過(guò)特殊的化學(xué)物質(zhì)將酶層層包裹，因此蛋白酶不會(huì)將添加的其他酶迅速分解；加酶洗衣粉的使用過(guò)程中水溫以3050 為宜，其中的酶具有耐較高溫度的特點(diǎn)，所以在50 的熱水中用加酶洗衣粉洗衣時(shí)，其中的酶不會(huì)迅速失活；加酶洗衣粉受潮后，酶表面的保護(hù)劑會(huì)被破壞，酶的活性會(huì)受到影響。2(2017江蘇高考)為了探究一種新型堿性纖維素酶的去污效能，研究性學(xué)習(xí)小組進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖。由圖中實(shí)驗(yàn)結(jié)果能直接得出的結(jié)論是()A堿性纖維素酶對(duì)污布類型2的去污力最強(qiáng)B不同類型洗衣粉影響堿性纖維素酶的去污力C堿性纖維素酶對(duì)污布類型2、3的去污力不同D加大酶用量可以顯著提高洗衣粉的去污力解析：選C對(duì)污布類型2、3處理，洗衣粉類型、酶用量均相同，二者比較可以直接說(shuō)明堿性纖維素酶對(duì)污布類型2、3的去污力不同。由圖中實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能直接得出A、B、D三項(xiàng)所述的結(jié)論，原因是它們都沒(méi)有單一變量的對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)支持。3(2014江蘇高考)下列關(guān)于加酶洗衣粉的敘述，正確的是()A高溫易使酶失活，因此冷水洗滌去污效果應(yīng)該比溫水好B洗衣粉中表面活性劑對(duì)堿性蛋白酶活性有一定的促進(jìn)作用C在pH低于7.0的自來(lái)水中，堿性蛋白酶依然能起作用D洗衣粉中酶主要是通過(guò)快速分解溶在水里的污漬發(fā)揮作用解析：選C酶有最適溫度，加酶洗衣粉中的酶在溫水中更能充分發(fā)揮洗滌效果；洗衣粉中的表面活性劑能影響堿性蛋白酶的活性，會(huì)使酶活性降低；加酶洗衣粉中的酶是經(jīng)過(guò)特殊處理的，能耐酸、耐堿；加酶洗衣粉中的酶主要是通過(guò)分解衣物上的污漬發(fā)揮作用。過(guò)關(guān)練習(xí)1(2018江蘇六市二模)下面是研究人員以復(fù)合酶制劑為材料進(jìn)行研究的結(jié)果，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()溫度()203040455060不加酶去污力(%)1518202121.522加酶去污力(%)304048504837A本研究的主要目的是探究溫度對(duì)復(fù)合酶制劑去污力的影響B(tài)實(shí)驗(yàn)所用污布上污染物種類、污染程度等均會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果C實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，加復(fù)合酶制劑后的洗滌溫度以4050 為宜D當(dāng)溫度高于60 時(shí)，加入的復(fù)合酶制劑會(huì)失去催化活性解析：選D據(jù)表格內(nèi)容可知，本實(shí)驗(yàn)的自變量是不同的溫度，因變量是加酶去污力與不加酶去污力的大小，因此本研究的主要目的是探究溫度對(duì)復(fù)合酶制劑去污力的影響；實(shí)驗(yàn)中的無(wú)關(guān)變量包括污布上污染物種類、污染程度等，這些無(wú)關(guān)變量均會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；據(jù)表格中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，4050 時(shí)，加復(fù)合酶制劑的去污力最強(qiáng)，洗滌衣物時(shí)應(yīng)控制溫度在該范圍；據(jù)表格中數(shù)據(jù)只能看出在2060 時(shí)，加入的復(fù)合酶制劑的活性先升高后降低，且4050 時(shí)復(fù)合酶制劑的活性最高，60 復(fù)合酶制劑的活性下降，無(wú)法看出60 以上復(fù)合酶制劑的催化活性是否喪失。