微生物學實驗【高教課堂】

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1、微生物學實驗微生物學實驗暨南大學生命科學技術(shù)學院暨南大學生命科學技術(shù)學院生物工程學系微生物學實驗室生物工程學系微生物學實驗室參考教材：參考教材：沈萍沈萍 陳向東陳向東 微生物學實驗微生物學實驗（第四版）（第四版）高等教育出版社高等教育出版社適用于生物科學、生物技術(shù)等專業(yè)適用于生物科學、生物技術(shù)等專業(yè)1詳細課資實驗一實驗一 環(huán)境微生物的檢測環(huán)境微生物的檢測（P5-8）1.學習檢測環(huán)境中微生物的方法；學習檢測環(huán)境中微生物的方法；2.觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征，比觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征，比較不同環(huán)境中微生物的類型和數(shù)量；較不同環(huán)境中微生物的類型和數(shù)量；3.體會無菌操作的重要性。體會無

2、菌操作的重要性。實驗項目號：實驗項目號：80000039101實驗類型：實驗類型：驗證性驗證性一一實驗目的實驗目的：2詳細課資二二基本原理：基本原理：環(huán)境中的微生物在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)環(huán)境中的微生物在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基平板中經(jīng)過培養(yǎng)即可長成肉眼可見的基平板中經(jīng)過培養(yǎng)即可長成肉眼可見的菌落，從而可檢測到環(huán)境中存在的微生菌落，從而可檢測到環(huán)境中存在的微生物的類型和數(shù)量。物的類型和數(shù)量。三三實驗材料：實驗材料：營養(yǎng)瓊脂平板、營養(yǎng)瓊脂平板、滅菌棉簽、滅菌棉簽、恒溫培養(yǎng)箱等恒溫培養(yǎng)箱等3詳細課資四四 實驗方法和步驟：（實驗方法和步驟：（P6-7）每四個同學為一組，每個同學一個營養(yǎng)瓊脂平板，每人各選取以下其每四

3、個同學為一組，每個同學一個營養(yǎng)瓊脂平板，每人各選取以下其中一種處理方法（中一種處理方法（或你感興趣的其他方法或你感興趣的其他方法），寫好標簽：），寫好標簽：1.實驗室空氣中的微生物：比較培養(yǎng)基暴露于空氣不同時間的區(qū)別：實驗室空氣中的微生物：比較培養(yǎng)基暴露于空氣不同時間的區(qū)別：v打開皿蓋，把培養(yǎng)基平板暴露于空氣中打開皿蓋，把培養(yǎng)基平板暴露于空氣中10min，蓋好皿蓋；，蓋好皿蓋；v打開皿蓋，把培養(yǎng)基平板暴露于空氣中打開皿蓋，把培養(yǎng)基平板暴露于空氣中30min，蓋好皿蓋；，蓋好皿蓋；2.比較洗手前后手指上微生物的區(qū)別：在培養(yǎng)皿底部用記號筆分四個區(qū)（比較洗手前后手指上微生物的區(qū)別：在培養(yǎng)皿底部用記號

4、筆分四個區(qū)（A、B、C、D區(qū)），洗手前后分別用手指在培養(yǎng)基表面輕按。（注意不要按碎培養(yǎng)基。）區(qū)），洗手前后分別用手指在培養(yǎng)基表面輕按。（注意不要按碎培養(yǎng)基。）蓋好皿蓋。蓋好皿蓋。3.口氣中的微生物：打開皿蓋，對著培養(yǎng)基吹氣。口氣中的微生物：打開皿蓋，對著培養(yǎng)基吹氣。4.實驗臺面的微生物：用滅菌棉簽揩拭實驗臺面，再用此棉簽在培養(yǎng)基表面滾動一實驗臺面的微生物：用滅菌棉簽揩拭實驗臺面，再用此棉簽在培養(yǎng)基表面滾動一下，也可用同樣方法檢測你所感興趣的其他地方或物品。下，也可用同樣方法檢測你所感興趣的其他地方或物品。處理完成后，蓋好皿蓋，處理完成后，蓋好皿蓋，倒置培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)皿，置于置于37溫箱培養(yǎng)溫箱

