高華2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容.ppt

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1、2010年版中國(guó)藥典 生物檢定部分修訂內(nèi)容,,高華 中國(guó)藥品生物制品檢定所,主要內(nèi)容,一、藥品生物檢定概況 二、藥品生物檢定增修訂情況,藥品生物檢定概況,定義 應(yīng)用范圍 作用,藥品生物檢定--定義,生物檢定法是利用生物體包括整體、離體組織、器官、細(xì)胞和微生物等評(píng)估藥物生物活性的一種方法。它以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在一定條件下比較供試品和相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌匪a(chǎn)生的特定反應(yīng)，通過(guò)等反應(yīng)劑量間比例的運(yùn)算或限值劑量引起的生物反應(yīng)程度，從而測(cè)定供試品的效價(jià)、生物活性或雜質(zhì)引起的毒性。,藥品生物檢定,體內(nèi)測(cè)定（in vivo）--以整體動(dòng)物生物體 體外測(cè)定（in bi

2、tro）--以離體器官、組織、微生物、酶和細(xì)胞（原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞）為生物體，利用這些生物體評(píng)價(jià)藥品的生物活性（藥效、活力或毒力）,應(yīng)用范圍,藥品（生化藥品、中藥） 生物制品（疫苗、血液制品） 安全性檢查,應(yīng)用范圍,對(duì)從動(dòng)物臟器、微生物或體液等提取的，有效成分不夠確切，多組分、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化方法不能有效鑒定并具有生物活性的天然生化藥物、中藥，以及有些生物技術(shù)藥物，由于空間結(jié)構(gòu)的細(xì)微變化，影響藥物的活性中心位點(diǎn)，目前質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中仍應(yīng)用生物檢定法評(píng)估藥物的生物活性。 如生化藥物：一般是從生物體分離、純化所得 如肝素鈉、魚(yú)精蛋白、促腎上腺皮質(zhì)激素。 中藥：洋地黃制劑、人工麝香、水蛭等。,藥品生物檢定作

3、用,工藝與方法驗(yàn)證 效價(jià)與活性 鑒別,作用工藝及方法驗(yàn)證,對(duì)于新生產(chǎn)工藝、新檢測(cè)方法的改進(jìn)、變更，往往需要生物檢定來(lái)驗(yàn)證核對(duì)。中、外藥典在重組人生長(zhǎng)激素（rhGH）重組人胰高血糖素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定，在生產(chǎn)研發(fā)階段，“生產(chǎn)過(guò)程中的產(chǎn)品必須用體內(nèi)生物檢定方法測(cè)定其生物效價(jià)”，直到生產(chǎn)穩(wěn)定為止。,作用效價(jià)與活性,當(dāng)采用理化方法測(cè)定如HPLC替代胰島素等原有的生物效價(jià)測(cè)定法時(shí)，仍需作大量的方法比對(duì)、相關(guān)性研究等工作。,作用效價(jià)與活性,定量的測(cè)定方法 半定量的測(cè)定方法,定量的測(cè)定方法,效價(jià)（potency）測(cè)定是生物檢定的主要內(nèi)容，它是以藥理為基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，利用生物體在一定

4、條件下比較供試品與相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌匪a(chǎn)生的特定反應(yīng)（可測(cè)量、量化的生理指標(biāo)或生物藥效或毒力）的一種定量的方法，因而被稱為定量藥理學(xué)。,定量的測(cè)定方法,胰島素 縮宮素 肝素 卵泡刺激素 黃體生成素,升壓素 硫酸魚(yú)精蛋白 洋地黃 生長(zhǎng)激素 降鈣素,半定量的測(cè)定方法（活性檢查）,當(dāng)理化測(cè)定占主導(dǎo)地位，效價(jià)測(cè)定一般來(lái)講可以不必精確，可歸于活性檢查項(xiàng)，采用半定量方法，設(shè)定限值，不需精密生物統(tǒng)計(jì)，盡可能減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量或其他生物體用量；甚至只用于定性的鑒別。例如：新藥重組人胰高血糖素類多肽是治療糖尿病用藥，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中即采用該法（限值為小鼠血糖降低大于20%）進(jìn)行活性檢查。,鑒別,隨著對(duì)動(dòng)物保護(hù)意識(shí)提

5、高，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物減少、替代、優(yōu)化（3R：Reduction、Replacement、Refinement）的實(shí)施，對(duì)能用理化測(cè)定的藥品，生物效價(jià)測(cè)定逐漸降為鑒別項(xiàng)的定性或半定量測(cè)定。 如USP升壓素大鼠血壓升高法用于鑒別。2010年中國(guó)藥典縮宮素注射液將子宮收縮法放入鑒別項(xiàng)。,二、附錄生物檢定方法增修訂情況,,,附錄生物檢定方法增修訂情況 附錄增修訂主要特點(diǎn) 增修訂主要內(nèi)容,附錄生物檢定方法增修訂情況,附錄增修訂主要特點(diǎn),中藥質(zhì)量控制評(píng)價(jià)模式轉(zhuǎn)變 充分驗(yàn)證 完善提高 充分體現(xiàn)了“3R”原則,附錄增修訂主要特點(diǎn),中藥質(zhì)量控制評(píng)價(jià)模式轉(zhuǎn)變 生物活性引入實(shí)現(xiàn)了中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)由單一指標(biāo)成分定性定量向活性有

6、效成分及生物測(cè)定的綜合檢測(cè)。,附錄增修訂主要特點(diǎn),充分驗(yàn)證： 遵循科學(xué)性、合理性、可操作性，新建或新設(shè)立項(xiàng)目必須經(jīng)不同實(shí)驗(yàn)室的共同驗(yàn)證或適用性研究，如注射劑安全性指導(dǎo)原則對(duì)方法學(xué)的適用性研究；中藥生物活性指導(dǎo)原則要求對(duì)方法的專屬性、準(zhǔn)確性、精密度（重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性）、適用性、科學(xué)性進(jìn)行了研究。,附錄增修訂主要特點(diǎn),完善提高 對(duì)2010藥典一、二部檢查法和指導(dǎo)原則進(jìn)行修訂和改進(jìn)，對(duì)影響結(jié)果準(zhǔn)確性的實(shí)驗(yàn)條件提出了要求，如熱原檢查法、溶血與凝聚、降壓物質(zhì)檢查法、過(guò)敏試驗(yàn)。,附錄增修訂主要特點(diǎn),體現(xiàn)了“3R”原則 如熱原檢查法取消家兔使用次數(shù)和體重上限規(guī)定。 中藥生物活性指導(dǎo)原則中對(duì)動(dòng)物的使

