江南大學1990-2009年生物化學歷年真題部分問答題答案.doc

《江南大學1990-2009年生物化學歷年真題部分問答題答案.doc》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《江南大學1990-2009年生物化學歷年真題部分問答題答案.doc（17頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。

1、江南大學1990-2009年生物化學歷年真題部分問答題答案1、五只試劑瓶中分別裝的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液，試用最簡便的化學方法鑒別。答：依次使用下列化學試劑進行鑒定2、某一已純化的蛋白無SDS的凝膠電泳圖如下所示，兩種情況下的電極槽緩沖液都為8.2 從下面兩副圖給出的信息，有關純化蛋白的結構你能得出什么結論？該蛋白的PI是大于還是小于8.2？答：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質時主要是根據各組分的pI的差別。圖（a）的結果只呈現單一的帶，根據題中給出的條件，表明該蛋白質是純凈的。由于SDS是一種帶負電荷的陰離子去垢劑，并且具有長長的疏水性碳氫鏈。它的這種性質不僅使寡聚蛋白質的亞

2、基拆離，而且還能拆開肽鏈的折疊結構，并且沿伸展的肽鏈吸附在上面。這樣，吸附在肽鏈上的帶負電荷的SDS分子使肽鏈帶凈負電荷，并且吸附的SDS量與肽鏈的大小成正比。結果是，不同大小的肽鏈將含有相同或幾乎相同的q/r值。由于聚丙烯酰胺凝膠基質具有篩分效應，所以，分子較小的肽鏈將比較大的、但具有相同的q/r值的肽鏈遷移得更快。若蛋白質是由單一肽鏈或共價交聯的幾條肽鏈構成（在不含-巰基乙醇的情況下），那么在用SDS處理后進行SDS-PAGE，其結果仍是單一的一條帶。若蛋白質是由幾條肽鏈非共價結合在一起，在用SDS處理后進行SDS-PAGE，則可能出現兩種情況：一種仍是一條帶，但其位置發(fā)生了變化（遷移得更

3、快），表明此蛋白質是由幾條相同的肽鏈構成，另一種可能出現幾條帶，則可以認為該蛋白質是由大小不同的幾條肽鏈構成。圖（b）的結果表明該蛋白質是由兩種大小不同的肽鏈借非共健結合在一起的寡聚體蛋白質。從圖（b）的電泳結果我們可以斷定該蛋白質的等電點低于8.2。3、含有以下四種蛋白質混合物：A，分子量12000，pI=10；B，分子量62000 ，pI=3；C，分子量28000，pI=7；D，分子量9000，pI=5。若不考慮其他因素，當它們（1）流過DEAE-纖維素陰離子交換柱時，用線性鹽洗脫時。（2）流經SephadexG-75凝膠過濾柱時，這些蛋白質的洗脫順序如何？陰離子交換柱起始pH可選擇什么范

4、圍。答：（1）流過DEAE-纖維素陰離子交換柱時，洗脫下柱的順序為等電點依次下降的順序：ACDB。陰離子交換柱最先洗脫下來的是堿性蛋白質，然后中性蛋白質，最后酸性蛋白質。 （2）流經SephadexG-75凝膠過濾柱時，按相對分子質量從大到小的順序被洗脫下來：BCAD。PH范圍：3PH104、請解釋什么是酶的活力和比活力，并說出這兩個指標在酶的純化過程中可以說明什么。（我覺得第一種答法太啰嗦了，是別人整理的，可以就第二種那樣答嗎？）答：酶活力也叫酶活性，可以用酶活力單位表示，國際酶活力單位（U）的定義是在最適條件下，1min內轉化1 mol底物所需要的酶量，或者是轉化1 mol的有關基因的酶量

5、（1 IU=1 mol/min）。另一個酶活力國際單位（Kat）的定義為：在最適條件下，每秒鐘能催化1mol底物轉化為產物所需的酶量（1Kat=1 mol/S）。酶活力是由酶催化一定反應的能力決定的，只是酶催化能力的大小，沒有具體量的概念，酶活力與總體積或總質量的乘積所代表的總活力則引入量的概念。每一純化步驟后存留的總酶活力占化步驟后存留的總酶活力占第一次總活力的百分比可以反映回收率。比活力是指單位質量（mg蛋白）的酶制劑的酶活力單位數，酶的比活力反應酶的純度，以及計算純化倍數。判斷酶分離純化的優(yōu)劣有兩個指標來衡量，一是總活力的回收；二是比活力提高的倍數?？偦盍Φ幕厥毡硎咎峒冞^程中酶的損失情況

6、，活力提高的倍數表示提純方法的有效程度。答：酶活力：酶活力是指，酶催化某一化學反應的能力，酶活力的大小可以用在一定條件下所催化的某一化學反應的反應速率來表示。酶活力反應的是反應速率。在純化過程中表示酶活力的損失程度。 酶的比活力代表酶的純度，比活力用每mg蛋白質所含的酶活力單位數表示。表明純化過程中純化的程度。（可以）5、有一份核酸樣品，可能含有少量蛋白質，只允許測定一種元素即可確定其有無蛋白質污染，您選哪一種元素，為什么？答：確定有無蛋白質污染，只需測定樣品中是否含有只存在于蛋白質而不存在核酸的元素，如果樣品有此元素存在，很明顯說明存在蛋白質污染，滿足此條件的是硫（S），核酸一般不含硫，而大

7、多數蛋白質含硫。 6、某種溶液中含有三種三肽：Tyr-Arg-Ser，Glu-Met-Phe和Asp-Pro-Lys，-COOH基團的pKa為3.8；-NH3基團的pKa為8.5。在哪種pH（2.0,6.0或13.0）下，通過電泳分離這三種多肽的效果最好。（10分）答：pH 6.0效果好。pH6.0能提供更好的分辨率。pH6.0時，3種肽（Tyr-Arg-Ser，Glu-Met-Phe和Asp-Pro-Lys）都帶有不同的電荷，凈電荷分別是+1、-1和0；而在pH 2.0時凈電荷分別是+2、+1和+2；在pH13.0時凈電荷分別是-2、-2和-2。7、比較底物水平磷酸化和氧化磷酸化的主要異同點

8、。答：底物水平磷酸化是指產物氧化還原反應過程中，分子內部能量重新分布，使無機磷酸酯化。形成高能磷酯健，后者在酶的作用下能將能量轉給ADP，生成ATP；氧化磷酸化是指與生物氧化相偶聯的磷酸化作用，發(fā)生在線粒體中，生物氧化過程中的電子傳遞在線粒體內膜兩側產生了H+濃度差，H+順濃度差流動時推動了ATP的生成，能量的最終來源是代謝過程中產生的還原型輔酶所含的化學能。8、 什么是蛋白質的變性作用？蛋白質變性后哪些性質會發(fā)生改變？答：天然蛋白質分子受到某些物理因素如高溫、高壓、紫外線照射和表面張力等或化學因素如強酸、強堿、尿素、胍、有機溶劑等的影響生物活性喪失、溶解度降低，不對稱性增加以及其他物理化學性

