（浙江專版）2019版高考生物一輪復(fù)習(xí) 第33講 克隆技術(shù)學(xué)案

第33講克隆技術(shù)考點(diǎn)克隆技術(shù)一、植物的克隆1.植物克隆(1)技術(shù)基礎(chǔ)：植物組織培養(yǎng)(2)理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的全能性原因：植物體的每個(gè)生活細(xì)胞都具有完整的全套遺傳物質(zhì)。(3)植物細(xì)胞的全能性的實(shí)現(xiàn)條件：離體；適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)(包括水、無機(jī)鹽、維生素、蔗糖、氨基酸等)；適宜條件(無菌、溫度、濕度、光照等)以及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。(4)植物激素的作用：誘導(dǎo)愈傷組織的形成和生長(zhǎng)；誘導(dǎo)和控制再分化過程。2.植物組織培養(yǎng)(1)程序：半固體培養(yǎng)基的配制小組織塊的切取愈傷組織的獲得新植株的再生。(2)填寫基本操作過程圖：圖中脫分化，再分化，A表示愈傷組織，B表示胚狀體或叢狀苗。3.植物細(xì)胞培養(yǎng)和器官培養(yǎng)(1)植物細(xì)胞培養(yǎng)程序：愈傷組織用搖床進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)單個(gè)胚性細(xì)胞在適宜培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞團(tuán)球形胚心形胚胚狀體完整植株。(2)器官發(fā)生和形態(tài)建成的實(shí)現(xiàn)：通過平衡的植物激素配比進(jìn)行調(diào)控。如適量的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素配比，可誘導(dǎo)芽的分化；適量的吲哚乙酸及適當(dāng)減除其他某些激素，可誘導(dǎo)生根。4.原生質(zhì)體培養(yǎng)與植物細(xì)胞工程(1)原生質(zhì)體的獲得方法：在0.50.6 mol/L的甘露醇溶液環(huán)境(較高滲透壓)下，用纖維素酶和果膠酶混合液處理根尖、葉片、愈傷組織或懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，除去細(xì)胞壁，獲得球形的原生質(zhì)體。(2)植物細(xì)胞工程的操作過程外源遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞新植株5.植物克隆技術(shù)的應(yīng)用(1)實(shí)現(xiàn)工廠化的植物快速繁殖(2)生產(chǎn)脫毒苗，恢復(fù)品種的性狀(3)生產(chǎn)重要的次生代謝產(chǎn)物，如藥物、色素、香料、殺蟲劑等(4)育種(植物細(xì)胞工程)：轉(zhuǎn)基因作物，突變體選擇，單倍體育種二、動(dòng)物的克隆1.動(dòng)物細(xì)胞、組織培養(yǎng)(1)動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)。(2)動(dòng)物(成纖維)細(xì)胞培養(yǎng)的過程：(3)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)必需傳代的原因：細(xì)胞培養(yǎng)到一定時(shí)期，細(xì)胞會(huì)因?yàn)槊芏冗^大造成接觸抑制，或者因?yàn)榇x消耗引起營(yíng)養(yǎng)枯竭，不能正常生長(zhǎng)。(4)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的含義原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即進(jìn)行的細(xì)胞、組織培養(yǎng)的過程。傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)細(xì)胞分成若干份，接種到若干份培養(yǎng)基中，使其繼續(xù)生長(zhǎng)、增殖。2.細(xì)胞系和細(xì)胞株(1)細(xì)胞系：是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，可分為連續(xù)細(xì)胞系(惡性細(xì)胞系：具有異體致瘤性；“良性”細(xì)胞系：保留接觸抑制現(xiàn)象，不致癌)和有限細(xì)胞系。(2)細(xì)胞株：通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞?？煞譃檫B續(xù)細(xì)胞株和有限細(xì)胞株。3.克隆培養(yǎng)法(1)概念：把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體的技術(shù)。單抗細(xì)胞株等都是應(yīng)用克隆培養(yǎng)法建立的。(2)基本要求：必須肯定所建成的克隆來源于單個(gè)細(xì)胞。(3)提高細(xì)胞克隆形成率的措施有：選擇適宜的培養(yǎng)基；添加血清；以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)；激素刺激；使用CO2培養(yǎng)箱；調(diào)節(jié)pH。4.動(dòng)物的克隆繁殖(1)動(dòng)物難以克隆的根本原因是體細(xì)胞中基因選擇性表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)中存在調(diào)節(jié)因子。(2)細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物的克隆繁殖(3)動(dòng)物體細(xì)胞核成功克隆的原因：去除了核基因表達(dá)的限制。“多莉”誕生說明：動(dòng)物體細(xì)胞核仍能表現(xiàn)全能性；胚胎和個(gè)體發(fā)育中，細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控作用5.單克隆抗體(1)制備過程：(2)單克隆抗體的特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高。1.(2015·10月浙江選考節(jié)選)科研人員擬將已知的花色基因(目的基因)轉(zhuǎn)入矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛。請(qǐng)回答：將消毒后的矮牽牛葉片剪成小片，在含有目的基因的農(nóng)桿菌溶液中浸泡后，取出并轉(zhuǎn)移至加有適當(dāng)配比生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基(含蔗糖、瓊脂和抗生素，下同)上，使小葉先脫分化形成_。再將其轉(zhuǎn)移至另一培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成芽，芽切割后轉(zhuǎn)移至_(A.LB培養(yǎng)基B.MS培養(yǎng)基適宜濃度NAAC.MS培養(yǎng)基適宜濃度BAD.NAA/BA小于1的MS培養(yǎng)基)上生根，形成完整植株。解析組培時(shí)，先將處理后的外植體接種在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，先經(jīng)脫分化形成愈傷組織。