7、用等。,增修訂主要內(nèi)容,一、熱原檢查法 二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法 三、異常毒性檢查法 四、溶血與凝聚檢查法 五、過(guò)敏反應(yīng)檢查法 六、降壓物質(zhì)檢查法 七、生物檢定統(tǒng)計(jì)法 八、中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 九、化藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 十、中藥生物活性測(cè)定指導(dǎo)原則,熱原檢查法,定義 2010 版與2005版區(qū)別 修訂背景 實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測(cè)試 熱原檢查適用性研究,熱原檢查法,定義：本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。,2010 版與2005版區(qū)別,*三部仍規(guī)定，對(duì)血液制品、抗毒素和其他同一過(guò)敏原的供試

8、品在5天內(nèi)可重復(fù)使用1次。,修訂背景,、熱原實(shí)驗(yàn)是一個(gè)整體的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，易受許多因素的影響。動(dòng)物自身的行為、生理、外部環(huán)境以及一些實(shí)驗(yàn)過(guò)程等都可影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。 、對(duì)家兔體重取消了上限3.0kg，同時(shí)取消家兔使用次數(shù)不超過(guò)次的規(guī)定。,修訂背景,、增加了升溫達(dá)0.6 的家兔應(yīng)休息2 周以上新要求。 4、實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求更加嚴(yán)格：實(shí)驗(yàn)室與飼養(yǎng)室溫度相差由不大于 5 改為3 5、強(qiáng)調(diào)同組各家兔間溫差不大于1 ，對(duì)家兔固定方式：寬松。 6、判定標(biāo)準(zhǔn)更加嚴(yán)格：初試的3只家兔體溫升高總和低于 1.4 改為低于1.3 ,實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測(cè)試,每年不定期隨機(jī)抽取體重和使用次數(shù)不同的實(shí)驗(yàn)用兔，按熱原檢查法要求注射EU

9、/kg或10EU/kg內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)得到不符合規(guī)定的結(jié)果。,熱原檢查適用性研究,新品種建立熱原檢查標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，建議進(jìn)行適用性研究，在不影響家兔正常生理的前提下，按人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的倍設(shè)定限值。（化學(xué)藥品一般為倍，中藥為倍）。,熱原檢查適用性研究,適用性試驗(yàn)時(shí)設(shè)三組：限值劑量的供試品組 10EU/kg內(nèi)毒素組含10EU/kg內(nèi)毒素的供試品組。 適用性試驗(yàn)判定： 組符合規(guī)定， 、組不符合規(guī)定表明該品種可建立熱原檢查項(xiàng)。,二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法,定義 2010版與2005版區(qū)別 修訂背景 注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則,二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法,定義：本法系利用鱟試劑來(lái)檢

10、測(cè)或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。,2010版與2005版區(qū)別,,,修訂背景,1、細(xì)菌內(nèi)毒素與檢查用水除了強(qiáng)調(diào)內(nèi)毒素含量外，還強(qiáng)調(diào)應(yīng)對(duì)內(nèi)毒素試驗(yàn)無(wú)干擾作用。 2、強(qiáng)調(diào)用干熱滅菌法（ 250、30分鐘以上）去除內(nèi)毒素與熱原法同步。 3、根據(jù)某些藥（如抗腫瘤藥）用體表面積計(jì)算給藥量的需要，增加了按體表面積給藥時(shí)的計(jì)算方法。,注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則,本原則依據(jù)2010年版藥典制訂，適用于注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)目時(shí)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)及研究。,需建立內(nèi)毒素檢查項(xiàng)目的品種,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有家兔熱原檢查法需轉(zhuǎn)換為細(xì)菌

11、內(nèi)毒素檢查方法的品種。 用于注射給藥，但未有熱原質(zhì)量控制的品種。 注射用新藥需建立熱原質(zhì)量控制的品種。 用于靜脈給藥的原輔料,建立方法時(shí)對(duì)鱟試劑及樣品的要求,同時(shí)使用兩個(gè)鱟試劑廠家的鱟試劑 每個(gè)品種至少三批樣品（上市品種應(yīng)檢測(cè)兩個(gè)以上生產(chǎn)廠家；新藥需檢測(cè)連續(xù)生產(chǎn)的樣品）。,確定內(nèi)毒素限值,一般按公式L=K/M計(jì)算。M為人每公斤每小時(shí)臨床最大用藥劑量，依據(jù)藥品使用說(shuō)明書(shū)，臨床用藥須知確定。 兒童用藥如大于成人，以兒童為準(zhǔn)。 為保障安全用藥，對(duì)于抗感染、抗腫瘤、治療心血管疾病等重癥用的藥品、需聯(lián)合用藥的藥品，可根據(jù)計(jì)算值適當(dāng)調(diào)整，嚴(yán)格至計(jì)算限值的1/2或1/3。 對(duì)于體積在100ml以上（包括10

12、0ml）的復(fù)方靜脈輸液類品種，內(nèi)毒素限值一般按0.5EU/ml計(jì)。其他單方靜脈輸液品種除另有規(guī)定外也可按用藥劑量計(jì)算，以EU/mg或EU/U表示。 對(duì)于美國(guó)、歐洲或日本藥典已收載的，并已建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的品種可參考國(guó)外藥典規(guī)定的限值，與按公式計(jì)算出的數(shù)值比較，以嚴(yán)格者為該品種的限值。如果使用的是國(guó)外藥典的限值，應(yīng)以最新版本藥典為準(zhǔn)。,干擾實(shí)驗(yàn),建議使用較低靈敏度鱟試劑 (0.5EU/ml或0.25EU/ml),以避免供試品中內(nèi)毒素的陽(yáng)性影響。,三. 異常毒性檢查法,定義 2010版與2005版區(qū)別,三. 異常毒性檢查法,定義：本法系給予小鼠一定劑量的供試品溶液，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察小鼠出現(xiàn)的死