9、質發(fā)生改變，這種現象稱為蛋白質的變性作用。變性后的蛋白質稱為變性蛋白質。蛋白質變性的實質是蛋白質分子中的次級鍵破壞，引起天然構像解體，變性不涉及共價鍵的斷裂。 蛋白質變性后許多性質發(fā)生了改變：（1）生物活性喪失：蛋白質的生物活性是指蛋白質具有的酶、激素、毒素、抗原與抗體等活性，以及其他特殊性質如血紅蛋白的載氧能力等，這是蛋白質變性的主要特征。（2）一些側鏈基團暴露：蛋白質變性時、原來在分子內部保藏而不易與化學試劑起反應的側鏈基團，由于結構的伸展松散而暴露出來。（3）一些物理化學性質改變：蛋白質變性后，疏水基外露，溶解度降低，易形成沉淀析出；分子形狀也發(fā)生改變，球狀蛋白分子伸展，不對稱性加大，表

10、現為粘度增加，旋光性、紫外吸收光譜等改變、擴散系數降低。（4）生物化學性質的改變：蛋白質變性后，分子結構伸展松散，易被蛋白水解酶分解。9、描述蛋白質的一級結構及高級結構，并說明一級結構與空間結構的關系。答：蛋白質是生物大分子，具有明顯的結構層次性，由低層到高層可分為一級結構、二級結構、三級結構和四級結構。蛋白質一級結構：是指肽鏈的氨基酸組成及其排列順序，包括二硫鍵的位置。氨基酸序列決定蛋白質的高級結構。蛋白質二級結構：是指蛋白質多肽鏈主鏈的空間走向（折疊和盤繞方式），是有規(guī)則重復的構象。天然蛋白質的二級結構主要有四種基本類型：螺旋，折疊和轉角和無規(guī)卷曲。復雜的蛋白質分子結構，就由這些比較簡單的

11、二級結構單元進一步組合而成。蛋白質三級結構：多肽鏈在二級結構、超二級結構和結構域的基礎上進一步盤繞、折疊形成的緊密地借各種次級鍵維持的球狀分子構象。由兩條或兩條以上肽鏈通過非共價鍵構成的蛋白質稱為寡聚蛋白質。其中每一條多肽鏈稱為亞基，每個亞基都有自己的一、二、三級結構。亞基單獨存在時無生物活性，只有相互聚合成特定構象時才具有完整的生物活性。蛋白質四級結構：具有三級結構的多肽鏈通過次級鍵彼此締合形成的聚集體。每個具有三級結構的多肽稱為亞基。四級結構就是各個亞基在寡聚蛋白的天然構象中空間上的排列方式。一級結構是蛋白質的共價鍵的全部情況，一級結構包含著決定高級結構的因素，蛋白質的種類和生物活性都與肽

12、鏈的氨基酸種類和排列順序有關，蛋白質分子肽鏈的排列順序包含了自動形成復雜的三維結構（即正確的空間構象）所需要的全部信息，所以一級結構決定其高級結構，蛋白質的空間結構決定于蛋白質的一級結構。10、請設計一種測定蔗糖酶Km及Vmax的實驗方案，并做簡要說明。答：采用如下幾種實驗方法進行測定： VS作圖法； Lineweaver-Burk雙倒數作圖法； Hanes-Woolf作圖法； Eadie-Hofstee作圖法； Eisenthal和Cornish-Bowden直接線性作圖法。Lineweaver-Burk雙倒數作圖法：在一系列不同S下，測定蔗糖酶的V，以1/ V對1/S作圖，得一直線（如下圖

13、所示）。直線的斜率=Km/Vmax，在1/ V軸（縱軸）上的截距是1/ Vmax，在1/S 軸（橫軸）上的截距是-1/Km。（寫出Lineweaver-Burk方程）11、試述DNA雙螺旋結構（B結構）的理論要點（哪種答法更好）答：（1）兩條反向平行的多核苷酸鏈（一條鏈的走向為53，另一條鏈的走向為35）圍繞同一中心軸形成右手雙螺旋；（2）磷酸和脫氧核糖形成的主鏈在外側，嘌呤堿和嘧啶堿在雙螺旋的內側，堿基平面垂直于中軸，糖環(huán)平面平行于中軸；（3）雙螺旋的直徑2 nm。螺距3.4 nm，沿中心軸每上升一周包含10個堿基對，相鄰堿基間距0.34 nm，之間旋轉角度36；（4）沿中心軸方向觀察，有兩

14、條螺旋凹槽，稱為大溝（寬1.2 nm，深0.85 nm）和小溝（寬0.6 nm，深0.75 nm）；（5）兩條多核苷酸之間按堿基互補配對原則進行配對，兩條鏈依靠彼此堿基之間形成的氫鍵和堿基堆積力而結合在一起。答：1）DNA分子是由兩條方向相反的平行多核苷酸鏈構成的，一條鏈的5-末端與另一條鏈的3-末端相對。兩條鏈的糖-磷酸主鏈都是右手螺旋，有一共同的螺旋軸，螺旋表面有一條大溝和一條小溝。（2）兩條鏈上的堿基均在主鏈內側，一條鏈上的A一定與另一條鏈上的T配對，G一定與C配對。（3）成對堿基大致處于同一平面，該平面與螺旋軸基本垂直。相鄰堿基對平面間的距離為0.34nm，雙螺旋每旋轉一周有10對堿基

15、，螺旋直徑為2nm。第一種更好一點，但沒有必要說的那么詳細。大多數天然DNA屬雙鏈結構DNA，某些病毒如 和M13的DNA是單鏈分子DNA。12、扼要解釋為什么大多數球狀蛋白質在溶液中具有下列性質。（1）當離子強度從零逐漸增加時，其溶解度開始增加，然后下降，最后出現沉淀。（2）在一定的離子強度下，達到等電點pH值時，表現出最小的溶解度。（3）加熱時沉淀。（4）加入一種可和水混溶的非極性溶劑，溶解度減少。（5）如果加入一種非極性強的溶劑，會導致變性。（15分）答：（1）雖然鹽濃度開始增加時能相應穩(wěn)定帶電基團，但其進一步增加將導致鹽離子與蛋白質競爭水分子，這不僅會降低蛋白分子的溶劑化，而且會因為促

16、進蛋白分子間的極性互作和疏水相互作用而導致沉淀。（2）等電點時蛋白質凈電荷為零，即分子間的靜電斥力最小。（3）因加熱會導致蛋白質變性，因疏水內部暴露而溶解度下降。（4）非極性溶劑能降低蛋白質表面極性殘基的溶劑化作用，促進蛋白質分子間的氫鍵形成以替換其分子間的氫鍵。（5）因低介電常數能穩(wěn)定暴露于溶劑中的非極性基團而促進蛋白分子的伸展。（1）當離子強度從零逐漸增加時，其溶解度開始增加，然后下降，最后出現沉淀。答：鹽溶到鹽析。隨著蛋白質分子吸附媳婦某種鹽類離子后,帶電層使蛋白質分子彼此排斥，而使蛋白質分子與水分子間的相互作用加強，因而溶解度增高。可是隨著鹽濃度增高，使水活度降低，原來溶液中的大部分甚

