2020版高考生物一輪復(fù)習(xí) 生物技術(shù)與工程 第3講 基因工程教學(xué)案 新人教版

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1、 第3講基因工程考綱展示1.基因工程的誕生()2.基因工程的原理及技術(shù)(含PCR技術(shù))()3.基因工程的應(yīng)用()4.蛋白質(zhì)工程()考點(diǎn)一| 基因工程的基本工具1基因工程的概念(1)概念:按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計,并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。(2)優(yōu)點(diǎn)與雜交育種相比:克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。與誘變育種相比:定向改造生物的遺傳性狀。2基因工程的基本工具(1)限制性核酸內(nèi)切酶(簡稱限制酶)。來源:主要來自原核生物。特點(diǎn):具有專一性,表現(xiàn)在兩個方面:識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列。切割特定核苷酸序列中的

2、特定位點(diǎn)。作用:斷裂特定的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。結(jié)果:產(chǎn)生黏性末端或平末端。(2)DNA連接酶種類Ecoli DNA連接酶T4DNA連接酶來源大腸桿菌T4噬菌體特點(diǎn)縫合黏性末端縫合黏性末端和平末端作用縫合雙鏈DNA片段,恢復(fù)兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵(3)載體種類:質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒等。質(zhì)粒的特點(diǎn)運(yùn)載體的作用:攜帶外源DNA片段進(jìn)入受體細(xì)胞。1(1)原核生物中限制酶為什么不切割自身的DNA?提示:原核生物中不存在該酶的識別序列或識別序列已被修飾等。(2)圖甲表示EcoR 限制酶及DNA連接酶的作用示意圖,圖乙表示Sma 限制酶的作用示意圖。請據(jù)圖回答問題:請寫出EcoR 限

3、制酶和Sma限制酶識別的堿基序列以及切割位點(diǎn)。提示:EcoR 限制酶識別的堿基序列是GAATTC,切割位點(diǎn)在G和A之間;Sma 限制酶識別的堿基序列是CCCGGG,切割位點(diǎn)在G和C之間。限制酶和DNA連接酶的作用部位相同嗎?DNA連接酶起作用時,是否需要模板?提示:相同,都是磷酸二酯鍵。不需要模板。1基因工程技術(shù)使用限制酶需注意的四個問題(1)獲取目的基因和切割載體時,經(jīng)常使用同一種限制酶(也可使用能切出相同末端的不同限制酶),目的是產(chǎn)生相同的黏性末端或平末端。(2)獲取一個目的基因需限制酶切割兩次,共產(chǎn)生4個黏性末端或平末端。(3)限制酶切割位點(diǎn)的選擇,必須保證標(biāo)記基因的完整性,以便于檢測。

4、(4)為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒。2載體上標(biāo)記基因的作用載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒有抵抗相關(guān)抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后,抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá),使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素,所以在受體細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入該種抗生素就可以只保留轉(zhuǎn)入載體的受體細(xì)胞,原理如圖所示:考法1考查限制酶、DNA連接酶等酶的作用1(2016全國卷)圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR 、BamH 和Sau3A 三種限制性內(nèi)切酶的識別序列與切割位點(diǎn),圖(b)為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上

5、的EcoR、Sau3A的切點(diǎn)是唯一的)。圖(a)圖(b)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識,回答下列問題:(1)經(jīng)BamH 酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被_酶切后的產(chǎn)物連接,理由是_。(2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子,如圖(c)所示。這三種重組子中,不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有_,不能表達(dá)的原因是_。圖(c)(3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有_和_,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是_。解析:(1)由題圖可知,BamH 和Sau3A 兩種限制性內(nèi)切酶的共同識別序列是,二者切割可以形成相同的黏性末端,因此經(jīng)BamH