13、亡情況，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。,三. 異常毒性檢查法,異常毒性有別于藥物本身所具有的毒性特征，是指由生產(chǎn)過(guò)程中引入或其他原因所導(dǎo)致的毒性反應(yīng)。 供試品如不合格，表明藥品中含有超過(guò)正常產(chǎn)品毒性的毒性雜質(zhì)，臨床用藥將可能增加急性不良反應(yīng)。,,四. 溶血與凝聚檢查法,定義 2010版與2005版區(qū)別 修訂背景,四. 溶血與凝聚檢查法,定義：本法系將一定量供試品與2%的家兔紅細(xì)胞混懸液混合，溫育一定時(shí)間后，觀察其對(duì)紅細(xì)胞狀態(tài)是否產(chǎn)生影響的一種方法。,,,修訂背景,1、考慮一般家兔容易得到，故將羊血?jiǎng)h去；采用兔紅細(xì)胞懸液； 2、2010版用輕輕倒轉(zhuǎn)3次來(lái)觀察凝聚，規(guī)范了操作； 3、在顯微鏡

14、下見(jiàn)紅細(xì)胞凝集為凝聚，簡(jiǎn)單明確； 4、同時(shí)觀察1、2號(hào)兩個(gè)平行管與5號(hào)管的對(duì)比，來(lái)判定是否溶血； 5、考慮藥物與一次性試管（高分子材料）的相容性，強(qiáng)調(diào)用玻璃試管。,五. 過(guò)敏反應(yīng)檢查法,定義 2010版與2005版區(qū)別 修訂背景,五. 過(guò)敏反應(yīng)檢查法,定義：本法系將一定量的供試品溶液注入豚鼠體內(nèi)，間隔一定時(shí)間后靜脈注射供試品溶液進(jìn)行激發(fā)，觀察動(dòng)物出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)的情況，以判定供試品是否引起動(dòng)物全身過(guò)敏反應(yīng)。,2010 版與2005版區(qū)別,,修訂背景,1、適宜的途徑考慮對(duì)腹腔有刺激性的藥物不適宜腹腔注射； 2、強(qiáng)調(diào)同一只動(dòng)物上； 3、增加部分嚴(yán)重的反應(yīng)指標(biāo)。,六. 降壓物質(zhì)檢查法,定義 2010 版

15、與2005版區(qū)別 修訂背景,六. 降壓物質(zhì)檢查法,定義：本法系比較組胺對(duì)照品（S）與供試品（T）引起麻醉貓血壓下降的程度，以判定供試品中所含降壓物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定,2010 版與2005版區(qū)別,2010 版與2005版區(qū)別,修訂背景,1、強(qiáng)調(diào)對(duì)照品的降壓活性要符合要求 2、強(qiáng)調(diào)貓的正常血壓范圍為13.320.0kPa 3、強(qiáng)調(diào)每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行，而不強(qiáng)調(diào)要35分鐘之內(nèi)。,七. 生物檢定統(tǒng)計(jì)法,定義：生物檢定統(tǒng)計(jì)法主要敘述的是應(yīng)用生物檢定時(shí)必須注意的基本原則、一般要求、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及統(tǒng)計(jì)方法。,2010 版與2005版區(qū)別,,,,2010 版與2005版區(qū)別,12、對(duì)結(jié)果不均

16、一時(shí)進(jìn)行了舉例：如胰島素測(cè)定結(jié)果不均一時(shí)計(jì)算表及計(jì)算方法,修訂背景,1、生物檢定法的概念 2、可信限率的定義及公式 3、（42）、（43）公式修訂 4、Sm2 (各次實(shí)驗(yàn)差方)及W(校正權(quán)重)的定義 5、合并計(jì)算時(shí)lgPT,八. 中藥注射劑安全性檢查法 應(yīng)用指導(dǎo)原則,,八. 中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則,中藥安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定 安全性檢查方法和檢查限值確定,八. 中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則,本指導(dǎo)原則為中藥注射劑臨床使用的安全性和制劑質(zhì)量可控性而定。 中藥注射劑安全性檢查包括：熱原（或細(xì)菌內(nèi)毒素）、異常毒性、降壓物質(zhì)、過(guò)敏反應(yīng)物質(zhì)、溶血與凝聚等項(xiàng)。 根據(jù)處方、工藝、用法及用

17、量等設(shè)定相應(yīng)檢查項(xiàng)目 進(jìn)行適用性研究。,,（一）中藥安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,靜脈用注射劑：應(yīng)設(shè)熱原（或細(xì)菌內(nèi)毒素）、異常毒性、過(guò)敏反應(yīng)、溶血與凝聚等安全性檢查項(xiàng)，必要時(shí)考慮降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。（功能主治中具有與升壓相關(guān)內(nèi)容的注射劑除外） 中藥注射劑中致熱成分復(fù)雜，可能干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，一般首選熱原檢查項(xiàng)，如該藥本身具有清熱的藥理作用或?qū)彝糜卸拘苑磻?yīng)，也可選擇細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)。 肌內(nèi)注射用注射劑： 應(yīng)設(shè)異常毒性、過(guò)敏反應(yīng)等檢查項(xiàng)。,（二）安全性檢查方法和檢查限值確定,方法適用性（設(shè)定限值前研究） 確定限值 應(yīng)進(jìn)行三批以上供試品的檢查驗(yàn)證,1.熱原-細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,方法適用性（設(shè)定限值前研究）

18、熱原檢查應(yīng)做適用性研究，求得對(duì)家兔無(wú)毒性反應(yīng)、不影響正常體溫和無(wú)解熱作用的劑量。 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查應(yīng)進(jìn)行干擾試驗(yàn)，求得 最大無(wú)干擾濃度。 檢查方法 參照熱原檢查法（附錄 A）或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（附錄 D）。 品種項(xiàng)下可以增加稀釋濃度、調(diào)節(jié)pH和滲透壓或緩慢注射等排除干擾或影響的特殊規(guī)定。,設(shè)定限值--熱原檢查,限值根據(jù)臨床一小時(shí)內(nèi)最大用藥劑量計(jì)算。 熱原檢查限值可參照臨床劑量計(jì)算，一般為人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的35倍， 供試品注射體積每公斤體重一般不少于0.5mL，不超過(guò)10mL。 限值劑量應(yīng)不影響正常體溫。,設(shè)定限值--內(nèi)毒素檢查,限值根據(jù)臨床一小時(shí)內(nèi)最大用藥劑量計(jì)算 內(nèi)毒素檢查限