17、至全部的自由的水分轉變?yōu)辂}離子的水化水。那些被迫與蛋白質表面的疏水基團接觸并掩蓋它們的水分子成為下一步最自由地可利用的水分子，因此被移去以溶劑化鹽離子，留下暴露出來的疏水基團。隨著鹽濃度的增加，蛋白質疏水表面進一步暴露，由于疏水作用蛋白質聚集而沉淀。（2）在一定的離子強度下，達到等電點pH值時，表現出最小的溶解度。答：蛋白質處于等電點時，其靜電荷為零，由于相鄰蛋白質分子之間沒有靜電斥力而趨于聚集沉淀。因此在其他條件相同時，它的溶解度達到最低點。（3）加熱時沉淀。答：當蛋白質處于等電點時，加熱凝固最完全和最迅速，熱變性使蛋白質天然結構解體，疏水基外露，因而破壞了水化層，同時由于蛋白質處于等電點也

18、破壞了帶電狀態(tài)。13、碘乙酸抑制酵母糖酵解的實驗中，（1）酵母+葡萄糖溶液+三氯乙酸的試管沒有氣泡產生；（2）酵母+葡萄糖溶液+碘乙酸的試管中有少量氣泡產生；（3）酵母+葡萄糖溶液的試管中有大量氣泡產生。試解釋產生上述現象的生化本質。（10分）答：試管中有氣泡產生的原因是酵母菌利用葡萄糖進行如下代謝途徑，產生CO2：（1）中三氯乙酸為變性劑，會殺死酵母菌，因此試管沒有氣泡產生。催化該反應的酶是由甘油醛-3-磷酸脫氫酶，其活性中心的巰基能與底物形成共價中間物，而碘乙酸與該巰基的結合將阻止這一共價中間物的形成，使甘油醛-3-磷酸不能被氧化，結果導致糖酵解途徑被抑制，因此（2）試管中只有少量氣泡產生

19、，而（3）試管中有大量氣泡產生。14、有一個酶分子抑制劑，不清楚它是可逆抑制劑還是不可逆抑制劑，請設計兩種實驗方案，說明它是哪一類抑制劑？答：（1）根據發(fā)生可逆抑制時，抑制劑與酶的結合是非共價的、可逆的。而發(fā)生不可逆抑制時，抑制劑和酶的結合是共價的原理。采用透析法，設計實驗方案如下：將一定量的酶分子抑制劑加入酶液中，編號為A液；對照樣品用等量的蒸餾水代替酶分子抑制劑，其它條件一致，編號為B液，混勻后，分別裝在半透膜的透析袋里，放入透析液（蒸餾水）中，然后放在磁力攪拌器上，在磁力攪拌子的攪拌下透析24h，其間更換透析液23次。透析完后，分別取出透析袋中酶液進行酶活力測定。如果A、B酶液酶活基本一

20、致，則說明該酶分子抑制劑為可逆抑制劑；如果A液酶活力明顯低于B液酶活力，則說明該酶分子抑制劑為不可逆抑制劑。（2）以酶的濃度為橫坐標，酶促反應速度為縱坐標，選擇數個不同抑制劑濃度，分別測定每一個抑制劑濃度下若干個酶濃度所對應的酶促反應速度。然后將這些對應的點連成曲線，得到一組不過原點的平行線的是不可逆抑制劑，得到一組過原點但斜率不同的直線的是可逆抑制劑。兩者有不同的動力學曲線圖。15、試比較DNA復制，RNA生物合成和蛋白質生物合成的忠實性。每一過程使用什么機制保證各自的忠實性。（類似題目：請分別指出（1）DNA復制（2）RNA轉錄（3）蛋白質合成三個過程的忠實性是如何保持的。）（15分）答：

21、三種大分子物質合成的忠實性高低依次為：DNA復制的忠實性蛋白質生物合成的忠實性RNA生物合成的忠實性。（1）DNA復制的忠實性主要從以下四個方面來保證： DNA雙螺旋結構及堿基配對原則（A與T、G與C配對）； DNA聚合酶具有模板依賴性，復制時堿基配對原則； DNA復制過程中的錯配修復機制； DNA的損傷修復（DNA損傷部位的切除原核生物靠Uvr蛋白，真核生物靠XP蛋白。）。（2）RNA生物合成的忠實性主要從以下五個方面來保證： RNA聚合酶可以在兩個水平上進行校對。一是借焦磷酸解除去錯誤摻入的核苷酸，這是聚合反應的逆反應。由于RNA聚合酶在遇到錯配核苷酸時停留時間比正常核苷酸為長，故給予了切

22、除的機會。另一種校對機制是聚合酶發(fā)生熄火，酶向后退，切除一段RNA（包括錯配堿基），然后再重新開始轉錄； 堿基配對原則（A與U、G與C配對）； 轉錄產物通常半衰期較短； 轉錄中的錯誤可以通過具有天然降解活性的RNA酶進行修復； 無功能的產物可以被正確的副本所替換。（3）蛋白質生物合成的忠實性主要從以下四個方面來保證： 氨基酸與tRNA的專一性結合：這種專一性結合是翻譯正確的關鍵，是由氨酰-tRNA合成酶的專一性所決定的； 攜帶氨基酸的tRNA對mRNA的識別：tRNA依靠其反密碼子去識別mRNA上的密碼子，從而保證了不同氨基酸按照mRNA上密碼子所決定的次序進入多肽鏈中； 起始因子與延伸因子的

23、作用：用于延伸的氨酰-tRNA甚至非甲?；腗et-tRNAf均不能與IF-2結合或結合很不穩(wěn)定，這就保證了只有起始氨酰-tRNA能進入核糖體的P位，與起始密碼子相結合。延伸因子EF-Tu能識別和結合除了fMet-tRNAf以外的所有氨酰-tRNA，從而保證起始tRNA攜帶的fMet不能進入肽鏈內部； 核糖體三位點模型的E位與A位的互相影響可提高翻譯的正確性； 校正作用：蛋白質生物合成的忠實性除了以上幾方面的保證外，其它多種校正作用也是極其重要的，甚至更重要的保證機制。. 氨酰-tRNA合成酶和tRNA的校正作用。其中主要有：a .動力學校對；b.構象校對；c.化學校對。以上三種校對作用，都是

24、首先由合成酶的合成部位發(fā)生錯誤，然后由水解部位進行水解校對。所以，水解校對是翻譯忠實性的重要保證。. 對占據核糖體A位的氨酰-tRNA的校對。. 變異校對。16、丙酮酸脫氫酶系的產物和底物分別是什么?為什么體內的丙酮酸脫氫酶受到嚴格的調控?答：（1）丙酮酸脫氫酶系的產物：乙酰-CoA 、CO2、FADH2；底物：丙酮酸、CoA-SH 、FAD+。（2）體內的丙酮酸脫氫酶受到嚴格的調控的原因主要有以下幾點： 嚴格調控丙酮酸脫氫酶活性的物質為：激活：CoA-SH、NAD+、AMP、丙酮酸、Ca2+、胰島素抑制：乙酰-CoA 、NADH+H+、ATP、GTP 丙酮酸脫氫酶催化的反應為不可逆反應。因此