6、酶切得到的目的基因可以與圖(b)所示表達(dá)載體被Sau3A 酶切后的產(chǎn)物連接。(2)在基因表達(dá)載體中,啟動子應(yīng)位于目的基因的首端,終止子應(yīng)位于目的基因的尾端,這樣基因才能順利地轉(zhuǎn)錄,再完成翻譯過程,即順利表達(dá)。圖中甲所示的目的基因插入在啟動子的上游,丙所示目的基因插入在終止子的下游,二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄,因此目的基因不能表達(dá)。(3)常見的DNA連接酶有EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶,其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。答案:(1)Sau3A 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端(2)甲和丙甲中目的基因插入在啟動子的上游,丙中目的基因插入在終止子的下游,二者的目

7、的基因均不能被轉(zhuǎn)錄(3)EcoliDNA連接酶T4DNA連接酶T4DNA連接酶考法2考查載體的作用及特點(diǎn)等2(2016全國卷)某一質(zhì)粒載體如圖所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamH 酶切后,與用BamH 酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng),用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌。結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。回答下列問題:(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具,應(yīng)具備的

8、基本條件有_ _(答出兩點(diǎn)即可),而作為基因表達(dá)載體,除滿足上述基本條件外,還需具有啟動子和終止子。(2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中,未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的,其原因是_;并且_和_的細(xì)胞也是不能區(qū)分的,其原因是_。在上述篩選的基礎(chǔ)上,若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落,還需使用含有_的固體培養(yǎng)基。(3)基因工程中,某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體,其DNA復(fù)制所需的原料來自于_。解析:(1)質(zhì)粒作為載體,應(yīng)具備的基本條件有:有一個至多個限制酶切割位點(diǎn),供外源DNA片段(基因)插入其中;在受體細(xì)胞中能自我復(fù)制,或能整合到

9、染色體DNA上,隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制;有特殊的標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇等等。(2)在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素進(jìn)行篩選,其中未被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌和僅含環(huán)狀目的基因的大腸桿菌,因不含氨芐青霉素抗性基因而都不能在此培養(yǎng)基上存活,二者不能區(qū)分。含有質(zhì)粒載體的大腸桿菌和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌中都含有氨芐青霉素抗性基因,都能在此培養(yǎng)基上存活,二者也不能區(qū)分。若要將含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌進(jìn)一步篩選出來,還需要使用含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基。(3)某些噬菌體經(jīng)改造后作為載體,導(dǎo)入受體細(xì)胞后,其DNA復(fù)制所需的原料來自于受體細(xì)胞。答案:(1)能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有

10、一至多個限制酶切割位點(diǎn)(答出兩點(diǎn)即可)(2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均不生長含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均能生長四環(huán)素(3)受體細(xì)胞考點(diǎn)二| 基因工程的基本操作及其應(yīng)用1基因工程的基本程序(1)目的基因的獲取從基因文庫中獲取人工合成利用PCR技術(shù)擴(kuò)增(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體的組成(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化含義:目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)遺傳和表達(dá)的過程。轉(zhuǎn)化方法生

11、物類型植物動物微生物受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵大腸桿菌或酵母菌等常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法顯微注射法感受態(tài)細(xì)胞法(4)目的基因的檢測與鑒定方法檢測或鑒定目的水平DNA分子雜交技術(shù)檢測目的基因的有無分子水平分子雜交技術(shù)目的基因是否轉(zhuǎn)錄抗原抗體雜交目的基因是否翻譯抗蟲或抗病接種實(shí)驗(yàn)是否具有抗蟲抗病特性個體水平2PCR技術(shù)(1)原理:DNA雙鏈復(fù)制。(2)條件(3)過程(4)結(jié)果:上述三步反應(yīng)完成后,一個DNA分子就變成了兩個DNA分子,隨著重復(fù)次數(shù)的增多,DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應(yīng)過程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的。3基因工程的應(yīng)用(1)植物基因工程培育抗蟲轉(zhuǎn)基因植物、抗病