再將其轉(zhuǎn)移至另一培養(yǎng)基誘導(dǎo)生芽形成的叢狀苗，叢狀苗經(jīng)分離后轉(zhuǎn)移至添加適宜濃度NAA的MS培養(yǎng)基上生根，形成完整植株。注意生根培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素類物質(zhì)濃度需大于細(xì)胞分裂素類。答案愈傷組織B2.(2016·4月浙江選考節(jié)選)兔肝細(xì)胞中的基因E編碼代謝甲醛的酶，擬利用基因工程技術(shù)將基因E轉(zhuǎn)入矮牽牛中，以提高矮牽牛對(duì)甲醛的代謝能力，請(qǐng)回答：(1)將被侵染的葉片除菌后進(jìn)行培養(yǎng)，最終得到轉(zhuǎn)基因矮牽牛。其中培養(yǎng)過程正確的是_(A.葉片在含合適濃度生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上分化形成愈傷組織B.愈傷組織在含細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配比較高的培養(yǎng)基上形成芽C.再生的芽在細(xì)胞分裂素含量高的培養(yǎng)基上生根D.愈傷組織在含合適濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上脫分化形成再生植株)。(2)取轉(zhuǎn)基因矮牽牛葉片，放入含MS液體培養(yǎng)基和適量濃度甲醛且密封的試管中，將試管置于_上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)。一段時(shí)間后測(cè)定培養(yǎng)基中甲醛的含量，以判斷基因E是否在轉(zhuǎn)基因矮牽牛中正常表達(dá)。培養(yǎng)過程中液體培養(yǎng)基的作用：一是提供營(yíng)養(yǎng)；二是_，從而使葉片保持正常形態(tài)。解析(1)在植物組織培養(yǎng)過程中，植物激素的濃度配比影響著脫分化和再分化過程，培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素配比較高時(shí)誘導(dǎo)愈傷組織生芽，培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素配比較高時(shí)誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)基中含合適濃度配比的植物激素時(shí)再分化成再生植株。(2)將轉(zhuǎn)基因矮牽牛葉片接種在液體培養(yǎng)基上，用揺床進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)可獲得單細(xì)胞，若在培養(yǎng)液中加入甲醛，可以通過測(cè)定培養(yǎng)基中甲醛的含量，以判斷基因E是否在轉(zhuǎn)基因矮牽牛中正常表達(dá)。液體懸浮培養(yǎng)中用到液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基除提供營(yíng)養(yǎng)外還需要維持滲透壓，維持細(xì)胞的正常形態(tài)和功能。答案(1)B(2)搖床維持滲透壓3.(2016·10月浙江選考節(jié)選)某小組欲進(jìn)行煙草原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)的研究。請(qǐng)回答：(1)原生質(zhì)體的分離：在無菌條件下，取煙草無菌苗的葉片，放入含有0.5 mol/L甘露醇(維持較高滲透壓)的_混合液處理，經(jīng)過離心純化后獲得原生質(zhì)體。(2)原生質(zhì)體的培養(yǎng)：將原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，重新長(zhǎng)出細(xì)胞壁，形成胚性細(xì)胞。此時(shí)，應(yīng)該_培養(yǎng)基中甘露醇濃度，以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，然后經(jīng)兩條途徑形成再生植株。途徑一：細(xì)胞團(tuán)經(jīng)球形胚、_和胚狀體，最后發(fā)育成植株。途徑二：細(xì)胞團(tuán)增殖為愈傷組織，然后在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出芽，切割芽經(jīng)過生根后形成完整植株。上述發(fā)芽培養(yǎng)基中含量相對(duì)較高的激素是_，胚性細(xì)胞的主要特點(diǎn)是：_。(A.液泡小、細(xì)胞核小B.液泡大，細(xì)胞核大C.液泡大，細(xì)胞核小D.液泡小、細(xì)胞核大)(3)為了對(duì)煙草的某些性狀進(jìn)行改良，分離到兩種煙草的原生質(zhì)體后，通過_方法將他們的遺傳物質(zhì)組合在一起，經(jīng)培養(yǎng)獲得具有新性狀的再生植株。提取再生植株的DNA，采用_擴(kuò)增相關(guān)基因，來鑒定遺傳物質(zhì)是否成功重組。解析(1)原生質(zhì)體取得，需要在較高滲透壓的甘露醇溶液中，將植物細(xì)胞用纖維素酶和果膠酶處理，去除細(xì)胞壁，從而得到原生質(zhì)體。(2)當(dāng)原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁后，應(yīng)當(dāng)降低培養(yǎng)基中甘露醇濃度，否則將會(huì)影響細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)。胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)。然后經(jīng)球形胚、心形胚和胚狀體，最后發(fā)育成植株。發(fā)芽培養(yǎng)基中含量相對(duì)較高的激素是細(xì)胞分裂素，而生長(zhǎng)素含量較低。胚性細(xì)胞的主要特點(diǎn)是細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大。(3)分離到兩種煙草的原生質(zhì)體后，可以通過原生質(zhì)體融合的方法將他們的遺傳物質(zhì)組合在一起，經(jīng)培養(yǎng)獲得具有新性狀的再生植株。在體外擴(kuò)增相關(guān)基因的方法是采用PCR技術(shù)。答案(1)纖維素酶和果膠酶(2)降低心形胚細(xì)胞分裂素D(3)原生質(zhì)體融合PCR本題組對(duì)應(yīng)選修三P21P37，克隆技術(shù)1.愈傷組織是由相對(duì)沒有分化的活的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成，其細(xì)胞具有細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大。2.由于不同種類植物或同種植物的不同基因型個(gè)體之間遺傳性差異，細(xì)胞全能性表達(dá)程度大不相同。有的如擬南芥、煙草和番茄等的培養(yǎng)細(xì)胞很容易再生出新植株，并能在多個(gè)世代中保持細(xì)胞全能性表達(dá)；而有的如小麥、玉米和水稻等的一些品種或品系的培養(yǎng)細(xì)胞所誘導(dǎo)出的再生植株，在多次繼代培養(yǎng)后，會(huì)喪失細(xì)胞全能性表達(dá)能力。3.