25、，人和動物體內的乙酰-CoA以及脂肪酸和酮體等分解代謝生成乙酰-CoA的物質，不能進行糖異生生成葡萄糖。 丙酮酸脫氫酶催化的反應是連接糖酵解和TCA的橋梁，決定丙酮酸的去路，處于代謝途徑的分支點，是重要的調控位點。丙酮酸脫氫酶對細胞內能量的產生和調節(jié)，具有重要的作用。當機體能荷高時，丙酮酸脫氫酶活性受到抑制，能荷低時，丙酮酸脫氫酶活性被激活。因此，基于以上幾點，對丙酮酸脫氫酶進行嚴格的調控，使機體在滿足自身能量需求時，不無效耗費能量。17、蘇氨酸正如大多數其它的氨基酸一樣，它們在體內的分解代謝可用來支持機體在饑餓狀態(tài)下的生存，而偶數的脂肪酸做不到，為什么?奇數的脂肪酸有同樣的效果嗎?答：蘇氨酸

26、經分解代謝生成丙酮酸，丙酮酸在丙酮酸羧化酶的作用下生成草酰乙酸，草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸，磷酸烯醇式丙酮酸經糖異生生成葡萄糖，葡萄糖可用來支持機體在饑餓狀態(tài)下的生存。偶數的脂肪酸在脂酰-CoA合成酶的作用下生成脂酰-CoA，脂酰-CoA經-氧化生成乙酰-CoA，但因丙酮酸脫氫酶催化丙酮酸生成乙酰-CoA是不可逆反應，因此，乙酰-CoA不能用于糖異生。奇數的脂肪酸經活化后進行-氧化，除生成乙酰-CoA外，最后還會生成1個丙酰-CoA分子。丙酰-CoA經3個酶的催化轉化為檸檬酸循環(huán)的一個中間代謝物琥珀酰-CoA，可用于糖異生。所以奇數的脂肪酸也可用來支持機體在饑

27、餓狀態(tài)下的生存。18、乙酰輔酶A羧化酶在脂肪酸合成中起調控作用，試述這個調控機制。答：腎上腺素和胰高血糖素都會使脂肪組織中的cAMP含量升高，cAMP別構激活cAMP-依賴性蛋白激酶，cAMP-依賴性蛋白激酶通過激活一個蛋白激酶使乙酰-CoA羧化酶磷酸化而抑制乙酰-CoA羧化酶。又由另外專一的磷酸酶脫掉磷酸而再活化。在脊椎動物，脂肪酸合成的主要產物即軟脂酰-CoA，對該酶起反饋抑制作用（使乙酰-CoA羧化酶原聚合成的有活性的多聚體變?yōu)閱误w），檸檬酸是該酶的別構激活劑。檸檬酸在決定細胞內代謝燃料走向分解利用或貯存（以脂肪酸形式）方面起著重要作用。當細胞線粒體內的乙酰-CoA和ATP濃度都很高時，

28、檸檬酸即從線粒體內轉移到細胞溶膠中。隨之轉變?yōu)槿苣z中的乙酰-CoA（通過檸檬酸裂解酶），它起著對乙酰-CoA羧化酶別構激活的信號作用，引發(fā)乙酰-CoA羧化酶原聚合成有活性的多聚體。植物和細菌中的乙酰-CoA羧化酶不受檸檬酸或蛋白激酶磷酸化的影響，而是受pH和Mg2+濃度調節(jié)（升高時酶活增強）。19、有多種方法可區(qū)分高分子量的DNA和RNA分子，請寫出一種簡單可行的生物分析方法，并簡要說明理由。答：核酸酶水解法。 用RNA核酸酶水解樣品，再電泳。如果是DNA，則電泳是一條帶，如果是RNA則是許多條帶。答：聚丙烯酰胺凝膠電泳，跑的快的是RNA，慢的是DNA。答：DNA與RNA一大區(qū)別在于DNA為雙

29、鏈結構，而RNA為單鏈結構，只在局部形成雙鏈。故DNA在加熱時，雙鏈可解開，其260nm吸光度值會升高，而RNA即使加熱變性，其260nm吸光值也變化不大，故可通過加熱前后DNA與RNA在260nm處吸光值的變化來區(qū)分DNA和RNA。20、敘述酵解途徑，TCA循環(huán)和HMP途徑中各一個主要限速步驟及相應的調控酶以及它們分別受哪些因素的控制？（10分）答：（1）酵解途徑：調控酶：磷酸果糖激酶首先，該酶受ATP/AMP比值的調節(jié)。ATP不僅是磷酸果糖激酶的底物，同時又是該酶變構抑制劑。當ATP濃度高時，ATP與酶的調節(jié)部位結合，引起酶構象改變，降低酶對果糖-6-磷酸的親和力。ATP的抑制作用可被AM

30、P逆轉。另外ADP和Pi對該酶也有激活作用。其次，該酶受檸檬酸調節(jié)。檸檬酸是此酶的抑制劑，它是通過增加ATP對酶的抑制而起作用的。第三，該酶受果糖-2，6-二磷酸調節(jié)。果糖-2，6-二磷酸是磷酸果糖激酶有效的別構激活劑，它是通過增加酶對底物的親和力而消除ATP對酶的抑制作用使酶活化。它可根據細胞內葡萄糖含量高低而調節(jié)糖酵解速度。當葡萄糖缺少時，果糖-2，6-二磷酸減少，酶活性降低；當葡萄糖豐富時，該調解物增加，酶活性增加。（2）TCA循環(huán)：調控酶：檸檬酸合酶該酶的活性受到化學反應質量作用定律的調控。當底物乙酰CoA和草酰乙酸濃度較高時，可激活該酶的活性。檸檬酸和琥珀酰CoA分別是檸檬酸合酶的底

31、物草酰乙酸及乙酰CoA的競爭性抑制劑，因此，二者濃度的增加，抑制檸檬酸合酶的活性。另外，該酶還受到NADH的抑制。（3）HMP途徑：調控酶：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶當NADP+濃度升高時，可激活該酶的活性；而當NADPH濃度升高時，抑制該酶的活性。所以NADP+/NADPH的比例直接影響葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的活性。只要NADP+的濃度稍高于NADPH，即能夠使酶激活從而保證所產生的NADPH及時滿足還原性生物合成以及其他方面的需要。21、請說明DNA和RNA化學組成、結構和功能的主要差別。指出為什么雙螺旋結構的DNA在高離子強度的溶液中比在低離子強度的溶液中更穩(wěn)定。答：（1）組成：組成DNA的

32、四種堿基是A、T、C、G，核糖是-D-2脫氧核糖；組成RNA的四種堿基是A、U、C、G，核糖是-D-核糖。（2）結構：DNA多是雙鏈（也有單鏈），其結構單位為脫氧核糖核苷酸。DNA典型的二級結構為雙螺旋結構。組成DNA的兩條鏈反向平行，通過堿基互補配對（A-T，G-C）形成雙螺旋，有A=T、G=C的定量關系。DNA分子在雙螺旋的基礎上還可以形成超螺旋等更高級的結構。RNA分子是單鏈的，其結構單位為核糖核苷酸。RNA的二級結構是典型的平衡可逆結構，即其單鏈在空間自身卷曲接觸的過程中，能通過A-U、G-C配對的區(qū)段形成部分小螺旋區(qū)，不能配對的非螺旋區(qū)呈不規(guī)則的單鏈形式存在，RNA分子中AU、GC。