12、轉(zhuǎn)基因植物、抗逆轉(zhuǎn)基因植物、利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。(2)動物基因工程提高動物生長速度、改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物、用轉(zhuǎn)基因動物作器官移植的供體。乳腺生物反應(yīng)器:藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件重組在一起。(3)基因工程藥品受體細(xì)胞:多為原核細(xì)胞。原因是其繁殖快,多為單細(xì)胞,遺傳物質(zhì)相對較少。成果:生產(chǎn)出細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。(4)基因治療方法:基因置換、基因修復(fù)、基因增補(bǔ)、基因失活等。類型:體內(nèi)基因治療和體外基因治療。1將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞整合到線粒體DNA或葉綠體DNA上,能否穩(wěn)定遺傳?說明理由。提示:一般不能。因?yàn)閮H把目的基因整合到線粒體DNA或葉綠體

13、DNA上,細(xì)胞分裂可能導(dǎo)致目的基因丟失,因此無法穩(wěn)定遺傳。2用箭頭及必要的文字簡述基因組文庫和部分基因文庫構(gòu)建過程。提示:基因組文庫的構(gòu)建過程為:某種生物全部DNA許多DNA片段受體菌群體。部分基因文庫的構(gòu)建過程為:某種生物發(fā)育的某個時期的mRNAcDNA受體菌群基因工程操作的四個易錯點(diǎn)(1)目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的,基因表達(dá)需要啟動子與終止子的調(diào)控,所以目的基因應(yīng)插入啟動子與終止子之間的部位。(2)基因工程操作過程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞)沒有堿基互補(bǔ)配對現(xiàn)象。(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法原理:農(nóng)桿菌易感染植物細(xì)胞,并將其Ti質(zhì)粒上的TDNA轉(zhuǎn)移并整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。(4)啟

14、動子起始密碼子,終止子終止密碼子啟動子和終止子位于DNA片段上,分別控制轉(zhuǎn)錄過程的啟動和終止;起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上,分別控制翻譯過程的啟動和終止??挤?基因工程的基本操作程序分析1(2018全國卷)回答下列問題:(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)??梢宰鳛檩d體外,還證明了_(答出兩點(diǎn)即可)。(2)體外重組的質(zhì)??赏ㄟ^Ca2參與的_方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞;而體外重組的噬菌體DNA通常需與_組裝成完整噬菌體后,才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)

15、胞中,可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是_。(3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時,表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解,在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用_的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加_的抑制劑。解析:(1)兩位科學(xué)家將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中并進(jìn)行了表達(dá),因此,該研究可以證明:質(zhì)??梢宰鳛檩d體,真核細(xì)胞的基因在原核細(xì)胞中也可以表達(dá)(不同生物共用一套密碼子)、體外重組的質(zhì)粒可以進(jìn)入受體細(xì)胞等。(2)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化,將質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時,常用的轉(zhuǎn)化方法是:首先用Ca2處理大腸桿菌細(xì)胞,使其成為

16、感受態(tài)。噬菌體DNA沒有侵染能力,體外重組的噬菌體DNA通常需與外殼蛋白組裝成完整噬菌體才能完成侵染過程。噬菌體多寄生在細(xì)菌中,但不能寄生在心肌細(xì)胞和葉肉細(xì)胞中。(3)若要使蛋白質(zhì)不被降解,則大腸桿菌體內(nèi)不能存在蛋白酶,因此,實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞。同理,在蛋白質(zhì)純化過程中,也不能使蛋白質(zhì)降解,因此,應(yīng)添加蛋白酶抑制劑。答案:(1)體外重組的質(zhì)??梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞;真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)(2)轉(zhuǎn)化外殼蛋白(或答噬菌體蛋白)細(xì)菌(3)蛋白酶缺陷型蛋白酶考法2基因工程技術(shù)的應(yīng)用2(2017全國卷)幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分,幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程

17、將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi),可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題:(1)在進(jìn)行基因工程操作時,若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA,常選用嫩葉而不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料,原因是_。提取RNA時,提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是_。(2)以mRNA為材料可以獲得cDNA,其原理是_。(3)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá),需要通過質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,原因是_(答出兩點(diǎn)即可)。(4)當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時,DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是_。(5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是_。解析

