《BSL2實驗室生物安全管理手冊.doc》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《BSL2實驗室生物安全管理手冊.doc（21頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。
1、一、前 言生物安全實驗室主要用于從事涉及病原微生物的實驗檢疫和檢測，由于從事微生物的檢疫和檢測關系工作人員的身體安全、健康以及工作環(huán)境的衛(wèi)生，所以要求從事檢疫和檢測的工作人員具備相應的專業(yè)知識，并執(zhí)行完善、嚴格的實驗操作規(guī)程。本手冊作為生物安全實驗室工作手冊使用，指導工作人員使用和管理生物安全實驗室。二、 本實驗室的危險性評估當實驗室活動涉及傳染或潛在傳染性生物因子時，應進行危害程度評估。危害程度評估應至少包括下列內容：生物因子的種類（已知的、未知的、基因修飾的或未知傳染性的生物材料）、來源、傳染性、致病性、傳播途徑、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、感染劑量、濃度、動物實驗數(shù)據(jù)、預防和治療。危害程度評估應由
2、適當?shù)挠薪涷灥膶I(yè)人員進行，本實驗室的由主任 負責完成。2.1 樣本的生物學危險評估根據(jù)規(guī)定，本實驗室（BSL-2級）主要從事出入境動物的檢驗檢疫；以及出入境水產品的檢驗，涉及的生物學危險因子及其評估見表1。 表1 實驗樣本及其生物學危險評估序號可能接觸的生物因子的名稱、種類 危險性類別致病性傳播途徑 感染劑量濃度 預 防 或 治 療 措 施1牛鼻氣管炎病毒2牛赤羽病病毒3456空氣7口腔8皮9血液2.2 實驗試劑的生物學危險性評估存在生物安全危害可能的實驗試劑必須進行生物學危險評估，評估原則遵照2.1。 表2 常用的實驗試劑及其危險性評估序號使用試劑名稱 危險性類別致病性傳播途徑感染（中毒）
3、劑量、濃度預防或治療措施1化學中毒血液2腸道感染皮3呼吸道感染口腔4空氣567892.3 通風系統(tǒng)的危險性評估表3 通風系統(tǒng)及其危險性評估序號可能的危險性部位（名稱） 可能的危險性類別致病性傳播途徑 感染劑量、濃度預防或治療措施1排風管道實驗過程中的生物因子累積在管道表面（見表1）空氣 未能確定每半年進行一次熏蒸消毒2高效濾器實驗過程中的生物因子截留在高效濾器迎風面（見表1）空氣未能確定每天定時啟動安裝在排風機箱內的臭氧發(fā)生器，進行消毒；更換時由專業(yè)公司的技術人員按規(guī)程更換、包裝、銷毀。2.4 水電系統(tǒng)的危險性評估表4 水電系統(tǒng)及其危險性評估序號可能的危險性部位（名稱） 可能的危險性類別致病性
4、傳播途徑 感染劑量、濃度預防或治療措施1洗眼器的排水實驗過程中的生物因子意外濺入眼睛而應急沖洗，累積在管道表面（見表1）口腔沖洗完畢，加入56升含氯消毒劑，30分鐘之后用大量的自來水沖稀，排入城市污水處理體系2電 器實驗過程中的生物因子累積在電器表面（見表1）皮膚1每周一次，用濕毛巾沾3%的H2O2消毒劑溶液搽抹消毒。 每天頂時啟動紫外線等進行30分鐘的消毒2.5 儀器設備的危險性評估表5 儀器設備及其危險性評估序號儀器設備名稱 可能的危險性致病性傳播途徑 感染劑量、濃度預防或治療措施1洗眼器實驗過程中的生物因子累積在電器表面皮膚每周一次，用濕毛巾沾3%的H2O2消毒劑溶液搽抹消毒。2生物安全
5、柜3高壓滅菌器456789三、操作管理規(guī)程3.1 生物安全柜操作規(guī)程【啟動準備】1 如紫外燈為關閉，請關閉紫外燈；2 啟動安全柜的鼓風機和照明燈，檢查進風口和排風口并確認它們未被覆蓋、處于正常狀態(tài)；3 在操作使用之前，鼓風機至少應運行15分鐘?！静聊ㄏ尽? 用70%酒精、2%堿性脫水戊二醛或消毒效果相近、無腐蝕性消毒劑對安全柜內的所有工作面進行擦抹消毒?！静牧虾驮O備】1 把材料和設備放置于安全柜內的工作面；2 任何物品放置均不能超出進風格柵的前后風口；在安全柜內工作面應隔離污染物，減少來回操作的次數(shù)；4 不能使用明火的本生燈（煤氣爐）；5 禁止使用任何閃點在25華度以下的易燃物質?！究諝鈨艋?/p>
