2018屆高考生物一輪復(fù)習(xí) 考點加強課7 微生物的篩選、鑒定、分離與計數(shù)學(xué)案

考點加強課7 微生物的篩選、鑒定、分離與計數(shù)從近五年全國卷高考看，生物技術(shù)實踐專題的命題絕大多數(shù)立足于微生物培養(yǎng)、應(yīng)用、分離、計數(shù)等。答題過程中須明確所有操作都要圍繞著“目的”進行：（1）如果實驗?zāi)康氖欠蛛x某種特定的目標(biāo)微生物；關(guān)鍵點在于如何依據(jù)該微生物某方面特點制備特定選擇培養(yǎng)基；（2）如果是測定細(xì)菌的數(shù)量，則必須明確可能會引發(fā)數(shù)量變化誤差的操作（稀釋時的倍數(shù)、接種過程的無菌操作）備考時務(wù)必強化“選擇”與“鑒定”的界定及實驗方案制定，同時必須熟練把握計數(shù)方法及公式套用等?！纠C】 （2014·全國卷）植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}。（1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將分解成。（2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時，CR可與纖維素形成色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的。（3）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見下表）：酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：“”表示有，“”表示無。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是；培養(yǎng)基乙（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。解析（1）纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，如下圖：（2）剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過觀察是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。（3）分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，且需以纖維素為唯一碳源。答案（1）纖維二糖葡萄糖（2）紅透明圈（3）不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌1.分離微生物的原理與措施（1）原理：自然環(huán)境中的微生物是混雜在一起的，因此分離獲得純培養(yǎng)物應(yīng)首先采用的方法是將單個的細(xì)胞與其他細(xì)胞分離，再給細(xì)胞提供合適的營養(yǎng)和條件，使其生長成為可見的群體。（2）常用措施接種過程中盡量使細(xì)胞分散開來，如平板劃線法、稀釋涂布平板法。運用選擇培養(yǎng)基的作用特點，在培養(yǎng)基中添加某種特定的物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，促進所需微生物的生長。2.選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或?qū)嵗旅媸呛Y選抗鏈霉素大腸桿菌的實驗步驟及相關(guān)圖解。實驗步驟：把大量對鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基1的表面，進行培養(yǎng)。待其長出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基3上，進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)基3上出現(xiàn)了個別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。請回答：（1）配制培養(yǎng)基時除了滿足基本的營養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)、的要求。（2）從功能上看，含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍，則培養(yǎng)皿中長出的菌落顏色為。由圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為_。（3）對2和3進行比較，在2上找到與3上相應(yīng)的菌落，挑取其中一個菌落接種到（填“含鏈霉素”或“不含鏈霉素”）的培養(yǎng)基上，如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之（填“前”或“后”）。（4）3中的菌落比1、2中的菌落少很多，這說明了基因突變具有的特點。解析（1）配制培養(yǎng)基時在提供幾種基本營養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，還需滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。（2）鏈霉素是抗生素，對大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍培養(yǎng)基上.大腸桿菌菌落顏色為黑色。由題圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為稀釋涂布平板法。（3）培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基3上相同的菌落，是具有相同性狀的大腸桿菌形成的，將培養(yǎng)基2中一個相應(yīng)菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)較多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前。（4）抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變后獲得的性狀.3號培養(yǎng)皿中的菌落比1號、2號中的菌落少很多，這說明了基因突變頻率很低。答案（1）pH氧氣（2）選擇黑色稀釋涂布平板法（3）含鏈霉素前（4）頻率低/低頻性影印法接種的具體過程是：將待測的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長好后作為母平板（每個平板上的菌落控制在30300個）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應(yīng)，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應(yīng)位置的母平板上選出待測的突變型菌落。影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應(yīng)的環(huán)境因素?zé)o關(guān)而設(shè)計的接種方法，目前已廣泛應(yīng)用于營養(yǎng)缺陷型微生物的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中?！