18、:(1)與老葉相比,嫩葉組織細(xì)胞易破碎,容易提取到幾丁質(zhì)酶的mRNA。提取RNA時,提取液中添加RNA酶抑制劑可防止RNA被RNA酶催化降解。(2)以mRNA為模板,按照堿基互補(bǔ)配對原則,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下,通過逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)可以獲得cDNA。(3)因該目的基因是通過逆轉(zhuǎn)錄形成的,無表達(dá)所需的啟動子,也無在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制所需的復(fù)制原點(diǎn)等,所以在受體細(xì)胞內(nèi)不能穩(wěn)定存在和表達(dá),也不能遺傳下去。(4)構(gòu)建基因表達(dá)載體時,DNA連接酶能催化目的基因和質(zhì)粒載體這兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。(5)轉(zhuǎn)基因植株的基因組中含有幾丁質(zhì)酶基因,但該植株抗真菌的能力并沒有提高,可能是由于轉(zhuǎn)錄或翻譯異常,即

19、幾丁質(zhì)酶基因未能正常表達(dá)。答案:(1)嫩葉組織細(xì)胞易破碎防止RNA降解(2)在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下,以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對的原則可以合成cDNA(3)目的基因無復(fù)制原點(diǎn);目的基因無表達(dá)所需啟動子(4)磷酸二酯鍵(5)目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常3(2019福建高三質(zhì)檢)苜蓿是目前我國種植最廣的豆科牧草,但是病菌往往威脅著苜蓿的生長。為提高產(chǎn)量,研究人員將溶菌酶基因(LYZ基因)和綠色熒光蛋白基因(GFP基因)連接為LYZGFP基因,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入苜蓿細(xì)胞中,并通過組織培養(yǎng)成功獲得了抗病植株。 圖1表示Ti質(zhì)粒,其中Vir區(qū)的基因產(chǎn)物是TDNA轉(zhuǎn)移的必備條件;圖2表示含有LYZGFP

20、基因的DNA片段。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)?;卮鹣铝袉栴}:(1)構(gòu)建含有LYZGFP基因的重組質(zhì)粒時,應(yīng)選用限制酶_進(jìn)行切割,原因是_。(2)據(jù)圖分析,在培育轉(zhuǎn)基因苜蓿植株過程中,應(yīng)選擇LYZGFP基因中的GFP基因?yàn)闃?biāo)記基因,而不選擇質(zhì)粒中原有的卡那霉素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因,這種做法的優(yōu)點(diǎn)是_。(3)在組織培養(yǎng)過程中,對愈傷組織進(jìn)行顯微檢測,若_,則表明細(xì)胞中GFP基因存在并表達(dá)。(4)選擇含有GFP基因的愈傷組織為材料,用PCR技術(shù)擴(kuò)增并檢測LYZ基因,需選用一段_合成引物,該過程所用到的酶必須具有_的特性。(5)對該苜蓿植株進(jìn)行病菌接種實(shí)驗(yàn),通過觀察其抗病程度可以進(jìn)行個體生物學(xué)水平

21、的鑒定,原因是_。解析:(1)據(jù)圖2可知,構(gòu)建含有LYZGFP基因的重組質(zhì)粒時,含有LYZGFP基因的片段有三個酶切位點(diǎn),基因兩側(cè)沒有相同限制酶,應(yīng)該使用雙酶切法,限制酶為必選。根據(jù)圖1結(jié)合農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理,所用限制酶切割位點(diǎn)必須在TDNA片段上,限制酶會切斷Ti質(zhì)粒本身的四環(huán)素抗性基因,但GFP基因、卡那霉素抗性基因都可以作為標(biāo)記基因。所以應(yīng)選擇限制酶和。限制酶會破壞質(zhì)粒中的Vir區(qū)的基因,不可選用。(2)據(jù)圖1可知,若LYZGFP基因在TDNA片段上,就能整合到苜蓿細(xì)胞染色體的DNA上,便于追蹤檢測LYZ基因的表達(dá)情況,這是選用GFP基因?yàn)闃?biāo)記基因的優(yōu)點(diǎn)。而卡那霉素抗性基因不在TDNA片

