（浙江專版）2019版高考生物一輪復(fù)習(xí) 第29講 微生物的利用、淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)學(xué)案

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1、 第29講　微生物的利用、淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 章 知識內(nèi)容 考試屬性及要求 考查頻率 加試 微生物的利用 1.大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 2.分離以尿素為氮源的微生物 實驗與探究能力 (1)能獨立完成“生物知識內(nèi)容表”所列的生物實驗(活動)，包括理解實驗?zāi)康?、原理、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實驗涉及的方法和技能進行綜合運用。 (2)具備驗證簡單生物學(xué)事實的能力，能設(shè)計實驗，提出或完善實驗思路，能對實驗現(xiàn)象和結(jié)果進行處理、分析和解釋。 (3)具有對一些生物學(xué)問題進行初步探究的能力，能提出問題、做出假設(shè)和預(yù)期、確認(rèn)變量、設(shè)計實驗方案、處理和解釋數(shù)據(jù)、做出合理的

2、判斷，能對一些簡單的實驗方案做出恰當(dāng)?shù)脑u價和修訂。 2015年10月第32題(1)(3分) 2016年10月第32題(一)(7分) 2017年4月第32題(一)(1)(2分) 酶的應(yīng)用 3.果汁中的果膠和果膠酶 4.α－淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測 2016年4月第32題(一)(7分) 2016年10月第32題(一)(4)(1分) 生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用 5.果酒及果醋的制作 6.泡菜的腌制和亞硝酸的測定 2017年4月第32題(一)(2)(3)(5分) 淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 7.植物的組織培養(yǎng) 2015年10月第32題(3)(5)(3分) 考點一　

3、微生物的利用 一、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 1.大腸桿菌 (1)特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌。 (2)細菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。 2.細菌的擴大培養(yǎng) 擴大培養(yǎng)用LB液體培養(yǎng)基。 3.分離 劃線分離用LB固體平面培養(yǎng)基。 培養(yǎng)基滅菌 ↓ 倒平板 ↓ 接種 ↓ 劃線分離 ↓ 培養(yǎng)觀察 ↓ 菌種保存 50 mL LB液體培養(yǎng)基和50 mL LB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌 將培養(yǎng)基分別倒入4個滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面 在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12 h 用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液

4、一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24 h，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個菌落 在無菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在斜面上，37 ℃培養(yǎng)24 h后，置于4__℃冰箱中保存 4.消毒和滅菌比較 條件 結(jié)果 常用方法 應(yīng)用范圍 消毒 較為溫和的物理或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物 紫外線消毒法 接種室、超凈臺 化學(xué)藥劑消毒法 用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源 滅菌 強烈的理化因素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼燒滅菌法 接種工具

5、 干熱滅菌法 玻璃器皿、金屬工具 高壓蒸汽滅菌法 培養(yǎng)基及容器的滅菌 過濾除菌 不能加熱滅菌的化合物，要用G6玻璃砂漏斗過濾 二、分離以尿素為氮源的微生物 1.菌種特點 含有脲酶，可以通過降解尿素作為其生長的氮源。 2.培養(yǎng)基 用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)，以LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基為對照。 3.實驗原理 (1)篩選以尿素為氮源的微生物，可使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)選擇。 (2)細菌合成的脲酶能將尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚紅指示劑變紅。 4.實驗步驟 制備培養(yǎng)基：將已滅菌的LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基分別倒入兩個培養(yǎng)皿中，搖勻，平放至凝固 ↓

6、 制備細菌懸液：用1 g土樣和無菌水配制不同濃度的細菌懸液 ↓ 用涂布分離法分離細菌：將不同濃度的土壤稀釋液分別加入到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每個濃度分別各接種到三個培養(yǎng)皿中，并用玻璃刮刀涂布到整個平面上 ↓ 培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿倒置，在37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48 h ↓ 觀察：培養(yǎng)基中菌落數(shù)量 5.反應(yīng)的鑒定 在配制培養(yǎng)基時，加入指示劑酚紅，培養(yǎng)時細菌將尿素分解產(chǎn)生堿性的氨，使培養(yǎng)基上菌落周圍出現(xiàn)紅色的環(huán)帶。 6.微生物接種的兩種常用方法比較 比較 劃線分離法 涂布分離法 工具 接種環(huán) 玻璃刮刀 原理 通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將

7、聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細菌細胞繁殖而來的肉眼可見的細胞群體，即菌落 將菌液用無菌水進行梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別用涂布器涂布到固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細菌細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落 特點 方法簡單，但不適宜計數(shù) 單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些 目的 使培養(yǎng)基上形成單個細菌細胞繁殖而來的子細胞群體——菌落 1.(2015·10月浙江選考　節(jié)選)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉(zhuǎn)入矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛。請回答： …用____

8、____的玻璃刮刀將稀釋后的大腸桿菌液________接種到含有抗生素的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)形成________，再進行鑒定和擴大培養(yǎng)。 解析　在細菌涂布分離時，采用滅菌的玻璃刮刀將稀釋后的菌液均勻涂布在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)形成單菌落，再進行鑒定和擴大培養(yǎng)。 答案　滅菌　涂布　菌落 2.(2016·10月浙江選考　節(jié)選)請回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細菌和脲酶固定化實驗的有關(guān)問題： (1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。 (2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因