6、】l 材料和設備放置于安全柜內后應允許運行23分鐘?！具\行操作】 1 運行操作時應選用適宜的服裝、長袖袖套，編織袖口和橡膠手套；2 盡量減少安全柜內的來回操作次數(shù)，并采用適宜的消毒措施?！窘K末凈化與擦抹消毒】1 從安全柜內取出材料與儀器之前，系統(tǒng)至少應運行23分鐘；2 完成操作后應進行終末消毒，擦抹消毒方法同上。3 熏蒸消毒生物安全柜內的污染清除時，可將適量的多聚甲醛(空氣中的終濃度達到08)放在電熱板或電熱盤上(在生物安全柜外進行控制)。然后在生物安全柜內放置第二個放有比多聚甲醛多10 的碳酸氫銨的加熱板或盤。第二個盤上覆蓋一個能夠從遠處將其移走的蓋子(如連接一個能夠從生物安全柜外拉動的繩子
7、)，從而盡量減少對甲醛氣體的提前中和。如果相對濕度低于70 ，在使用強力膠帶如“管道密封膠帶”(ducttape)密封前部封閉板前，還要在安全柜內部放置一個開口的盛有熱水的容器。如果前部沒有封閉板，則可以用重型塑料布(heavy gaugeplastic，heeting)粘貼覆蓋在前部以保證氣體不會泄漏進入房間【關閉】l 關閉鼓風機和照明燈。3.2 BSL-2實驗室操作規(guī)程【準備】樣本準備應在樣品室內完成。【啟動】1、 啟動排風風機；2、 啟動生物安全柜1、2；3、 啟動送風風機；4、 啟動空調機。系統(tǒng)運行至少十分鐘，檢查壓差，核心室壓差正常范圍應在-10Pa,緩沖室壓差正常范圍應在0Pa。【
8、人員進入】1、 系統(tǒng)參數(shù)處于正常狀態(tài)，人員方可進入；2、 人員進入時應更換工作服，按緩沖間1 淋浴間 緩沖間2 核心實驗室的順序進入。【物品進入】1、 實驗人員進入核心實驗室后，物品方可進入；2、 物品應從傳遞窗輸送進入?！緦嶒炦M行】1、 實驗操作應于生物安全柜內完成；2、 實驗用廢水應用專用的接水桶盛接；3、 帶上備用更換的清潔工作服，留置于淋浴間內?！疚锲废尽?、 實驗結束，實驗物品應置于高壓滅菌器內滅菌；2、 高壓滅菌應遵循高壓滅菌器的操作規(guī)程。【人員退出】1、 實驗操作完成，實驗物品已完成高壓滅菌，方可認為實驗結束；2、 實驗結束后，人員應從進入路線退出，在緩沖室內洗手，更換工作服，
9、并用密閉的塑料袋負壓包裝；3、 進入淋浴室，沖淋全身，并換上清潔工作服?！鞠到y(tǒng)關閉】1、 關閉空調機；2、 關閉送風系統(tǒng)；3、 在確認生物安全柜內紫外線燈完成消毒后，關閉生物安全柜；4、 關閉排風機?！鞠到y(tǒng)消毒】1、 紫外線消毒定時于每天上午7：007：30、下午5：306：00，如需加班未能在此時段完成，應事先調節(jié)。2、 排風系統(tǒng)采用臭氧消毒，與紫外線燈同時進行?！緫薄?、 實驗室內如遇樣品濺入眼睛，請腳踏洗眼器開關沖洗眼睛；2、 如遇緊急停電，應急照明即自動啟動，人員從正常路線退出。3、 如遇意外事故，擊碎報警盒，按下按鈕報警。【特別注意】1、 人員進入實驗室內，紫外線燈應關閉，以免灼傷
10、皮膚與眼睛；2、 洗眼器使用完畢后，洗眼水應視危險性大小決定是否置于高壓滅菌器內滅菌。3.3 實驗操作規(guī)程331樣品的接收與開啟接收和打開樣品的人員應當了解樣品對身體健康的潛在危害，并接受過如何采用常規(guī)預防措施的培訓，尤其是處理破碎或泄漏的容器時更應如此。樣品要在生物安全柜內打開，并準備好消毒劑。332移液管和移液輔助器的使用1應使用移液輔助器，嚴禁用口吸取。2所有移液管應帶有棉塞以減少移液器具的污染。3不能向含有感染性物質的溶液中吹人氣體。4感染性物質不能夠用移液管反復吹吸混合。5不能將液體從移液管內用力吹出。6刻度對應(Marktomark)移液管不需要吹出最后一滴液體，因此最好使用這種移
11、液管。7污染的移液管應該完全浸泡在盛有適當消毒液的防碎容器中。移液管應當在消毒劑中浸泡18，24小時后再進行處理。8盛放廢棄移液管的容器應當放在生物安全柜內，而不能放在外面。9固定有皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液。應當用鈍頭導管替代針頭?？梢杂霉ぞ叽蜷_瓶塞后再用移液管取樣，從而避免使用注射器和針頭。10為了避免感染性物質從移液管中意外滴出而擴散，在工作臺面應當放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙，使用后將其高壓滅菌或按感染性廢物處理。333避免感染性物質的擴散1為了避免轉移物質灑落，微生物接種環(huán)的直徑應為23mm并完全封閉，手柄(shanks)的長度應小于6cm以減小振動?；蛘卟捎靡淮涡?/p>
