（浙江選考）2018屆高三生物二輪專(zhuān)題復(fù)習(xí) 專(zhuān)題十一 現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題 考點(diǎn)1 基因工程和克隆技術(shù)學(xué)案 新人教版

專(zhuān)題十一 現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題 考點(diǎn)1 基因工程和克隆技術(shù)一、知識(shí)要求1工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生加試(a)。2基因工程的原理和技術(shù)加試(b)。3基因工程的應(yīng)用加試(a)。4植物的克隆加試(b)。5動(dòng)物的克隆加試(a)。6從受精卵談起加試(a)。7胚胎工程加試(a)。8生態(tài)工程的主要類(lèi)型加試(a)。9生態(tài)工程在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用加試(a)。二、活動(dòng)要求1提出生活中的疑難問(wèn)題，設(shè)計(jì)用基因工程技術(shù)解決的方案加試(c)。2庭院生態(tài)系統(tǒng)的經(jīng)濟(jì)效益分析加試(a)?？键c(diǎn)1基因工程和克隆技術(shù)1基因工程的正誤判斷(1)限制性核酸內(nèi)切酶只能用于切割目的基因(×)提示也可用于切割質(zhì)粒。(2)DNA連接酶能將兩堿基間形成的氫鍵連接起來(lái)(×)提示DNA連接酶是將兩核苷酸間通過(guò)形成的磷酸二酯鍵連接起來(lái)。(3)質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子，是基因工程常用的載體()(4)DNA連接酶能夠?qū)⑷我?個(gè)DNA片段連接在一起(×)提示具有相同粘性末端的2個(gè)DNA片段連接在一起。(5)抗蟲(chóng)基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá)()2克隆技術(shù)的正誤判斷(1)棉花根尖細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)形成幼苗能體現(xiàn)細(xì)胞全能性()(2)植物的每個(gè)細(xì)胞在植物體內(nèi)和體外都能表現(xiàn)出細(xì)胞的全能性(×)提示在生物體內(nèi)，由于基因的選擇性表達(dá)，細(xì)胞不能表現(xiàn)出全能性，而是分化成為不同的組織器官，細(xì)胞表現(xiàn)全能性的必要條件是離體狀態(tài)、一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和激素。(3)在誘導(dǎo)離體菊花莖段形成幼苗的過(guò)程中，不會(huì)發(fā)生細(xì)胞的增殖和分化(×)提示植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分化兩個(gè)重要的過(guò)程，在這兩個(gè)過(guò)程中都會(huì)發(fā)生細(xì)胞增殖(有絲分裂)，且在再分化過(guò)程發(fā)生細(xì)胞分化，形成各種組織細(xì)胞。(4)愈傷組織是外植體通過(guò)脫分化和再分化后形成的(×)提示外植體通過(guò)脫分化形成愈傷組織。(5)用纖維素酶和果膠酶水解法獲得的植物原生質(zhì)體失去了全能性(×)提示原生質(zhì)體具有全能性。(6)連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞大多具有二倍體核型(×)提示連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞一般都培養(yǎng)了多次，大多數(shù)具有異倍體核型。(7)制備肝細(xì)胞懸浮液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理(×)提示制備肝細(xì)胞懸浮液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胰蛋白酶處理，不能使用胃蛋白酶，因?yàn)槲傅鞍酌感枰趶?qiáng)酸環(huán)境下才能起作用，但這樣的環(huán)境不適于細(xì)胞生存。(8)肝細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的CO2刺激細(xì)胞呼吸(×)提示肝細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的CO2的目的是維持培養(yǎng)液pH。(9)與“多莉”羊等克隆哺乳動(dòng)物相關(guān)的技術(shù)有胚胎移植、細(xì)胞培養(yǎng)和核移植()(10)植物原生質(zhì)體融合和動(dòng)物細(xì)胞融合原理是相同的()(11)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得單克隆抗體的胚胎(×)提示雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，是為了獲得單克隆抗體。一、基因工程1基因工程的工具2基因工程的原理和技術(shù)3轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、植物及微生物的培育流程易錯(cuò)警示(1)使用限制性核酸內(nèi)切酶的注意點(diǎn)一般用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割載體和目的基因。不同的限制性核酸內(nèi)切酶也能切割出相同的粘性末端。(2)DNA連接酶DNA聚合酶DNA連接酶連接兩個(gè)DNA片段，而DNA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈上。(3)限制性核酸內(nèi)切酶DNA酶解旋酶限制性核酸內(nèi)切酶是切割某種特定的脫氧核苷酸序列，并使兩條鏈在特定的位置斷開(kāi)；DNA酶是將DNA水解為組成單位；解旋酶是將DNA的兩條鏈間的氫鍵打開(kāi)形成兩條單鏈。(4)啟動(dòng)子、終止子啟動(dòng)子(DNA片段)起始密碼子(RNA)。終止子(DNA片段)終止密碼子(RNA)。二、植物的克隆1植物組織培養(yǎng)關(guān)鍵過(guò)程總結(jié)名稱(chēng)過(guò)程形成體特點(diǎn)培養(yǎng)基光脫分化由外植體脫分化為愈傷組織排列疏松、高度液泡化的薄壁細(xì)胞團(tuán)適當(dāng)配比的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑避光再分化由愈傷組織分化為幼苗或胚狀結(jié)構(gòu)有根、芽或有生根發(fā)芽的能力生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例低時(shí)，誘導(dǎo)芽的形成；兩者比例高時(shí)，誘導(dǎo)根的形成需光營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)和生殖生長(zhǎng)發(fā)育成完整的植物體由根、莖、葉、花、果實(shí)、種子組成自身產(chǎn)生各種激素需光2.植物細(xì)胞工程操作3植物細(xì)胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)的關(guān)系三、動(dòng)物的克隆1動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)(1)動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)包括組織塊的切取、組織細(xì)胞的分散及細(xì)胞培養(yǎng)三個(gè)階段。