纠C】 （2014·全國卷，39）為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}：（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是_；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為。（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌，操作時，接種環(huán)通過滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是_。（3）示意圖A和B中，表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。（4）該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高的利用率。解析（1）在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間，檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；每升水樣中的活菌數(shù)為：（393837）/338，再除以0.1乘以100，得到1毫升中的菌數(shù)，再乘以1000就是1升中的菌數(shù)，故為3.8×107。（2）用平板劃線法應(yīng)先將接種環(huán)灼燒滅菌再劃線。第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，達到稀釋的目的，使得最后能夠得到單個菌落。（3）根據(jù)圖示可知，B為稀釋涂布平板法接種后培養(yǎng)得到的菌落。（4）振蕩的作用相當(dāng)于攪拌，可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。答案（1）檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8×107（2）灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落（3）B（4）溶解氧營養(yǎng)物質(zhì)微生物計數(shù)的方法專項歸納1.間接計數(shù)法（也叫活菌計數(shù)法）常用的是稀釋涂布平板法。（1）原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。（2）操作：設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計算菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實值，可將同一稀釋度的樣液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù)。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30300個的平板進行計數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實驗。計算公式：每克樣品中的細(xì)菌數(shù)（C/V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。提醒此種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。這是因為當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。2.顯微鏡直接計數(shù)法（1）原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定面積（1 mm2）和高（0.1 mm）的計數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個（或16個）中格，每個中格進一步劃分成16個（或25個）小格，但計數(shù)室都是由400個小格組成的。（2）操作：將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，稍等片刻，待細(xì)菌全部沉降到計數(shù)室底部再在顯微鏡下統(tǒng)計45個中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。（3）計算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù)。 3.濾膜法以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例，將已知體積的水過濾后，將濾膜放于伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。（2017·吉林松原模擬）研究人員用有機化合物X、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基成功地從土壤中篩選出能高效降解有機化合物X的細(xì)菌（目的菌）。下圖是從土壤中篩選出該細(xì)菌的過程示意圖，下表是分離純化的結(jié)果。請回答下列問題：記錄項目：透明圈直徑/菌落直徑菌落編號12348小時1.62.83.072小時2.21.25.096小時2.31.24.2（1）培養(yǎng)基中的有機化合物X主要為目的菌提供等營養(yǎng)要素。從土壤中富集能有效降解有機化合物X的細(xì)菌時，應(yīng)選用（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基。（2）配制成10倍稀釋液時，用無菌移液管從富集液中吸取1 mL，移入盛有mL無菌水的試管中，并依次配制1021010的梯度稀釋液。（3）在分離、純化過程中，圖中過程接種的方法分別為、。在倒平板前，應(yīng)對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌，滅菌方法是。（4）分析菌種的分離純化結(jié)果，應(yīng)選擇號菌落進行擴大生產(chǎn)，原因是_。解析（1）篩選微生物用選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的有機化合物X主要為目的菌提供碳源、氮源等營養(yǎng)要素，不能降解有機化合物X的微生物不能生存。從土壤中富集能有效降解有機化合物X的細(xì)菌時，應(yīng)選用液體培養(yǎng)基，有利于富集培養(yǎng)。（2）配制成10倍稀釋液時，用無菌移液管從富集液中吸取1 mL，移入盛有9 mL無菌水的試管中，并依次配制1021010的梯度稀釋液。（3）在分離、純化過程中，微生物接種方法常用稀釋涂布平板法、平板劃線法。在倒平板前，對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法。（4）由于目的菌能有效降解有機化合物X產(chǎn)生透明圈，透明圈直徑/菌落直徑越大，說明降解有機化合物X的能力越強，因此應(yīng)選擇3號菌落進行擴大生產(chǎn)。答案（1）碳源（或碳源、氮源）液體（2）9（3）稀釋涂布平板法平板劃線法高壓蒸汽滅菌法（4）3透明圈直徑/菌落直徑越大，降解有機化合物X的能力越強隨堂·真題&預(yù)測1.（2014·四川理綜，節(jié)選）有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。