12、滅菌棉簽。2使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)能夠避免在本生燈的明火上加熱所引起的感染性物質爆濺。最好使用不需要再進行消毒的一次性接種環(huán)。3為了避免產生氣泡和氣溶膠的擴散，不要在玻片上進行觸酶試驗，而應當采用試管、毛細管或蓋玻片法。4準備高壓滅菌和或處理的廢棄樣品和培養(yǎng)物應當放置在防漏的容器內，如實驗室廢物袋。5在每一階段工作結束后，必須采用適當?shù)南緞┣宄ぷ鲄^(qū)的污染。 334生物安全柜的使用1應參考國家標準和相關文獻，介紹生物安全柜的使用方法和局限性。并發(fā)給工作人員書面的操作步驟、安全或操作手冊。應明確注明當出現(xiàn)溢出、破損或不良操作時，安全柜就不再能保護操作者。2生物安全柜必須運行正常時才能
13、使用。3生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板。4安全柜內應盡量少放置器材或樣品，不能阻礙后部的氣流循環(huán)。樣品在放人安全柜內的工作區(qū)前需要清除表面污染。5安全柜內不能使用酒精燈，否則燃燒產生的熱量會干擾氣流并可能損壞過濾器。允許使用微型電加熱器，但最好使用一次性無菌接種環(huán)；6所有工作必須在工作臺面的中后部進行，并能夠通過觀察擋板看到。7盡量減少操作者身后的人員流動。8操作者不應反復移出和伸進手臂以免干擾氣流。9實驗記錄、移液管以及其他物品不能夠阻礙前面的空氣格柵，因為這將干擾氣體流動，引起物品的潛在污染和操作者的暴露。10工作完成后以及每天下班前，應使用適當?shù)南緞ι锇踩竦谋砻孢M行擦拭。
14、 11工作開始前和結束后，安全柜的風機應至少運行5分鐘。 335 避免感染性物質的注入1通過認真練習和仔細操作，可以避免破碎玻璃器皿的意外刺傷。盡可能用塑料制品代替玻璃制品。2皮下注射針頭、玻璃吸管以及破碎的玻璃均可能將感染性物質注入體內。3以下兩點可以減少針刺事故： (a)注射時特別小心(b)減少使用注射器和針頭；許多操作可用帶有鈍頭導管的注射器替代?？捎靡恍┖唵蔚难b置來打開瓶塞，然后使用吸管取樣。4不要重新給用過的針頭戴護套，一次性注射器用完后，不必將針頭從注射器上取下，應丟棄在防穿透的帶蓋容器中。5應當用塑料吸管代替玻璃吸管。 336血清的分離操作1只有經過嚴格培訓的人員才能進行這項工作
15、。2操作時應戴手套以及眼睛和黏膜的保護裝置。3規(guī)范的實驗操作技術可以避免或盡量減少噴濺和氣溶膠的產生。血液和血清應當小心吸取，而不能傾倒。嚴禁用口吸液。4移液管使用后應完全浸入次氯酸鹽或其他適當?shù)南疽褐?。移液管應在消毒液中浸泡至?8小時，然后再丟棄或滅菌清洗后重復使用。5帶有血凝塊等的廢棄樣品管，在加蓋后應當放在適當?shù)姆缆┤萜鲀雀邏簻缇突蚍贌?為了清洗噴濺和溢出的血樣，應當備有每天新鮮配制的次氯酸鹽溶液。 337離心機的操作使用1在使用實驗室離心機時，儀器良好的機械性能是保障微生物安全的前提條件。2應按照操作手冊來操作離心機。3離心機放置的高度應當使低于平均身高的工作人員也能夠看到離心
16、機腔體內部，以正確放置十字軸和離心管套。4離心管和盛放離心樣品的容器應當由厚壁玻璃制成，或最好為塑料制品，并且在使用前應檢查是否破損。5用于離心的試管和樣品容器應當始終牢固蓋緊(最好使用螺旋蓋)。6離心管套的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內進行。7離心管套和十字軸應按重量配對，并在裝載離心管后正確平衡。8操作指南中應給出液面距離心管邊緣需要留出的空間大小。9空離心管套應當用蒸餾水或乙醇(異丙醇，70)平衡。鹽溶液或次氯酸鹽溶液對金屬具有腐蝕作用，因此不能使用。10對于危險度3級和4級的微生物，必須使用可封口的離心離心管套(安全杯)。 11當使用固定角離心轉子時，必須小心不能將離心管裝得
