2019屆高考生物一輪復習 第十二單元 生物技術實踐 第40講 微生物的培養(yǎng)與應用學案

第40講微生物的培養(yǎng)與應用1微生物的分離和培養(yǎng)2.某種微生物數(shù)量的測定3.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用4利用微生物發(fā)酵來生產特定的產物以及微生物在其他方面的應用培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術1培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。(2)營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外，還需要滿足微生物生長對pH、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質的要求。(3)分類2無菌技術的主要方法及適用對象連一連3制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基4純化大腸桿菌(1)原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細菌菌落。(2)主要方法及純化原理主要方法平板劃線法稀釋涂布平板法平板示意圖純化原理通過連續(xù)劃線操作實現(xiàn)的將菌液進行一系列的梯度稀釋和涂布平板操作實現(xiàn)的5.菌種的保藏方法(1)臨時保藏法：對于頻繁使用的菌種，先接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后放入4 的冰箱中保藏。(2)甘油管藏法：對于需要長期保存的菌種，先將菌液轉入滅菌后的甘油中，混勻后放在20 冷凍箱中保存。 (選修 1 P18“旁欄小資料”改編)微生物的接種方法只有平板劃線法和稀釋涂布平板法嗎？微生物接種的核心是什么？答案：不是。微生物的接種技術還包括斜面接種、穿刺接種等方法，其核心是防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。 考向1培養(yǎng)基及其制備方法及無菌技術的操作1(2018·湖南長沙瀏陽四中一模)高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：(1)號培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時要加入_作為凝固劑，從用途來看屬于選擇培養(yǎng)基，應以_作為唯一碳源。(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是()A計算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D計算、稱量、滅菌、溶化、倒平板(3)溶化時，燒杯中加入瓊脂后要不停地_，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對培養(yǎng)基滅菌的方法一般為_。(4)過程是_，過程所使用的接種方法是_法。(5)部分嗜熱菌在號培養(yǎng)基上生長時可釋放_分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應的菌落，接種到號培養(yǎng)基上進一步分離純化后，再對菌種進行_培養(yǎng)。解析：固體培養(yǎng)基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實驗的目的是獲得產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養(yǎng)基中應以淀粉作為唯一碳源。配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。配制培養(yǎng)基加熱溶化時，要注意加入瓊脂后要不斷攪拌，防止瓊脂糊底和溢出。對培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌。仔細觀察題圖可知，過程是菌液稀釋，過程是采用涂布法接種。能產生淀粉酶的部分細菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應菌種，以后可以擴大培養(yǎng)用于生產。答案：(1)瓊脂淀粉(2)C(3)攪拌高壓蒸汽滅菌(4)稀釋稀釋涂布平板(5)淀粉酶擴大 考向2微生物的純化技術2(2017·高考江蘇卷)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴重危害。小明同學準備依據(jù)下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題：(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_。(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應隨轉接次數(shù)增加而逐漸_，以達到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應進一步_，以便于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質外，還必須添加_。(3)如圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中_(填圖中序號)區(qū)域更易獲得單菌落。(4)采用比色測定法(使用苯酚顯色劑)檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進行顯色反應，下表中15號比色管的苯酚濃度應分別為_。管號123456苯酚濃度(mg/L)1如果廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_(填序號：51020)倍后，再進行比色。解析：(1)富集培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚都是含C的有機物，可作為碳源。(2)欲富集酚降解菌，需隨轉接次數(shù)增加逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚的含量；若接種培養(yǎng)后平板上菌落過于密集，則應進一步稀釋后再進行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計數(shù)與分離；平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除含有水、營養(yǎng)物質(碳源、氮源、無機鹽等)外，還需添加瓊脂作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時，最后的劃線區(qū)域()中，菌體的密度較小，容易獲得單菌落。(4)因系列濃度梯度中6號比色管中苯酚濃度為1 mg/L，故15號比色管中的苯酚濃度應分別為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L；根據(jù)題意，廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于01 mg/L，需將殘留液稀釋20倍左右。答案：(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀釋涂布凝固劑(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8兩種純化細菌方法的比較項目優(yōu)點缺點適用范圍平板劃線法可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離不能計數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延適用于厭氧菌和兼性厭氧菌土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)(1)分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶，這種物質在把尿素分解成無機物的過程中起到催化作用。(2)統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。