分散組織細(xì)胞常用的方法有機(jī)械消化法和胰酶消化法。(3)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的含義原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即進(jìn)行的細(xì)胞、組織培養(yǎng)的過(guò)程。傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)細(xì)胞分成若干份，接種到若干份培養(yǎng)基中，使其繼續(xù)生長(zhǎng)、增殖。(4)動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程：切取組織小片胰蛋白酶酶解原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)。2動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用(1)細(xì)胞融合(2)單克隆抗體的制備3細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物的克隆繁殖(1)核移植：利用一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核來(lái)取代另一個(gè)細(xì)胞中的細(xì)胞核，形成一個(gè)重建的“合子”。(2)動(dòng)物的克隆繁殖4規(guī)避克隆動(dòng)物與試管動(dòng)物的3個(gè)誤區(qū)(1)誤區(qū)一：試管動(dòng)物與克隆動(dòng)物的產(chǎn)生都是無(wú)性生殖。糾正：試管動(dòng)物的產(chǎn)生是有性生殖，克隆動(dòng)物的產(chǎn)生是無(wú)性生殖。(2)誤區(qū)二：試管動(dòng)物(哺乳類(lèi))的產(chǎn)生是在體外進(jìn)行的，克隆動(dòng)物(哺乳類(lèi))的產(chǎn)生是在體內(nèi)進(jìn)行的。糾正：試管動(dòng)物(哺乳類(lèi))和克隆動(dòng)物(哺乳類(lèi))早期胚胎之前都是在體外進(jìn)行的，早期胚胎經(jīng)過(guò)胚胎移植之后是在體內(nèi)進(jìn)行的。(3)誤區(qū)三：胚胎移植的優(yōu)勢(shì)是充分發(fā)揮雌性?xún)?yōu)良個(gè)體的繁殖潛力，因此胚胎移植的胚胎只能來(lái)自體內(nèi)受精的胚胎。糾正：胚胎移植的胚胎有三個(gè)來(lái)源：體內(nèi)正常受精產(chǎn)生的胚胎、核移植產(chǎn)生的重組細(xì)胞培養(yǎng)而來(lái)的胚胎、體外受精產(chǎn)生的早期胚胎。題型一基因工程的原理、工具和技術(shù)1(2017·海淀區(qū)期中)科研人員分別將蛋白C基因和蛋白G(葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)基因與質(zhì)粒連接，形成重組DNA分子。將質(zhì)粒和上述兩種表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)入三組蛋白G缺陷細(xì)胞，在三種不同濃度的葡萄糖間隔刺激下，測(cè)定三組細(xì)胞的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率，結(jié)果如圖。下列分析不正確的是()A組實(shí)驗(yàn)的目的是排除空質(zhì)粒對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響B(tài)、組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率隨葡萄糖濃度增加而減小C由實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)蛋白C是一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白D實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蛋白C的轉(zhuǎn)運(yùn)功能強(qiáng)于蛋白G答案B解析組中轉(zhuǎn)入的是空質(zhì)粒，其目的是排除空質(zhì)粒對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，A正確；由圖可知，、組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率隨葡萄糖濃度增加而增加，B錯(cuò)誤；組中轉(zhuǎn)入的是空質(zhì)粒，組轉(zhuǎn)入的是蛋白C基因，對(duì)比組與組結(jié)果可推知蛋白C是一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，C正確；組中轉(zhuǎn)入的是蛋白G基因，組轉(zhuǎn)入的是蛋白C基因，結(jié)果組的轉(zhuǎn)運(yùn)速率大于組，這表明蛋白C的轉(zhuǎn)運(yùn)功能強(qiáng)于蛋白G，D正確。2(2017·宣城期中)下列有關(guān)人胰島素的重組DNA分子的敘述，正確的是()A重組DNA分子中的胰島素基因可通過(guò)人肝細(xì)胞mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得B重組DNA分子的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動(dòng)于復(fù)制原(起)點(diǎn)C借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)D胰島素的重組DNA分子中要有啟動(dòng)子和終止密碼子答案C解析由于基因的選擇性表達(dá)，在人的肝細(xì)胞中，沒(méi)有胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA，A錯(cuò)誤；重組DNA分子的復(fù)制啟動(dòng)于復(fù)制原(起)點(diǎn)，胰島素基因的表達(dá)啟動(dòng)于啟動(dòng)子，B錯(cuò)誤；標(biāo)記基因的作用是鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)，C正確；胰島素的重組DNA分子中要有啟動(dòng)子和終止子，終止密碼子存在于mRNA上，D錯(cuò)誤。3(2018·“七彩陽(yáng)光”聯(lián)盟)某研究小組欲利用抗蟲(chóng)基因，通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育抗蟲(chóng)玫瑰。圖1和圖2分別表示出了抗蟲(chóng)基因和農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)和抗生素抗性基因(pst、Sma、Alu表示限制性核酸內(nèi)切酶切割位點(diǎn)；amp為氨芐青霉素抗性基因，tet為四環(huán)素抗性基因)。請(qǐng)回答：(1)為獲得大量抗蟲(chóng)基因，且保證形成重組質(zhì)粒時(shí)，目的基因以唯一方向接入，可選用_(填限制性核酸內(nèi)切酶的種類(lèi))分別切割目的基因和Ti質(zhì)粒，再用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子，再與經(jīng)過(guò)_處理的_(A.