17、過滿，否則會導致漏液。 12應當每天檢查離心機內轉子部位的腔壁是否被沾染或弄臟。如污染明顯，應重新評估離心操作規(guī)程。13應當每天檢查離心轉子和離心管套是否有腐蝕或細微裂痕。14每次使用后，要清除離心管套、轉子和離心機腔的污染。15使用后離心管套應當?shù)怪么娣攀蛊胶庖毫鞲伞?6當使用離心機時，可能噴射出可在空氣中傳播的感染性顆粒。如果將離心機放置在傳統(tǒng)的前開式的I級或級生物安全柜內，這些粒子由于運動過快而不能被安全柜內的氣流截留。而在級生物安全柜內封閉離心時，可以防止生成的氣溶膠廣泛擴散。但是，良好的離心操作技術和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護，以防止感染性氣溶膠和可擴散粒子的產生。3。38勻
18、漿器搖床攪拌器和超聲處理器操作的使用1實驗室不能使用家用(廚房)勻漿器，因為它們可能泄漏或釋放氣溶膠，必須配備并使用實驗室專用攪拌器和消化器(stomacher)。2. 蓋子、杯子或瓶子應當保持正常狀態(tài)，沒有裂縫或變形。蓋子應能封蓋嚴密，襯墊也應處于正常狀態(tài)。3在使用勻漿器、搖床和超聲處理器時，容器內會產生壓力，含有感染性物質的氣溶膠就可能從蓋子和容器間隙逸出。由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質并傷害操作者，使用塑料容器，尤其是聚四氟乙烯(po1ytetranuoroe - thylene， PTFE)容器。4使用勻漿器、搖床和超聲處理器時，必須用一個結實透明的塑料箱覆蓋設備，使用結束后消毒?？?/p>
19、能的話，這些儀器可在生物安全柜內覆蓋塑料罩進行操作。5操作結束后，在生物安全柜內打開容器。6使用超聲處理器的人員應進行聽力保護。3。39組織研磨器的操作使用1使用玻璃研磨器時應戴手套，并用一塊具有吸收性的軟物包住研磨器。塑料(聚四氟乙烯)研磨器更加安全。2操作和打開組織研磨器時應當在生物安全柜內進行。3310冰箱與冷柜的維護和使用1冰箱、低溫冷柜和干冰柜應當定期除霜和清潔，應清理出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時應戴厚橡膠手套并進行面部防護，清理后要對內表面進行消毒。2儲存在冰箱內的所有容器應當清楚地標明內裝物品的學名、儲存日期和儲存者的姓名。未標明的或廢舊物品應當高壓滅菌并丟棄
20、。3應當保存一份凍存物品的清單。4除非采用有效防爆措施，否則冰箱內不能放置易燃溶液并冰箱門上應明確標示3311裝有凍干感染性物質安瓿的開啟操作當打開裝有凍干物的安瓿時必須小心，因為其內部可能處于負壓，瞬間進入的空氣可能使一些物質擴散進入空氣。安瓿應該在生物安全柜內打開，建議按下列步驟打開安瓿：1首先清除安瓿外表面的污染。 2如果管內有棉花或纖維塞，可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡。3用一團酒精浸泡的棉花將安瓿包起來以保護雙手，然后手持安瓿從標記的銼痕處打開。4將頂部小心移去并按污染物處理。5如果塞子仍然在安瓿上，用消毒鑷子除去。6緩慢向安瓿中加入液體來重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。 331
21、感染性物質保存安瓿的存放 裝有感染性物質的安瓿不能浸入液氮中，因為這樣會造成有裂痕或密封不嚴的安瓿在取出時破碎或爆炸。如果需要低溫保存，安瓿應當儲存在液氮上面的氣相中。此外，感染性物質應儲存在低溫冰柜或干冰中。當從冷凍儲存器中取出安瓿時，實驗室工作人員應當進行眼睛和手的防護。以這種方式儲存的安瓿在取出時應對外表面進行消毒。3313 樣品的收集、標記和運輸1始終遵循常規(guī)預防措施；所有操作均要戴手套2應當由受過培訓的人員來采集病人或動物的血樣。3在靜脈抽血時，應當使用一次性的安全的抽真空設備取代傳統(tǒng)的針頭和注射器，因為這樣可以使血液直接采集到帶塞的運輸管和或培養(yǎng)管中。用完后自動廢棄針頭。4裝有樣品