9、為G6玻璃砂漏斗________________，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。 (3)取適量含產(chǎn)脲酶細菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)量最少的是________。 A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基 B.10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基 C.10－4稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基 D.10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基 在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細菌菌落周圍出現(xiàn)________，其原因是細菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生________所致。 解析　(1)本實驗中

10、的LB培養(yǎng)基是要與尿素培養(yǎng)基作對比的，所以要用瓊脂糖替換瓊脂。(2)尿素培養(yǎng)基的滅菌要分開進行，除尿素外的其他成分仍用高壓蒸汽滅菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗過濾除菌，再將除菌的尿素加到已滅菌的其他成分中。G6玻璃砂漏斗由于孔徑小，細菌不能濾過，可用于過濾除菌，但需要在使用前進行高壓蒸汽滅菌。(3)由于在土壤中產(chǎn)脲酶的細菌遠小于普通細菌，所以在尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)相對少得多，另外稀釋倍數(shù)高的土壤稀釋液中細菌數(shù)量少，在培養(yǎng)基上菌落數(shù)也相對少。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細菌菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是因為脲酶催化尿素分解產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑在堿性下呈紅色。 答案　(1)瓊脂糖　(2)高壓

11、蒸汽　孔徑小，細菌不能濾過　(3)A　紅色環(huán)帶　氨(或NH3) 3.(2017·4月浙江選考　節(jié)選)回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關(guān)的問題： 制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用無菌蒸餾水稀釋后，再用________蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。下圖所示的劃線分離操作，正確的是________。 解析　從酸奶中分離乳酸菌時，可采用劃線分離，方法是用接種環(huán)蘸取少量的稀釋液，在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基的平板上劃線，以獲得乳酸菌單菌落。圖示的劃線分離中B圖方法是正確的，A圖不分區(qū)劃線，但劃線太稀疏了，分離效果很差，B

12、、C、D都采用了分區(qū)劃線，但C、D都沒有注意除第一區(qū)外，之后每區(qū)劃線的第一條線都需要從上一區(qū)劃線的末端開始。 答案　接種環(huán)　B 本題組對應(yīng)選修一P19～P28，微生物的利用 1.大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌，是基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具。 2.培養(yǎng)基是指微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)，一般都含有五大營養(yǎng)要素：即：水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子。一般來講，“細菌喜葷、霉菌喜素”，大腸桿菌一般采用LB培養(yǎng)基，其主要成分為蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水等，若要擴大培養(yǎng)，則采用LB液體培養(yǎng)基，若要分離獲得純種，則 采用LB固體培養(yǎng)基，這兩者的主要區(qū)別在于后者加入了瓊脂。霉菌培養(yǎng)

13、基一般用無機物配制成或添加蔗糖的豆芽汁。 3.單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一。常用的分離方式有劃線分離法、涂布分離法兩種。它們都采用固體平面培養(yǎng)基。其中涂布分離法單菌落更易分開，并且可用來計數(shù)菌體數(shù)目，但操作復(fù)雜些，且往往要先將培養(yǎng)的菌液稀釋；而劃線分離操作簡單，但不能用于計數(shù)。 4.菌種保存往往選用固體斜面培養(yǎng)基，于4__℃冰箱中保存。用灼燒后的接種環(huán)從斜面取菌種時，往往要先使接種環(huán)接觸培養(yǎng)基以達到冷卻的目的，然后再取菌體。 5.接種完成后應(yīng)將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，目的是：防止水蒸氣凝結(jié)成的水滴落入培養(yǎng)基表面沖散菌落，影響單菌落的形成和分離。

14、 6.滅菌操作：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、槍頭、接種環(huán)、鑷子等用具通常用高壓蒸汽滅菌，這些用具通常需要用牛皮紙或報紙包好，其中容器先要用棉塞或封口膜封口再包好，放入滅菌鍋中，在121 ℃(1__kg/cm2壓力)下滅菌15 min。實驗用的棉花不能用脫脂棉，因脫脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。如果培養(yǎng)基中有葡萄糖，為防止葡萄糖分解碳化，要用500 g/cm2壓力(90 ℃以上)滅菌 30 min。由于尿素加熱會分解，只能用G6玻璃砂漏斗過濾除菌，但玻璃砂漏斗使用前也要在121 ℃下用紙包好滅菌，用后還需用1 mol/L的HCl浸泡，并抽濾去酸，再用蒸餾水洗至洗出液呈中性，干燥后保存。將培

15、養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶和試管中時必須用三角漏斗，以免培養(yǎng)基沾到三角瓶口和試管口，發(fā)生污染。 7.無菌操作通常在超凈臺中進行，超凈臺使用前30 min，打開紫外燈和過濾風(fēng)，注意打開紫外燈后人必須離開，使用時必須關(guān)閉紫外燈。 角度　微生物的利用 1.(2017·嘉興期末　節(jié)選)下列有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實驗，請回答： (1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時，根據(jù)“細菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和________作為營養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的________。 (2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實驗中，在________中進行擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)________后，在L