22、段上,不能整合到苜蓿細(xì)胞染色體的DNA上,所以相對不宜選用。(3)GFP基因的表達(dá)產(chǎn)物是綠色熒光蛋白,對愈傷組織進(jìn)行顯微檢測時,若觀察到綠色熒光,則表明細(xì)胞中的GFP基因存在并表達(dá)。(4)進(jìn)行PCR技術(shù)擴(kuò)增并檢測LYZ基因的前提,要有一段已知的LYZ基因的核苷酸序列以便合成引物。PCR擴(kuò)增過程使用的DNA聚合酶具有耐高溫或熱穩(wěn)定的特性。(5)LYZ基因能夠表達(dá)出溶菌酶,根據(jù)免疫學(xué)知識得知:溶菌酶是免疫活性物質(zhì),能夠殺滅病菌。因此轉(zhuǎn)基因成功的苜蓿植株會表現(xiàn)出抗病特性。答案:(1)和(對Ti質(zhì)粒和含有LYZGFP基因的片段)選擇限制酶和限制酶能獲取LYZGFP基因,不會破壞質(zhì)粒中的Vir區(qū)的基因,

23、使目的基因的插入位點(diǎn)位于TDNA片段上(2)LYZGFP基因在TDNA片段上,能整合到苜蓿細(xì)胞染色體的DNA上,便于追蹤檢測LYZ基因的表達(dá)情況(3)觀察到綠色熒光(4)LYZ基因的核苷酸序列耐高溫(或“熱穩(wěn)定”) (5)LYZ基因能夠表達(dá)出溶菌酶,溶菌酶能夠殺滅病菌,表現(xiàn)出抗病特性考點(diǎn)三| 蛋白質(zhì)工程及應(yīng)用1蛋白質(zhì)工程(1)概念以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過基因修飾或基因合成,對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(2)流程圖寫出流程圖中字母代表的含義:A轉(zhuǎn)錄,B.翻譯,C.分子設(shè)計,D.多肽鏈,E.預(yù)期功能。2蛋白質(zhì)工程與基因工程的

24、比較(1)區(qū)別項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程過程預(yù)期蛋白質(zhì)功能設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測應(yīng)有的氨基酸序列找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列獲取目的基因基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測與鑒定實(shí)質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性,以獲得人類所需的生物類型和生物產(chǎn)品結(jié)果可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)(2)聯(lián)系蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上,延伸出來的第二代基因工程?;蚬こ讨兴玫哪承┟感枰ㄟ^蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造。1對天然蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,應(yīng)該通過對基因的操作來實(shí)現(xiàn),為什么不能直接對蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作?提示:如果對蛋白質(zhì)直接進(jìn)行改造,即使改造成功了,

25、被改造過的蛋白質(zhì)分子還是無法遺傳。2絕大多數(shù)酶都是蛋白質(zhì),簡要表述酶工程與蛋白質(zhì)工程有何區(qū)別和聯(lián)系?提示:酶工程的重點(diǎn)在于對已存在的酶的合成充分利用,而蛋白質(zhì)工程則是對已存在的蛋白質(zhì)進(jìn)行修飾改造或制造出自然界不存在的蛋白質(zhì)。酶工程是蛋白質(zhì)工程的一部分。考法考查蛋白質(zhì)工程的原理及應(yīng)用(2015全國卷)已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P),該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,由305個氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸,240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸,改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能,而且具有了酶的催化活性?;卮鹣铝袉栴}:(1)從上述資料可知,若要改變蛋白質(zhì)的功能,可以考慮對蛋白質(zhì)的_進(jìn)行改