19、值按規(guī)定要求計(jì)算， 由于藥物和適應(yīng)癥 (如抗感染、抗腫瘤、心血管藥等急重病癥用藥、兒童老人用藥、復(fù)合用藥、大輸液等) 的不同，限值可適當(dāng)嚴(yán)格，至計(jì)算值的1/31/2，以保證安全用藥。 細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定濃度應(yīng)無(wú)干擾反應(yīng)。,2.異常毒性檢查,方法適用性（設(shè)定限值前研究） 可參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，并經(jīng)單次靜脈注射給藥毒性試驗(yàn)確定該注射劑的急性毒性數(shù)據(jù)（LD50或LD1及其可信限）。 可由多個(gè)實(shí)驗(yàn)室或多種來(lái)源動(dòng)物試驗(yàn)求得LD50和LD1數(shù)據(jù)。 注射速度0.1ml/秒，觀察時(shí)間為72小時(shí)。 如其它給藥途徑或延長(zhǎng)觀察時(shí)間應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)途徑或相應(yīng)觀察時(shí)間的急性毒性試驗(yàn)。 檢查方法 參照異常毒性檢查法（附錄 E ）。 對(duì)

20、動(dòng)物、給藥途徑和給藥次數(shù) 、觀察指標(biāo)和時(shí)間等，方法和限值有特殊要求時(shí)，可在品種項(xiàng)下另作規(guī)定。,設(shè)定限值,限值應(yīng)低于該注射劑本身毒性的最低致死劑量 考慮到實(shí)驗(yàn)室間差異、動(dòng)物反應(yīng)差異和制劑的差異，建議 限值至少應(yīng)小于LD1可信限下限的1/3(建議采用1/31/6)， 如難以計(jì)算最低致死量，可采用LD50可信限下限的1/4 (建議采用1/41/8)。 如半數(shù)致死量與臨床體重劑量之比小于20，可采用LD50可信限下限的1/4或LD1可信限下限的1/3。 靜脈注射最大劑量0.8ml/20g仍未見(jiàn)毒性反應(yīng)或死亡，可以此作為檢查限值。,3.降壓物質(zhì)檢查,,方法適用性（設(shè)定限值前研究） 供試品按一定注射速度

21、靜脈注射不同劑量，觀察供試品對(duì)貓血壓反應(yīng)的劑量反應(yīng)關(guān)系。 供試品與對(duì)照品注射體積應(yīng)相同，通常為0.21ml/kg，求得供試品降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定的最大劑量（最大無(wú)降壓反應(yīng)劑量）。 檢查方法 參照降壓物質(zhì)檢查法（附錄 F）。,設(shè)定限值,臨床單次用藥劑量的1/55倍作為降壓反應(yīng)物質(zhì)檢查劑量限值，急重病癥用藥盡可能采用高限。 特殊情況下，如供試品有一定降壓作用，則可按最大無(wú)降壓反應(yīng)劑量的1/2-1/4作為限值劑量。 供試品原液靜脈注射1ml/kg劑量未見(jiàn)降壓反應(yīng)，該劑量可作為給藥限值,4. 過(guò)敏反應(yīng)檢查,方法適用性（設(shè)定限值前研究） 測(cè)定供試品對(duì)豚鼠腹腔 (或皮下)和靜脈給藥的無(wú)毒性反應(yīng)劑量。 可

22、采用注射劑的半成品原輔料進(jìn)行致敏和激發(fā)研究，確定致敏方式和次數(shù) 在首次給藥后14、21、28天中選擇最佳激發(fā)時(shí)間。 檢查方法 參照過(guò)敏反應(yīng)檢查法（附錄 G）。,設(shè)定限值,致敏和激發(fā)劑量應(yīng)小于該途徑的急性毒性反應(yīng)劑量, 適當(dāng)參考臨床劑量 一般激發(fā)劑量大于致敏劑量。 常用腹腔或鼠鼷部皮下注射途徑致敏，每次每只0.5ml, 每只1ml靜脈注射激發(fā)。 如致敏劑量較小，可適當(dāng)增加致敏次數(shù)，方法和限值的特殊要求應(yīng)在品種項(xiàng)下規(guī)定。,5.溶血與凝聚檢查,方法適用性（設(shè)定限值前研究） 對(duì)注射劑原液和稀釋液進(jìn)行溶血與凝聚實(shí)驗(yàn)研究, 指標(biāo)除目測(cè)外，可增加比色法和顯微鏡下紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法, 確定無(wú)溶血和或凝聚的最大濃度

23、 檢查方法 參照溶血與凝聚檢查法（附錄 H）。,設(shè)定限值,以無(wú)溶血和凝聚的最大濃度的1/2作為限值濃度 一般應(yīng)高于臨床最大使用濃度。,修訂背景,1、增加了中藥安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定原則。 2、增加了限制前研究（即方法適用性研究），使方法更具科學(xué)性、可操作性。 3、安全性檢查法內(nèi)容省略，檢查限值設(shè)定更加具體明確。 4、家兔熱原檢查法檢查限值由人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的1-3倍修改為3-5倍。,九. 化學(xué)藥品注射劑安全性檢查法 應(yīng)用指導(dǎo)原則,,化學(xué)藥品注射劑安全性檢查法 應(yīng)用指導(dǎo)原則,化學(xué)藥品（包括抗生素、生化藥品）安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定 安全性檢查方法和檢查限值確定 化藥與中藥注

24、射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的異同點(diǎn),化學(xué)藥品注射劑安全性檢查法 應(yīng)用指導(dǎo)原則,本指導(dǎo)原則為化學(xué)藥品注射劑臨床使用的安全性和制劑質(zhì)量可控性而定。 化學(xué)藥注射劑安全性檢查包括異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）、降壓物質(zhì)（或組胺物質(zhì)）、過(guò)敏反應(yīng)等項(xiàng)。 根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設(shè)定相應(yīng)的檢查項(xiàng)目 進(jìn)行適用性研究。,（一）化學(xué)藥品（包括抗生素、生化藥品）安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,1、靜脈用注射劑 應(yīng)設(shè)細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）檢查項(xiàng)。 所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵液提取物，組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染毒性雜質(zhì)，且又缺乏有效的理化分析方法的靜脈用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立異常毒性檢查項(xiàng)。,安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,1、