22、的試管應置于適當容器中運至實驗室，在實驗室內部轉運也應這樣說明書應當分開放置在防水袋或信封內。 3314 顯微觀察的薄膜和涂片 用于顯微觀察的血液、唾液和糞便樣品在固定和染色時，并不必殺死涂片上的所有微生物和病毒。應當用鑷子拿取這些東西，恰當儲存，并經清除污染和或高壓滅菌后再丟棄。3315自動化儀器(超聲處理器、渦旋混合器)的操作1為了避免液滴和氣溶膠的擴散，這些儀器應采用封閉型的。2排出物應當收集在封閉的容器內進一步高壓滅菌和或廢棄。3在每一步完成后應根據(jù)操作指南對儀器進行消毒。3316 動物組織處理操作1組織樣品應當采用福爾馬林固定小塊樣品，如針頭活檢樣品，能夠在幾個小時內固定和消毒，但是
23、較大樣品則可能需要幾天時間。2應當避免冰凍切片。如果必須進行冰凍切片，應當罩住冰凍機，操作者要戴安全防護罩(面具)。清除污染時，儀器的溫度要升至20C。 3.4 加熱與高壓消毒操作規(guī)程341加熱消毒1 加熱是最常用的清除病原體污染的物理手段?！案伞睙釠]有腐蝕性，可用來處理實驗器材中許多可耐受160C或更高溫度24小時的物品。燃燒或焚化也是一種干熱方式。高壓滅菌的濕熱法則最為有效。2 煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體，但如果其他方法(化學殺菌、清除污染、高壓滅菌)不可行或沒有條件時，也可以作為一種最起碼的消毒措施3 滅菌后的物品必須小心操作并保存，以保證在使用之前不再被污染。 342高壓滅
24、菌1 高壓滅菌的技術指標壓力飽和蒸汽滅菌(高壓滅菌)是對實驗材料進行滅菌時最有效和最可靠的方法。對于大多數(shù)目的，下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果：134、2、3分鐘 126、10分鐘 121、15分鐘 115、25分鐘2 高壓滅菌器的裝載為了利于蒸汽的滲透和空氣排出，高壓滅菌物品應松散包裝放置在滅菌器內。要使蒸汽能夠作用到其內容物。通過高壓滅菌器內的蒸汽，由下而上置換空氣并經排氣孔排出。當所有的空氣排出后，關閉排氣孔的閥門，緩慢加熱使壓力和溫度上升到安全閥預置的水平。此時記為滅菌開始時間。滅菌結束后停止加熱，讓溫度下降到80以下再打開蓋子。4 高壓滅菌器使用注意事項下列規(guī)定能夠減
25、小操作壓力容器時會發(fā)生的危害：（1）高壓滅菌器的操作和日常維護應由受過良好培訓的人員負責。預防性的維護程序應包括：由有資質人員定期檢查滅菌器內部、門的密封性以及所有的儀表和控制器。（2）應使用飽和蒸汽，并且其中不含腐蝕性抑制劑或其他化學試劑，這些物質可能污染正在滅菌的物品。（3）所有要高壓的物品都應放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中；滅菌器內不能塞得過緊，否則蒸汽不能均勻作用于裝載物。（4）當滅菌器內部加壓時，互鎖安全裝置可以防止門被打開，而沒有互鎖裝置的高壓滅菌器，應當關閉主蒸汽閥并待溫度下降到80以下時再打開門。 （5）即使溫度下降到80以下，操作者打開門時也應當戴適當?shù)氖痔缀兔嬲?/p>
26、來進行防護。（6）在進行高壓滅菌效果的常規(guī)監(jiān)測中，生物指示 劑或熱電偶計應置于每件高壓滅菌物品的中心。最好在“最大”裝載時用熱偶計和記錄儀進行定時監(jiān)測，以確定滅菌程序是否恰當。（7）滅菌器的過濾器(如果有)應當每天拆下清洗。（8）應當注意保證高壓滅菌器的安全閥沒有被高壓滅菌物品中的紙等堵塞。 3.5 生物安全實驗室消毒與滅活操作規(guī)程 消毒和滅菌的基本常識對于實驗室生物安全是至關重要的。生物安全中關于清除污染的特殊要求要根據(jù)實驗工作的類型和所操作感染性物質的特性來決定。因此，有必要利用已知的普通信息來確立更具體的和標準化的程序，以滿足某些特殊實驗室中各種不同生物危害水平的需求。35。1局部環(huán)境污
27、染的清除操作需要聯(lián)合應用液體和氣體消毒劑來清除實驗室空間、用具和設備的污染。清除表面污染時可以使用次氯酸鈉(Na0C1)溶液；含有1有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設備，但是當處理高危環(huán)境時，建議使用高濃度(5gL)溶液。用于清除環(huán)境污染時，含有3過氧化氫的溶液也可以作為漂白劑的代用品?？梢酝ㄟ^加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產生的甲醛蒸氣熏蒸來清除房間和儀器的污染。產生甲醛蒸氣。前，房間的所有開口(如門窗等)都應用密封帶或類似物加以密封。熏蒸應當在室溫不低于21且相對濕度70 的條件下進行清除污染時氣體需要與物體表面至少接觸8小時。熏蒸后，該區(qū)域必須徹底通風后才能允許人員進入。在通風之前需要進入房