33、RNA主要有三種（rRNA、tRNA、mRNA）。各種tRNA（個別除外）均具有類似的二、三級結構，其二級結構為三葉草結構，三級結構為倒“L”型。（3）功能：rRNA是構成核糖體的成分之一；tRNA的主要功能是在蛋白質合成中轉運氨基酸；mRNA的主要作用是作為蛋白質合成的直接模板。DNA的主要作用是作為RNA合成的直接模板，并且自身能進行半保留復制。（4）DNA的磷酸基帶大量的負電荷，從而導致相鄰核苷酸之間產生靜電斥力而影響雙螺旋的穩(wěn)定性，在高離子強度的溶液中，溶液中的大量陽離子能更多的中和DNA的負電荷，使雙螺旋結構的DNA更加穩(wěn)定。因此，雙螺旋結構的DNA在高離子強度的溶液中比在低離子強度

34、的溶液中更穩(wěn)定。22、從組織中提取細胞DNA后，如何鑒定其純度?答：方法一：將DNA樣品分別測定其在260nm和280nm的吸光值，如果測得DNA的比值為1.8，則說明提取的細胞DNA純度高。方法二：將DNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，如果在凝膠成像系統下檢測到凝膠圖譜上只有一條帶，則說明提取的細胞DNA純度高。23、試敘述復制、轉錄、翻譯過程中最主要的酶、模板及產物的性質與特點。（10分）答：（1）復制過程中最主要的酶、模板及產物的性質與特點：DNA聚合酶：原核細胞：DNA聚合酶，是多功能酶，具有53聚合酶活性和35外切酶活性。真核細胞：DNA聚合酶和。DNA連接酶：連接酶作用的過程中，在原核細

35、胞中以NAD+提供能量，在真核細胞中以ATP提供能量。引物合成酶：該酶作用時需與另外的蛋白結合形成引發(fā)體才具有催化活性。以親代DNA為模板進行半保留復制。組成DNA的四種堿基是A、T、C、G，核糖是-D-2脫氧核糖組成DNA的兩條鏈反向平行，通過堿基互補配對（A-T，G-C）形成雙螺旋，有A=T、G=C的定量關系。（2）轉錄過程中最主要的酶、模板及產物的性質與特點：RNA聚合酶：大腸桿菌的RNA聚合酶只有一種，催化3類RNA的合成。大腸桿菌RNA聚合酶全酶的亞基組成為2，因子可識別啟動子，結合于啟動子部位，核心酶2則負責RNA鏈的延伸。DNA為模板，同上。產物RNA的四種堿基是A、U、C、G，

36、核糖是-D-核糖，RNA分子是單鏈的。RNA的二級結構是典型的平衡可逆結構，即其單鏈在空間自身卷曲接觸的過程中，能通過A-U、G-C配對的區(qū)段形成部分小螺旋區(qū)，不能配對的非螺旋區(qū)呈不規(guī)則的單鏈形式存在，RNA分子中AU、GC。（3）翻譯過程中最主要的酶、模板及產物的性質與特點：氨酰-tRNA合成酶：該酶具有很高的專一性，每種氨基酸至少有一種對其專一的酶，這種酶既識別特異的氨基酸，還能識別攜帶該氨基酸的特異tRNA。mRNA模板：由DNA轉錄合成，攜帶著DNA的遺傳信息。mRNA中核苷酸序列直接決定多肽鏈中氨基酸中的順序。原核生物mRNA上的SD序列，真核生物mRNA的“帽子”結構以及mRNA的

37、起始密碼子AUG都是蛋白質起始合成所不可缺的。產物蛋白質具有電離性、吸附性以及生物學功能專一性等。24、從Michaelish-Menten方程式可以得到哪些啟示？（5分）答：米氏方程式圓滿的解釋了底物濃度和反應速度之間的關系。（1）當S足夠低時反應速率V隨S增加呈線性上升，V對S的關系為一級動力學。當SKm時，V=VmaxS/Km或V=KS。（2）當S足夠高時，米氏曲線趨于V=Vmax的漸進線而呈現平臺，此時V與S無關，只與Et成正比，在給定的酶和Et下，V是恒值（Vmax），V對當SKm時，V=Vmax。因此，測定酶活力時，底物必須過量，S至少5倍于Km值。（3）當S= Km時，V=Vma

38、x/2或V=Vmax/2時，S= Km。25、變構酶的動力學特點及變構酶在調節(jié)酶促反應速度中的作用。（10分）答：正協同性和負協同性的酶在動力學上往往不遵循米氏方程。對于這些變構酶，當V=Vmax/2時，S= S0.5或S= K0.5。正協同性酶，V對S的關系呈S形曲線，在某一段底物濃度范圍內，S的相對較小改變能引起V的較大變化，從而實現靈敏的代謝調節(jié)。負協同性酶，V對S的關系呈“表觀雙曲線”。在底物濃度很低的范圍內，底物濃度的微量增加即可引起酶活性的大幅度增加（如下圖所示）。變構酶一般是多酶體系反應序列中催化第一步反應的酶或是代謝途徑分支處的酶，可以通過別構效應改變自身活性，從而調節(jié)整個代謝

39、途徑的反應速度和方向，代謝終產物的累積會反饋抑制變構酶。Hill方程中的指數n（Hill系數）是協同程度的量度。正協同性酶，n1；負協同性酶，n1。同促酶的正協同性（S形曲線）和負協同性26、什么叫酶的最適pH？有人說“酶的最適pH是等于該酶等電點的常數”。你以為如何？pH影響酶活力的原因是什么？（10分）答：（1）酶的最適pH指在一定條件下，使酶發(fā)揮最大活力的pH值。酶的最適pH可用實驗的方法測定，酶的最適pH因酶的純度、底物的種類和濃度及緩沖液成分不同而不同，是酶的一個特征性參數，不是酶的特征常數，只是在一定條件下才為某一確定的數值。而等電點是酶的特征常數，并且等電點時會使蛋白質沉淀。（2

40、）pH影響酶活力的原因： 過酸或過堿可以使酶的空間結構破壞，引起酶構象的改變，酶活性喪失。 影響酶活性部位上的基團解離和底物分子的解離，或影響中間復合物ES的解離狀態(tài)，從而影響酶與底物的結合和催化作用。 影響與酶構象有關的基團解離，從而影響酶分子和活性部位的構象。進而影響酶的活性。27、生物體內的代謝調節(jié)在不同的水平進行，試簡述“酶水平”的調節(jié)。答：生物體內的代謝反應都是由酶催化和調節(jié)的，酶水平的調節(jié)是一種最原始但又是最基本的調節(jié)方式。調節(jié)過程主要包括酶含量的調節(jié)和酶活性的調節(jié)。酶含量的調節(jié)（即酶濃度的調節(jié)）是通過酶合成和降解兩個方面進行。通過酶的合成與降解細胞內酶的含量發(fā)生變化，進而對代謝過