25、靜脈用注射劑 所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵提取物時(shí),組分結(jié)構(gòu)不清晰，且有可能污染異源蛋白或未知過(guò)敏反應(yīng)物質(zhì)的靜脈用注射劑，如缺乏相關(guān)的理化分析方法且臨床發(fā)現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，應(yīng)考慮設(shè)立過(guò)敏反應(yīng)檢查項(xiàng)。 所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵提取物時(shí), 組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染組胺、類組胺樣降血壓物質(zhì)的靜脈用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立降壓物質(zhì)或組胺類物質(zhì)檢查項(xiàng)。,安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,2、肌內(nèi)注射用注射劑 所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵提取物時(shí), 組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染毒性雜質(zhì)，且又缺乏有效的理化分析方法的肌內(nèi)注射用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立異常毒性檢查項(xiàng)。,安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,2、肌內(nèi)注射用注射劑 所用原料系動(dòng)物來(lái)

26、源或微生物發(fā)酵提取物時(shí), 組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染異源蛋白或未知過(guò)敏反應(yīng)物質(zhì)的肌內(nèi)注射用注射劑，如缺乏相關(guān)理化分析方法且臨床發(fā)現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，應(yīng)考慮設(shè)立過(guò)敏反應(yīng)檢查項(xiàng)。 臨床用藥劑量較大，生產(chǎn)工藝易污染細(xì)菌內(nèi)毒素的肌內(nèi)注射用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng),安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,3、特殊途徑的注射劑 椎管內(nèi)、腹腔、眼內(nèi)等特殊途徑的注射劑，其安全性檢查項(xiàng)目一般應(yīng)符合靜脈用注射劑的要求， 必要時(shí)增加其它安全性檢查項(xiàng)目，如刺激性檢查、細(xì)胞毒性檢查。,安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,4、注射劑輔料 注射劑輔料使用面廣，用量大，來(lái)源復(fù)雜，與藥品的安全性直接相關(guān)。 在質(zhì)量控制中，應(yīng)根據(jù)輔料來(lái)源、性質(zhì)、用途、用法用量，

27、配合理化分析方法，設(shè)立必要的安全性檢查項(xiàng)目。,安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定,5、其它 原料和生產(chǎn)工藝特殊的注射劑必要時(shí)應(yīng)增加特殊的安全性檢查項(xiàng)目，如病毒檢查、細(xì)胞毒性檢查等。,（二）安全性檢查方法和檢查限值確定 ---組胺檢查法,定義：本法系將一定濃度的供試品和組胺對(duì)照品分別觀察出現(xiàn)的收縮反應(yīng)幅度并加以比較，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。 不合格供試品表明含有組胺和類組胺物質(zhì)，在臨床上可能引起血壓下降和類似過(guò)敏反應(yīng)等嚴(yán)重的不良反應(yīng)。,（二）安全性檢查方法和檢查限值確定 ---組胺檢查法,檢查方法 參照本附錄“附 組胺類物質(zhì)檢查法” 設(shè)定限值前研究 在確定限值前，應(yīng)考察供試品對(duì)組胺對(duì)照

28、品引起的離體豚鼠回腸收縮反應(yīng)的干擾（抑制或增強(qiáng)），求得最大無(wú)收縮干擾濃度。 若供試品的處方、生產(chǎn)工藝等任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的條件發(fā)生改變時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。,組胺檢查法,干擾試驗(yàn) 按組胺類物質(zhì)檢查法，依下列順序準(zhǔn)確注入供試品稀釋液加對(duì)照品稀釋液低劑量、對(duì)照品稀釋液低劑量、供試品稀釋液加對(duì)照品稀釋液高劑量、對(duì)照品稀釋液高劑量（dSL+T、dSL 、dSH+T、dSH ），重復(fù)一次，如dSL+T及dSH+T所致的反應(yīng)值與dSL及dSH所致的反應(yīng)值基本一致，可認(rèn)為供試品不干擾組胺物質(zhì)檢查；同時(shí)應(yīng)進(jìn)行本法與降壓物質(zhì)檢查法符合性的研究。否則該品種不適合設(shè)立組胺物質(zhì)檢查項(xiàng)，建議設(shè)立降壓物質(zhì)

29、檢查項(xiàng)。,組胺檢查法,限值確定 除特殊要求外，原則上與降壓物質(zhì)檢查限值一致，以臨床單次用藥劑量的1/55倍量和每千克體重0.1g組胺劑量計(jì)算注射劑含組胺類物質(zhì)檢查限值，其計(jì)算公式為：限值L=K/M，其中K值為人每千克體重接受的組胺量（0.1g/kg），M為降壓物質(zhì)檢查限值（mg/kg、ml/kg、IU/kg）。供試品劑量應(yīng)低于最大無(wú)收縮干擾劑量?？鼓[瘤藥、心血管病藥等急重病癥用藥應(yīng)采用高限。,組胺類物質(zhì)檢查法,定義 本法系比較組胺對(duì)照品（S）與供試品（T）引起豚鼠離體回腸收縮的程度，以判定供試品中含組胺類物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。,增訂背景,1降壓物質(zhì)檢查法使用的動(dòng)物為貓，現(xiàn)在貓來(lái)源復(fù)雜

30、、而且難以得到，動(dòng)物數(shù)量、質(zhì)量都難以保證。因此使用組胺檢查法作為體外替代方法。,增訂背景,2許多中藥注射劑品種在做降壓物質(zhì)檢查時(shí)，存在一過(guò)性降壓現(xiàn)象，如清開(kāi)靈注射液、復(fù)方苦參注射液等，但在臨床使用時(shí)并不存在降壓現(xiàn)象； 還有一些活血化瘀類中藥注射劑品種如紅花注射液，丹參注射液，紅花黃色素注射液等，本身具有擴(kuò)張血管的作用，在做降壓物質(zhì)檢查時(shí)，在與臨床劑量等同的情況下，血壓出現(xiàn)大幅度下降的情況。究其原因，是中藥注射劑的成分復(fù)雜，還是其本身擴(kuò)張血管的作用，尚不清楚。 因此，在中藥注射液的安全性評(píng)價(jià)中是否增加降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)一直存在爭(zhēng)議。,增訂過(guò)程,組胺檢查法是豚鼠離體回腸收縮法在藥品檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用。豚鼠

