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1、紫景天對實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織病理作用的研究
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紫景天對實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織病理作用的研究 本文簡介:牙周炎(CP)是一種慢性炎癥性疾病,是由齦下微生物和宿主防御之間的穩(wěn)態(tài)破壞引起[1],當(dāng)牙周組織被破壞時(shí),牙周袋內(nèi)的微生物負(fù)荷壓倒系統(tǒng)的主動(dòng)防御機(jī)制[2].針對此種狀況,目前國內(nèi)外對牙周炎的藥物治療主要是牙周袋內(nèi)用藥,而此類藥物主要以抗生素為主,近幾年研究顯示抗生素的長期使用可加快細(xì)菌的進(jìn)化,出現(xiàn)耐
紫景天對實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織病理作用的研究 本文內(nèi)容:
牙周炎 (CP) 是一種慢性炎癥性疾病,
2、是由齦下微生物和宿主防御之間的穩(wěn)態(tài)破壞引起[1], 當(dāng)牙周組織被破壞時(shí), 牙周袋內(nèi)的微生物負(fù)荷壓倒系統(tǒng)的主動(dòng)防御機(jī)制[2].針對此種狀況, 目前國內(nèi)外對牙周炎的藥物治療主要是牙周袋內(nèi)用藥, 而此類藥物主要以抗生素為主, 近幾年研究顯示抗生素的長期使用可加快細(xì)菌的進(jìn)化, 出現(xiàn)耐藥菌株, 也可破壞人體內(nèi)正常菌群, 造成菌群失調(diào)等副作用。因此, 我們進(jìn)行了紫景天總黃酮凝膠對實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織病理作用的相關(guān)研究。
1 材料與方法
1.1 試劑及儀器
二甲苯 (__化工廠, 批號:110315) ;冰醋酸 (西隴化工股份有限公司生產(chǎn), 批號:120302) ;
3、磨牙機(jī) (吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院口腔科提供) ;Wistar大鼠, 體重180-230g, 雌雄各半 (吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供) .
1.2 樣品的純度、來源
濃度分別為1.0%、0.5%、0.25%的紫景天總黃酮凝膠;基質(zhì)16%泊洛沙姆407 (吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室, 批號:0725) 以及陽性對照組藥物:復(fù)方牙痛酊 (貴州同濟(jì)堂制藥有限公司, 批號:) .
1.3 絲線結(jié)扎加牙齦卟啉菌感染復(fù)合法建立大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型
取Wistar大鼠60只, 雌雄各半, 分籠圈養(yǎng), 隨機(jī)取出50只大鼠, 用牙齦卟啉單胞菌的鹽水預(yù)處理2小時(shí)后的
4、4號無菌絲線若干, 雙股在同一位置打結(jié)3次后, 再穿過大鼠的第一和第二磨牙之間的間隙, 再將絲線環(huán)繞過第一磨牙, 于其腭側(cè)間隙結(jié)扎, 然后打結(jié)3次, 將打好的結(jié)頭埋入牙齦組織下, 以便使線結(jié)持續(xù)刺激到牙齦組織。在第3, 5, 7天將等量牙齦卟啉單胞菌的鹽水注射到大鼠頰腭側(cè)埋有絲線結(jié)頭的齦下, 于處理大鼠后的第3周通過國際通用標(biāo)準(zhǔn)和觀察牙齦癥狀評價(jià)牙齦指數(shù)并記錄牙齦指數(shù)。第4周隨機(jī)取動(dòng)物2只, 通過獲取打結(jié)部位的上頜磨牙及其牙周組織進(jìn)行病理組織學(xué)觀察, 以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)組大鼠模型的成立。