在長(zhǎng)期培養(yǎng)中，培養(yǎng)物的胚胎發(fā)生和器官形成能力下降的可能原因有染色體畸變、細(xì)胞核變異或非整倍體產(chǎn)生等，而且其結(jié)果是不可逆的；細(xì)胞或組織中激素平衡被打破，或細(xì)胞對(duì)外源生長(zhǎng)物質(zhì)的敏感性發(fā)生改變；隨著時(shí)間推移，由于其他各種原因產(chǎn)生了缺乏成胚性的細(xì)胞系。4.通過大量培養(yǎng)特定細(xì)胞系，實(shí)現(xiàn)了能產(chǎn)生重要次生代謝產(chǎn)物的細(xì)胞的大量克隆和產(chǎn)物的工業(yè)化生產(chǎn)；通過花藥培養(yǎng)，進(jìn)行單倍體克?。辉谂囵B(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl或病原體的毒蛋白，誘發(fā)和篩選了抗鹽或抗病突變體。5.動(dòng)物的組織經(jīng)過機(jī)械消化或胰酶消化，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。然后，在人工控制的培養(yǎng)條件下，使這些細(xì)胞得以生存，并保持生長(zhǎng)、分裂乃至接觸抑制和有規(guī)律的衰老、死亡等生命活動(dòng)現(xiàn)象。6.理論上各種培養(yǎng)細(xì)胞都可被克隆，但原代培養(yǎng)細(xì)胞和有限細(xì)胞系克隆較困難；相反，無限細(xì)胞系、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系克隆較容易。這是因?yàn)橹挥袑?duì)培養(yǎng)環(huán)境有較大適應(yīng)范圍和具有較強(qiáng)獨(dú)立生存能力的細(xì)胞，才容易做細(xì)胞克隆。在這方面，單細(xì)胞通常不如群體細(xì)胞；原代細(xì)胞、有限細(xì)胞通常不如無限細(xì)胞、轉(zhuǎn)化或腫瘤細(xì)胞。7.動(dòng)物的受精卵具有全能性，具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的潛能。隨胚胎發(fā)育，細(xì)胞的全能表達(dá)能力下降，成為多能細(xì)胞、專能細(xì)胞直到體細(xì)胞，不再能分化為其他細(xì)胞。低等動(dòng)物細(xì)胞的全能性一般比較容易體現(xiàn)。癌細(xì)胞仍能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞。所以，無論分化還是癌化，變化的都是表現(xiàn)型，基因組成的完整性可以保留。動(dòng)物體細(xì)胞中基因組成是完整的，但細(xì)胞分化使得基因的表達(dá)發(fā)生了差異化，細(xì)胞中合成了專一的蛋白質(zhì)，細(xì)胞全能性難以發(fā)揮。8.體細(xì)胞羊的克隆成功證明了：(1)高度分化的細(xì)胞經(jīng)過一定技術(shù)處理，也可以回復(fù)到類似受精卵時(shí)期的功能；(2)在胚胎和個(gè)體發(fā)育中，細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的作用。9.克隆羊獲得成功的部分原因：重組卵細(xì)胞最初分裂時(shí)雖然復(fù)制了DNA，但基因的轉(zhuǎn)錄并未開始；同時(shí)，供體核DNA開始丟失來源于乳腺細(xì)胞的調(diào)節(jié)蛋白；在重組卵細(xì)胞開始第三次分裂時(shí)，原乳腺細(xì)胞的調(diào)節(jié)蛋白便全部被卵細(xì)胞質(zhì)中的蛋白因子替換了，因此核DNA被重新編排，胚細(xì)胞開始表達(dá)自己的基因，進(jìn)而調(diào)控胚在代孕母親子宮中的進(jìn)一步發(fā)育。因此，采用電脈沖細(xì)胞融合技術(shù)，選擇分裂3次時(shí)的細(xì)胞進(jìn)行移植，并在核移植前對(duì)乳腺細(xì)胞進(jìn)行了營(yíng)養(yǎng)限制性培養(yǎng)，有利于細(xì)胞核的一系列變化和細(xì)胞融合后基因表達(dá)的分子開關(guān)的啟動(dòng)。角度1植物的克隆1.下圖表示利用棉花葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體培養(yǎng)進(jìn)行遺傳改良的過程，據(jù)圖分析錯(cuò)誤的是()A.過程需在適宜條件下用纖維素酶和果膠酶的混合物處理B.過程能定向誘導(dǎo)原生質(zhì)體產(chǎn)生優(yōu)良性狀的突變C.過程中葉肉細(xì)胞失去了其特有的結(jié)構(gòu)和功能D.過程需用適宜配比的植物激素處理解析植物細(xì)胞壁主要是由纖維素和果膠組成的，常選用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體，A正確；紫外線照射誘變育種所依據(jù)的原理是基因突變或染色體畸變，這種變異是不定向的，B錯(cuò)誤；過程是脫分化，指已經(jīng)分化的植物器官、組織或細(xì)胞，當(dāng)受到創(chuàng)傷或進(jìn)行離體(也受到創(chuàng)傷)培養(yǎng)時(shí)，已停止分裂的細(xì)胞，又重新恢復(fù)分裂，細(xì)胞改變?cè)械姆只癄顟B(tài)，失去原有結(jié)構(gòu)和功能，成為具有未分化特性的細(xì)胞。C正確；是再分化，需用適宜配比的植物激素誘導(dǎo)，D正確。答案B2.甲、乙是染色體數(shù)目相同的兩種二倍體藥用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小組擬培育同時(shí)含有A和B的新型藥用植物?；卮鹣铝袉栴}：(1)為了培育該新型藥用植物，可取甲和乙的葉片，先用_酶和_酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的_，再用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)二者融合。形成的融合細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)形成_組織，然后經(jīng)過_形成完整的雜種植株。這種培育技術(shù)稱為_。(2)上述雜種植株屬于多倍體，多倍體是指_。假設(shè)甲與乙有性雜交的后代是不育的，而上述雜種植株是可育的，造成這種差異的原因是_。(3)這種雜種植株可通過制作人工種子的方法來大量繁殖。經(jīng)植物組織培養(yǎng)得到的_，用人工薄膜包裝后可得到人工種子。解析(1)該新型藥用植物是通過植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得的。要獲得有活力的原生質(zhì)體才能進(jìn)行體細(xì)胞雜交，因此首先用纖維素酶和果膠酶去掉植物的細(xì)胞壁，然后用PEG化學(xué)誘導(dǎo)劑(物理方法：離心、振動(dòng)等)誘導(dǎo)二者的原生質(zhì)體融合。然后采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得雜種植株，植物組織培養(yǎng)的主要過程是：先脫分化形成愈傷組織，然后再分化形成植物體，利用了植物細(xì)胞的全能性。(2)如果植物甲、乙是兩個(gè)物種，二者不能通過有性雜交產(chǎn)生可育后代，原因是甲、乙有性雜交所產(chǎn)生的后代在減數(shù)分裂過程中同源染色體聯(lián)會(huì)異常，也就是存在著生殖隔離。但植物甲、乙通過植物體細(xì)胞雜交技術(shù)產(chǎn)生的后代卻是可育的，因?yàn)樵跍p數(shù)分裂過程中同源染色體能完成正常的聯(lián)會(huì)，產(chǎn)生正常的配子。