2實驗流程3分解尿素的細菌的鑒別(1)方法：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)分解尿素的細菌。(2)原理： (3)實驗現(xiàn)象及結論培養(yǎng)基變紅：該種細菌能分解尿素。培養(yǎng)基不變紅：該種細菌不能分解尿素。4設置對照和重復項目對照重復目的排除非測試因素對實驗結果的影響排除偶然因素對實驗結果的影響實例空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否合格同一稀釋度涂布至少3個平板(選修 1 P26“旁欄小資料”改編)細菌數(shù)目的測定還有哪些方法？舉例說明。答案：濾膜法。測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目可以采用濾膜法。 1(2017·高考全國卷)某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}：(1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產生_。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產物CO2作為碳源，原因是_。但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是_(答出兩點即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應選擇_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_。(3)用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答出兩點即可)。解析：(1)能分解尿素的細菌體內應含有脲酶；能分解尿素的細菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來合成有機物，可用葡萄糖等有機物作為碳源。進入細菌體內的葡萄糖既能為細胞生命活動提供能量，又可為其他有機物的合成提供原料。(2)篩選可分解尿素的細菌，應選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，而能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，其他兩組不能起到篩選作用。(3)用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，這兩種物質既可為細菌生長提供無機營養(yǎng)，又可作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH相對穩(wěn)定。答案：(1)脲酶分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來合成有機物為細胞生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料(2)尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用(3)為細菌生長提供無機營養(yǎng)，作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定2(2018·廣西來賓中學模擬)下表是某同學列出的分離并計數(shù)土壤中微生物培養(yǎng)基的配方，據(jù)此回答下列問題：(1)制備培養(yǎng)基時，將上述物質溶解并用蒸餾水定容至1 000 mL后，還要進行_和_。(2)從功能上看，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基，細菌能利用培養(yǎng)基中的氮源是由于能合成_。(3)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時，_(填“需要”或“不需要”)設置對照組(即不接種進行培養(yǎng))，原因是_。(4)某同學在3個培養(yǎng)基上分別涂布稀釋倍數(shù)為106的土壤樣液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，其菌落數(shù)分別為180、220、320個，則1 mL原土壤樣液中上述微生物的數(shù)量為_，此方法測定的活菌數(shù)比實際活菌數(shù)少的原因為_。解析：(1)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)，制備培養(yǎng)基時，將上述物質溶解并用蒸餾水定容至1 000 mL后，還要進行滅菌和倒平板。(2)該培養(yǎng)基中含有的尿素為唯一氮源，是選擇培養(yǎng)基，細菌能合成脲酶，能利用尿素。(3)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時需要設置對照組，主要用于判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染。(4)1 mL原土壤液中上述微生物數(shù)量(180220320)÷3×106×102.4×109個，用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低的原因是培養(yǎng)基上的菌落可能是由兩個或多個細菌形成的。答案：(1)滅菌倒平板(2)選擇脲酶(催化尿素分解的酶)(3)需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染(4)2.4×109當兩個或多個細菌連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落兩種計數(shù)方法的比較項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法)原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量公式每克樣品中的菌落數(shù)(C÷V)×MC：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V：涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細菌數(shù)：每小格平均細菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)缺點當兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分細胞死活結果比實際值偏小比實際值偏大 分解纖維素的微生物的分離1纖維素與纖維素酶(1)纖維素：一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質。(2)纖維素酶組成：纖維素酶是一種復合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三種組分。作用纖維素纖維二糖葡萄糖2纖維素分解菌的篩選(1)方法：剛果紅染色法。(2)培養(yǎng)基：富含纖維素的選擇培養(yǎng)基。 (4)菌落的挑選：挑選產生透明圈的菌落。3實驗流程及注意事項1(2018·四川成都七中模擬)為獲得果膠酶高產菌株，科研人員進行了下列分離、篩選、鑒定工作?；卮鹣铝袉栴}：(1)為分離果膠酶產生菌，科研人員配制了下表所示成分的培養(yǎng)基，該表空白處的兩種成分是_。制備的培養(yǎng)基常用_法進行滅菌。K2HPO4MgSO4NaNO3FeSO4瓊脂0.1 g0.5 g3 g0.01 g2 g15 g加至1 L(2)科研人員將采集的果園土壤放入無菌水中，震蕩混勻，制成懸液。為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行_，用_法接種于固體培養(yǎng)基上。接種后的培養(yǎng)基呈_狀態(tài)放入培養(yǎng)箱。(3)選擇單菌落數(shù)目適宜的培養(yǎng)基，加入一定濃度的剛果紅溶液(果膠與剛果紅結合后顯紅色)，一段時間后洗去培養(yǎng)基表面的剛果紅溶液，觀察并比較菌落的_直徑的比值，篩選果膠酶高產菌株。(4)將獲得的菌株進行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)液的_(填“上清液”或“沉淀物”)獲得粗提的果膠酶。