有amp和tetB有amp，無(wú)tetC無(wú)amp，有tetD無(wú)amp和tet)農(nóng)桿菌液混合，使重組DNA進(jìn)入農(nóng)桿菌。再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的玫瑰細(xì)胞，使目的基因?qū)朊倒寮?xì)胞中。(2)將含有導(dǎo)入了目的基因的玫瑰細(xì)胞的試管放在_上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)獲得胚性細(xì)胞，進(jìn)而培育成抗蟲(chóng)玫瑰。(3)這種借助基因工程方法，將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，再通過(guò)這些轉(zhuǎn)基因細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，獲得具有特定性狀的新植株的技術(shù)就是_。(4)當(dāng)前多地過(guò)度開(kāi)發(fā)旅游造成生態(tài)環(huán)境的破壞，為減緩生態(tài)環(huán)境的破壞，可發(fā)展_工程，并在旅游區(qū)種植抗蟲(chóng)玫瑰，可有效降低農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染，并獲得較佳的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和_。答案(1)Sma和PstCaCl2D(2)搖床(3)植物細(xì)胞工程技術(shù)(4)生態(tài)旅游生態(tài)效益有關(guān)基因工程操作易錯(cuò)分析(1)基因文庫(kù)中不是直接保管相應(yīng)基因，基因文庫(kù)中的基因保存在受體菌中。(2)原核生物繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少，有利于目的基因的復(fù)制與表達(dá)，因此常用大腸桿菌等原核生物作為受體細(xì)胞。(3)植物細(xì)胞的全能性較高，可經(jīng)植物組織培養(yǎng)過(guò)程成為完整植物體。因此受體細(xì)胞可以是受精卵也可以是體細(xì)胞；動(dòng)物基因工程中的受體細(xì)胞一般是受精卵。(4)操作工具有三種，但工具酶常用兩種，載體不是酶；在基因工程操作步驟“獲得目的基因”和“形成重組DNA分子”兩個(gè)過(guò)程中通常用同種限制性核酸內(nèi)切酶，目的是產(chǎn)生相同的粘性末端；DNA連接酶只在“形成重組DNA分子”操作中用到。(5)一般情況下，用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時(shí)可用兩種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割質(zhì)粒和目的基因。這樣可避免質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連接。(6)標(biāo)記基因的作用和種類(lèi)：標(biāo)記基因的作用篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；常見(jiàn)的標(biāo)記基因有抗生素抗性基因、發(fā)光基因(表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì))等。題型二基因工程的應(yīng)用4如圖是利用基因工程培育抗蟲(chóng)植物的示意圖。以下相關(guān)敘述，正確的是()A的形成需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶參與B侵染植物細(xì)胞后，重組Ti質(zhì)粒整合到的染色體上C的染色體上若含抗蟲(chóng)基因，則就表現(xiàn)出抗蟲(chóng)性狀D只要表現(xiàn)出抗蟲(chóng)性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異答案D解析重組質(zhì)粒的形成需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶參與，DNA聚合酶一般用于DNA復(fù)制過(guò)程，A錯(cuò)誤；侵染植物細(xì)胞后，重組Ti質(zhì)粒上的TDNA整合到植物細(xì)胞的染色體上，B錯(cuò)誤；受體細(xì)胞的染色體上含抗蟲(chóng)基因，但不代表該基因就一定成功表達(dá)，因此不能確定是否表現(xiàn)出抗蟲(chóng)性狀，C錯(cuò)誤；只要表現(xiàn)出抗蟲(chóng)性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異，D正確。5(2017·南昌期中)下列關(guān)于基因工程應(yīng)用的敘述，正確的是()A基因治療就是把缺陷基因誘變成正?；駼基因診斷的基本原理是DNA分子雜交C一種基因探針能檢測(cè)水體中的各種病毒D利用基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗時(shí)，目的基因存在于人體B淋巴細(xì)胞的DNA中答案B解析基因治療就是向目標(biāo)細(xì)胞中引入正常功能的基因以糾正或補(bǔ)償基因的缺陷，達(dá)到治療疾病的目的，A錯(cuò)誤；基因診斷又稱(chēng)DNA診斷或分子診斷，通過(guò)分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)，直接檢測(cè)出分子結(jié)構(gòu)水平和表達(dá)水平是否異常，從而對(duì)疾病做出判斷，利用的原理就是DNA分子雜交，B正確；基因探針是用放射性同位素(或熒光分子)標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段，一種基因探針只能檢測(cè)水體中的一種或一類(lèi)病毒，C錯(cuò)誤；基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗是通過(guò)構(gòu)建含有乙肝病毒表面抗原基因的重組質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染(就是讓質(zhì)粒進(jìn)入宿主細(xì)胞)相應(yīng)的宿主細(xì)胞，如酵母菌、CHO細(xì)胞( 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞，一種可以無(wú)限繁殖的細(xì)胞)，生產(chǎn)乙肝表面抗原蛋白，D錯(cuò)誤。題型三基因工程的設(shè)計(jì)方案6(2017·鏡湖區(qū)校級(jí)期中)科研人員以抗四環(huán)素基因?yàn)闃?biāo)記基因，通過(guò)基因工程的方法讓大腸桿菌生產(chǎn)鼠的珠蛋白，治療鼠的鐮刀形細(xì)胞貧血癥。下列相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，不合理的是()A用珠蛋白編碼序列加啟動(dòng)子、抗四環(huán)素基因等元件來(lái)構(gòu)建重組DNA分子B利用小鼠DNA分子通過(guò)PCR克隆出珠蛋白基因的編碼序列C用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出已經(jīng)導(dǎo)入珠蛋白編碼序列的大腸桿菌D用Ca2處理大腸桿菌后，將重組DNA分子導(dǎo)入具有四環(huán)素抗性的大腸桿菌中答案D解析重組DNA分子的組成包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因和終止子，因此用珠蛋白編碼序列加啟動(dòng)子、抗四環(huán)素基因等元件來(lái)構(gòu)建重組DNA分子，A正確；利用小鼠DNA分子通過(guò)PCR克隆出珠蛋白基因的編碼序列，B正確；標(biāo)記基因是四環(huán)素抗性基因，因此用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出已經(jīng)導(dǎo)入珠蛋白編碼序列的大腸桿菌，C正確；標(biāo)記基因是四環(huán)素抗性基因，因此受體細(xì)胞不能具有四環(huán)素抗性，即用Ca2處理大腸桿菌后，將重組DNA分子導(dǎo)入不具有四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，D錯(cuò)誤。