41、程起調節(jié)作用。這種調節(jié)作用是比較慢的，所以稱為“慢速調節(jié)”。酶活性的調節(jié)是指在酶已合成的情況下，通過酶活性狀態(tài)的變化對代謝進行調控。它是一種更快速、更靈敏的調節(jié)，包括酶原激活、關鍵酶、酶的區(qū)域化、酶的反饋抑制作用、酶分子的共價修飾和酶的別構效應等。有些酶，特別是一些與消化作用和凝血作用有關的酶，最初合成和分化時呈無活性的酶原狀態(tài)，以后在一定條件下才激活。這種調節(jié)的意義在于避免了不需要時活性酶對組織和器官的損傷，需要時酶才迅速轉化為活性形式，保證了代謝的及時需要。酶的共價修飾是指以共價鍵插入或附著一特殊的基團于酶分子上，這個基團也可水解脫下，使修飾發(fā)生逆轉。這種調節(jié)反應的特點是可引起連鎖代謝反應

42、造成級聯放大。酶的別構效應包括前饋和反饋作用，分別是代謝底物和代謝產物對代謝過程調節(jié)酶活性的調節(jié)，前饋和反饋又可分為激活和抑制兩種作用。答: (1)調節(jié)酶的濃度 誘導或抑制酶的合成;調節(jié)酶的降解 (2)通過激素調節(jié)酶活性 (3)反饋抑制調節(jié)酶的活性 (4)抑制劑激活劑對酶活性的調節(jié) （5）別構調控、酶原激活、酶的可逆共價修飾和同工酶來調節(jié)酶活性.28、簡述米氏常數Km的物理意義。答：Km是當酶促反應速度達到最大反應速度一半時的底物濃度。Km是酶的特征常數之一，只與酶的性質有關，與酶的濃度無關；Km受pH及溫度的影響，不同的酶Km不同，如果一個酶有幾種底物，則對每一種底物各有一個特定的Km。其中

43、Km最小的底物稱為該酶的最適底物。1/ Km可近似地表示酶對底物的親和力的大小，1/ Km值越大，表示酶對底物親和力越大；1/ Km值越小，表示酶對底物親和力越小。29、堿基堆積力在穩(wěn)定核酸結構中非常重要。（1）堿基堆積力的化學本質是什么?答：疏水作用。（2）在核酸結構中，經?？吹浇Y合的金屬元素，它們所起的作用是什么?答：形成離子鍵，在磷酸殘基上的負電荷與介質中陽離子之間形成離子鍵，在生理PH條件下DNA帶有大量的負電荷，吸引著各種陽離子，形成離子鍵，消除了自身各個部位之間因負電荷而產生的斥力，增加了DNA分子的穩(wěn)定性。（3）氫鍵也參與穩(wěn)定核酸結構，但在哪一方面不同于堿基堆積力和金屬離子與核酸

44、的作用?答：在DNA分子中，兩條走向相反的互補鏈可以形成大量的氫鍵，G-C之間三對氫鍵，A-T之間兩對氫鍵.氫鍵的強度雖比共價鍵弱，但比范德華力大，由于氫鍵多，所以氫鍵也是維持DNA雙螺旋結構的主要作用力。GC含量越多，越穩(wěn)定。30、何謂油脂的酸敗作用？答：天然油脂長時間暴露在空氣中會產生難聞的氣味，這種現象稱為酸敗。酸敗的原因主要是油脂的不飽和成分發(fā)生自動氧化，產生過氧化物并進而降解成揮發(fā)性醛、酮、酸的復雜混合物；所謂自動氧化是指空氣中的分子氧在常溫常壓下對化合物的直接作用，從而導致氧化的發(fā)生。其次是微生物的作用，它們把油脂分解為游離的脂肪酸和甘油，一些低級脂肪酸本身就有臭味，而且脂肪酸經系

45、列酶促反應也產生揮發(fā)性的低級酮，甘油可被氧化成具有異臭的1，2-環(huán)氧丙醛。酸敗程度一般用酸值表示。酸值即是中和1g油脂中的游離脂肪酸所需的KOH mg數。31、簡述酶促反應速度的影響因素？答：底物濃度的影響：所有的酶反應，如果其他條件恒定，則反應速度決定于酶濃度和底物濃度，如果酶濃度保持不變，當底物濃度增加，反應速度隨著增加，并以雙曲線形式達到最大速度。pH對酶促反應速度的影響：pH對酶反應速度有顯著的影響，酶有最適的pH，在最適pH兩側。酶促反應速度呈下降趨勢，大部分酶的pH-酶活力曲線近于鐘罩形。溫度對酶促反應速度的影響：每種酶都有最適的反應溫度，在最適溫度兩側，反應速度也呈鐘罩形曲線。溫

46、度對酶促反應的影響有兩個方面，一方面是當溫度升高時，反應速度加快；另一方面，隨著溫度的升高而使酶逐步變性，降低了酶的反應速度。酶濃度對酶促反應速度的影響：在酶促反應中，如果底物濃度足夠大，足以使酶飽和，則反應速度與酶濃度呈正比。激活劑對酶促反應速度的影響：激活劑能夠提高酶的活性或通過除去抑制劑而解除對酶的抑制作用。抑制劑對酶反應的影響：抑制劑可以降低酶的活性，但不引起酶蛋白的變性，根據抑制劑與酶的作用方式可將抑制作用分為兩大類：不可逆的抑制作用和可逆的抑制作用。32、葡萄糖由酵母進行酒精發(fā)酵的總反應式，且計算理論產率。（原子量：C=12；O=16；H=1）答：葡萄糖由酵母進行酒精發(fā)酵的總反應式

47、：葡萄糖+2ADP+2Pi2乙醇+2ATP+2CO2+2H2O+2H+（具體代謝途徑見下圖） （180為葡萄糖分子質量；46為乙醇分子質量）33、核酸、蛋白質、脂肪酸、糖原生物合成中鏈延伸機制有何異同？（15分）答：核酸、蛋白質、脂肪酸、糖原生物合成中鏈延伸機制的異同主要從以下幾個方面進行討論：（1）核酸生物合成中鏈延伸需DNA模板，由53方向延伸；蛋白質生物合成中鏈延伸需mRNA模板，由N端C端方向延伸；脂肪酸、糖原生物合成中鏈延伸不需要模板。（2）核酸鏈延伸需ATP直接參與功能；蛋白質生物合成中鏈延伸需GTP直接參與功能；脂肪酸、糖原鏈延伸不需ATP/GTP直接參與功能，但脂肪酸鏈延伸需N

48、ADPH提供還原力。（3）核酸鏈延伸以3，5-磷酸二酯健連接新加入的核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸單元；蛋白質生物合成中鏈延伸以肽鍵（親核攻擊）連接新加入的氨基酸單元；脂肪酸鏈延伸以C-C單鍵連接新加入的二碳單元；糖原鏈延伸以糖苷鍵（親核攻擊）連接新加入的葡萄糖單元。（4）核酸鏈延伸不需要載體運載底物；蛋白質生物合成中鏈延伸以tRNA為載體運載氨基酸單元；脂肪酸鏈延伸以ACP/CoA作為?；d體；糖原鏈延伸以UDP為載體運載葡萄糖單元。（5）核酸鏈延伸由一個反應重復完成；蛋白質生物合成中鏈延伸由三個連續(xù)重復反應完成；脂肪酸鏈延伸由四個連續(xù)重復反應完成；糖原鏈延伸由一個反應重復完成。（6）核酸鏈延伸