31、離體回腸收縮法本身是一種成熟的藥理實(shí)驗(yàn)方法，在基礎(chǔ)藥理研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，其作用機(jī)制、拮抗劑與激動(dòng)劑的類型與劑量等基礎(chǔ)研究均細(xì)致深入。本法在借鑒的基礎(chǔ)上，對(duì)試驗(yàn)條件、結(jié)果判定等進(jìn)行了明確與改良。,附 組胺檢查法,營(yíng)養(yǎng)液組成特點(diǎn) A 液：試驗(yàn)當(dāng)日，取氯化鈉160.0g、氯化鉀4.0g、氯化鈣（按無(wú)水物計(jì)算）2.0g、氯化鎂（按無(wú)水物計(jì)算）1.0g 與磷酸氫二鈉（含12 個(gè)結(jié)晶水）0.10g，加注射用水700ml 使溶解，再加入注射用水適量，使成1000ml。 B 液：取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氫鈉1.0g、葡萄糖（含1 個(gè)結(jié)晶水）0.5g，加適量注射用水使溶解，加A 液50.0ml，混合后加注射

32、用水使成1000ml。B 液應(yīng)臨用前配制，并在24h 內(nèi)應(yīng)用。,結(jié)果判定方法,如供試品溶液引起回腸收縮： 則分別計(jì)算dSL、dT 所致反應(yīng)的平均值。 若dT 所致反應(yīng)的均值不大于dSL 所致反應(yīng)的均值，即判定供試品組胺類物質(zhì)檢查符合規(guī)定； 若dT 所致反應(yīng)的均值大于dSL所致反應(yīng)的均值，即判定供試品組胺類物質(zhì)檢查不符合規(guī)定。,結(jié)果判定方法,如供試品不引起回腸收縮： 則在供試品溶液中加入組胺對(duì)照品高、低劑量，并按下列次序準(zhǔn)確注入dSH、dSL+T、dSH+T、dSL, 重復(fù)一次。 若供試品組胺溶液產(chǎn)生的收縮與對(duì)應(yīng)組胺對(duì)照液高、低劑量的收縮基本一致，可判定供試品組胺類物質(zhì)檢查符合規(guī)定； 若供試品組

33、胺溶液產(chǎn)生的收縮與對(duì)應(yīng)組胺對(duì)照液高、低劑量產(chǎn)生的收縮不相符，即減少或無(wú)收縮，或不能重復(fù)出現(xiàn)，則此檢查結(jié)果無(wú)效，應(yīng)進(jìn)行供試品的降壓物質(zhì)檢查。,技術(shù)要求與注意事項(xiàng),動(dòng)物要求 1、實(shí)驗(yàn)證實(shí)純種動(dòng)物對(duì)組胺的反應(yīng)更為靈敏，收縮值高，靈敏度也較為穩(wěn)定。因此使用純種動(dòng)物是保證實(shí)驗(yàn)順利的基礎(chǔ)。 2、動(dòng)物體重應(yīng)嚴(yán)格控制在250-350g，動(dòng)物體重過(guò)大、過(guò)小靈敏度均難以重復(fù)。 3、禁食時(shí)間對(duì)豚鼠的腸道平滑肌功能有直接影響，故動(dòng)物禁食應(yīng)控制在24h左右，禁食后未使用的動(dòng)物近期內(nèi)不應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)。,技術(shù)要求與注意事項(xiàng),腸管處置 1、剖腹取出回腸一段（選用遠(yuǎn)端小腸，因?yàn)榇硕巫蠲舾校⒁獗苊庖驙坷够啬c受損，腸系膜不必要

34、全部分離，容易損傷腸管，少帶一些血管組織，腸管更有活力。 2、新鮮取出的腸管宜立刻浸泡至營(yíng)養(yǎng)液B中。 3、腸管剪取23cm長(zhǎng)，具體長(zhǎng)度應(yīng)依據(jù)浴桶高度取舍。,技術(shù)要求與注意事項(xiàng),4、剪取后立即使其在營(yíng)養(yǎng)中平衡一段時(shí)間，并在20分鐘內(nèi)開(kāi)始給予組胺。 5、離體腸管可以保存于B液中，至2-8冰箱中冷藏，通入氧氣，24h內(nèi)可以使用。冰箱中保存的離體腸管使用時(shí)宜掛在浴桶內(nèi)1h左右后再開(kāi)始試驗(yàn)。,技術(shù)要求與注意事項(xiàng),預(yù)負(fù)荷 對(duì)于準(zhǔn)確記錄組胺引起的回腸收縮值十分重要，調(diào)零后應(yīng)預(yù)加負(fù)荷1g左右，調(diào)節(jié)使其對(duì)收縮的反應(yīng)最為靈敏。在腸管平衡的過(guò)程中，因腸管松弛，預(yù)加的負(fù)荷值會(huì)降低，必要時(shí)應(yīng)調(diào)整使其對(duì)收縮的反應(yīng)最為靈敏

35、。但在確定了dSH、dSL后，則不應(yīng)調(diào)整，否則可能引起dSH、dSL的收縮高度改變，失去意義。,技術(shù)要求與注意事項(xiàng),干擾的判斷 干擾的判斷是試驗(yàn)過(guò)程的重要影響因素。試驗(yàn)中有時(shí)靈敏度的下降與樣品干擾引起的回腸收縮降低難以區(qū)分，應(yīng)靜置或沖洗浴筒使靈敏度恢復(fù)后重新試驗(yàn)。,技術(shù)要求與注意事項(xiàng),建議先取一段腸管，以組胺對(duì)照液10-9、10-8、10-7、10-6g/ml依次給予，觀察腸管收縮，以確定所用動(dòng)物的最佳劑量范圍；要注意的是如果組胺對(duì)照液的濃度過(guò)高，有可能使腸管收縮難以恢復(fù)，應(yīng)更換腸管。,（三）化藥與中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的異同點(diǎn),1.安全性檢查法和檢查限值確定中異常毒性檢查、細(xì)菌內(nèi)