7科學(xué)家采用基因工程技術(shù)將矮牽牛中控制藍(lán)色色素合成的基因A轉(zhuǎn)移到玫瑰中，以培育藍(lán)玫瑰，下列操作正確的是()A利用DNA分子雜交技術(shù)從矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因AB用氯化鈣處理玫瑰葉肉細(xì)胞，使其處于感受態(tài)C用含四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因玫瑰細(xì)胞D將基因A導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞液泡中，防止其經(jīng)花粉進(jìn)入野生玫瑰答案A解析矮牽牛中有控制藍(lán)色色素合成的基因A，利用DNA分子雜交技術(shù)，可以從矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取目的基因(基因A)，故A正確；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，不需要用氯化鈣，故B錯(cuò)誤；根據(jù)標(biāo)記基因來(lái)篩選轉(zhuǎn)基因玫瑰細(xì)胞，而標(biāo)記基因不一定是四環(huán)素抗性基因，故C錯(cuò)誤；玫瑰細(xì)胞液泡中沒(méi)有DNA，不能將目的基因?qū)胍号葜?，?yīng)將目的基因?qū)肴~綠體或線粒體中，以防止其經(jīng)花粉進(jìn)入野生玫瑰，故D錯(cuò)誤。8(2017·浙江聯(lián)考)我們?nèi)粘３缘拇竺字需F含量極低，科研人員通過(guò)基因工程等技術(shù)，培育出了鐵含量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)基因水稻，改良了大米的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。下圖為培育轉(zhuǎn)基因水稻的過(guò)程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：(1)上述過(guò)程中，鐵結(jié)合蛋白基因?yàn)開(kāi)，獲取該基因后常用_技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。(2)構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，通常要用同種限制性核酸內(nèi)切酶分別切割_和_。將重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí)，可以用_處理農(nóng)桿菌，使重組Ti質(zhì)粒易于導(dǎo)入農(nóng)桿菌。(3)將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與水稻愈傷組織共同培養(yǎng)時(shí)，通過(guò)培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)，可以獲得成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞，該篩選過(guò)程是通過(guò)在培養(yǎng)基2中加入_實(shí)現(xiàn)的。(4)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻的培育是否成功，需要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻_。答案(1)目的基因PCR(2)含目的基因的DNA片段Ti質(zhì)粒CaCl2(3)抗生素(4)種子中鐵含量解析(1)本題中培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是獲得鐵含量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)基因大米，因此目的基因?yàn)殍F結(jié)合蛋白基因；要大量獲得目的基因，一般采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。(2)構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，要用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割含目的基因的DNA片段和Ti質(zhì)粒，使二者產(chǎn)生相同的粘性末端，從而便于拼接；CaCl2處理農(nóng)桿菌可以增大其細(xì)胞壁的通透性，從而利于重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入。(3)重組Ti質(zhì)粒含有抗生素抗性基因，導(dǎo)入重組Ti質(zhì)粒的愈傷組織細(xì)胞在含有抗生素的培養(yǎng)基上可以存活，而未導(dǎo)入的則無(wú)法存活，故可加入抗生素來(lái)篩選成功導(dǎo)入的受體細(xì)胞。(4)轉(zhuǎn)基因的目的是提高大米中鐵含量，因此可通過(guò)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻種子中鐵的含量來(lái)判斷轉(zhuǎn)基因水稻的培育是否成功。題型四植物的克隆9(2017·泰州三模)為了給工廠化繁殖脫毒甘薯苗提供技術(shù)支持，科研人員利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)研究了甘薯莖尖大小對(duì)誘導(dǎo)分化苗和脫毒苗的影響，結(jié)果如表所示，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()處理外植體數(shù)/個(gè)分化苗數(shù)/苗脫毒苗數(shù)/苗小于0.3 mm20110.30.5 mm20107大于0.6 mm20134A.為防止細(xì)菌污染，應(yīng)對(duì)外植體進(jìn)行消毒B脫分化時(shí)，應(yīng)給予適宜光照誘導(dǎo)基因表達(dá)C根據(jù)培養(yǎng)階段的不同要調(diào)整培養(yǎng)基中激素比例D0.30.5 mm大小的莖尖有利于培養(yǎng)脫毒甘薯苗答案B解析植物組織培養(yǎng)時(shí)，在接種前對(duì)外植體進(jìn)行消毒處理可減少雜菌污染，A正確；脫分化時(shí)，愈傷組織的誘導(dǎo)往往需要暗培養(yǎng)，不能給予適宜光照，B錯(cuò)誤；不同階段的培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例不同，C正確；根據(jù)表格中數(shù)據(jù)可知，0.30.5 mm大小的莖尖，脫毒苗數(shù)最多，因此有利于培養(yǎng)脫毒甘薯苗，D正確。10(2017·揚(yáng)州二模)擬采用“取材消毒愈傷組織培養(yǎng)出芽生根移栽”的方法繁殖一種名貴花卉。