5、培養(yǎng)1-2天觀察，記錄實驗結(jié)果。天觀察，記錄實驗結(jié)果。4詳細課資五五 實驗結(jié)果：實驗結(jié)果：將實驗結(jié)果記錄于下表（將實驗結(jié)果記錄于下表（P8）：）：表表1：微生物檢測的結(jié)果記錄表：微生物檢測的結(jié)果記錄表處理方法處理方法（1）（2）（3）（4）菌落數(shù)量菌落數(shù)量菌落特征菌落特征（大小、形狀、透明（大小、形狀、透明度、顏色等）度、顏色等）簡要說明簡要說明菌落數(shù)量可用菌落數(shù)量可用“+”和和“-”來表示，從多到少依次表示為來表示，從多到少依次表示為+，+，+，+，-5詳細課資六六 分析及討論：分析及討論：七七思考題：思考題：通過本次實驗，在防止微生物污染通過本次實驗，在防止微生物污染與擴散方面，你學到了些

6、什么？有何體與擴散方面，你學到了些什么？有何體會？會？6詳細課資實驗二實驗二 顯微鏡的使用和細菌基本形態(tài)的觀察顯微鏡的使用和細菌基本形態(tài)的觀察（P40-47）1.學習并掌握顯微鏡，特別是油鏡的工作原學習并掌握顯微鏡，特別是油鏡的工作原理和使用方法理和使用方法；2.熟練使用顯微鏡觀察細菌的個體形態(tài)熟練使用顯微鏡觀察細菌的個體形態(tài)。實驗項目號：實驗項目號：80000039101實驗類型：實驗類型：驗證性驗證性一一實驗目的實驗目的：7詳細課資 1.光學部分光學部分:接目鏡接目鏡、接物鏡接物鏡、照明裝置照明裝置(聚光聚光鏡、鏡、虹彩光圈、虹彩光圈、反光鏡反光鏡等等).它使檢視物放大它使檢視物放大,造成

7、造成物象物象.2.機械部分機械部分:鏡座、鏡臂、鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件.它它起著支持起著支持 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié) 固定等作固定等作用用.顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡的構(gòu)造二二基本原理：基本原理：微生物的個體很小，必須要借助顯微鏡才能看清其形態(tài)。微生物的個體很小，必須要借助顯微鏡才能看清其形態(tài)。8詳細課資 1.放大倍數(shù)放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù) 2.顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率 是表示顯微是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能

8、力，可用公式表示為：離的能力，可用公式表示為：D=/2nsin(/2)式中式中D D：物鏡分辨出物體兩點間物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。的最短距離。：可見光的波長（平均：可見光的波長（平均0.550.55 m)m)n:n:物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率。射率。：鏡口角（即入射角）。：鏡口角（即入射角）。顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率9詳細課資 1.香柏油的折射率香柏油的折射率與玻璃接近，提高與玻璃接近，提高了視野的照明度。了視野的照明度。2.提高了顯微鏡的提高了顯微鏡的分辨率分辨率油鏡使用的原理油鏡使用的原理10詳細課資三三 實驗材料：實驗材料：v玻片

9、標本：玻片標本：球狀：四聯(lián)球菌（球狀：四聯(lián)球菌（Micrococcus tetragenus）桿狀：枯草桿菌（桿狀：枯草桿菌（Bacillus subtilis）螺旋狀：水弧菌（螺旋狀：水弧菌（Vibrio aquatilis）v示范片：溶血鏈球菌（示范片：溶血鏈球菌（Streptococcus hemolyticus）v其他器材：顯微鏡、香柏油、清潔劑、擦鏡紙其他器材：顯微鏡、香柏油、清潔劑、擦鏡紙等等 11詳細課資1.用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。2.調(diào)節(jié)光亮度調(diào)節(jié)光亮度 3.低倍鏡觀察：粗調(diào)、細調(diào)低倍鏡觀察：粗調(diào)、細調(diào) 4.高倍觀察高倍觀察：