49、需由RNA聚合酶/DNA聚合酶（與相應的模板結合）指導；蛋白質生物合成中鏈延伸需由三類延伸因子協助；脂肪酸鏈延伸需脂肪酸合成酶系催化；糖原鏈延伸需糖原合酶催化，糖原合酶與生糖原蛋白緊密的結合在一起。34、試比較兩類（直鏈和支鏈）淀粉與碘的反應。答：當淀粉膠懸液用微溶于水的醇如正丁醇飽和時。則形成微晶沉淀，稱直鏈淀粉。向母液中加入與水混容的醇如甲醇，則得無定形物質，稱支鏈淀粉。淀粉的螺旋結構并不十分穩(wěn)定，當不與其他分子如碘相互作用時，直鏈淀粉很可能是以無規(guī)卷曲形式存在碘分子正好能嵌入螺旋中心空道，每圈可容納一個碘分子，通過朝向圈內的羥基氧和碘之間的相互作用形成穩(wěn)定的深藍色淀粉-碘絡合物。產生特征

50、性的藍色需要約36個葡萄糖的殘基。支鏈淀粉螺旋中的短竄碘分子比直鏈淀粉螺旋中的長竄碘分子吸收更短波長的光，因此支鏈淀粉遇碘呈紫色到紫紅色。35、戊糖磷酸支路的主要特點是什么？答：（1）在胞液中進行，本身不需要氧的參與。有氧、無氧條件下都起作用。不同種類生物組織器官中比重不同。脂肪組織，泌乳期間的乳腺組織，肝臟和腎上腺皮質等組織中，該途徑很活躍，因為NADH和H+與脂肪酸和甾體合成有密切關系。骨骼肌中缺乏葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，無（完整的）此途徑。（2）葡萄糖直接脫氫脫羧徹底氧化，不必經過糖酵解和TCA。是相對獨立于糖酵解和TCA和有氧分解途徑之一，指代謝途徑不重疊，并非不聯系。抑制糖酵解和有氧

51、氧化途徑后，該途徑不受抑制。（3）以NADP+為受氫體生成的還原型NADPH和H+，主要用于生物合成，而不是供能。（4）可分為氧化階段和非氧化階段。氧化階段：6-磷酸葡萄糖脫氫、脫羧生成五碳糖。非氧化階段：五碳糖分子重排生成六碳糖和三碳糖，分為三個階段： 6-磷酸葡萄糖氧化生成5-磷酸-核酮糖； 5-磷酸-核酮糖異構化為5-磷酸-核糖和5-磷酸-木酮糖 將五碳糖轉化為6-磷酸-果糖和3-磷酸-甘油醛。（5）通過6-磷酸-果糖和3-磷酸-甘油醛與糖酵解“溝通”。細胞對NADPH的需要遠遠超過對5-磷酸-核糖的需要。36、什么叫核酸的變性作用？答：核酸的變性指核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈，并不

52、涉及共價鍵的斷裂。DNA變性是指雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結構破壞，形成單鏈無規(guī)則線團狀態(tài)的過程。變性只是次級鍵的變化，磷酸二酯鍵并不斷裂。DNA變性后，260nm的紫外吸收增加，粘度下降，浮力密度升高，生物學功能部分或全部喪失。RNA的變性：RNA也具有雙螺旋 無規(guī)則線團之間的轉變。但是由于RNA只有局部的雙螺旋區(qū)，所以這種轉變不如DNA那樣明顯。37、用凱氏定氮法測定A生物材料的蛋白質含量，現有下列數據：稱取A生物材料1.10克，消化液定容為100ml，并吸取5.0ml蒸餾；消耗0.0100mol/L氫氧化鈉溶液；A生物材料平行樣品為5.18ml和5.22ml，空白0.20ml。（1）簡明寫出

53、實驗原理及操作過程 答：天然有機含氮量常用微量凱氏定氮法測定。蛋白質含量幾乎是恒定的，約在1516%。因此，只要測定蛋白質N，乘以6.25，即為蛋白質含量，當被測的天然含氮量有機物與濃硫酸共熱時，其中的碳、氮二元素轉變成CO2和H2O，而其中的氮轉變成氨，并進一步與硫酸反應生成硫酸銨，此過程稱為“消化”。消化時，分解反應進行的很慢，因此，往往加入硫酸鉀以提高反應的沸點，加入硫酸銅作為催化劑。消化完成時，在凱氏定氮儀中加入強堿堿化消化液，使硫酸銨分解，放出氨。用水蒸汽蒸餾法，將氨蒸入過量標準無機酸溶液中（硼酸），然后用標準酸（HCl）溶液進行滴定，準確測定氨量，從而計算出含氮量。（2）計算A生物

54、材料樣品的蛋白質含量%答：8%（3）實驗中誤差來源有哪些方面？答：定容；轉移消化管中消化液；蒸餾器的洗滌；滴定操作。38、什么是酶的非競爭性抑制劑？它對酶促反應最大速度與Km 什么影響？答:酶與抑制劑結合后,還可以與底物結合. 并且抑制酶活性。 最大速度不變,Km變小.39、用（生物）中心法則簡述生物遺傳和基因表達。答：DNA是生物遺傳的主要物質基礎。遺傳信息以特定的脫氧核苷酸序列儲存在DNA分子中。DNA能準確地自我復制，并把遺傳信息轉錄到mRNA分子上，然后通過mRNA翻譯成具有特定氨基酸順序的蛋白質，由蛋白質行使各種生物學功能。這種遺傳信息的流動稱為分子遺傳的中心法則。后來人們又發(fā)現反轉

55、錄病毒可以其RNA為模板合成DNA；某些病毒RNA可進行自我復制，即以自身RNA為模板，合成子代RNA，也就是說某些情況下RNA也可作為重要的遺傳物質。40、由兩分子葡萄糖可組成多少種雙糖？其中有多少種非還原雙糖？為什么？答：11種。6種。區(qū)別雙糖是還原雙糖還是非還原雙糖是通過判斷游離異頭碳的構型是型還是型。由兩分子葡萄糖組成的11種雙糖中，有6種分子還原端的殘基異頭碳的構型為型的，有5種分子還原端的殘基異頭碳的構型為型的。因此，有6種屬于非還原雙糖。41、為什么RNA聚合酶在延伸過程中不像DNA聚合酶那樣需要解鏈酶和SSB?答：RNA聚合酶的活性中心有多個通道。和亞基間的裂縫為DNA入口的通

56、道。進入活性中心的DNA遇到的蛋白壁產生轉折，促使雙鏈解開，模板鏈和非模板鏈經分開的兩通道而于出口處重新形成雙螺旋。因此，RNA聚合酶在延伸過程中不像DNA聚合酶那樣需要解鏈酶局部解開雙鏈。SSB的作用：與DNA分開的單鏈結合，起穩(wěn)定DNA的單鏈、阻止重新復合成雙鏈和保護單鏈不被核酸酶降解的作用。DNA復制是半保留復制，一邊解鏈一邊復制，為了防止剛解開的鏈重新復合成雙鏈，需要SSB與已解開的DNA單鏈立即結合；而轉錄是RNA鏈以位于RNA聚合酶的活性中心的通道內的DNA模板鏈為模板不斷合成，并經RNA出口通道離開酶，因此RNA合成過程中DNA模板鏈不需要SSB的保護。42、將A（200 000