將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性。進行吸光值測定時，需將_與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照。解析：依題意可知：該實驗的目的是分離果膠酶產生菌，因此培養(yǎng)基中需要加入果膠，在配制過程中需用蒸餾水定容，所以該表空白處的兩種成分是果膠和蒸餾水。制備的培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。答案：(1)果膠和蒸餾水高壓蒸汽滅菌(2)梯度稀釋(或系列稀釋)(稀釋)涂布平板倒置(3)水解(或透明)圈(4)上清液等量失活的粗提果膠酶2(高考新課標全國卷)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成_。(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成_色復合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見表)：酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：“”表示有，“”表示無。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_；培養(yǎng)基乙_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。解析：(1)纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶能使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶能將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅是一種染料，可以與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物就無法形成，培養(yǎng)基中就會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。(3)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，而用于分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，并且培養(yǎng)基中需含有纖維素，才能與CR形成紅色復合物，有纖維素分解菌時才能形成以纖維素分解菌為中心的透明圈。答案：(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR纖維素紅色復合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌兩種剛果紅染色法的比較項目方法一方法二優(yōu)點傳統(tǒng)的方法，顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用操作簡便，不存在菌落混雜問題缺點操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質，可以使能夠產生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應；有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成的明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分清一清易錯點1誤認為所有微生物培養(yǎng)基中均需加入“生長因子”點撥碳源、氮源、水分、無機鹽、生長因子是微生物生長必需的五大營養(yǎng)成分，但大多數(shù)培養(yǎng)基中都含碳源、氮源、水分、無機鹽四類物質，可能不需額外添加“生長因子(如維生素)”，這是因為許多微生物可自行合成這些生長因子，而對那些合成能力有限或不能合成生長因子的微生物(如乳酸菌)，則需在培養(yǎng)基中添加諸如維生素等生長因子。易錯點2消毒滅菌點撥項目條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部的部分對人體有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌易錯點3兩種微生物篩選方法的比較點撥項目土壤中分解尿素的細菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生長，能夠分解尿素的微生物能利用尿素為氮源正常生長，從而起到選擇作用因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而大量繁殖特有代表過程CO(NH2)2H2OCO22NH3纖維素纖維二糖葡萄糖易錯點4不知道菌落計數(shù)比實際值“偏高”還是“偏低”點撥稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中菌落的數(shù)目往往比實際數(shù)目“低”。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。而顯微計數(shù)法中由于不能區(qū)分死菌與活菌，故所得數(shù)值可能“偏高”。判一判(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需要加入一些特殊的物質()(2)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上()(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害()(4)為了防止污染，接種環(huán)經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落()(5)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落()(6)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類()(7)對細菌進行計數(shù)只能采用稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法()(8)篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源()(9)分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低()(10)剛果紅可以與纖維素形成透明復合物，所以可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌()(11)土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養(yǎng)”是必不可少的()(12)在富含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅染色劑，若出現(xiàn)周圍存在透明圈的菌落，則說明篩選到了分解纖維素的微生物()(13)在纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上生長的菌落都是纖維素分解菌()(14)培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈的菌落一定是纖維素分解菌的菌落()答案：(1)(2)×(3)(4)×(5)(6)×(7)×(8)(9)×(10)×(11)×(12)(13)×(14)× (2016·高考全國卷)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下：配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；制作無菌平板；設置空白對照組和若干實驗組，進行相關操作；將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹣铝袉栴}：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于_。