由于甲、乙都是二倍體，因此，植物體細(xì)胞雜交得到的后代是異源多倍體(四倍體)。(3)人工種子生產(chǎn)不受氣候、季節(jié)和地域等因素限制，而且可以避免后代發(fā)生性狀分離等優(yōu)點(diǎn)，因此，植物細(xì)胞工程重要的應(yīng)用之一是制備人工種子，用到的核心技術(shù)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)。將植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽、腋芽等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。答案(1)纖維素果膠原生質(zhì)體愈傷再分化(分化)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)(2)體細(xì)胞中含有三個(gè)或三個(gè)以上染色體組的個(gè)體在減數(shù)分裂過程中，前者染色體聯(lián)會(huì)異常，而后者染色體聯(lián)會(huì)正常(3)胚狀體1.植物組織培養(yǎng)的操作流程2.脫分化和再分化的比較比較內(nèi)容脫分化再分化過程外植體愈傷組織愈傷組織幼苗形成體特點(diǎn)排列疏松、高度液泡化的薄壁細(xì)胞有根、芽需要條件a.離體b.適宜的營(yíng)養(yǎng)c.生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的比例適中d.一般不需光a.離體b.適宜的營(yíng)養(yǎng)c.生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的比例高或低誘導(dǎo)生根或生芽d.光照角度2動(dòng)物的克隆1.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是()A.連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞大多具有二倍體核型B.某些癌細(xì)胞在合適條件下能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞C.由多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆D.未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞系細(xì)胞具有相同的性狀解析連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞一般都培養(yǎng)了多代，具有了連續(xù)增殖能力，二倍體核型發(fā)生了改變，大多數(shù)細(xì)胞具有異倍體核型，A錯(cuò)誤；細(xì)胞癌變是由相關(guān)基因突變引起的，如果癌細(xì)胞在一定條件下發(fā)生回復(fù)性的基因突變，則有可能恢復(fù)成正常細(xì)胞，B正確；細(xì)胞克隆的最基本的要求是，必須確定所建立的克隆來源于單個(gè)細(xì)胞，C錯(cuò)誤；未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞系具有異質(zhì)性，而克隆化培養(yǎng)成的細(xì)胞株則具有相同的性狀，D錯(cuò)誤。答案B2.某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測(cè)定各小鼠血清抗體的效價(jià)(能檢測(cè)出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如下圖所示。若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測(cè)，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉栴}。(1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí)，所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過_次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是_小鼠，理由是_。(2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有_，體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是_。(3)雜交瘤細(xì)胞中有_個(gè)細(xì)胞核，染色體數(shù)目是_條。(4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是_。解析(1)據(jù)圖分析，第4次免疫后X、Y、Z小鼠的血清抗體效價(jià)均達(dá)到16 000以上，小鼠Y的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體效價(jià)最高，最適用于制備單克隆抗體。(2)融合體系中除了未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞之外，還有骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的自身融合產(chǎn)物，由于細(xì)胞膜具有流動(dòng)性，且誘導(dǎo)之后的細(xì)胞融合不具有特異性，故體系中會(huì)出現(xiàn)多種類型的細(xì)胞。(3)雜交瘤細(xì)胞形成后，小鼠的B淋巴細(xì)胞核與骨髓瘤細(xì)胞核會(huì)融合形成一個(gè)細(xì)胞核。小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)和骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)融合后，染色體可達(dá)100條。(4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，仍然不是能無增殖的細(xì)胞，同時(shí)正常細(xì)胞的分裂次數(shù)是有限的。答案(1)4YY小鼠的抗體效價(jià)最高(2)B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%(3)1100(4)不能無限增殖1.植物組織培養(yǎng)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的異同項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基類型固體或半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基成分水、礦質(zhì)元素、維生素、蔗糖、氨基酸、瓊脂葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、促生長(zhǎng)因子、動(dòng)物血清等取材植物幼嫩部位或花藥等動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織過程結(jié)果新的組織或植株個(gè)體，可以體現(xiàn)全能性新的細(xì)胞系或細(xì)胞株，不形成個(gè)體，不體現(xiàn)全能性目的植株快速繁殖脫毒植株的培育人工種子生產(chǎn)藥物、殺蟲劑等轉(zhuǎn)基因植物的培育蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)皮膚移植材料的培育檢測(cè)有毒物質(zhì)生理、病理、藥理學(xué)研究相同點(diǎn)兩技術(shù)手段培養(yǎng)過程中細(xì)胞都進(jìn)行有絲分裂，都是無性繁殖，都可稱克隆，都不涉及減數(shù)分裂均為無菌操作，需要適宜的溫度、pH等條件2.