57、），B（150 000），C（75 000），D（65 000）四種蛋白質的混合液進行凝膠過濾層析，下圖中哪個圖是真正的層析圖，說明理由。此凝膠的排阻極限是100 000左右。伴刀豆球蛋白、血纖維蛋白、香菇多糖的分子質量能否一起用葡聚糖凝膠層析柱測定？為什么？答： （a）是真正的層析圖。凝膠顆粒具有大量微孔，這些微孔只允許較小的分子進入，而大于膠粒微孔的分子則不能進入膠粒而被排阻。當用洗脫液洗脫時，被排阻的分子質量大的蛋白質先被洗脫下來，分子量小的后下來。因此，根據凝膠過濾層析原理，分子質量大的蛋白質先被洗脫下來，又由于該凝膠的排阻相對分子質量為100 000，所以A與B一同洗出，因此圖（a）

58、是真正的層析圖譜。 不能。因為伴刀豆球蛋白和血纖維蛋白為蛋白質，但香菇多糖不是蛋白質，缺乏已知分子量的統一的標樣對上述三種物質的分子量進行準確的測定。（附：凝膠過濾法測定蛋白質分子量的方法：將已知分子量的標準蛋白混合物上柱，洗脫，根據洗脫峰位置量出各種蛋白質的洗脫體積，然后用分子量的對數為橫坐標，以洗脫體積為縱坐標，制作標準曲線。測定時，根據紫外檢測洗脫峰位置，量出待測樣品的洗脫體積，由標準曲線可查出其分子質量。）43、在錐形瓶中加入5ml pH7.5的0.025mol/L磷酸鹽緩沖液和4ml橄欖油乳液，置于45水浴中預熱10分鐘待用。取某一脂肪酶制劑1克，稀釋成250ml。取1ml稀釋溶液，

59、加入預熱的錐形瓶內，45保溫15分鐘后，立即加入95%乙醇終止反應。向反應液中加2-3滴酚酞指示劑，用0.05 mol/L NaOH滴定至微紅色。滴定結果耗堿量為5.90ml，空白對照耗堿量為1.4ml，求此酶制劑的活力（在一定條件下，脂肪酶水解脂肪，每分鐘產生1umol脂肪酸的酶量為1個活力單位）。（10分）答：此酶制劑的活力為3750U44、一種發(fā)生在蛋白質內部的AlaVal突變導致蛋白質喪失活性。然而，如果這種蛋白質在第二個位置發(fā)生IleGly的突變，可使蛋白質恢復活性。試提出一種合理的解釋。答：由于纈氨酸占的空間比丙氨酸大，蛋白質的空間構象改變，所以使蛋白質活性喪失，第二次突變由于甘氨

60、酸占的空間體積比異亮氨酸小，補償了第一次空間變化，蛋白質的空間構象又恢復，所以蛋白質活性也恢復了。45、說明凝膠過濾色譜（分子排阻層析）分離蛋白質混合物的原理，某凝膠的分級范圍為300070000，它對分子量分別為2萬、4萬、6萬、8萬、10萬的5種蛋白質混合物能進行分離嗎？為什么？答：當不同分子大小的蛋白質流經凝膠層析柱時，比凝膠珠孔徑大的分子不能進入珠內網狀結構，而被排阻在凝膠珠外隨著溶劑在凝膠珠之間的空隙向下移動并最先流出柱外；比網孔小的分子能不同程度地自由出入凝膠珠的內外。大分子物質先被洗脫出來，小分子物質后被洗脫出來。2萬到8萬的蛋白質都可進行分離，因為它們能進入層析柱，而10萬的蛋

61、白質因為不能進入層析柱，所以不能分離。46、敘述酶的誘導契合學說答:當酶分子與底物分子接近時，酶蛋白受底物分子誘導，其構象發(fā)生有利于底物結合的變化，酶與底物在此基礎上互補契合進行反應。47、取某-淀粉酶制劑1.5克，溶解稀釋至500ml，備用；另取一大試管加入2%可溶性淀粉溶液20ml，PH6.0 緩沖液5ml，于37 c 水浴45分鐘，加入上述酶液0.5ml，立即開始計時，充分搖勻，定時取樣滴于預先盛有稀碘液的調色板空穴內呈色，呈色變至與標準終點色相同時，所需時間為2分30秒。假定在31c 和PH 6.0 條件下，1小時水解1克可溶性淀粉的酶量為1個活力單位。簡述本實驗的基本原理答：淀粉遇碘

62、變色，并且不同鏈長顯色程度不同，為紫色，紫紅色，紅色；淀粉酶可水解淀粉，當淀粉被水解過程中，通過觀察顏色變化可知道水解程度，當呈色至標準色時，說明反應結束。48、任意舉出兩種定量測定蛋白質的方法，并簡述其基本原理？答：（1）考馬斯亮藍G-250在酸性溶液中為棕紅色，當它與蛋白質節(jié)后后變?yōu)樗{色，在595nm處有最大的光吸收，其顏色深淺與蛋白質濃度成正比。可比色測定。測定范圍為0.011.0mg/ml.(2)雙縮脲法：蛋白質含有多個肽鍵，因此有雙縮脲反應，即Cu+與蛋白質的肽鍵絡合，形成紫紅色絡合物，此物在540nm處有最大的光吸收，可以比色測定，其顏色的深淺與蛋白質濃度成正比。測定范圍為0.51

63、0mg/ml49、在含有丙酮酸脫氫酶復合物和TCA循環(huán)全部酶系，單但不含任何中間代謝物的溶液中：（1）如果加入丙酮酸、輔酶ANAD、FAD、ADP、GDP和Pi各3mmol/L會產生什么現象？釋放出多少CO2 ？（2）如果除加入（1）中所指定的試劑外，再添加檸檬酸、異檸檬酸、-同戊二酸、琥珀酸、反丁希二酸和蘋果酸3mmol/L，將釋放出多少CO2？（3）如果除加入（1）中所指定的試劑，再添加（2）中所指定的一種中間代謝物，你將選擇哪一種？為什么？將會釋放出多少CO2？（4）如果除加入（1）中所指定的試劑外，再添加丙酮酸羧化酶，將會對CO2的釋放發(fā)生什么影響？答：(1)丙酮酸幾乎能定量地轉變成乙

64、酰coA和CO2,由于溶液中不存在TCA的中間代謝物，由丙酮酸與coA、NAD+生成的乙酰coA不能進一步降解，故僅釋放出3mmol/Lco2 （2）存在TCA中間代謝物時，3mmol/l丙酮酸完全氧化產生了9mmol/Lco2我們做的答案不是9mol。他們的答案是24mol，我的答案是33mol。不過這題出的有問題，首先是NAD這個限制因素，可是如果考慮NAD的話，下面一道題似乎就出的沒有意義了。然后是輔酶A的限制，這是相對于下面一題而言的，因為加入的代謝物如果是琥珀酸以后的物質，對二氧化碳的產生是沒有影響的，因為草酰乙酸和乙酰輔酶A的反映量應該是一樣的，而乙酰輔酶A是有限的，是3mol。 反丁希二酸、蘋果酸