16、B固體培養(yǎng)基上進行________，并將培養(yǎng)皿________放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果。為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及________，應(yīng)同時將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 (3)通常對獲得的純菌種可以依據(jù)________的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。 (4)關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中，下列敘述正確的是________。 A.高壓滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B.倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C.為了防止污染，接種工具經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D.用記號筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)

17、標(biāo)記在皿底上 解析　(1)配制培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基通常用LB培養(yǎng)基，其成分有蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水等，固體培養(yǎng)基還有瓊脂。其中蛋白胨、酵母提取物提供營養(yǎng)，NaCl提供無機鹽并調(diào)節(jié)滲透壓，瓊脂是凝固劑。(2)細菌培養(yǎng)通常用LB液體培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)和生產(chǎn)，用固體培養(yǎng)基進行分離、鑒定、保存菌種。菌種分離有劃線法和涂布法，進行涂布分離時，選稀釋菌液，再進行涂布，完成后將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可獲得分布均勻的單菌落。為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及培養(yǎng)基滅菌是否徹底，應(yīng)同時將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(3)菌落的形狀、大小等特征可以作為鑒定的依據(jù)。(4)高壓滅菌加熱結(jié)

18、束后，自然冷卻待壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋，A錯誤；倒平板時，應(yīng)將打開上蓋的一邊，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，再蓋上培養(yǎng)皿上蓋，將培養(yǎng)皿置于水平位置，輕輕晃動，使培養(yǎng)基鋪滿底部，待其凝固，B錯誤；接種時接種工具經(jīng)灼燒滅菌后，需先接觸培養(yǎng)基使其冷卻后，再挑取菌落，C錯誤；由于培養(yǎng)皿是倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的，所以用記號筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D正確。 答案　(1)酵母提取物　NaCl　(2)LB液體培養(yǎng)基　稀釋　涂布分離　倒置　培養(yǎng)基滅菌是否徹底　(3)菌落　(4)D 2.(2017·金麗衢十二?！」?jié)選)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α－淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌

19、中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種(過程如圖1所示) (1)圖1中，為達到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以______作為唯一碳源。②③過程需重復(fù)幾次，目的是_____________________________________ ___________________________________________________________。 (2)某同學(xué)嘗試過程③的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖2所示。該同學(xué)的接種方法是________；推測該同學(xué)接種時可能的操作失誤是________。 (3)上述工程酵母菌培養(yǎng)過程中，有關(guān)操作正確的是______

20、__。 A.玻璃刮刀用火焰灼燒進行滅菌 B.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌 C.倒平板和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進行 D.獲得的菌種如果需要保存，可置于37 ℃恒溫保存 解析　(1)為篩選得到高效利用淀粉的工程酵母菌菌種，固體培養(yǎng)基應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。多次重復(fù)篩選是為獲得高效利用淀粉的工程酵母菌的純化菌種。(2)由圖2的結(jié)果表明，該同學(xué)采用的是涂布分離法，其操作的失誤是涂布不均勻，造成平板上菌落未均勻分布。(3)涂布操作用的玻璃刮刀通常保存在70%酒精中，使用前引燃酒精，火焰熄滅后待其冷卻后使用；培養(yǎng)基通常先滅菌，后趁熱倒平板；保存菌種通常使用斜面培養(yǎng)基，在4 ℃冰箱中保存；倒平板

21、和取菌液都必須在酒精燈火焰旁進行，這是無菌操作要求。 答案　(1)淀粉　篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種　(2)涂布分離法　涂布不均勻　(3)C 1.培養(yǎng)基的種類 劃分標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基種類 特點 用途 物理性質(zhì) 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn)、擴大培養(yǎng) 半固體培養(yǎng)基 加凝固劑，如瓊脂 觀察微生物的運動、分類、鑒定 固體培養(yǎng)基 微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種 化學(xué)成分 天然培養(yǎng)基 含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì) 工業(yè)生產(chǎn) 合成培養(yǎng)基 培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成) 分類、鑒定 用途 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，

22、以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長 培養(yǎng)、分離出特定微生物 鑒別培養(yǎng)基 根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 鑒別不同種類的微生物 2.培養(yǎng)基營養(yǎng)要素 基本營養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽。此外還要滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。 營養(yǎng)要素 來源 功能 碳源 無機碳源 CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無機物 ①構(gòu)成細胞中的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；②既是碳源又是能源 有機碳源 糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機酸、石油、花生粉餅等 氮源 無機氮源 無機氮：NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等 將

23、無機氮合成含氮的代謝產(chǎn)物 有機氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物 生長因子 維生素、氨基酸、堿基 ①酶和核酸的組成成分；②參與代謝過程中的酶促反應(yīng) 考點二　淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 1.植物組織培養(yǎng)的原理 (1)理論基礎(chǔ)：植物細胞具有全能性。 (2)植物組織培養(yǎng)的基本過程 (3)植物組織培養(yǎng)影響因素 ①選材：不同植物組織或同一植物組織的不同部分，培養(yǎng)的難易程度差別很大，菊花的組織培養(yǎng)，一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。 ②培養(yǎng)基：植物組織培養(yǎng)需要適宜的培養(yǎng)基，常用的是MS培養(yǎng)基，在配制好的培養(yǎng)基中，常常需要添加生長素和細胞