（1）微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、四類，該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。（2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和，這些植物激素一般需要事先單獨配制成保存?zhèn)溆?。?）為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設(shè)是，該實驗設(shè)計是否合理？為什么？。解析（1）微生物生長所需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括：碳源、氮源、水和無機鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因為它是允許特定的微生物生長和增殖，同時又能抑制或阻止其他微生物的生長和增殖的培養(yǎng)基，該實驗所用培養(yǎng)基只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生長和增殖。（2）植物組織培養(yǎng)常需要添加的植物激素有生長素和細(xì)胞分裂素，調(diào)整二者的比例可以誘導(dǎo)脫分化和再分化。MS培養(yǎng)基的成分一般先分別配制成母液備用。（3）題中實驗為將該菌種的培養(yǎng)液過濾后離心，取上清液加入蛋白酶處理后，測得其對苯磺隆的降解率，意為假設(shè)目的菌種能產(chǎn)生降解苯磺隆的蛋白質(zhì)，若用蛋白酶處理后，可使該蛋白質(zhì)分解，苯磺隆降解率下降，則假設(shè)成立。但由于缺乏空白對照，不能比較蛋白酶處理是否降低苯磺隆降解率，該實驗不能得出相應(yīng)結(jié)論。答案（1）氮源和無機鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長和繁殖（2）細(xì)胞分裂素母液（3）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對照2.（2019·高考預(yù)測）纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素?；卮鹣铝袉栴}：（1）在篩選纖維素分解菌的過程中，通常用染色法，這種方法能夠通過顏色反應(yīng)直接對纖維素分解菌進行篩選。甲同學(xué)在實驗時得到了如圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于。A. B.C. D.（2）乙同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計數(shù)，與分離醋酸菌相比，進行培養(yǎng)時除了營養(yǎng)不同，最主要的實驗條件差別是_。該同學(xué)采用活菌計數(shù)法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目_。（3）丙同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過程中，為了抵制外界酸和堿對酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加。若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設(shè)置對照？ _。解析（1）剛果紅與纖維素形成的紅色復(fù)合物在纖維素被分解后將不再形成，則在培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。（2）牛胃是一個厭氧環(huán)境，所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌相比培養(yǎng)條件有所不同。因是活菌計數(shù)法，所以當(dāng)兩個或多個細(xì)菌連在一起時平板上只觀察到一個菌落，所以菌落數(shù)目比實際的少。（3）探究最適溫度可設(shè)置一系列的溫度梯度進行相互對照，其他無關(guān)變量要保持相同且適宜。答案（1）剛果紅A（2）保證無氧環(huán)境少（低）（3）緩沖溶液設(shè)置一系列的溫度梯度進行相互對照（時間：30分鐘滿分：100分）1.（2017·河南十所名校聯(lián)考，23）如圖表示研究者從土壤中篩選分解尿素的細(xì)菌并計數(shù)的相關(guān)實驗，請據(jù)圖回答下列問題：（1）進行過程和的目的分別是和；圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是。（2）進行培養(yǎng)基配制和滅菌時，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是_。倒平板時，待平板冷卻凝固后，應(yīng)將平板倒過來放置，并用記號筆在皿底上標(biāo)明培養(yǎng)微生物名稱、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、制作者姓名、培養(yǎng)日期及等信息。純化菌種時為了得到單一菌落，常采用的接種方法是和。（3）在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入。培養(yǎng)后，若出現(xiàn)色就可以鑒定其中含有能夠分解尿素的細(xì)菌。（4）研究者可以通過觀察培養(yǎng)形成的菌落的、隆起程度等特征，來判斷培養(yǎng)基上是否感染了其他細(xì)菌。在實驗中，研究者每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止_。解析（1）根據(jù)圖示過程可知，和的目的分別是選擇培養(yǎng)、增加分解尿素細(xì)菌的數(shù)量。圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是挑出分解尿素細(xì)菌的菌落。（2）配制培養(yǎng)基和滅菌時，應(yīng)該是先調(diào)pH，再進行滅菌。培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)日期、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、培養(yǎng)微生物名稱及制作者姓名等信息要用記號筆在皿底上標(biāo)明。純化菌種時為了得到單一菌落，常采用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（3）分解尿素的細(xì)菌鑒定時應(yīng)該加入酚紅指示劑，培養(yǎng)過程中pH升高，酚紅指示劑會變?yōu)榧t色，原因是細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的堿性增強，出現(xiàn)紅色說明含有能夠分解尿素的細(xì)菌。（4）可以根據(jù)菌落特征來判斷不同的細(xì)菌，菌落特征一般體現(xiàn)在形狀、大小、顏色和隆起程度。實驗中，研究者每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目。答案（1）選擇培養(yǎng)增加分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量挑出菌落（2）先調(diào)節(jié)pH后滅菌培養(yǎng)基種類平板劃線法稀釋涂布平板法（后兩空位置可顛倒）（3）酚紅指示劑紅 （4）形狀、大小、顏色因培養(yǎng)時間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目2.