2在探究某品牌加酶洗衣粉適宜的洗滌溫度時(shí)，不必考慮( )A實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的溫度范圍是否符合生活實(shí)際B洗滌衣物的大小、質(zhì)地、污漬類型和污染程度C洗衣粉用量、洗滌方式及時(shí)間、洗滌后漂洗方式D使用普通洗衣粉和不加洗衣粉進(jìn)行同樣方式的洗滌解析：選D探究加酶洗衣粉適宜的洗滌溫度實(shí)驗(yàn)中，自變量是溫度，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的溫度范圍要符合生活實(shí)際；洗滌衣物的大小、質(zhì)地、污漬類型和污染程度、洗衣粉用量、洗滌方式及時(shí)間、洗滌后漂洗方式都屬于無(wú)關(guān)變量，必須要考慮，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；由于探究溫度對(duì)加酶洗衣粉的影響，所以不需要設(shè)置加普通洗衣粉和不加洗衣粉的對(duì)照?？枷?二)酵母細(xì)胞的固定化及應(yīng)用真題導(dǎo)向1(2018江蘇高考)下列關(guān)于酵母細(xì)胞固定化實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()A用溫水使海藻酸鈉迅速溶解，待其冷卻到室溫后用于包埋細(xì)胞B進(jìn)行包埋時(shí)，用于懸浮細(xì)胞的CaCl2溶液濃度要適宜C注射器(或滴管)出口應(yīng)盡量貼近液面以保證凝膠珠成為球狀D包埋酵母細(xì)胞的凝膠珠為淡黃色半透明狀，并具有一定的彈性解析：選D溶解海藻酸鈉時(shí)，應(yīng)先加水，小火或間斷加熱并不斷攪拌，完全溶化后用蒸餾水定容，冷卻至室溫后加入活化的酵母細(xì)胞充分?jǐn)嚢瑁蛊浠旌暇鶆?，再固定；進(jìn)行包埋時(shí)，CaCl2溶液的作用是讓膠體聚沉，使海藻酸鈉形成凝膠珠，不是用于懸浮細(xì)胞；滴加時(shí)注射器或滴管不能貼近液面，否則凝膠珠會(huì)呈蝌蚪狀；制作成功的凝膠珠為淡黃色半透明狀，并具有一定的彈性。2(2017江蘇高考)下列關(guān)于“酵母細(xì)胞的固定化技術(shù)”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()A活化酵母時(shí)，將適量干酵母與蒸餾水混合并攪拌成糊狀B配制CaCl2溶液時(shí)，需要邊小火加熱邊攪拌C將海藻酸鈉溶液滴加到CaCl2溶液時(shí)，凝膠珠成形后應(yīng)即刻取出D海藻酸鈉溶液濃度過(guò)高時(shí)凝膠珠呈白色，過(guò)低時(shí)凝膠珠易呈蝌蚪狀解析：選A將適量干酵母與蒸餾水混合并攪拌成糊狀，可以活化酵母；配制海藻酸鈉溶液時(shí)需用小火加熱，配制CaCl2溶液時(shí)不需加熱；凝膠珠成形后應(yīng)在CaCl2溶液中浸泡30 min左右，以便形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)；海藻酸鈉溶液濃度過(guò)低時(shí)固定的酵母細(xì)胞數(shù)目少，凝膠珠呈白色，過(guò)高時(shí)凝膠珠易呈蝌蚪狀。3(2016江蘇高考)為了探索海藻酸鈉固定化對(duì)綠球藻生長(zhǎng)的影響，以及固定化藻對(duì)含Zn2污水的凈化作用，科研人員用篩選到的一株綠球藻進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，流程及結(jié)果如下。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：圖1圖2(1)實(shí)驗(yàn)中的海藻酸鈉作用是_，CaCl2的作用是_。(2)為洗去凝膠球上殘余的CaCl2和其他污染物，并保持綠球藻活性，宜采用_洗滌。圖1中1.0%海藻酸鈉組培養(yǎng)24 h后，移動(dòng)凝膠球，溶液呈綠色，原因是_。(3)為探索固定化藻對(duì)含Zn2污水的凈化作用，應(yīng)選用濃度為_海藻酸鈉制備凝膠球。(4)圖2中空白凝膠球組Zn2濃度下降的原因是_。結(jié)合圖1和圖2分析，固定化藻的實(shí)驗(yàn)組2448 h 間Zn2濃度下降速度較快的主要原因是_；7296 h間Zn2濃度下降速度較慢的原因有_。解析：(1)綠球藻為單細(xì)胞生物，可用包埋法固定化，實(shí)驗(yàn)中海藻酸鈉的作用是包埋綠球藻。配制好的海藻酸鈉和綠球藻混合溶液需要滴入CaCl2溶液中，與CaCl2反應(yīng)形成凝膠球，剛形成的凝膠球應(yīng)在CaCl2溶液中浸泡一段時(shí)間，有利于形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。(2)將固定好