24、分裂素兩種植物激素。實驗中使用的生長素類似物是萘乙酸(NAA)，細胞分裂素類似物是芐基腺嘌呤(BA)。 ③其他條件：pH、溫度和光照等條件對植物組織培養(yǎng)也很重要。 2.菊花組織培養(yǎng)過程 制備MS固體培養(yǎng)基：配制好的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌 ↓ 外植體消毒：自然生長的莖離體→用70%的乙醇浸泡10 min→再用5%的次氯酸鈉浸泡5 min→再用另一5%的次氯酸鈉浸泡5 min→最后用無菌水清洗 ↓ 接種：始終在酒精燈火焰旁進行，對接種工具要用灼燒滅菌 ↓ 生芽培養(yǎng)：①培養(yǎng)基：發(fā)芽培養(yǎng)基(MS＋BA＋NAA)； ②培養(yǎng)條件：溫度為18～25 ℃；光照≥14.5 h/d；pH為5.

25、8～6.0； ③培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：健壯的叢狀苗 ↓ 生根培養(yǎng)：①培養(yǎng)基：生根培養(yǎng)基(MS＋NAA)； ②培養(yǎng)條件與發(fā)芽培養(yǎng)相同 ↓ 煉苗：①培養(yǎng)基：草炭土或蛭石； ②培養(yǎng)條件：2～3 d內(nèi)濕度控制為80%；2～3 d后逐漸降低濕度至自然濕度 ↓ 移栽(定植) (2015·10月浙江選考　節(jié)選)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉(zhuǎn)入矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛。請回答： (1)取田間矮牽牛的幼嫩葉片，經(jīng)自來水沖洗，先用70%________浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用________清洗，作為轉(zhuǎn)基因的受體材料。 (2)取出試管苗，在適宜的光照、溫度和8

26、0%以上的________等條件下進行煉苗。 解析　(1)用作組培的外植體若取自自然環(huán)境則需要消毒，方法是外植體經(jīng)自來水沖洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用無菌水清洗，才能用于接種。(2)組培時，試管苗需經(jīng)煉苗才能定植，煉苗時需將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，移栽至具適宜的光照、溫度和較低濕度的環(huán)境中。 答案　(1)酒精　無菌水　(2)濕度 本題組對應(yīng)選修一P59～P61，植物的組織培養(yǎng) 1.組織培養(yǎng)就是取一部分植物組織，如根、莖、花瓣、葉或花粉等，在無菌的條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基上，給予一定的光照和溫度，使之產(chǎn)生愈傷組織，或進而生根發(fā)芽。組織培養(yǎng)必須在培養(yǎng)基中加入生

27、長素和細胞分裂素。兩者的摩爾濃度比決定組織是生根還是生芽。當(dāng)細胞分裂素與生長素的比例高時，誘導(dǎo)芽的生成，兩者比例大致相等時，愈傷組織繼續(xù)生長而不分化；當(dāng)細胞分裂素與生長素的比例較低時，會趨于生根。 2.本實驗首先用細胞分裂素相對較多和生長素相對較少的發(fā)芽培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，獲得叢狀苗；然后將叢狀苗分株培養(yǎng)。分株后，再移入含較多生長素的生根培養(yǎng)基中，使其生根；將生根的苗從三角瓶中移至草炭土或蛭石中繼續(xù)生長；苗健壯后再移至土中。 角度　植物組織培養(yǎng) 1.某愈傷組織在如下圖甲所示的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后得到如圖乙所示的結(jié)構(gòu)，經(jīng)分析可知該培養(yǎng)基中(　　) A.細胞分裂素多，生長素少 B.

28、細胞分裂素少，生長素多 C.細胞分裂素和生長素用量相等 D.只有生長素 解析　從圖乙中可以看出該培養(yǎng)基有利于生根且抑制芽的形成，所以可推斷該培養(yǎng)基中生長素多，細胞分裂素少，B正確。 答案　B 2.(2016·溫州選考模擬　節(jié)選)卡那霉素和頭孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素還對葡萄細胞有抑制作用。研究人員將Barnase基因(雄性不育基因)轉(zhuǎn)入葡萄細胞，利用卡那霉素和頭孢霉素，通過植物克隆方法成功培育出大粒、無核的葡萄新品種。請回答： (1)構(gòu)建含Barnase基因、β－葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成________以便鑒定是否混有雜

29、菌，再用________將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB________培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)。 (2)將經(jīng)過________的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，4分鐘后取出(此時已有較多農(nóng)桿菌附著在葉片小塊上)并接種到固體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時，可以看到在葉片小塊周圍出現(xiàn)________和大量菌落。這時再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是________(A.抑制葡萄細胞脫分化　B.促進葡萄細胞再分化　C.殺滅農(nóng)桿菌　D.促進農(nóng)桿菌生長)。 (3)將葉片切成小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，轉(zhuǎn)移至生芽培養(yǎng)基中，待其長出________后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗?？敲顾嘏囵B(yǎng)