26、造。(2)以P基因序列為基礎(chǔ),獲得P1基因的途徑有修飾_基因或合成_基因。所獲得的基因表達(dá)時是遵循中心法則的,中心法則的全部內(nèi)容包括_的復(fù)制,以及遺傳信息在不同分子之間的流動,即:_。 (3)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程,其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā),通過_和_,進(jìn)而確定相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列,據(jù)此獲得基因,再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì),之后還需要對蛋白質(zhì)的生物_進(jìn)行鑒定。解析:(1)從題中所述資料可知,將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸,240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸后,該蛋白質(zhì)的功能發(fā)生了改變,此過程是通過對構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的排列順序進(jìn)行改造,進(jìn)而改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),從而改變了蛋白

27、質(zhì)的功能。(2)在蛋白質(zhì)工程中,目的基因可以以P基因序列為基礎(chǔ),對生物體內(nèi)原有P基因進(jìn)行修飾,也可以通過人工合成法合成新的P1基因。中心法則的內(nèi)容如圖所示:由圖可知,中心法則的全部內(nèi)容包括:DNA以自身為模板進(jìn)行的復(fù)制,DNA通過轉(zhuǎn)錄將遺傳信息傳遞給RNA,最后RNA通過翻譯將遺傳信息表達(dá)成蛋白質(zhì);在某些病毒中RNA可自我復(fù)制(如煙草花葉病毒等),在某些病毒中能以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成DNA(如HIV),這是對中心法則的補(bǔ)充。(3)蛋白質(zhì)工程的基本途徑是預(yù)期蛋白質(zhì)功能設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測應(yīng)有的氨基酸序列合成DNA表達(dá)出蛋白質(zhì),經(jīng)過該過程得到的蛋白質(zhì),需要對其生物功能進(jìn)行鑒定,以保證其發(fā)揮正

28、常作用。答案:(1)氨基酸序列(或結(jié)構(gòu))(2)PP1DNA和RNA(或遺傳物質(zhì))DNARNA、RNADNA、RNA蛋白質(zhì)(或轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、翻譯)(3)設(shè)計蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測氨基酸序列功能真題體驗(yàn)| 感悟高考淬煉考能1(2017北京高考)為了增加菊花花色類型,研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1),擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組,再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖?)A用限制性核酸內(nèi)切酶EcoR和連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒B用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞C在培養(yǎng)基中添加卡那霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞D用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上CA對:C基因兩端有Ec

29、oR 酶切位點(diǎn),可用限制性核酸內(nèi)切酶EcoR和(DNA)連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒。B對:一般用農(nóng)桿菌等作為媒介去侵染植物的愈傷組織等,將含有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞。C錯:據(jù)圖可知,質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因,不含卡那霉素抗性基因,故無法用卡那霉素來篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞。D對:檢測C基因是否整合到菊花染色體上,常采用DNA分子雜交技術(shù),即在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作為標(biāo)記,以此作為探針,使探針與C基因雜交,若顯示出雜交帶,則表明目的基因已插入染色體DNA中。2(2015重慶高考)下列有關(guān)人胰島素基因表達(dá)載體的敘述,正確的是()A表達(dá)載體中的胰島素基因可通過人肝細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得B表

30、達(dá)載體的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動于復(fù)制原(起)點(diǎn)C借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來D啟動子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用答案:C3(多選)(2014江蘇高考)下列關(guān)于基因工程技術(shù)的敘述,錯誤的是()A切割質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切酶均特異性地識別6個核苷酸序列BPCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應(yīng)C載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因D抗蟲基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá)答案:ABC4(2018全國卷)某種熒光蛋白(GFP)在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光,這一特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某

31、種病毒的外殼蛋白(L1)基因連接在GFP基因的5末端,獲得了L1GFP融合基因(簡稱為甲),并將其插入質(zhì)粒P0,構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1,其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下,圖中E1E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同?;卮鹣铝袉栴}:(1)據(jù)圖推斷,該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時,使用了兩種限制酶,這兩種酶是_。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證_,也是為了保證_。(2)將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后,若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光,則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了_和_過程。(3)為了獲得含有甲的牛,該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括:將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的_移入牛的_中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。(4)為了檢測