列表法比較細(xì)胞系和細(xì)胞株種類來源特點(diǎn)細(xì)胞系有限細(xì)胞系由二倍體細(xì)胞傳代培養(yǎng)建成有接觸抑制；不能連續(xù)培養(yǎng)連續(xù)細(xì)胞系由傳代細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)建成發(fā)生了轉(zhuǎn)化，多數(shù)具有異倍體核型；有些具有異體致瘤性；有些具有不死性，但不致癌細(xì)胞株有限細(xì)胞株通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞傳代次數(shù)有限一般具有恒定染色體組型、同功酶類型、病毒敏感和生化特性等連續(xù)細(xì)胞株可連續(xù)多次傳代3.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性過程相關(guān)酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶融合方法物理法：離心、電激、振動(dòng)；化學(xué)法：聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)除物理法和化學(xué)法外還可以用滅活的病毒誘導(dǎo)結(jié)果雜種植株雜交細(xì)胞意義克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性，獲得雜種植株生產(chǎn)單克隆抗體；實(shí)現(xiàn)基因定位(時(shí)間：40分鐘分?jǐn)?shù)：100分)1.下列有關(guān)植物克隆技術(shù)的敘述中，錯(cuò)誤的是()A.誘導(dǎo)某些植物的愈傷組織能使其直接發(fā)育成花芽B.植物組織培養(yǎng)中通過調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的配比可以實(shí)現(xiàn)器官發(fā)生和形態(tài)建成C.植物愈傷組織通過液體懸浮培養(yǎng)能分散成單細(xì)胞，這種單細(xì)胞能發(fā)育成胚狀體D.通過大量培養(yǎng)特定細(xì)胞系，可以克隆出大量能產(chǎn)生重要次生代謝產(chǎn)物的細(xì)胞解析通過調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比，可以從愈傷組織誘導(dǎo)出芽和根的頂端分生組織，并可由此再生出新的植株，A正確；植物組織培養(yǎng)中通過調(diào)節(jié)植物激素的濃度配比可以實(shí)現(xiàn)器官發(fā)生和形態(tài)建成，B錯(cuò)誤；植物愈傷組織通過液體懸浮培養(yǎng)能分散成單細(xì)胞，這種單細(xì)胞能發(fā)育成胚狀體，C正確；通過大量培養(yǎng)特定細(xì)胞系，可以克隆出大量能產(chǎn)生重要次生代謝產(chǎn)物的細(xì)胞，D正確。答案B2.下列關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的說法正確的是()A.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能B.二者的培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件相差不大C.以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)是提高動(dòng)物細(xì)胞克隆形成率的措施之一D.動(dòng)、植物克隆技術(shù)的理論基礎(chǔ)是完全一樣的解析動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞都可以大量培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)有許多相似之處，也有許多不同點(diǎn)，其主要不同點(diǎn)是它們的培養(yǎng)基的成分不同，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽和維生素，另外還有動(dòng)物血清；植物組織培養(yǎng)所需要的培養(yǎng)基包含植物生長(zhǎng)和發(fā)育的全部營(yíng)養(yǎng)成分，如礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、植物激素和有機(jī)添加物，沒有動(dòng)物血清，B錯(cuò)誤；以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)是提高動(dòng)物細(xì)胞克隆形成率的措施之一，C正確；動(dòng)物克隆的基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，植物克隆的基礎(chǔ)是植物細(xì)胞的全能性，D錯(cuò)誤。答案C3.下列實(shí)例中能體現(xiàn)植物細(xì)胞全能性的是()A.小麥花粉經(jīng)離體培養(yǎng)發(fā)育成單倍體植株B.風(fēng)信子在愈傷組織的基礎(chǔ)上直接發(fā)育出花器官C.用生長(zhǎng)素處理未經(jīng)授粉的番茄雌蕊得到無籽果實(shí)D.以四倍體西瓜和二倍體西瓜為親本雜交得到三倍體西瓜植株解析全能性是指高度分化的細(xì)胞仍具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，小麥花粉經(jīng)過離體培養(yǎng)可發(fā)育成單倍體植株，體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性，A正確；風(fēng)信子在愈傷組織的基礎(chǔ)上發(fā)育出花器官，但未形成完整植株，不能體現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性，B錯(cuò)誤；生長(zhǎng)素處理未授粉的番茄雌蕊得到無籽果實(shí)，該過程沒有應(yīng)用到植物組織培養(yǎng)技術(shù)，且未發(fā)育成完整植株，不能體現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性，C錯(cuò)誤；四倍體西瓜和二倍體西瓜雜交得到三倍體西瓜植株屬于多倍體育種，不能體現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性，D錯(cuò)誤。答案A4.將攜帶抗M基因、不帶抗N基因的鼠細(xì)胞去除細(xì)胞核后，與攜帶抗N基因、不帶抗M基因的鼠細(xì)胞融合，獲得的胞質(zhì)雜種細(xì)胞具有M、N兩種抗性。該實(shí)驗(yàn)證明了()A.該胞質(zhì)雜種細(xì)胞具有全能性B.該胞質(zhì)雜種細(xì)胞具有無限增殖能力C.抗M基因位于細(xì)胞質(zhì)中D.