30、基起著________作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是________。 (4)在卡那霉素培養(yǎng)基中，由于轉(zhuǎn)化細胞對周圍的非轉(zhuǎn)化細胞有保護作用，獲得的試管苗中可能存在假的轉(zhuǎn)基因試管苗，因此還需對試管苗的________基因的表達產(chǎn)物進行生化檢測，才能鑒別出真正的轉(zhuǎn)基因試管苗。 (5)最后，對轉(zhuǎn)基因試管苗還需進行逐漸________濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。 解析　(1)構(gòu)建含Barnase基因、β－葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成單菌落以便鑒定是否混有雜菌，再用接種環(huán)將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB液體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)。(2)將經(jīng)過消毒的幼嫩葡萄葉片切成小

31、塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，然后取出并接種到固體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時，可以看到在葉片小塊周圍出現(xiàn)愈傷組織和大量菌落。這時再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是殺滅農(nóng)桿菌，從而獲得處理的葡萄葉片細胞。(3)將葉片小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得導(dǎo)入目的基因的葡萄葉片細胞，轉(zhuǎn)移至生芽培養(yǎng)基中，待其長出叢狀苗后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗?？敲顾嘏囵B(yǎng)基起著篩選導(dǎo)入目的基因的葡萄葉片細胞作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是植物組織培養(yǎng)。(5)最后，對轉(zhuǎn)基因試管苗還需進行逐漸降低濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。 答案　(1)單菌落　接種環(huán)　液體　(2)消毒　愈傷組織　C　(3)叢狀苗　篩選　植物組織培養(yǎng)

32、　(4)β－葡糖苷酸酶　(5)降低 生長素和細胞分裂素用量比例與根、芽的分化 生長素和細胞分裂素比值 結(jié)果 比值高時 促進根的分化，抑制芽的形成 比值低時 促進芽的分化，抑制根的形成 比值適中 促進愈傷組織的生長 (時間：40分鐘　分?jǐn)?shù)：100分) 1.檢驗飲用水的細菌含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請回答下列與檢驗飲用水有關(guān)的問題： (1)要測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)量，常采用________法，通常將水樣進行一系列的梯度________，然后將上述的水樣用涂布器分別涂布到________的表面進行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量。用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時_______

33、_(填“是”或“否”)需要對照組。原因：__________________________________________。 (2)下面所示的四種菌落分布圖中，不可能由上述方法得到的是________。 (3)大腸桿菌的培養(yǎng)條件是無菌，培養(yǎng)基配制時需加入氯化鈉，以維持________。配制培養(yǎng)基時先________(填“調(diào)節(jié)pH”或“滅菌”)后________(填“調(diào)節(jié)pH”或“滅菌”)。 解析　對細菌計數(shù)時通常用涂布法接種到LB固體培養(yǎng)基上，必要時要先對菌液稀釋再接種。因為需要判斷培養(yǎng)基使用之前是否被雜菌污染，所以需要空白對照組。D培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果說明是劃線法接種的。培養(yǎng)基配制時

34、，添加氯化鈉除提供無機鹽外還能調(diào)節(jié)滲透壓，配制培養(yǎng)基時通常先調(diào)節(jié)pH后滅菌。 答案　(1)涂布分離　稀釋　LB固體培養(yǎng)基　是　因為需要判斷培養(yǎng)基使用之前是否被雜菌污染(培養(yǎng)基滅菌是否合格)　(2)D　(3)滲透壓　調(diào)節(jié)pH　滅菌 2.(2017·3月稽陽聯(lián)考　節(jié)選)回答下列小題： 炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。對炭疽病疑似患者，可通過下圖所示鑒定炭疽桿菌的實驗進行確診，其中實驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌。 (1)若要從炭疽病疑似患者體內(nèi)分離出炭疽桿菌，可將患者皮膚膿胞滲出物稀釋后滴于培養(yǎng)基表面，用無菌玻璃刮刀涂勻，該接種方法稱為________。 (2)制備圖中的液體培養(yǎng)基

35、時需采取________法滅菌。接種可疑菌后，需將三角瓶置于35 ℃下的搖床上________培養(yǎng)24小時，可疑菌會大量繁殖，液體培養(yǎng)基變渾濁。 (3)圖中，對照組與實驗組試管同時培養(yǎng)6小時后，若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。此判斷的依據(jù)是______________________________________。 解析　(1)將細菌培養(yǎng)液滴于培養(yǎng)基表面，用無菌玻璃刮刀涂勻，這種接種方法稱為涂布分離法。(2)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌法滅菌。液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)時，需將三角瓶置于35 ℃下的搖床上振蕩培養(yǎng)2

36、4小時，細菌大量繁殖，導(dǎo)致液體培養(yǎng)基變渾濁。(3)實驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，炭疽桿菌大量死亡，使培養(yǎng)基渾濁度降低。 答案　(1)涂布分離法　(2)高壓蒸汽滅菌　振蕩　(3)低　噬菌體侵染炭疽桿菌，炭疽桿菌數(shù)量下降 3.(2017·3月寧波模擬節(jié)選)回答下列小題： 下表是用于從土壤中分離純化細菌的培養(yǎng)基配方。 材料 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 瓊脂 水 用量 5 g 10 g 5 g 20 g 1 000 mL 請回答： (1)培養(yǎng)基的類型很多，按照“細菌喜________，霉菌喜________”的原則配制上述培養(yǎng)基后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對