36、毒素、熱原檢查、降壓物質(zhì)檢查、過(guò)敏反應(yīng)檢查兩者一致。 2.化學(xué)安全性檢查項(xiàng)目設(shè)定原則中增加了特殊途徑的注射劑、注射劑輔料及其它。 3.化學(xué)注射劑增加了組胺類物質(zhì)檢查項(xiàng),而中藥注射劑增加了溶血與凝聚檢查。,十、中藥生物活性測(cè)定指導(dǎo)原則,生物活性測(cè)定法是以藥物的生物效應(yīng)為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，測(cè)定藥物有效性的一種方法，從而達(dá)到控制藥品質(zhì)量的作用。 其測(cè)定方法包括生物效價(jià)測(cè)定法和生物活性限值測(cè)定法。,概 念,控制中藥有效性的一種方法； 方法基礎(chǔ)：生物效應(yīng)； 方法工具：統(tǒng)計(jì)學(xué)； 目的：控制質(zhì)量； 分類：定量法生物效價(jià)測(cè)定法 定性法生物活性限值測(cè)定法,背 景,中藥的藥材來(lái)源廣

37、泛、多變，制備工藝復(fù)雜，使得中藥制劑的質(zhì)量控制相對(duì)困難 中藥往往含有多種活性成分和具有多種藥理作用，僅僅控制少數(shù)成分不能完全控制其質(zhì)量和反映臨床療效 為了使中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能更好地保證每批藥品的臨床使用安全有效，有必要在現(xiàn)有含量測(cè)定的基礎(chǔ)上增加生物活性測(cè)定，以綜合評(píng)價(jià)其質(zhì)量。,（一）基本原則,符合藥理學(xué)研究基本原則 應(yīng)符合藥理學(xué)研究隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的基本原則；具備簡(jiǎn)單、精確特點(diǎn)；判斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)明確。 體現(xiàn)中醫(yī)藥特點(diǎn) 建立的方法，其測(cè)定指標(biāo)應(yīng)與該中藥的“功能與主治”相一致。 品種選擇合理 研究的中藥材或中成藥應(yīng)功能主治明確， 優(yōu)先考慮適應(yīng)癥明確，成分單一的中藥注射劑品種，對(duì)急重癥用藥、保護(hù)品種應(yīng)重點(diǎn)進(jìn)

38、行研究。 方法科學(xué)可靠 優(yōu)先選用生物效價(jià)測(cè)定法，不能建立生物效價(jià)測(cè)定的品種可考慮采用生物活性限值測(cè)定法,體現(xiàn)中醫(yī)藥特色,難度大； 判定指標(biāo)和中醫(yī)的“功能主治”如何銜接？ 多功能主治中藥指標(biāo)的選擇。,品種選擇合理,功能主治明確； 適應(yīng)癥單一； 中藥注射劑； 急重癥用藥； 保護(hù)品種； 新藥？,方法科學(xué)可靠,生物效價(jià)法 生物活性限值測(cè)定法,（二）基本內(nèi)容,1、實(shí)驗(yàn)條件 試驗(yàn)系選擇 供試品選擇 標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌愤x擇,試驗(yàn)系的選擇,應(yīng)與試驗(yàn)原理和測(cè)定指標(biāo)密切相關(guān)； 背景資料清楚、影響因素少、檢測(cè)指標(biāo)靈敏、成本低廉； 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的要求。 盡可能使用小鼠和大鼠，應(yīng)遵循“優(yōu)化、減少、替代”的“3R”原則。,供試品

39、的選擇,工藝穩(wěn)定、質(zhì)量合格（目前的標(biāo)準(zhǔn)要求）； 飲片應(yīng)基源清楚； 使用三批供試品（方法學(xué)研究時(shí)）。,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品選擇,首選中藥標(biāo)準(zhǔn)品； 可考慮化學(xué)藥作為對(duì)照品； 生物效價(jià)測(cè)定法必須要有標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定相對(duì)效價(jià)；生物活性限值測(cè)定法用對(duì)照品作為驗(yàn)證。,2、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),設(shè)計(jì)原理 設(shè)計(jì)類型 劑量設(shè)計(jì) 給藥途徑 給藥次數(shù) 指標(biāo)選擇,設(shè)計(jì)原理,所選實(shí)驗(yàn)方法的原理應(yīng)明確； 所選擇的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)客觀、專屬性強(qiáng)； 能夠體現(xiàn)供試品的功能與主治或藥理作用； 如果選擇機(jī)理研究也應(yīng)考慮指標(biāo)的專屬性,設(shè)計(jì)類型,采用生物效價(jià)測(cè)定法，應(yīng)按中國(guó)藥典二部附錄“生物檢定統(tǒng)計(jì)法”的要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究； 采用生物活性限值測(cè)定法，試驗(yàn)設(shè)計(jì)可考

40、慮設(shè)供試品組、陰性對(duì)照組或陽(yáng)性對(duì)照組， 測(cè)定方法需建立動(dòng)物模型時(shí)，應(yīng)考慮設(shè)置模型對(duì)照組。重現(xiàn)性好的試驗(yàn)，也可以不設(shè)或僅在復(fù)試時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組。,劑量設(shè)計(jì),如采用生物效價(jià)測(cè)定法，供試品和標(biāo)準(zhǔn)品均采用多劑量組試驗(yàn)，并按生物檢定的要求進(jìn)行合理的劑量設(shè)計(jì)，使不同劑量之間的生物效應(yīng)有顯著性差異。 如采用生物活性限值測(cè)定法，建議只設(shè)一個(gè)限值劑量，限值劑量應(yīng)以產(chǎn)生生物效應(yīng)為宜；但在方法學(xué)研究時(shí)，應(yīng)采用多劑量試驗(yàn)，充分說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)定限值劑量的依據(jù)。,給藥途徑,一般應(yīng)與臨床用藥途徑一致。 如采用不同的給藥途徑，應(yīng)說(shuō)明理由。,給藥次數(shù),根據(jù)藥效學(xué)研究合理設(shè)計(jì)給藥次數(shù)； 可采用多次或單次給藥,指標(biāo)選擇,應(yīng)客觀、明確、