28、間時，必須戴適當?shù)姆蓝久婢摺？?以采用氣態(tài)的碳酸氫銨來中和甲醛。已有報道，可采用過氧化氫溶液的氣霧熏蒸污染的空間，但對此還需要進一步的研究。 注：甲醛是一種危險和有刺激性的氣體，并懷疑有致癌性。應使用具有供氣系統(tǒng)的全面罩式防毒面具。操作時應當采用“雙人”制。 35。2 室內表面紫外線消毒的日常操作3.6 工作服臭氧消毒操作規(guī)程 3.7 排風系統(tǒng)臭氧消毒操作規(guī)程 3.8 濾器更換操作規(guī)程四、 進出管理制度4.1 實驗室準入制度a) 非實驗有關人員不得進入實驗室； b）實驗室工作人員進入其崗位之前必須經過實驗室主任的批準；外來合作者、進修和學習人員在進入實驗室及其崗位之前必須經過實驗室主任的批準。
29、c）在實驗室內不得進食和飲水，或者進行其他與實驗無關的活動；4.2 實驗人員的進出管理4.3 實驗物品的進出管理a) 與實驗無關的物品不得帶入實驗室；b) 進入實驗室的實驗用品保持潔凈。4.4 實驗廢水的處置管理a) 核心區(qū)的實驗廢水經高壓消毒后才能轉移出實驗室b) 涉及生物安全的實驗廢水經有效消毒后才排出實驗室4.5 實驗廢物的處置管理a) 所有棄置的實驗室生物樣本、培養(yǎng)物和被污染的廢棄物在從實驗室中取走之前,應使其達到生物學安全。生物學安全可通過高壓消毒處理或其他被承認的技術達到。 b) 實驗室核心區(qū)廢棄物應高壓消毒后移出出實驗室。c) 有害氣體、氣溶膠、污水、廢液應經適當?shù)臒o害化處理后排
30、放，應符合國家相關的要求。d) 動物尸體和組織的處置和焚化應符合國家相關的要求4.6 實驗工作服的處置管理實驗室內，任何接觸了病原微生物的工作服都必須由專職清潔人員消毒清洗；進入核心間工作使用后的工作服存放于指定的位置，由專職的清潔人員打包后消毒清洗；在輔助功能室工作使用的工作服定期由專職清潔人員清洗。五、 防護措施5.1 個人防護a) 可能產生致病微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作均應在生物安全柜(II級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設備中進行，并使用個體防護設備。b) 處理高濃度或大容量感染性材料均必須在生物安全柜(II級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設備中進行，并使用個體防護設備。5.1.1
31、防護服在實驗室中應穿著工作服或罩衫等防護服。離開實驗室時，防護服必須脫下并留在實驗室內。不得穿著外出，更不能攜帶回家。用過的工作服應先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。5.1.2 手套當手可能接觸感染材料、污染的表面或設備時應戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室。工作完全結束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。5.1.3 鞋 進入實驗室應換實驗室內的鞋，進入實驗室潔凈室和核心區(qū)應再次換鞋5.1.4 面部與身體的防護處理樣本的過程中,如可產生含生物因子的氣溶膠,應在適當?shù)纳锇踩裰胁僮鳎划斘⑸锏牟僮鞑豢赡茉谏锇踩駜冗M行而必須采取外部操
32、作時，為防止感染性材料濺出或霧化危害，必須使用面部保護裝置(護目鏡、面罩、個體呼吸保護用品或其他防濺出保護設備)。5.2 設備防護六、 管理措施6.1 管理崗位與責任實驗室管理層對所有員工和實驗室來訪者的安全負責。最終責任由實驗室負責人或指定的與其地位相當者承擔。實驗室安全負責人應有權阻止不安全的活動。如設有安全委員會,實驗室安全負責人如果不是該委員會的主任，至少應是該委員會有職權的成員。實驗室負責人應制定規(guī)定和程序確保實驗室設施、設備、個人防護設備、材料等符合國家有關安全要求，定期檢查、維護、更新,確保不降低其設計性能。6.2 實驗人員的健康管理所有人員應有文件證明其對工作及實驗室全部設施中