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A消毒的原則是既要?dú)⑺啦牧媳砻娴奈⑸铮忠獪p少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害B在愈傷組織培養(yǎng)基中加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，可獲得染色體加倍的細(xì)胞C出芽是外植體經(jīng)細(xì)胞脫分化后再分化的結(jié)果，受基因選擇性表達(dá)的調(diào)控D誘導(dǎo)分化生長(zhǎng)物生根時(shí)，培養(yǎng)基中通常含有生長(zhǎng)素類(lèi)似物等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑答案B解析消毒劑的使用既要?dú)⑺辣砻嫖⑸镉忠乐箓M織細(xì)胞，影響組織培養(yǎng)，A正確；愈傷組織細(xì)胞含有細(xì)胞壁，加入細(xì)胞融合誘導(dǎo)劑不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞融合，因此不會(huì)得到染色體加倍的細(xì)胞，B錯(cuò)誤；愈傷組織再分化形成胚狀體后，一般先形成芽，再形成根，而分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，C正確；誘導(dǎo)分化生長(zhǎng)物生根時(shí)，培養(yǎng)基中通常含有生長(zhǎng)素類(lèi)似物等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，D正確。題型五動(dòng)物的克隆11(2017·泰州期中)如圖為小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)培養(yǎng)的過(guò)程圖，下列敘述不正確的是()A可用胰蛋白酶分散組織塊中的細(xì)胞BMEF細(xì)胞可能產(chǎn)生某種物質(zhì)抑制胚胎干細(xì)胞的分化C加入培養(yǎng)液中的MEF細(xì)胞最好是來(lái)自傳代培養(yǎng)的細(xì)胞D細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可能出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制的現(xiàn)象答案C解析將動(dòng)物組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞，可以用胰蛋白酶處理，A正確；分析圖發(fā)現(xiàn)：在胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液中加入MEF細(xì)胞后，不分化，但未加的一組，易分化。對(duì)比分析可以推導(dǎo)：MEF細(xì)胞可能產(chǎn)生某種物質(zhì)抑制胚胎干細(xì)胞的分化，B正確；加入培養(yǎng)液中的MEF細(xì)胞最好是來(lái)自原代培養(yǎng)的細(xì)胞，C錯(cuò)誤；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可能出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制的現(xiàn)象，D正確。12(2017·浙江三模)甘草酸是中藥甘草中的主要活性成分，為了快速檢測(cè)甘草酸，科研人員利用細(xì)胞工程技術(shù)制備了抗甘草酸的單克隆抗體，其基本操作過(guò)程如圖。相關(guān)敘述正確的是()A過(guò)程注射相應(yīng)抗原后應(yīng)立即從小鼠脾臟中提取細(xì)胞甲B過(guò)程誘導(dǎo)細(xì)胞融合，利用了細(xì)胞膜的選擇透過(guò)性C過(guò)程、的篩選方法相同，細(xì)胞丙、丁遺傳物質(zhì)相同D過(guò)程無(wú)論在體內(nèi)還是體外進(jìn)行，細(xì)胞丁都可大量增殖答案D解析過(guò)程注射相應(yīng)抗原后，需要機(jī)體進(jìn)行免疫，使B淋巴細(xì)胞增殖分化產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞，才可以從小鼠脾臟中提取細(xì)胞甲，A錯(cuò)誤；過(guò)程誘導(dǎo)細(xì)胞融合，利用了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，B錯(cuò)誤；過(guò)程用選擇培養(yǎng)基獲得雜交瘤細(xì)胞，過(guò)程用抗體檢測(cè)和克隆培養(yǎng)得到能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，C錯(cuò)誤；雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體，過(guò)程無(wú)論在體內(nèi)還是體外進(jìn)行，細(xì)胞丁都可大量增殖，D正確。專(zhuān)題強(qiáng)化練一、選擇題1(2017·南通模擬)科學(xué)家利用基因工程技術(shù)將魚(yú)的抗凍蛋白基因?qū)敕?，使番茄的耐寒能力大大提高。在培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因番茄的過(guò)程中，下列操作不合理的是()A可用PCR技術(shù)或逆轉(zhuǎn)錄法獲得抗凍蛋白基因B利用選擇培養(yǎng)基對(duì)構(gòu)建的重組DNA分子直接篩選C利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入番茄體細(xì)胞D在低溫條件下篩選已導(dǎo)入抗凍蛋白基因的番茄植株答案B解析基因工程中獲取目的基因的方法包括PCR技術(shù)體外擴(kuò)增、從基因文庫(kù)中獲取或化學(xué)方法合成(如逆轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因)，A正確；構(gòu)建的重組DNA分子不可直接在選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，需要先導(dǎo)入受體細(xì)胞中再進(jìn)行篩選，B錯(cuò)誤；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，C正確；可利用低溫條件對(duì)耐寒番茄進(jìn)行個(gè)體性狀水平的檢測(cè)，篩選成功轉(zhuǎn)基因的耐寒番茄植株，D正確。2(2017·江蘇三模)如圖表示抗胃癌單克隆抗體的制備過(guò)程。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A抗胃癌單克隆抗體可以和甲特異性結(jié)合B圖中細(xì)胞融合過(guò)程只可用聚乙二醇處理C用特定的選擇培養(yǎng)基對(duì)乙篩選后獲得的細(xì)胞均能增殖D需對(duì)丙進(jìn)行抗體檢測(cè)，經(jīng)過(guò)篩選后才可獲得丁答案B解析抗胃癌單克隆抗體可以和甲(抗原)特異性結(jié)合，A正確；誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合也可以用滅活的仙臺(tái)病毒處理，B錯(cuò)誤；用特定的選擇培養(yǎng)基對(duì)乙篩選后獲得的細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞，都能增殖，但不一定能產(chǎn)生特異性抗體，C正確；需對(duì)丙(雜交瘤細(xì)胞)進(jìn)行抗體檢測(cè)，經(jīng)過(guò)篩選后才可獲得丁(能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞)，D正確。