41、專屬性強(qiáng)； 與“功能主治”基本一致； 功能主治多時(shí)應(yīng)如何選擇？ 如何體現(xiàn)與功能主治基本一致？,3、結(jié)果與統(tǒng)計(jì),試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)應(yīng)符合生物統(tǒng)計(jì)要求。生物效價(jià)測(cè)定法應(yīng)符合中國(guó)藥典二部附錄“生物檢定統(tǒng)計(jì)法”的要求，根據(jù)樣品測(cè)定結(jié)果的變異性決定效價(jià)范圍和可信限率（FL）限值； 生物活性限值測(cè)定法，應(yīng)對(duì)誤差控制進(jìn)行說(shuō)明，明確試驗(yàn)成立的判定依據(jù)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并說(shuō)明具體的統(tǒng)計(jì)方法和選擇依據(jù)。,判定標(biāo)準(zhǔn),生物效價(jià)測(cè)定，應(yīng)按品種的效價(jià)范圍和可信限率（FL）限值進(jìn)行結(jié)果判斷； 生物活性限值測(cè)定，應(yīng)在規(guī)定的限值劑量下判定結(jié)果； 初試結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義者，可判定為符合規(guī)定； 初試結(jié)果沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義者，可增加樣本數(shù)

42、進(jìn)行一次復(fù)試，復(fù)試時(shí)應(yīng)增設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組，復(fù)試結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定為符合規(guī)定，否則為不符合規(guī)定。,（三）方法學(xué)驗(yàn)證,測(cè)定方法影響因素考察 精密度考察 方法適用性考察,測(cè)定方法影響因素考察,應(yīng)考察測(cè)定方法的各種影響因素，通過(guò)考察確定最佳的試驗(yàn)條件，以保證試驗(yàn)方法的專屬性和準(zhǔn)確性。 根據(jù)對(duì)影響因素考察結(jié)果，規(guī)定方法的誤差控制限值或?qū)y(tǒng)計(jì)有效性進(jìn)行說(shuō)明。,精密度考察,重復(fù)性 按確定的測(cè)定方法，用3批供試品、每批3次或同批供試品進(jìn)行6次測(cè)定試驗(yàn)后對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。生物活性測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果判斷應(yīng)基本一致。 中間精密度 考察實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變（如不同人員、不同儀器、不同工作日和實(shí)驗(yàn)時(shí)間）對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，至少應(yīng)對(duì)

43、同實(shí)驗(yàn)室改變?nèi)藛T進(jìn)行考察。 重現(xiàn)性 生物活性測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果必須在3家以上實(shí)驗(yàn)室能夠重現(xiàn)。,方法適用性考察,由生產(chǎn)企業(yè)按擬采用的生物活性測(cè)定方法和劑量對(duì)10批以上該產(chǎn)品進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制測(cè)定，以積累數(shù)據(jù)，考察質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該測(cè)定項(xiàng)目的適用性。 藥品檢驗(yàn)研究機(jī)構(gòu)應(yīng)收集不同生產(chǎn)企業(yè)的同種產(chǎn)品進(jìn)行生物活性比較研究。,起草背景,中藥質(zhì)量控制模式的歷史和現(xiàn)狀 必要性,中藥質(zhì)量控制模式歷史現(xiàn)狀,大致分為三個(gè)階段：外觀形態(tài)鑒別為主和內(nèi)在成分監(jiān)測(cè)為主。 第一階段 1985 年前，包括傳統(tǒng)的外觀形態(tài)鑒別（即經(jīng)典的看、嗅、嘗、試、量五法）和顯微鑒別，沒(méi)有確切的定量指標(biāo)，缺乏專屬性鑒別項(xiàng)目。 第二階段 1985 年后，中藥質(zhì)

44、量控制向微觀內(nèi)在成分監(jiān)測(cè)的方向發(fā)展，開(kāi)始使用化學(xué)和儀器分析的方法來(lái)對(duì)中藥成分進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定。 薄層色譜法的應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了中藥的專屬性鑒別；現(xiàn)代儀器分析方法來(lái)測(cè)定中藥活性成分和指標(biāo)成分的含量，結(jié)束了中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有定量指標(biāo)的歷史。,中藥質(zhì)量控制模式階段,第三階段 近年來(lái)，歐共體在草藥質(zhì)量指南中稱：草藥及其制劑是以整體為活性物質(zhì)，單靠測(cè)定其中的某種有效成分來(lái)考查質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的。因此，具有“整體”特征的指紋圖譜檢測(cè)方法得到推廣，中藥質(zhì)量控制由單一指標(biāo)成分定性定量向活性有效成分及生物測(cè)定的綜合檢測(cè)的方向發(fā)展，是中藥質(zhì)量控制的里程碑。,起草背景,必要性 中藥成分的復(fù)雜多變不確定性導(dǎo)致生物活

45、性的變化 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的局限性 現(xiàn)行的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要是參照化學(xué)合成藥模式，通過(guò)某一個(gè)或幾個(gè)指標(biāo)有效成分的定性檢測(cè)與含量測(cè)定來(lái)對(duì)中藥的質(zhì)量加以控制。由于該指標(biāo)成分不一定是藥品的藥效成分或?qū)傩猿煞?，即使為主要藥效成分，且其低微的含量限度與臨床有效劑量間缺乏相關(guān)性，其量效關(guān)系、毒效關(guān)系目前尚不清楚。 質(zhì)量控制的需要,中藥生物活性應(yīng)用及方法局限性,生物活性影響因素 1、應(yīng)用的局限性 不是所有中藥都適合采用用生物活性測(cè)定 中藥作用機(jī)制的復(fù)雜性，多靶點(diǎn)； 藥理作用比較溫和與遲緩，導(dǎo)致采用方法靈敏度較低； 2、方法的局限性 造模型的選擇：功能主治多 成本高，時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物消耗或材料多。有些造模型和給藥需要幾天時(shí)間。 生物誤差較大：由于受實(shí)驗(yàn)條件(如動(dòng)物性別、窩別，細(xì)胞活力等)因素的影響，尤其體內(nèi)測(cè)定法，重現(xiàn)性差，精密度低，且量效相關(guān)性不好，因此不宜采用生物效價(jià)法； 對(duì)照品的選擇難度,中藥生物活性應(yīng)用與方法局限性,對(duì)照品的選擇---需解決難題 由于中藥成分復(fù)雜性，多組分。如何正確選擇事關(guān)實(shí)驗(yàn)的成敗。 已知一種有效成分？ 對(duì)照藥材？ 中藥提取物精制品？ 具有明確和藥理作用相一致的中藥？化學(xué)藥？,謝謝,