抗N基因位于細(xì)胞核中解析全能性是指已經(jīng)分化的細(xì)胞仍具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，該胞質(zhì)雜種細(xì)胞并沒有發(fā)育成完整個(gè)體，沒有證明，A錯(cuò)誤；題干信息沒有體現(xiàn)該胞質(zhì)雜種細(xì)胞具有無限增殖能力，B錯(cuò)誤；該實(shí)驗(yàn)是將攜帶抗M基因、不帶抗N基因的鼠細(xì)胞去除細(xì)胞核后，與攜帶抗N基因、不帶抗M基因的鼠細(xì)胞融合，獲得的胞質(zhì)雜種細(xì)胞具有M、N兩種抗性，可見抗M基因位于細(xì)胞質(zhì)中，C正確；從題干信息中無法判斷抗N基因是位于細(xì)胞核中還是位于細(xì)胞質(zhì)中，D錯(cuò)誤。答案C5.(2017·嘉興模擬)下列關(guān)于克隆技術(shù)的敘述中，正確的是()A.細(xì)胞克隆的主要用途之一是篩選出缺乏特殊基因的突變細(xì)胞系B.在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl，不能篩選出抗鹽突變體C.植物經(jīng)多次繼代培養(yǎng)后不會(huì)喪失全能性的表達(dá)能力D.有限細(xì)胞系比無限細(xì)胞系更容易克隆解析細(xì)胞克隆的主要用途之一是篩選出缺乏特殊基因的突變細(xì)胞系，A正確；在培養(yǎng)基中加入不同濃度的NaCl，可以篩選出抗鹽突變體，B錯(cuò)誤；有些植物(如小麥、水稻等)經(jīng)多次繼代培養(yǎng)后會(huì)喪失全能性的表達(dá)能力，C錯(cuò)誤；無限細(xì)胞系比有限細(xì)胞系更容易克隆，因?yàn)闊o限細(xì)胞系的對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力和獨(dú)立生存能力更強(qiáng)，D錯(cuò)誤。答案A6.單純皰疹病毒型(HSV1)可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV1的單克隆抗體可快速檢測(cè)HSV1?；卮鹣铝袉栴}：(1)在制備抗HSV1的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV1蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗_的抗體檢測(cè)呈陽性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了_反應(yīng)，再?gòu)男∈蟮腳中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的_細(xì)胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是_。(2)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的_中使其增殖，再?gòu)腳中提取、純化獲得。(3)通過上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV1蛋白，其原因是該抗體具有_和_等特性。解析(1)制備單克隆抗體時(shí)，需要先給小鼠注射特定抗原(HSV1蛋白)，當(dāng)小鼠血清中抗HSV1蛋白的抗體檢測(cè)呈陽性時(shí)，就可從小鼠脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞，將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過篩選和克隆化培養(yǎng)，最終獲得既能無限增殖又能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞。(2)單克隆抗體的獲取有兩條途徑，一是從體外細(xì)胞培養(yǎng)液中提純獲得，二是將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹腔中使其增殖，再?gòu)母顾刑崛?、純化獲得。(3)單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、純度高等特點(diǎn)。答案(1)HSV1蛋白體液免疫脾臟骨髓瘤無限增殖且產(chǎn)生專一抗體(2)腹腔腹水(3)純度高特異性強(qiáng)7.下圖表示通過核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物(二倍體)的流程。回答下列問題：(1)圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為_。過程表示去除細(xì)胞核，該過程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用_的方法。代表的過程是_。(2)經(jīng)過多次傳代后，供體細(xì)胞中_的穩(wěn)定性會(huì)降低，因此，選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)。(3)若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是_。(4)與克隆羊“多莉(利)”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了_。解析(1)提供體細(xì)胞的供體可能為雌性，也可能為雄性，因此圖中A(正常細(xì)胞核)的性染色體組成為XX或XY。常采用顯微操作去核法來去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核。過程表示將早期胚胎移入受體，其過程為胚胎移植。(2)取供體動(dòng)物的體細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。超過10代繼續(xù)培養(yǎng)，則其遺傳物質(zhì)(或核型)的穩(wěn)定性會(huì)降低。(3)克隆動(dòng)物的細(xì)胞核基因來自供體，因此大部分性狀與供體相同，但細(xì)胞質(zhì)基因來源于受體(或提供卵母細(xì)胞的個(gè)體)，即卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響，這就決定了克隆動(dòng)物的性狀與供體不完全相同。(4)克隆動(dòng)物的培育采用的是核移植技術(shù)，核移植技術(shù)的原理是：已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。答案(1)XX或XY顯微操作(去核法)胚胎移植(2)遺傳物質(zhì)(3)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響(4)已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性8.下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物克隆的說法錯(cuò)誤的是()A.植物組培獲得的試管苗，可能為雜合子，也可能為純合子；可能為單倍體，也可能為二倍體B.同一株綠色開花植物不同部位的細(xì)胞經(jīng)組培獲得的愈傷組織基因型一定相同C.動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)D.