33、潛在的風險受過培訓。應要求所有人員根據(jù)可能接觸的生物接受免疫以預防感染。應保存免疫記錄。禁止高度易感人群（如孕婦或免疫損傷人員）在高危險實驗室中工作6.3 安全計劃6.3.1 制定實驗室主任（對實驗室直接負責的人員）負責制訂和采用生物安全管理計劃以及安全或操作手冊。6.3.2 審核每年應(由受過適當培訓的人員)對安全計劃至少審核和檢查一次,包括但不限于下列要素:a) 安全和健康規(guī)定;b) 書面的工作程序包括安全工作行為;c) 教育及培訓;d) 對工作人員的監(jiān)督;e) 常規(guī)檢查;f) 危險材料和物質;g) 健康監(jiān)護;h) 急救服務及設備;i) 事故及病情調查j) 健康和安全委員會評審;k) 記錄
34、及統(tǒng)計:l) 確保落實審核中提出需要采取的全部措施的計劃。m) 為每個領域特制的檢查表可有效地協(xié)助審核工作。6.3.3 檢查實驗室管理層有責任確保安全檢查的執(zhí)行。每年應對工作場所至少檢查一次,以保證:a) 應急裝備、警報體系和撤離程序功能及狀態(tài)正常;b) 用于危險物質漏出控制的程序和物品狀態(tài),包括緊急淋浴;c) 對可燃易燃性、可傳染性、放射性和有毒物質的存放進行適當?shù)姆雷o和控制;d) 去污染和廢棄物處理程序的狀態(tài);e) 實驗室設施、設備、人員的狀態(tài)。6.3.4 記錄a) 職業(yè)性疾病、傷害和不利事件記錄 應有機制記錄并報告職業(yè)性疾病、傷害、不利事件或事故以及所采取的相應行動,同時應尊重個人機密。
35、應保持人員培訓記錄。應包括對每一員工的安全指導和安全預備狀態(tài)的年度更新資料。b) 危險標識 應系統(tǒng)而清晰地標識出危險區(qū),且適用于相關的危險。在某些情況下,宜同時使用標記和物質屏障標識出危險區(qū)。通向工作區(qū)的所有進出口都應標明存在其中的危險。6.4 應急與救治6.4.1 應急 在實驗室發(fā)生緊急事故可啟動實驗室內的報警裝置。6.4.2 救治 急救是指在事故發(fā)生的時間和地點熟練運用醫(yī)學處理原則。急救裝備至少應包括一個急救箱，急救人員所需要的防護服和安全設施以及洗眼設備。急救箱急救箱從結構上應能防塵防濕。急救箱應置于顯著位置并易于識別。根據(jù)國際慣例，急救箱用綠色背景下的白十字來加以標識。急救箱內應裝有下
36、列物品：a) 一般性指南的說明書b) 單獨包裝的不同尺寸無菌包扎敷料c) 帶有繃帶的無菌眼墊d) 三角繃帶e) 無菌創(chuàng)傷敷料f) 安全別針g) 可選擇的無菌的非醫(yī)用的創(chuàng)傷敷料七、 培 訓71 培訓內容實驗室負責人應保證對實驗室所有相關人員包括運輸和清潔員工等工作人員安全培訓計劃的實施。培訓應強調安全工作行為。一項全面的培訓計劃始于書面的規(guī)劃,應包括對新員工的指導以及對有經驗員工的周期性再培訓。應要求員工在某一領域工作前閱讀適用的安全手冊。員工應書面確認其已接受造當?shù)呐嘤?閱讀并理解了安全手冊,包括其執(zhí)行日期。一項安全培訓計劃至少要有消防和預備狀態(tài)、化學和放射安全、生物危險和傳染預防。課程應按照
37、員工的崗位制定,應適當考慮懷孕、免疫缺陷和身體殘障情況。應有一套系統(tǒng)評估每個員工對提供給其信息的理解力。實驗室應保證全體人員受過急救培訓|。應提供物品和程序以減少涉及潛在傳染性材料、化學品或有害物質的不利作用和事件的發(fā)生。人員培訓的內容應始終包括如何采用安全的方法來進行下列所有實驗室工作人員都會經常遇到的高危操作，包括：a) 吸入危險（氣溶膠產物），如使用接種環(huán)、劃線接種瓊脂平板、移液、制作涂片、打開培養(yǎng)物、采集血液血清標本、離心等b) 食入危險，如處理標本、涂片以及培養(yǎng)物c) 在使用注射器和針頭時刺傷皮膚的危險d) 處理動物時被咬傷、抓傷e) 處理血液以及其他有潛在病理學危害的材料f) 感染