3(2017·南京三模)科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過(guò)乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線如圖所示(成纖維細(xì)胞可增殖)。下列敘述錯(cuò)誤的是()A過(guò)程常用的方法是顯微注射法B代孕母羊要注射免疫抑制劑防止發(fā)生免疫排斥反應(yīng)使移植胚胎死亡C卵細(xì)胞去核的目的是保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞D整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)從而獲得大量的細(xì)胞群答案B解析過(guò)程是將重組目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，受體細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞，常用的方法是顯微注射法，A正確；胚胎移植時(shí)，受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，因此胚胎移植時(shí)不需要對(duì)代孕母羊注射免疫抑制劑，B錯(cuò)誤；卵細(xì)胞去掉其細(xì)胞核的原因是使克隆出的動(dòng)物個(gè)體的遺傳物質(zhì)幾乎全部來(lái)自供體細(xì)胞，即含目的基因的成纖維細(xì)胞，C正確；因?yàn)檎嫌心康幕虻某衫w維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，理論上可獲得大量的細(xì)胞群，D正確。4下面是3種限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)DNA分子的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)圖(箭頭表示切點(diǎn)，切出的斷面為粘性末端)。下列敘述錯(cuò)誤的是()限制酶1：ATC；限制酶2：CCGG；限制酶3：ATCCA不同的限制性核酸內(nèi)切酶有不同的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，體現(xiàn)了酶的專(zhuān)一性B限制性核酸內(nèi)切酶2和酶3識(shí)別的序列都包含6個(gè)堿基對(duì)C限制性核酸內(nèi)切酶1和酶3剪出的粘性末端相同D能夠識(shí)別和切割RNA分子內(nèi)一小段核苷酸序列的酶只有限制性核酸內(nèi)切酶2答案D解析酶具有專(zhuān)一性，不同的限制性核酸內(nèi)切酶有不同的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，故A正確；圖中可得，限制性核酸內(nèi)切酶2和酶3識(shí)別的序列分別是CCGCGG和GGATCC，均為6個(gè)堿基對(duì)，故B正確；限制性核酸內(nèi)切酶1和酶3剪出的粘性末端相同，均為GATC，故C正確；限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別特定的DNA序列，因此三種限制性核酸內(nèi)切酶均不能識(shí)別和切割RNA中核糖核苷酸序列，故D錯(cuò)誤。5下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物克隆的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是()A植物組織培養(yǎng)獲得的試管苗，可能是雜合子也可能是純合子，可能為單倍體也可能為二倍體、多倍體B為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的干擾素C克隆動(dòng)物的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D同一株綠色開(kāi)花植物不同部位的細(xì)胞經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的愈傷組織基因型不一定相同答案B解析由于植物組織培養(yǎng)屬于無(wú)性生殖，后代的基因型由親本基因型決定，可能是雜合子也可能是純合子，如果培養(yǎng)的外植體是體細(xì)胞，則會(huì)獲得二倍體或多倍體，如果培養(yǎng)的是花粉粒，則獲得的是單倍體，A正確；抗生素具有殺菌作用，因此為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素，B錯(cuò)誤；動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的技術(shù)基礎(chǔ)，C正確；同一植株不同細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基因不一定相同，如花粉細(xì)胞培養(yǎng)形成的愈傷組織細(xì)胞的基因只有體細(xì)胞的一半，D正確。二、非選擇題6(2016·全國(guó)乙，40)某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamH酶切后，與用BamH酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。回答下列問(wèn)題：(1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有_(答出兩點(diǎn)即可)，而作為基因表達(dá)載體，除滿(mǎn)足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。(2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是_；并且_和_的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是_。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有_的固體培養(yǎng)基。(3)基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自于_。答案(1)能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因(2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或含有重組質(zhì)粒)二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素(3)受體細(xì)胞解析(1)作為載體必須具備如下特點(diǎn)：能自我復(fù)制，從而在受體細(xì)胞中穩(wěn)定保存；含標(biāo)記基因，以供重組DNA的鑒定和選擇；具一個(gè)至多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶切割位點(diǎn)以便外源DNA片段插入。(2)在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，只有具有Ampr的大腸桿菌才能夠生長(zhǎng)。