37、培養(yǎng)基進行________處理。 (2)分離純化微生物最常使用的劃線分離法中，接種環(huán)在菌液中蘸菌液________(A.一　B.二　C.三　D.四)次；若用涂布分離法，則制備細菌懸液時，一般需進行________處理，為確保操作過程不被雜菌污染，接種必須在________附近操作。 (3)假設(shè)培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是什么？(列舉一項) ___________________________________________________________。 解析　(1)根據(jù)微生物的營養(yǎng)需求，培養(yǎng)基配制原則是“細菌喜葷，霉菌喜素”，培養(yǎng)基配制完成后，一般還要調(diào)節(jié)p

38、H并對培養(yǎng)基進行滅菌處理。(2)在劃線分離法中，接種環(huán)在菌液中蘸菌液一次。在涂布分離法中，則制備細菌懸液時，一般需進行稀釋處理，為確保操作過程不被雜菌污染，接種必須在酒精燈火焰附近操作。(3)假設(shè)培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是：稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高；劃線時，劃完第一次沒有滅菌即接著劃第二次；培養(yǎng)過程滅菌不嚴(yán)格，受到微生物的污染。 答案　(1)葷　素　滅菌　(2)A　稀釋　酒精燈火焰 (3)稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高(或劃線時，劃完第一次沒有滅菌即接著劃第二次；或培養(yǎng)過程滅菌不嚴(yán)格，受到微生物的污染。) 4.(2016·10月稽陽聯(lián)考節(jié)選)回答下列小題： 為

39、了增強發(fā)酵效果，提高秸稈的營養(yǎng)價值，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究。請回答有關(guān)的問題： (1)纖維素是植物多糖，它在植物細胞中的作用是________(A.能源物質(zhì)　B.貯能物質(zhì)　C.結(jié)構(gòu)組成成分　D.將不同的細胞粘連在一起)。該菌株在生態(tài)系統(tǒng)中能促進________循環(huán)。 (2)用________培養(yǎng)基來擴大培養(yǎng)纖維素酶高產(chǎn)菌株，在將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶或試管中時必須用________，以防止培養(yǎng)基沾到三角瓶壁或試管壁上。為了測定纖維素酶高產(chǎn)菌株的數(shù)量可以用________法在培養(yǎng)基上進行測定。 (3)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解

40、產(chǎn)物發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩選到了幾株有透明圈的菌落。透明圈的大小與纖維素酶的________有關(guān)。 解析　(1)纖維素是植物細胞壁的主要成分，是植物細胞結(jié)構(gòu)組成成分。由于纖維素很少能被生物利用，而該菌株能利用纖維素，所以能促進碳循環(huán)。(2)通常用液體培養(yǎng)基對菌種進行擴大培養(yǎng)。在將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶或試管中時必須用三角漏斗，以防止培養(yǎng)基沾到三角瓶壁或試管壁上。為了測定菌株的數(shù)量可以用(稀釋)涂布分離法在培養(yǎng)基上進行測定。(3)由于剛果紅不與纖維素降解產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)，所以菌落透明圈的大小與纖維素酶的數(shù)量、活性有關(guān)。 答案　(1)C　碳(物質(zhì))　(2)液體　三角漏斗　涂布分

41、離 (3)數(shù)量、活性 5.(2017·衢麗湖舟四地模擬節(jié)選)請回答黃花蒿植物組織培養(yǎng)的有關(guān)問題： (1)黃花蒿的植物組織培養(yǎng)研究在我國已有數(shù)年歷史。選取黃花蒿的莖段后，通常用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精等藥品對莖段進行________，然后再放入________溶液中浸泡，最后用無菌水沖洗。若外植體不慎被細菌感染，采用劃線分離法純化細菌，在4個區(qū)域內(nèi)劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌________次。 (2)植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基可采用________滅菌。形成愈傷組織的過程中，除需無菌、營養(yǎng)和激素外，________等外界條件也很重要。 (3)2～3周后將生長健壯的叢狀苗在________(A.L

42、B培養(yǎng)基＋適宜濃度BA　B.LB培養(yǎng)基＋適宜濃度NAA　C.MS培養(yǎng)基＋適宜濃度BA　D.MS培養(yǎng)基＋適宜濃度NAA)上繼續(xù)生根，形成完整植株。定植前，還需逐漸________進行煉苗。 解析　(1)植物組織培養(yǎng)時，需對外植體消毒，方法是先后用70%的酒精和5%次氯酸鈉溶液浸泡，再用無菌水沖洗。采用劃線分離法純化細菌，在4個區(qū)域內(nèi)劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌5次，在每區(qū)劃線前都需要灼燒接種環(huán)，而最后劃線完成后還要灼燒接種環(huán)，才能結(jié)束分離操作。(2)植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基可采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。在形成愈傷組織的過程中，除需無菌、營養(yǎng)和激素外，光照、溫度等外界條件也很重要。(3)健壯的叢狀苗需在生根