（2017·河南十所名校聯(lián)考，37）微生物的培養(yǎng)在生物科學(xué)史和現(xiàn)代生物工程中都是極其重要的基礎(chǔ)技術(shù)。下圖1是某學(xué)生重復(fù)艾弗里證明DNA是遺傳物質(zhì)實驗的其中一組實驗；下圖2是基因工程中運用影印法將培養(yǎng)基A上的菌落按原來方向印在培養(yǎng)基B上，以檢測重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌的示意圖。請據(jù)圖回答下列相關(guān)問題：（1）圖1、圖2的培養(yǎng)結(jié)果顯示，兩實驗中使用的都是（填物理狀態(tài)）培養(yǎng)基。（2）在配制圖2中的培養(yǎng)基時，除考慮營養(yǎng)、pH、滲透壓等條件外，還要考慮在培養(yǎng)基A和B中加入（填“相同”或“不同”）種類的抗生素。在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，下列選項不需要的是（填序號）。酒精燈 接種環(huán) 高壓蒸汽滅菌鍋 培養(yǎng)皿（3）培養(yǎng)基滅菌是避免雜菌污染的有效手段之一，適用于圖1、圖2所示培養(yǎng)基的滅菌方法是_；接種前還需檢測滅菌效果，方法是將置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。（4）實驗證明，上述兩項實驗中R型菌和大腸桿菌的轉(zhuǎn)化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結(jié)果，一是要設(shè)法提高圖1中S型菌的；二是要使用恰當(dāng)?shù)姆椒ń臃N。兩實驗都不能用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種，而應(yīng)采用不加稀釋的涂布平板法接種R型菌和大腸桿菌，理由是_。接種培養(yǎng)4天后，可通過觀察的形態(tài)特征來識別R型菌和大腸桿菌。解析本題考查微生物的培養(yǎng)與分離的知識，旨在考查考生的理解能力和獲取信息的能力。（1）從圖1、圖2可以看出，兩實驗中使用的都是固體培養(yǎng)基。（2）要檢測重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌，檢測的依據(jù)一般是重組質(zhì)粒的抗性發(fā)生了改變，因此在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中應(yīng)加入不同種類的抗生素。在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，不需要接種環(huán)。（3）對培養(yǎng)基滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法，接種前需要檢測滅菌效果，其方法是進行空白對照，將未接種的培養(yǎng)基置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。（4）上述兩項實驗中R型菌和大腸桿菌的轉(zhuǎn)化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結(jié)果，一是要提高圖1中S型菌的DNA純度；二是要使用恰當(dāng)?shù)姆椒ń臃N，不選用平板劃線法和稀釋涂布平板法，而采用不加稀釋的涂布平板法接種R型菌和大腸桿菌，是因為這兩種方法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉(zhuǎn)化成功的菌落。識別不同類型的細(xì)菌，一般可通過觀察菌落的特征來加以區(qū)分。答案（1）固體（2）不同（3）高壓蒸汽滅菌法未接種的培養(yǎng)基（4）DNA純度平板劃線法和稀釋涂布平板法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉(zhuǎn)化成功的菌落菌落3.（2017·開封市三模，37）有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：（1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。（2）制備培養(yǎng)基時需采取方法滅菌，目的是_。（3）純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，下面兩圖是兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解。獲得圖A效果的接種方法是_，獲得圖B效果的接種方法是_?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)某一培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是_。（4）在進行分離該菌實驗時，某同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個菌落。該同學(xué)的實驗結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有（填序號）由于土樣不同由于培養(yǎng)基污染由于操作失誤沒有設(shè)置對照答案（1）原油選擇（2）高壓蒸汽滅菌殺死微生物及芽孢（3）稀釋涂布平板法平板劃線法菌液濃度過高（或培養(yǎng)過程被雜菌污染，或用接種針劃下一區(qū)域前接種針沒有滅菌導(dǎo)致菌液沒有稀釋開等）（4）4.（2017·安陽市二模，37）“口嚼酒”因日本著名動畫電影導(dǎo)演新海誠的新作你的名字而引起人們的關(guān)注。世界上有些地方很早就有口嚼酒的記載。請回答下列相關(guān)問題：（1）口嚼酒的做法是：首先需要將米煮熟，然后放入口中咀嚼一段時間，直至米粒變?yōu)楹隣睿賹⑵渫氯胩刂迫萜髦?，令其發(fā)酵，經(jīng)過幾天便成為甜酸味的酒。上述的制作過程中，“咀嚼”可能具有兩個作用，分別是 和。參與口嚼酒形成初期的微生物主要是來自空氣中的，末期形成酸味，可能是因為密封不嚴(yán)，產(chǎn)生了等物質(zhì)。（2）口嚼酒是一種自釀酒，不僅品質(zhì)不高，而且衛(wèi)生條件難以把握，會有雜菌滋生的危險。某生物興趣小組想探究口嚼酒制作過程中會滋生哪些微生物，進行了進一步的實驗，實驗步驟如下：制作口嚼酒。制作培養(yǎng)基：計算稱量溶化倒平板。接種：每天同一時間將口嚼酒液體搖勻后按照圖1和圖2的方法進行操作，該方法是。并在每天接種的培養(yǎng)皿上注明培養(yǎng)日期，最后將所有培養(yǎng)基放在相同且適宜的環(huán)境下培養(yǎng)。經(jīng)過一段適宜的時間后，觀察不同培養(yǎng)基上的菌落數(shù)和菌落的形態(tài)，并進行品種鑒定。圖3是三個不同時間獲得的培養(yǎng)基，其時間先后為（填字母）。上述實驗在時間上形成前后對照，但是還需要設(shè)置一個空白對照，目的是_。（3）興趣小組成員在實驗后期看到培養(yǎng)基上長滿了許多雜菌菌落，若他們采用圖4的方法對雜菌中的目的菌進行純化，則在（填數(shù)字）區(qū)最可能獲得純凈的目的菌。答案（1）增大酶與米飯的接觸面積，有利于發(fā)酵使唾液淀粉酶將米飯中的淀粉分解成麥芽糖酵母菌醋酸（2）滅菌（或高壓蒸汽滅菌）稀釋涂布平板法B、C、A檢驗培養(yǎng)基滅菌是否合格（3）513