若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_。(2)步驟中，實驗組的操作是_。(3)若在某次調查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結果說明在此次調查中出現(xiàn)了_現(xiàn)象。若將30(即366)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_(填“正確”或“不正確”)。解析：(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質的水解產物，都可以作為氮源；觀察菌落需利用固體培養(yǎng)基，因此可推知若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分X通常是凝固劑，如瓊脂。(2)實驗組的各組構成對比實驗，設計要依據(jù)單一變量原則，結合實驗目的：欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內不同高度空氣中微生物的分布情況，可知步驟中，實驗組的操作是將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間。(3)若在某次調查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結果說明在此次調查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象。該污染菌可能對空氣中的其他微生物的生長無影響也可能有影響，因此將30(即366)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法不正確。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間(3)污染不正確 (2015·高考全國卷)已知微生物A可以產生油脂，微生物B可以產生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產?；卮鹩嘘P問題：(1)顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通?？捎胈染色。微生物A產生的油脂不易揮發(fā)，可選用_(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。(2)為了從自然界中獲得能產生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應選用以_為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。(3)為了確定微生物B產生的脂肪酶的最適溫度，某同學測得相同時間內，在35 、40 、45 溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個溫度中，_條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應圍繞_設計后續(xù)實驗。解析：(1)生物組織中的油脂能被蘇丹(或蘇丹)染成橘黃色(或紅色)。(2)為了篩選出能產生脂肪酶的微生物B的單菌落，我們應選用只能讓該菌落生長的選擇性培養(yǎng)基，因此只能選用以油脂作為唯一碳源的固體培養(yǎng)基。(3)溫度影響酶的活性，在三個溫度中，45 時需酶量最高，說明酶活性最低；在三個溫度實驗中40 時所需酶量最少，35 時和45 時所用酶量多，說明酶的最適溫度介于35 和45 之間，因此應圍繞40 設計不同溫度梯度，進行后續(xù)實驗。答案：(1)蘇丹(或蘇丹)萃取法(2)油脂(3)4540 (高考全國卷)為了調查某河流的水質狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是_；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過_滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是_。(3)示意圖A和B中，_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結果。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_的利用率。解析：(1)為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，微生物學實驗一般會設置空白對照：隨機取若干滅菌后的不接種的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成，若無菌落生成說明滅菌合格；0.1 mL稀釋液中平均有(393837)/338個活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1380，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為380×1003.8×104，則每升水樣中活菌數(shù)目為3.8×104×1 0003.8×107。(2)接種時接種環(huán)需要灼燒滅菌；在第二次及以后每次劃線時，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做的目的是通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌體的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。(3)由題圖可知，B圖菌落分布相對均勻，應為稀釋涂布平板法接種的結果。(4)振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基的氧氣含量，促進好氧型微生物的生長，另外振蕩培養(yǎng)還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質的利用率。答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8×107(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(3)B(4)溶解氧營養(yǎng)物質 課時作業(yè)1(2018·武漢調研)如表所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，請回答有關問題：KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素蒸餾水1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g定容至1 000 mL(1)該培養(yǎng)基只允許分解尿素的細菌生長，這種培養(yǎng)基稱為_培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基會抑制其他種類微生物生長，其原因是該培養(yǎng)基_。(2)若要通過統(tǒng)計培養(yǎng)基中菌落數(shù)來估計樣品中的細菌數(shù)，上述培養(yǎng)基中還需要添加的成分是_，接種時應采用_法，該方法接種培養(yǎng)后的菌落，不可能是圖中的_。(3)從土壤中分離出分解尿素的細菌后，要對其做進一步的鑒定，可在上述培養(yǎng)基中加入_指示劑，培養(yǎng)該菌后，如果指示劑變_，可初步鑒定該種細菌能夠分解尿素。(4)某同學用0.1 mL稀釋液在稀釋倍數(shù)為106的平板中測得菌落數(shù)的平均值為163，則每毫升樣品中的細菌數(shù)是_個。答案：(1)選擇以尿素為唯一的氮源(2)瓊脂稀釋涂布平板D(3)酚紅紅(4)1.63×1092(2018·黑龍江大慶中學模擬)回答與微生物實驗室培養(yǎng)有關的問題：(1)在制備固體培養(yǎng)基時需加入的常用凝固劑是_。若培養(yǎng)基需調節(jié)pH，則應在滅菌之_(填“前”或“后”)調節(jié)。(2)為防止外來雜菌入侵，對_等可采用干熱滅菌法進行滅菌。(3)如圖為平板劃線法接種后的示意圖。在劃線接種的整個操作過程中，對接種環(huán)至少需進行_次灼燒滅菌。接種后蓋上皿蓋，將平板_放入恒溫箱中培養(yǎng)，這樣放置的目的是_。