為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素解析植物組培屬于無性繁殖，獲得的試管苗細(xì)胞內(nèi)基因型和染色體組成取決于外植體，A正確；同一株綠色開花植物的體細(xì)胞和生殖細(xì)胞經(jīng)組培獲得的愈傷組織基因型不同，B錯(cuò)誤；動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)，C正確；為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素，D正確。答案B9.下列關(guān)于動(dòng)物克隆的敘述，錯(cuò)誤的是()A.將肝組織制成單細(xì)胞懸浮液后，直接培養(yǎng)獲得肝細(xì)胞克隆B.培養(yǎng)基中添加胎牛血清和胰島素可以提高動(dòng)物細(xì)胞克隆的形成率C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，保留接觸抑制的連續(xù)細(xì)胞系獲得不死性，但不致癌D.動(dòng)物難以克隆是由于動(dòng)物細(xì)胞在分化時(shí)使細(xì)胞發(fā)生差異性表達(dá)解析將肝組織制成單細(xì)胞懸浮液后，需要轉(zhuǎn)入特殊培養(yǎng)液中進(jìn)行單一細(xì)胞的克隆培養(yǎng)，才能獲得肝細(xì)胞克隆，A錯(cuò)誤；提高細(xì)胞克隆形成率的措施有：選擇適宜的培養(yǎng)基、添加血清(胎牛血清最好)、激素(胰島素等)刺激、使用二氧化碳培養(yǎng)箱、調(diào)節(jié)pH等，B正確；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，部分能連續(xù)分裂下去的細(xì)胞稱之為連續(xù)細(xì)胞系，有的連續(xù)細(xì)胞系獲得不死性，但保留接觸抑制現(xiàn)象，不致癌，C正確；動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞相比更加難以克隆，就是因?yàn)樵趧?dòng)物細(xì)胞分化過程中，細(xì)胞發(fā)生了差異性表達(dá)，D正確。答案A10.下列有關(guān)植物的克隆的相關(guān)敘述中，正確的是()A.水稻等植物在多次繼代培養(yǎng)后，其細(xì)胞全能性的表達(dá)能力會(huì)喪失B.植物組織培養(yǎng)過程中植物器官的發(fā)生主要通過營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的配比進(jìn)行調(diào)節(jié)C.植物組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)物的胚胎發(fā)生和器官形成能力下降的可能原因有染色體畸變、細(xì)胞核變異或非整倍體產(chǎn)生等，但其結(jié)果是可逆的D.原生質(zhì)體培養(yǎng)需要先對(duì)原生質(zhì)體的活力進(jìn)行檢測(cè)，可以采用質(zhì)壁分離的方法解析小麥、水稻等植物在多次繼代培養(yǎng)后，會(huì)喪失其細(xì)胞全能性的表達(dá)能力，A正確；植物組織培養(yǎng)過程中植物器官的發(fā)生主要通過植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的配比進(jìn)行調(diào)節(jié)，B錯(cuò)誤；植物組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)物的胚胎發(fā)生和器官形成能力下降的可能原因有染色體畸變、細(xì)胞核變異或非整倍體產(chǎn)生等，并且其結(jié)果是不可逆的，C錯(cuò)誤；原生質(zhì)體培養(yǎng)需要先對(duì)原生質(zhì)體的活力進(jìn)行檢測(cè)，由于細(xì)胞壁已經(jīng)去除，所以不能采用質(zhì)壁分離的方法，可以根據(jù)形態(tài)特征判斷其活力，如原生質(zhì)體呈綠色(來源于葉片)及圓而鼓者為活原生質(zhì)體，D錯(cuò)誤。答案A11.進(jìn)行動(dòng)物克隆繁殖的基本過程如圖所示。下列敘述正確的是()A.該過程的技術(shù)基礎(chǔ)是核移植B.克隆蛙需經(jīng)過核移植、胚胎體外培養(yǎng)和胚胎移植獲得C.動(dòng)物克隆繁殖屬于無性生殖，甲細(xì)胞可以是體細(xì)胞而不能是胚胎干細(xì)胞D.目前，高等哺乳動(dòng)物胚胎移植成為胚胎工程中獲得后代的最后一道工序解析動(dòng)物克隆繁殖過程的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；蛙是一種體外受精，體外發(fā)育的兩棲類動(dòng)物，克隆蛙不需要進(jìn)行胚胎移植，B錯(cuò)誤；核移植可以是體細(xì)胞核移植也可以是胚胎干細(xì)胞核移植，C錯(cuò)誤；由于高等哺乳動(dòng)物胚胎全體外培養(yǎng)技術(shù)尚未掌握，必須利用代孕母體完成胚胎發(fā)育，所以胚胎移植是胚胎工程的最后一道工序，D正確。答案D12.原花青素(PC)是廣泛存在于水果、蔬菜、花朵和樹皮中的一種天然抗癌化合物，某研究小組就原花青素對(duì)離體的人膽囊癌QBC939細(xì)胞抑制作用做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下曲線所示，請(qǐng)回答下列問題：(說明：細(xì)胞的數(shù)量通過測(cè)定相應(yīng)培養(yǎng)瓶的吸光度值表示，細(xì)胞抑制率(1相應(yīng)組吸光度值)/對(duì)照組吸光度值。)(1)實(shí)驗(yàn)材料及儀器：不同濃度的PC，膽囊癌QBC939細(xì)胞懸液，MTT儀器(測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液的吸光度)等(2)實(shí)驗(yàn)思路：取若干個(gè)培養(yǎng)瓶分成_組，均加入等量且適量的膽囊癌QBC939細(xì)胞懸液，再分別加入等量的相應(yīng)濃度PC。在適宜條件下培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定_，并計(jì)算細(xì)胞抑制率。實(shí)驗(yàn)過程中每個(gè)培養(yǎng)瓶測(cè)定_次。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)論：_。(4)討論研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組處于細(xì)胞周期中S期細(xì)胞的比例均顯著增加，且隨著藥物劑量增加S期細(xì)胞的比例也增加，由此推測(cè)PC的作用機(jī)理是：_。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果是膽囊癌QBC939細(xì)胞在離體條件下獲得，如果要把PC作為治療膽管癌的藥物，還需要做哪方面的實(shí)驗(yàn)研究。_(寫出一項(xiàng))。解析(2)據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，PC濃度有6種，加上空白組，因此實(shí)驗(yàn)應(yīng)分7組進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)的測(cè)量指標(biāo)是各培養(yǎng)瓶的吸光度值，每個(gè)組分24、48、72小時(shí)測(cè)量3次。(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果曲線可知，隨著PC濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制效果增強(qiáng)。