43、培養(yǎng)基上繼續(xù)生根培養(yǎng)，形成完整植株。生根培養(yǎng)基成分為MS培養(yǎng)基＋適宜濃度NAA，BA可以不加，D正確。定植前，還需逐漸降低濕度進行煉苗。 答案　(1)消毒　5%次氯酸鈉　5　(2)高壓蒸汽滅菌法　光照、溫度(任寫一個也可)　(3)D　降低濕度 6.(2017·綠色聯(lián)盟適應(yīng)性考試　節(jié)選)已知某細菌的兩種突變類型細菌Ⅰ和細菌Ⅱ的營養(yǎng)條件和菌落特征都相同，但細菌Ⅰ能分解有機物A而不能分解有機物B，細菌Ⅱ能分解有機物B而不能分解有機物A?，F(xiàn)有這兩種類型細菌的混合液樣品，要將其分離，有人設(shè)計了一種方案，部分操作步驟如下圖。 (1)步驟一使用的是________培養(yǎng)基，其中含有細菌生長所需的

44、水、無機鹽、碳源和氮源等營養(yǎng)物質(zhì)，此外還必須加________，以利于對不同菌種進行分離操作。 (2)步驟一采用________方法接種，此接種法可使接種細菌逐漸稀釋，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)，可形成單個、獨立的________，最終可能得到純種的細菌；要進行上述接種操作，必須在________及酒精燈火焰附近進行，以避免雜菌污染。 (3)步驟三中，若對其中某瓶培養(yǎng)液中A、B兩種有機物含量進行測定，當(dāng)培養(yǎng)液中檢測出如下的實驗結(jié)果，其中能說明培養(yǎng)液只有細菌Ⅰ的是________。 A.化合物A與B含量都明顯下降 B.化合物A含量明顯下降，B含量基本不變 C.化合物A含量基本不變，B含量明顯下降

45、 D.化合物A、B含量都基本不變 解析　(1)從圖中不難知道步驟一是為了分離菌種，分離細菌通常采用固體培養(yǎng)基，需要向培養(yǎng)基中添加凝固劑(瓊脂)。(2)從圖中“蛇形線”描述中可知步驟一采用的是劃線分離法，通過劃線可以獲得單個菌落，從而純化菌種。(3)由于已知細菌Ⅰ能分解有機物A而不能分解有機物B，所以當(dāng)培養(yǎng)液中化合物A含量明顯下降，B含量基本不變時，可以確定培養(yǎng)液只有細菌Ⅰ沒有細菌Ⅱ，B正確。 答案　(1)LB固體　瓊脂　(2)劃線　(單)菌落　超凈臺　(3)B 7.(2017·名校聯(lián)盟第三次聯(lián)考　節(jié)選)請回答野生酵母的培養(yǎng)和分離及果酒制作實驗的有關(guān)問題： (1)從葡萄多年生長的環(huán)境中獲

46、取少量土樣，配制成土壤稀釋液，然后取0.1 mL稀釋液加入到________培養(yǎng)基中，用________(工具)進行________分離，最后培養(yǎng)得到野生酵母菌。將分離獲得的菌種進行誘變培養(yǎng)后，根據(jù)不同菌株的________特征，分別篩選出高產(chǎn)谷胱甘肽酵母菌(甲)和低產(chǎn)硫化氫的酵母菌(乙)。實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進行滅菌處理才能倒掉，目的是___________________________________________________________。 (2)成熟的紫葡萄，常用________(A.高錳酸鉀　B.次氯酸鈉　C.乙醇　D.無菌水)溶液浸泡約5 min，然后制成勻漿放

47、入發(fā)酵罐中，并接種相應(yīng)菌株，發(fā)酵獲得高品質(zhì)的葡萄酒。若向發(fā)酵罐中加入一定量的________，可獲得酒精含量和糖含量較高的果酒。 解析　(1)在進行涂布分離微生物時，需要將稀釋的樣液0.1 mL加到固體培養(yǎng)基上，再用玻璃刮刀均勻涂布，然后進行培養(yǎng)。菌種進行誘變培養(yǎng)后，可根據(jù)不同菌株的菌落特征篩選出目的菌株。微生物實驗結(jié)束后，要對使用過的培養(yǎng)基應(yīng)進行滅菌處理才能倒掉，這是因為培養(yǎng)基中殘留的微生物可能污染環(huán)境。(2)釀制葡萄酒時，需要用高錳酸鉀溶液浸泡約5 min，起到消毒的作用；若向發(fā)酵罐中加入一定量的蔗糖，可獲得酒精含量和糖含量較高的果酒。 答案　(1)固體　玻璃刮刀　涂布　菌落　防止造成