(4)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，每隔一個“時間間隔”統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，最后選取_作為結果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而遺漏菌落的數(shù)目。解析：(1)制備固體培養(yǎng)基通常加入的凝固劑是瓊脂。培養(yǎng)基若在滅菌后調pH，可造成污染，故培養(yǎng)基調pH應在滅菌前進行。(2)滅菌的方法通常有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌和灼燒滅菌三種。采用干熱滅菌的通常有玻璃器皿和金屬用具。(3)平板劃線法接種過程中需在接種前、每次劃線后對接種環(huán)進行灼燒滅菌。圖中共接種5個區(qū)域，故接種環(huán)至少需要進行6次灼燒滅菌處理。微生物培養(yǎng)過程中，易產生冷凝水，為防止水珠滴在培養(yǎng)基表面造成污染，培養(yǎng)時需將平板倒置。(4)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，要以菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄為最終結果，這樣可以防止因遺漏而導致統(tǒng)計結果偏小。答案：(1)瓊脂前(2)玻璃器皿和金屬用具(3)6倒置避免培養(yǎng)基被污染和防止培養(yǎng)基水分過快揮發(fā)(4)菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄3臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}：(1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用_法或_法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。(2)取該單菌落適當稀釋，用_法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。(3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A_；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B_；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明_；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的_。(4)根據(jù)上述實驗結果，為達到抗菌目的，最好應選用抗生素_。解析：(1)實驗室中對微生物純化培養(yǎng)時，常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)若讓已經獲得的單個菌落在固體培養(yǎng)基上大量且均勻繁殖，常用玻璃涂布器把稀釋的菌液均勻涂滿整個平板。(3)對某種抗生素越敏感的致病菌，在該抗生素存在的范圍內，越不易生存，形成的透明圈就越大。但是，如果在透明圈中還有菌落生存，則說明這個菌落的細菌耐藥性很強。(4)通過(3)可知，在應用時，要想殺死某致病菌，就得選擇能使該致病菌大量死亡，即產生的透明圈大的那種抗生素。答案：(1)平板劃線稀釋涂布平板(2)稀釋涂布平板(3)敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A的弱耐藥菌(4)A4(2018·吉林長春模擬)下面是篩選抗鏈霉素大腸桿菌的實驗步驟及相關圖解。實驗步驟：把大量對鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基1的表面，進行培養(yǎng)。待其長出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基3上，進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)基3上出現(xiàn)了個別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。請回答下列問題：(1)配制培養(yǎng)基時除了滿足基本的營養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質、_、_的要求。(2)從功能上看，含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍，則培養(yǎng)皿中長出的菌落顏色為_。由圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為_。(3)對培養(yǎng)基2和3進行比較，在培養(yǎng)基2上找到與3上相應的菌落，挑取其中一個菌落接種到_(填“含鏈霉素”或“不含鏈霉素”)的培養(yǎng)基上，如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之_(填“前”或“后”)。(4)培養(yǎng)基3中的菌落比1、2中的菌落少很多，這說明基因突變具有_的特點。解析：(1)配制培養(yǎng)基時在提供幾種基本營養(yǎng)條件的基礎上，還需滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。(2)鏈霉素是抗生素，對大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落顏色為黑色。由題圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為稀釋涂布平板法。(3)培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基3上相同的菌落，是具有相同性狀的大腸桿菌形成的，將培養(yǎng)基2中一個相應菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)較多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前。(4)抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變后獲得的性狀，3號培養(yǎng)皿中的菌落比1號、2號中的菌落少很多，這說明基因突變頻率很低。答案：(1)pH氧氣(2)選擇黑色稀釋涂布平板法(3)含鏈霉素前(4)低頻性5(2018·河北邯鄲一模)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是_，這種培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的_。實驗需要振蕩培養(yǎng)，由此推測“目的菌”的代謝類型是_。(3)在上述實驗操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關鍵是_。(4)轉為固體培養(yǎng)基時，常采用平板劃線的方法進行接種，此過程中所用的接種工具是_，操作時采用的滅菌方法是_。(5)實驗結束后，使用過的培養(yǎng)基應該進行滅菌處理才能倒掉，這樣做的目的是_。(6)某同學計劃統(tǒng)計污水池中“目的菌”的總數(shù)，他選用104、105、106稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設置了3個培養(yǎng)皿，從設計實驗的角度看，還應設置的一組對照實驗是_，此對照實驗的目的是_。解析：(1)該實驗的目的是篩選“目的菌”，故培養(yǎng)基中添加的化合物A起選擇作用。(2)微生物正常生長需要碳源、氮源、無機鹽等，由培養(yǎng)基中添加的物質種類知：化合物A應該給微生物生長提供碳源、氮源。培養(yǎng)過程需振蕩，說明目的菌是需氧型微生物。(6)統(tǒng)計污水池中的“目的菌”時應設置空白對照，以用于檢驗培養(yǎng)基是否滅菌嚴格。答案：(1)篩選目的菌選擇(2)化合物A異養(yǎng)需氧型(3)防止外來雜菌污染(4)接種環(huán)灼燒滅菌(5)防止造成環(huán)境污染(6)不接種的空白培養(yǎng)基檢驗培養(yǎng)基滅菌是否合格21