38、性材料的清除污染和處理。72 培訓計劃序號培訓人員 培訓內容培訓方式培訓日期指導教師備注1實驗操作人員安全手冊講座1天，每年2月8日2實驗操作人員操作規(guī)程現(xiàn)場示范教學1天，每年4月6日3實驗操作人員消毒規(guī)程現(xiàn)場示范教學1天，每年6月18日4實驗操作人員應急及救治現(xiàn)場示范教學1天，每年8月20日5全局人員 實驗室安全管理觀看錄象VCD半天，每年10月16日6全局人員安全常識與行為講座、現(xiàn)場示范教學半天，每年12月15日八、 日常監(jiān)測8.1 健康體檢與醫(yī)療監(jiān)測實驗室主任應確保實驗室全體工作人員接受適當?shù)慕】当O(jiān)測。監(jiān)測的目的是監(jiān)控職業(yè)獲得性疾病。為達到這些目的，應進行如下工作：促進實驗室感染的早期檢
39、測；禁止高度易感人群（如孕婦或免疫損傷人員）在高危險實驗室中工作；提供有效的個體防護裝備和方法。 根據(jù)實驗室的工作內容及可能存在的生物學危險，本實驗室工作人員的健康體檢與監(jiān)測計劃見下表。 表 健康體檢與監(jiān)測計劃序號監(jiān)測項目監(jiān)測周期參加人員委托醫(yī)院備注1血常規(guī)1年所有工作人員北海市人民醫(yī)院2尿常規(guī)1年所有工作人員北海市人民醫(yī)院3乙型肝炎1年所有工作人員北海市人民醫(yī)院4瘋牛病毒1年北海市人民醫(yī)院5HIV病毒1年北海市人民醫(yī)院61年北海市人民醫(yī)院71年北海市人民醫(yī)院81年北海市人民醫(yī)院91年北海市人民醫(yī)院8.2 生物安全柜監(jiān)測生物安全柜每年進行一次性能監(jiān)測，以維持出廠技術標準。序號監(jiān)測指標 正常范圍
40、監(jiān)測周期委托檢測單位備注1潔凈度 100級（）1年廣西CDC2送風速度0.45m/s1年廣西CDC3柜內靜壓差-20Pa1年廣西CDC41年廣西CDC51年廣西CDC61年廣西CDC71年廣西CDC81年廣西CDC91年廣西CDC101年廣西CDC8.3 潔凈通風系統(tǒng)的監(jiān)測 表 潔凈通風系統(tǒng)的監(jiān)測計劃序號監(jiān)測指標 正常范圍監(jiān)測周期委托檢測單位備注1潔凈度 10000級1年廣西CDC2送風速度0.25m/s1年廣西CDC3室內靜壓差-10Pa1年廣西CDC8.4 濾器的檢測九、 實驗室安全行為指南91 洗手1 實驗室工作人員在實際或可能接觸了血液、體液或其他污染材料后，即使戴有手套也應立即洗手。
41、2 摘除手套后、使用衛(wèi)生間前后、離開實驗室前、進食或吸煙前應例行洗手。3 實驗室應為過敏或對某些消毒防腐劑中的特殊化合物有其他反應的工作人員提供洗手用的替代品。 92生物性材料接觸與處理 1 處理、檢驗和處置生物源性材料的規(guī)定和程序應利用良好微生物行為標準。2 工作行為應可降低污染的風險。執(zhí)行污染區(qū)內的工作行為應可預防個人暴露。3 如果樣本在收到時有損壞或泄漏，應由穿著個人防護裝備之受過培訓的人員開啟樣本以防止漏出或產生氣溶膠。應在生物安全柜內開啟此類容器。如果污染過量或認為樣本有不可接受的損壞，則應將樣本安全地廢棄而勿開啟。93 實驗室常規(guī)安全行為1、禁止口吸移液 2、實驗室工作人員安全操作
42、尖利器具及裝置，禁止用手對任何利器剪、彎、折斷、重新戴套或從注射器上移去針頭，針頭、玻璃、一次性手術刀在內的利器應在使用后立即放 在耐扎容器中。尖利物容器應在內容物達到三分之二前置換5、所有樣本、培養(yǎng)物和廢棄物應被假定含有傳染性生物因子均應以安全方式處理和處置6、所有有潛在傳染性或毒性的質量控制和參考物質在存放、處理和使用時應按未知風險的樣本對待。 7、實驗室工作行為的設計和執(zhí)行應能減少人員接觸化學或生物源性有害氣溶膠8、應在有蓋安全罩內離心9、所有進行渦流攪拌的樣本應置于有蓋容器內 10、在能產生氣溶膠的大型分析設備上應使用局部通風防護 11、在操作小型儀器時使用定制的排氣罩。12、在可能出現(xiàn)有害氣體和生物源性氣溶膠的地方應采取局部排風措施13、飼養(yǎng)、操作動物應在適當?shù)膭游镌葱詺馊苣z防護設備中進行，工作人員應同時使用適當?shù)膫€人防護設備15、有害氣溶膠不得直接排放 十、自我檢查與評價
BSL2實驗室生物安全管理手冊.doc