48、環(huán)境污染　(2)A　蔗糖 8.(2016·7月杭州期末　節(jié)選)科研人員擬用組織培養(yǎng)繁殖一種糧食作物，其基本過程為“取材→消毒→愈傷組織培養(yǎng)→出芽→生根→移栽”。請回答： (1)用于植物組織培養(yǎng)的離體材料都需要消毒，通常消毒所用的藥劑是________。植物組織培養(yǎng)實驗中無需使用的設(shè)備及用品是________(A.封口膜　B.滅菌鍋　 C.酒精燈　D.玻璃刮刀)。 (2)植物組織培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上長有多種細菌，若要從中分離出某種細菌，可用接種環(huán)挑取少量細菌，在LB培養(yǎng)基上________，形成單________后，再進一步觀察確認(rèn)。 (3)在幼苗培養(yǎng)過程中，生根培養(yǎng)基的主要成分是

49、________(A.MS培養(yǎng)基　B.MS培養(yǎng)基＋蔗糖　C.MS培養(yǎng)基＋NAA＋蔗糖　D.MS培養(yǎng)基＋BA＋NAA＋蔗糖)。若要誘導(dǎo)叢狀苗，培養(yǎng)基中添加的生長素濃度________(填“大于”“小于”或“等于”)細胞分裂素濃度。 解析　(1)植物組培中外植體消毒通常用70%酒精和5%次氯酸鈉進行。在封口膜、滅菌鍋、酒精燈和玻璃刮刀等設(shè)備及用品中，植物組培中玻璃刮刀并不需要。 (2)若要分離某種細菌可采用劃線法分離純化，就是用接種環(huán)挑取少量細菌，在LB固體培養(yǎng)基上進行劃線分離操作，形成單菌落后，再進一步觀察確認(rèn)。(3)在植物組培中，生根培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中加入蔗糖和適量NAA，BA加入量極

50、少或不加。而誘導(dǎo)叢狀苗的生根培養(yǎng)基中，除MS培養(yǎng)基中加入蔗糖和少量NAA外，還需加入較多BA，因為細胞分裂素濃度大于生長素濃度，有利于芽的分化。 答案　(1)70%酒精和5%次氯酸鈉　D　(2)劃線分離　菌落　(3)C　小于 9.(2016·8月溫州模擬　節(jié)選)鐵皮石斛是一種名貴中藥材，有生津養(yǎng)胃、降血糖和增強免疫力等作用，有效成分為石斛多糖、石斛堿等，溫州雁蕩山素有“中國鐵皮石斛之鄉(xiāng)”的美譽。請回答： (1)用優(yōu)良品種自然生長的莖快速繁殖鐵皮石斛時，給莖消毒時無需使用的是________(A.乙醇　B.無菌水　C.甘露醇　D.次氯酸鈉)。在細胞分裂素相對較多和生長素相對較少的培養(yǎng)基中培

51、養(yǎng)莖的切段，待長出較多的________，將其進行________(處理)后再轉(zhuǎn)入________培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長成幼苗。這種通過組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法，也稱為________。 (2)研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛的生長發(fā)育與其體內(nèi)的內(nèi)生菌密切相關(guān)。為進一步研究內(nèi)生菌作用，需要大量內(nèi)生菌進行相關(guān)實驗。分離內(nèi)生菌時最好采用________(A.G6玻璃砂漏斗過濾法　B.血細胞計數(shù)法　C.劃線分離法　D.涂布分離法)，再將純化的內(nèi)生菌轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進行________。 解析　(1)植物組培中，對外植體消毒需要用到70%乙醇、5%次氯酸鈉和無菌水，不需要甘露醇。在再分化階段，若培養(yǎng)基

52、中細胞分裂素相對較多而生長素相對較少，則將誘導(dǎo)生芽，生成叢狀苗，將叢狀苗分株后再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長成幼苗。這種通過組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法，也稱為植物克隆。(2)通常分離細菌的方法有劃線分離法和涂布分離法，而涂布分離法更容易獲得單菌落，所以最好采用涂布分離法純化菌種，然后再將菌種轉(zhuǎn)到液體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)。 答案　(1)C　叢狀苗　分株/分株培養(yǎng)　生根　植物克隆　(2)D　擴大培養(yǎng) 10.(原創(chuàng)題)自生固氮菌在土壤中能利用空氣中的氮氣進行獨立固氮的細菌，它對于增加土壤中的氮素有重要意義。某研究小組按照下圖所示的實驗方案從土壤中分離自生固氮菌株。 (1)制備土壤懸

53、浮液時，在無菌條件下將1 g土樣加到有________的三角瓶中振蕩10 min。即成10－2 土壤懸浮液。 (2)按功能分，Ⅰ號培養(yǎng)基稱為________培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基中應(yīng)有的營養(yǎng)成分(僅列出碳源和氮源)為________。 A.葡萄糖、硫酸銨 B.葡萄糖 C.酵母提取物、蛋白胨 D.酵母提取物 (3)圖中第一次接種到Ⅰ號培養(yǎng)基的方法是___________________。 (4)接種后的平板放在37 ℃恒溫箱培養(yǎng)1～2天，通過觀察________的特征可統(tǒng)計自生固氮菌的種類，但培養(yǎng)時間不宜過長，原因是________________ ___________________________________________________________。 答案　(1)99 mL無菌水　(2)選擇　B　(3)涂布法 (4)菌落　菌落會分泌含氮物質(zhì)，引起雜菌生長 20