而Ampr位于質(zhì)粒上，故未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的大腸桿菌細(xì)胞中無(wú)Ampr，不能在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而僅含有質(zhì)粒載體的和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌均具有Ampr，因而能在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。目的基因的插入破壞了質(zhì)粒載體的Tetr，故含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能在含有四環(huán)素的平板上生長(zhǎng)，從而與僅含有質(zhì)粒載體的大腸桿菌得以區(qū)分。(3)噬菌體是病毒，無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無(wú)法自主合成DNA，需借助宿主細(xì)胞完成DNA復(fù)制。7(2016·全國(guó)丙，40)圖(a)中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoR、BamH和Sau3A三種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖(b)為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上的EcoR、Sau3A的切點(diǎn)是唯一的)。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題：(1)經(jīng)BamH酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被_酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_。(2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)所示，這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有_，不能表達(dá)的原因是_。答案(1)Sau3A兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的粘性末端(2)甲、丙甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄解析(1)由于限制性核酸內(nèi)切酶Sau3A與BamH切割后形成的粘性末端相同，所以經(jīng)BamH酶切得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被Sau3A酶切后的產(chǎn)物連接。(2)在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子應(yīng)位于目的基因的首端，終止子應(yīng)位于目的基因的尾端，這樣目的基因才能表達(dá)。圖中甲、丙均不符合，所以不能表達(dá)目的基因的產(chǎn)物。8青蒿素是治療瘧疾的重要藥物。下圖為利用二倍體野生型青蒿，通過(guò)現(xiàn)代生物技術(shù)培育青蒿素含量高的四倍體細(xì)胞和植株的示意圖。請(qǐng)回答以下相關(guān)問(wèn)題：(1)上述ad過(guò)程涉及的原理有_(至少兩項(xiàng))。其中a為_(kāi)過(guò)程，b過(guò)程需要在_作用下完成，d過(guò)程的技術(shù)基礎(chǔ)是_。(2)通過(guò)e過(guò)程可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)青蒿素。有關(guān)敘述正確的是_。A該過(guò)程需要適量激素以刺激分化B該過(guò)程不需要提供有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)C該過(guò)程需要誘導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)D該過(guò)程的原理是染色體畸變(3)已知青蒿素的合成受G基因控制，利用_酶可將G基因從青蒿細(xì)胞中分離出，并經(jīng)改造和擴(kuò)增后，將其與含有抗生素抗性基因的質(zhì)粒形成重組DNA，再與經(jīng)_處理的大腸桿菌液混合，使重組DNA更易進(jìn)入大腸桿菌，通過(guò)培養(yǎng)大腸桿菌可生產(chǎn)青蒿素。(4)下列有關(guān)基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是_。A獲取目的基因需要酶的催化B目的基因能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制C大腸桿菌是基因工程的常用載體D能夠?qū)崿F(xiàn)定向改造生物性狀答案(1)細(xì)胞全能性、膜的流動(dòng)性、染色體畸變脫分化纖維素酶和果膠酶植物組織培養(yǎng)(2)C(3)限制性核酸內(nèi)切氯化鈣(4)C解析(1)上述ad過(guò)程涉及細(xì)胞全能性、膜的流動(dòng)性、染色體畸變等原理；其中a為脫分化過(guò)程，b過(guò)程需要在纖維素酶和果膠酶作用下去除細(xì)胞壁，d過(guò)程的技術(shù)基礎(chǔ)是植物組織培養(yǎng)。(2)通過(guò)e過(guò)程可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)青蒿素，該過(guò)程需要誘導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)。(3)已知青蒿素的合成受G基因控制，利用限制性核酸內(nèi)切酶可將G基因從青蒿細(xì)胞中分離出，并經(jīng)改造和擴(kuò)增后，將其與含有抗生素抗性基因的質(zhì)粒形成重組DNA，再與經(jīng)氯化鈣處理的大腸桿菌液混合，使重組DNA更易進(jìn)入大腸桿菌，通過(guò)培養(yǎng)大腸桿菌可生產(chǎn)青蒿素。(4)質(zhì)粒是基因工程的常用載體，C錯(cuò)誤。9(2016·溫州3月選考模擬)卡那霉素和頭孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素還對(duì)葡萄細(xì)胞有抑制作用。研究人員將Barnase基因(雄性不育基因)轉(zhuǎn)入葡萄細(xì)胞，利用卡那霉素和頭孢霉素，通過(guò)植物克隆方法成功培育出大粒、無(wú)核的葡萄新品種。請(qǐng)回答：(1)構(gòu)建含Barnase基因、葡萄糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成_以便鑒定是否混有雜菌，再用_將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB_培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。構(gòu)建重組質(zhì)粒需要用到的工具酶是_、_。(2)將經(jīng)過(guò)_的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，4分鐘后取出(此時(shí)已有較多農(nóng)桿菌附著在葉片小塊上)并接種到固體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時(shí)，可以看到在葉片小塊周?chē)霈F(xiàn)_和大量菌落。這時(shí)再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是_(A.抑制葡萄細(xì)胞脫分化B促進(jìn)葡萄細(xì)胞再分化C殺滅農(nóng)桿菌D促進(jìn)農(nóng)桿菌生長(zhǎng))。