1.4 紫景天總黃酮對實(shí)驗(yàn)性牙周炎的治療作用
1) 未處理的10只大鼠為正常對照組 (
5、A組) :對牙齦不做任何處理, 其他方面同模型組大鼠。將上述大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型動(dòng)物隨機(jī)的分成4組:模型對照組 (B組) 以及陽性對照藥復(fù)方牙痛酊組 (C組) .根據(jù)紫景天總黃酮給藥的劑量的不同濃度分為實(shí)驗(yàn)D組 (給予1.0%紫景天總黃酮) , 實(shí)驗(yàn)E組 (給予0.5%紫景天總黃酮) 及實(shí)驗(yàn)F組 (給予0.25%紫景天總黃酮) , D、E和F組分別牙齦涂擦紫景天總黃酮, 每日2次, 0.5 ml/次/只, 次間隔8h, 連續(xù)涂藥14天。C組牙齦涂擦復(fù)方牙痛酊, 方法同紫景天藥物實(shí)驗(yàn)組。
2) 牙齦指數(shù) (GI) 和齦溝出血指數(shù) (SBI) :于給藥后第15天, 以3%水合氯醛10
6、 ml/kg腹腔注射麻醉, 觀察并記錄藥后牙齦指數(shù)及齦溝出血指數(shù), 然后腹主動(dòng)脈取血, 測量血清中的超氧化物歧化酶 (SOD) 、谷胱甘肽過氧化物酶 (GSH) 、丙二醛含量 (MDA) .
3) 牙周組織病理學(xué)觀察:在實(shí)驗(yàn)開始后的第5周處死各組大鼠進(jìn)行觀察, 首先將獲取的上頜骨標(biāo)本, 經(jīng)PBS (pH=7.2) 溶液清洗2遍后, 用10%甲醛固定上頜骨標(biāo)本24h, 將標(biāo)本浸泡在70%乙醇溶液中, 將組織修正后, 通過脫鈣、梯度脫水、石蠟包埋技術(shù)處理組織, 然后將牙齒進(jìn)行平行于牙長軸的近遠(yuǎn)中方向切片處理, 獲取牙體牙周聯(lián)合切片, 厚度約為5m.將切片進(jìn)行蘇木素-伊紅 (HE) 染
7、色, 通過光鏡組織學(xué)觀察并記錄組織學(xué)變化, 分析結(jié)果。
2 結(jié)果
2.1 外部行為觀察和組織病理學(xué)檢查
由圖1結(jié)果所見, 肉眼觀察:正常對照組動(dòng)物 (如圖A組) 牙齦色粉紅, 質(zhì)韌, 菲薄且緊貼牙面;模型組動(dòng)物可見牙面上有大量牙石菌斑, 且牙齦色暗紅質(zhì)地疏松, 探之易出血, 牙周袋形成。第4周處死兩只動(dòng)物, 取牙及牙周組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查, 確認(rèn)牙周炎模型復(fù)制成功。第5周開始給藥, 此時(shí)模型組動(dòng)物組, 牙周袋可見進(jìn)一步加深, 內(nèi)有食物殘?jiān)奂?牙齦組織出血、糜爛、溢膿等癥狀加重;給藥兩周后觀察可見模型對照組 (B組) 癥狀加重, 紫景天藥物實(shí)驗(yàn)組
8、(D、E、F組) 及陽性對照藥復(fù)方牙痛酊組 (C組) 動(dòng)物牙齦顏色變淺, 出血減少, 牙周袋變淺。
正常對照組動(dòng)物 (A組) 牙周軟組織細(xì)胞大小、形態(tài)及分布正常, 鏡下可見大鼠的牙周膜的附著點(diǎn)位于其牙齒的釉牙骨質(zhì)界處, 牙槽骨的骨小梁排列致密, 且不可見牙槽骨吸收破壞等變化。模型組對照組 (B組) 牙周組織可見大量炎性細(xì)胞;溝內(nèi)上皮出現(xiàn)糜爛潰瘍, 上皮部分向根方向增生, 牙周膜附著位于釉牙骨質(zhì)界下方, 可見深牙周袋形成;牙槽骨內(nèi)發(fā)現(xiàn)骨吸收陷窩, 判斷出現(xiàn)破骨細(xì)胞性骨吸收, 并可見中重度牙周炎的組織病變。陽性對照復(fù)方牙痛酊組 (C組) 大鼠的牙周組織雖然依然有炎性細(xì)胞的浸潤, 但是