(4)由于實(shí)驗(yàn)組S期細(xì)胞的比例增加，且藥物劑量增加該比例也增加，因此，推測(cè)PC的作用機(jī)理是抑制DNA的復(fù)制過程，使得分裂細(xì)胞停滯在S期。這是一個(gè)開放性試題，只要答案合理即可。答案(2)7各培養(yǎng)瓶的吸光度值3(3)隨著PC濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制效果增強(qiáng)(4)抑制DNA的復(fù)制(抑制DNA的復(fù)制相關(guān)酶的合成)研究PC對(duì)體內(nèi)膽管癌細(xì)胞的抑制作用(或研究PC對(duì)人體正常細(xì)胞的毒害作用，只要寫出一點(diǎn)即可，其他合理答案也對(duì))13.(2017·嘉興模擬節(jié)選)我國(guó)目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質(zhì)(S蛋白)，對(duì)應(yīng)的基因?yàn)閟基因。請(qǐng)回答：(1)在構(gòu)建重組DNA分子時(shí)，要用限制性核酸內(nèi)切酶處理_，并用_酶使兩者結(jié)合。將重組DNA分子導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞，經(jīng)篩選得到工程細(xì)胞。(2)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，工程細(xì)胞在生長(zhǎng)過程中有_現(xiàn)象，需要定期使用_酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)。(3)為提高工程細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，下列措施中不采用的是_。A.取單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng) B.加入胰島素C.二氧化碳培養(yǎng)箱 D.加入動(dòng)物血清(4)由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)較難，成本較高，近些年科學(xué)家們又發(fā)明了“乳腺生物發(fā)生器”，進(jìn)而從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳汁中提取所需產(chǎn)品。在這種技術(shù)中，作為重組DNA分子受體細(xì)胞的一般是_。解析(1)基因工程中，獲得重組DNA時(shí)要先用相同限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體DNA，并用DNA連接酶使兩者結(jié)合形成重組DNA分子。(2)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞在生長(zhǎng)過程中有接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)。(3)為提高細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，需要使用適合的培養(yǎng)液，并添加胰島素和動(dòng)物血清，使用二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，但細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞克隆培養(yǎng)不同，不需要從單個(gè)細(xì)胞開始進(jìn)行培養(yǎng)。(4)在培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物過程中，一般用受精卵作為重組DNA分子的受體細(xì)胞。答案(1)s基因和載體DNADNA連接(2)接觸抑制胰蛋白(3)A(4)受精卵14.(2017·臺(tái)州模擬節(jié)選)請(qǐng)回答雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備的有關(guān)問題。(1)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時(shí)，利用一定的物質(zhì)，如生物誘導(dǎo)劑_作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出融合的細(xì)胞再進(jìn)行細(xì)胞的_培養(yǎng)，獲得純系細(xì)胞，同時(shí)還要進(jìn)行_檢驗(yàn)，以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。(2)獲得雜交瘤細(xì)胞后，在體外培養(yǎng)時(shí)需要特別加入的天然成分是_。(3)有關(guān)雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)的敘述，正確的是_。A.用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)B.用滋養(yǎng)層細(xì)胞支持生長(zhǎng)C.能進(jìn)行傳代培養(yǎng)D.需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破碎獲得產(chǎn)物(4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體，科研小組將與抗體形成有關(guān)的關(guān)鍵基因通過噬菌體導(dǎo)入受體細(xì)胞，該技術(shù)的核心步驟是_，噬菌體是這些關(guān)鍵基因的_。解析(1)制備單克隆抗體時(shí)，經(jīng)免疫的小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞需要融合，電擊振蕩、PEG等方法可以促進(jìn)融合，而生物誘導(dǎo)劑就是利用滅活的病毒介導(dǎo)。篩選得到的融合細(xì)胞需經(jīng)過克隆培養(yǎng)，才能獲得純系細(xì)胞，同時(shí)還要進(jìn)行抗體檢驗(yàn)，以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。(2)在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要特別加入的天然成分是血清。(3)雜交瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)過程是一個(gè)克隆培養(yǎng)過程，需要使用液體培養(yǎng)基，并添加動(dòng)物血清和胰島素，而且要用滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)，培養(yǎng)過程需要不斷傳代才能保證細(xì)胞不斷生長(zhǎng)?？贵w是雜交瘤細(xì)胞合成并分泌的，不需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破碎獲得產(chǎn)物。(4)基因工程核心步驟是形成重組DNA分子，噬菌體是這些關(guān)鍵基因的載體。答案(1)滅活的(仙臺(tái))病毒克隆抗體(2)動(dòng)物血清(3)C(4)形成重組DNA分子載體19