(3)將葉片小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，轉(zhuǎn)移至發(fā)芽培養(yǎng)基中，待其長(zhǎng)出_后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗?？敲顾嘏囵B(yǎng)基起著_作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是_。(4)在卡那霉素培養(yǎng)基中，由于轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)周?chē)姆寝D(zhuǎn)化細(xì)胞有保護(hù)作用，獲得的試管苗中可能存在假的轉(zhuǎn)基因試管苗，因此還需對(duì)試管苗的_基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行生化檢測(cè)，才能鑒別出真正的轉(zhuǎn)基因試管苗。(5)最后，對(duì)轉(zhuǎn)基因試管苗還需進(jìn)行逐漸_濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。答案(1)單菌落接種環(huán)液體限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶(2)消毒愈傷組織C(3)叢狀苗篩選植物組織培養(yǎng)(4)葡萄糖苷酸酶(5)降低解析(1)構(gòu)建含Barnase基因、葡萄糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入農(nóng)桿菌，在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成單菌落以便鑒定是否混有雜菌，再用接種環(huán)將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。構(gòu)建重組質(zhì)粒需要用到的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶。(2)將經(jīng)過(guò)消毒的幼嫩葡萄葉片切成小塊，浸入農(nóng)桿菌懸浮液中，4分鐘后取出(此時(shí)已有較多農(nóng)桿菌附著在葉片小塊上)并接種到固體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)至第3天時(shí)，可以看到在葉片小塊周?chē)霈F(xiàn)愈傷組織和大量菌落。這時(shí)再用頭孢霉素處理葉片小塊，其目的是殺滅農(nóng)桿菌。(3)將葉片小塊放入卡那霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，轉(zhuǎn)移至發(fā)芽培養(yǎng)基中，待培養(yǎng)基長(zhǎng)出叢狀苗后，再轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)形成試管苗?？敲顾嘏囵B(yǎng)基起著篩選作用，植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是植物組織培養(yǎng)。(4)在卡那霉素培養(yǎng)基中，由于轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)周?chē)姆寝D(zhuǎn)化細(xì)胞有保護(hù)作用，獲得的試管苗中可能存在假的轉(zhuǎn)基因試管苗，因此還需對(duì)試管苗的葡萄糖苷酸酶基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行生化檢測(cè)，才能鑒別出真正的轉(zhuǎn)基因試管苗。(5)對(duì)轉(zhuǎn)基因試管苗還需進(jìn)行逐漸降低濕度的鍛煉，使之適應(yīng)自然環(huán)境。10(2015·溫州中學(xué)測(cè)試)如圖所示為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖，回答下列問(wèn)題：(1)容器A中放置的一般是幼齡動(dòng)物的器官或組織，原因是其細(xì)胞_，易于培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)先要剪碎，然后用_分散細(xì)胞，制成B瓶中的細(xì)胞懸液。細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入C瓶中進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱(chēng)為_(kāi)。(2)在D瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞絕大部分死亡，只有極少數(shù)細(xì)胞存活，這是因?yàn)榇婊畹募?xì)胞發(fā)生了_，可無(wú)限增殖。目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為_(kāi)代以?xún)?nèi)，以保持細(xì)胞正常的_核型。(3)C、D瓶中的培養(yǎng)基為保證無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，需要添加一定量的_。還需要提供O2和CO2等氣體環(huán)境，CO2的作用主要是_。(4)動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)，通常要在培養(yǎng)基中補(bǔ)充一定濃度的某些物質(zhì)。如圖是血清對(duì)正常細(xì)胞和癌細(xì)胞培養(yǎng)影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。據(jù)圖可知，培養(yǎng)_細(xì)胞一定需要添加血清。答案(1)分裂能力強(qiáng)胰蛋白酶原代培養(yǎng)(2)突變10二倍體(3)抗生素維持培養(yǎng)液的pH(4)正常解析(1)容器A中放置的一般是幼齡動(dòng)物的器官或組織，原因是其細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，易于培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)先要剪碎，然后用胰蛋白酶分散細(xì)胞，制成B瓶中的細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入C瓶中進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。(2)細(xì)胞正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞絕大部分死亡，只有極少數(shù)細(xì)胞存活，這是因?yàn)榇婊畹募?xì)胞發(fā)生了突變，可無(wú)限增殖。目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為10代以?xún)?nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。(3)C、D瓶中的培養(yǎng)基為保證無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，需要添加一定量的抗生素。培養(yǎng)過(guò)程中還需要提供O2和CO2等氣體環(huán)境，CO2的作用主要是維持培養(yǎng)液的pH。(4)分析曲線圖：是否添加血清對(duì)于癌細(xì)胞的增殖影響不大，而對(duì)于正常細(xì)胞增殖影響很大，故培養(yǎng)正常細(xì)胞一定需要添加血清。20