9、其數(shù)量明顯減少。C組病理變化與陽性藥相似;F組大鼠的軟組織中炎性細(xì)胞的浸潤可見明顯減輕, 牙槽骨吸收狀態(tài)處于靜止期, 可見牙槽骨中的破骨細(xì)胞有明顯減少, 且牙槽骨周圍可見大量的成骨細(xì)胞增生, 并且有新生纖維結(jié)締組織大量生成, 牙周袋的變化顯示變淺或消失, D組炎性病變明顯大于E組, 而E組變化明顯大于F組, 但是D、E、F組炎性變化明顯小于B組, 這些顯示牙周組織正處于修復(fù)階段。
2.2 對實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠牙齦指數(shù)、齦溝出血指數(shù)的影響
由圖2、3結(jié)果可見, 紫景天總黃酮1.0%和復(fù)方牙痛酊均可明顯降低牙齦指數(shù)及齦溝出血指數(shù), 明顯減輕牙周炎損傷程度, 與模型對照組比
10、較均有顯著差異, 對大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎有明顯的治療作用。
2.3 對實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠血清中SOD、GSH、MDA的影響
由圖4、5結(jié)果可見, 模型組血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶比對照組明顯降低, 丙二醛含量明顯升高, 紫景天總黃酮1.0%、0.5%和復(fù)方牙痛酊均可明顯升高大鼠血清中超氧化物歧化酶 (P0.01) 、谷胱甘肽過氧化物酶 (P0.05) , 降低丙二醛含量。表明紫景天總黃酮及復(fù)方牙痛酊均可明顯減輕對大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的損傷程度, 對實(shí)驗(yàn)性牙周炎具有顯著的治療作用。
3 討論
盡管在目前的醫(yī)學(xué)和整體健康方面有了長足的進(jìn)步
11、, 但是慢性牙周炎仍然是一種廣泛的疾病, 失去牙齒是這種特殊疾病最嚴(yán)重的并發(fā)癥[3], 該病的特點(diǎn)是由于牙周韌帶和相鄰支撐骨的破壞而失去臨床附著。它普遍存在于成人之中[4], 它的主要病理變化為牙槽骨的病理性吸收?,F(xiàn)如今對牙周炎治療的藥物, 主要著力于控制或消除炎癥并且進(jìn)一步促進(jìn)牙周組織的再生成。臨床上主要應(yīng)用藥物是用于控制炎癥并且阻斷牙槽骨吸收和促進(jìn)骨再生。目前臨床上牙周炎的藥物治療主要是針對牙菌斑細(xì)菌的抗生素的治療方法, 此類治療藥物對于治療牙周炎有較好的療效, 但是如果長期使用易導(dǎo)致耐藥細(xì)菌的增多, 從而導(dǎo)致口腔內(nèi)菌群的失調(diào), 某些藥物也可同時(shí)引起胃腸道刺激性等毒副作用。因此需研究并且開
12、發(fā)高效低毒的牙周炎治療的藥物以應(yīng)用在臨床治療中。因此我們進(jìn)行了紫景天對實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織的病理作用的研究, 以給相關(guān)研究提供相應(yīng)證據(jù)。
通過本研究, 我們發(fā)現(xiàn)紫景天總黃酮可以減輕牙周炎的病理性損傷, 抑制牙周炎中的牙槽骨吸收。在大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的觀察中可見對牙周炎有明顯的預(yù)防和治療作用。本研究可為眾多牙周病患者帶來福音, 推動(dòng)長白山野生藥材資源開發(fā), 本研究成果應(yīng)用前景廣闊, 將對提高社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益具有重要的意義。
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