32、甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中,某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定,在鑒定時應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的_(填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”)作為PCR模板。解析:(1)據(jù)圖示信息分析:將L1GFP融合基因(甲)插入質(zhì)粒時使用酶E1和E4進(jìn)行酶切,既能保證L1GFP融合基因的完整,又能保證L1GFP融合基因與載體的正確連接。(2)目的基因在受體細(xì)胞中的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個過程。(3)將體外培養(yǎng)的含有目的基因的動物體細(xì)胞核移入該動物的去核卵母細(xì)胞中,經(jīng)過體外胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)可獲得轉(zhuǎn)基因動物。(4)檢測目的基因是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中,采用PCR技術(shù)鑒定時,應(yīng)以該牛不同組織細(xì)

33、胞中的核DNA作為PCR模板。答案:(1)E1和E4甲的完整甲與載體正確連接(2)轉(zhuǎn)錄翻譯(3)細(xì)胞核去核卵母細(xì)胞(4)核DNA5(2017全國卷)真核生物基因中通常有內(nèi)含子,而原核生物基因中沒有,原核生物沒有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列的機(jī)制。已知在人體中基因A(有內(nèi)含子)可以表達(dá)出某種特定蛋白(簡稱蛋白A)?;卮鹣铝袉栴}:(1)某同學(xué)從人的基因組文庫中獲得了基因A,以大腸桿菌作為受體細(xì)胞卻未得到蛋白A,其原因是_。(2)若用家蠶作為表達(dá)基因A的受體,在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中,不選用_作為載體,其原因是_。(3)若要高效地獲得蛋白A,可選用大腸桿菌作為受體。因?yàn)榕c家蠶相比,

34、大腸桿菌具有_(答出兩點(diǎn)即可)等優(yōu)點(diǎn)。(4)若要檢測基因A是否翻譯出蛋白A,可用的檢測物質(zhì)是_ _(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”)。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)為證明DNA是遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻(xiàn),也可以說是基因工程的先導(dǎo),如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示,那么,這一啟示是_。解析:(1)人是真核生物,從人的基因組文庫中獲得的基因A有內(nèi)含子,而受體細(xì)胞大腸桿菌是原核生物,原核生物基因中沒有內(nèi)含子,相應(yīng)的就沒有切除內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列的機(jī)制,故無法表達(dá)出蛋白A。(2)噬菌體是專一性侵染細(xì)菌的病毒,以細(xì)菌為宿主細(xì)胞,而昆蟲病毒侵染的是昆蟲,以昆蟲為宿主細(xì)胞。家蠶屬于

35、昆蟲,故應(yīng)選用昆蟲病毒作為載體。(3)與家蠶相比,大腸桿菌具有繁殖快、容易培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn),故要高效地獲得蛋白A,可選用大腸桿菌作為受體。(4)檢測基因A是否翻譯出蛋白A,可用抗原抗體雜交法。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中,S型細(xì)菌的DNA可以使R型細(xì)菌發(fā)生轉(zhuǎn)化,說明可調(diào)控多糖莢膜產(chǎn)生的基因整合到了R型細(xì)菌的DNA分子中并成功得以表達(dá)。也就是說DNA可以從一種生物個體轉(zhuǎn)移到另一種生物個體并進(jìn)行表達(dá),這就為基因工程理論的建立提供了啟示。答案:(1)基因A有內(nèi)含子,在大腸桿菌中,其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對應(yīng)的RNA序列不能被切除,無法表達(dá)出蛋白A(2)噬菌體噬菌體的宿主是細(xì)菌,而不是家蠶(3)繁殖快、容易培養(yǎng)(4)蛋白A的抗體(5)DNA可以從一種生物個體轉(zhuǎn)移到另一種生物個體- 16 -

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