10、細調(diào)：細調(diào) 5.油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，旋開高倍鏡，油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，旋開高倍鏡，在標本中央滴一滴香柏油，轉(zhuǎn)過油鏡，使油鏡鏡頭浸在標本中央滴一滴香柏油，轉(zhuǎn)過油鏡，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。6.換片：另換新片，必須從換片：另換新片，必須從“3”開始操作。開始操作。7.標本片的清潔：標本片的清潔：8.用后復原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡用后復原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量清潔劑擦去殘留頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量清潔劑擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的清潔劑，后

11、將鏡體全的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的清潔劑，后將鏡體全部復原。部復原。四四 實驗方法和步驟：實驗方法和步驟：（P44-45）主要是油鏡的使用主要是油鏡的使用12詳細課資 1.不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。以免損壞。2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度度 3.觀察標本時，必須依次用低、高倍鏡，最后用油鏡。當觀察標本時，必須依次用低、高倍鏡，最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面器，以免壓碎玻片或損

12、傷鏡面。4.觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習慣，以觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。5.拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。手拿，更不可傾斜拿。6.顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片鏡片。顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項：顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項：13詳細課資四聯(lián)球菌四聯(lián)球菌鏈球菌鏈球菌水弧菌水弧菌枯草桿菌枯草桿菌細菌基本形態(tài)的觀察

13、細菌基本形態(tài)的觀察 利用油鏡，觀察細菌的基本形態(tài)（球狀、桿狀和螺旋狀），邊觀察邊繪圖。利用油鏡，觀察細菌的基本形態(tài)（球狀、桿狀和螺旋狀），邊觀察邊繪圖。14詳細課資五五 觀察結(jié)果（繪圖）觀察結(jié)果（繪圖）P46六六分析及討論：分析及討論：菌名菌名拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)繪出在油鏡下觀察到的形態(tài)圖，注意菌體的繪出在油鏡下觀察到的形態(tài)圖，注意菌體的形態(tài)、大小比例、排列，形態(tài)、大小比例、排列，同時標明同時標明菌名菌名(包括拉丁學名包括拉丁學名)和和放大倍數(shù)（物鏡的放大倍數(shù)放大倍數(shù)（物鏡的放大倍數(shù)目鏡的目鏡的放大倍數(shù)）放大倍數(shù)）15詳細課資1.用油鏡觀察時應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡用油鏡觀察時

14、應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有什么作用？頭之間滴加香柏油有什么作用？2.鏡檢標本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是鏡檢標本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？直接用高倍鏡或油鏡觀察？3.影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？七七思考題：（思考題：（P47）16詳細課資實驗三實驗三 細菌簡單染色及革蘭氏染色細菌簡單染色及革蘭氏染色1.學習微生物制片、染色的基本技術(shù)；學習微生物制片、染色的基本技術(shù)；2.了解革蘭氏染色的原理，掌握革蘭氏染了解革蘭氏染色的原理，掌握革蘭氏染色的方法；色的方法；3.鞏固油鏡的使用方法，熟練觀察細菌的鞏固油鏡的使用方

15、法，熟練觀察細菌的個體形態(tài)。個體形態(tài)。實驗項目號：實驗項目號：80000039102實驗類型實驗類型：驗證性驗證性一一實驗目的：實驗目的：17詳細課資二二基本原理：基本原理：簡單染色：簡單染色：簡單染色法是只用一種染料使細菌著色簡單染色法是只用一種染料使細菌著色以顯示其形態(tài)。染料主要有堿性染料、酸以顯示其形態(tài)。染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類，通常采用性染料和中性染料三大類，通常采用堿性堿性染料染料進行染色。因細菌在中性、堿性或弱進行染色。因細菌在中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負電荷，而染料電離酸性的溶液中時常帶負電荷，而染料電離后的染色部分帶正電荷，易與細胞結(jié)合使后的染色部分帶

16、正電荷，易與細胞結(jié)合使其著色。其著色。18詳細課資根據(jù)細胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同根據(jù)細胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同 革蘭氏染色法革蘭氏染色法（細菌學上最常用的鑒別染色法）（細菌學上最常用的鑒別染色法）：19詳細課資三三 實驗材料：實驗材料：v菌種：菌種：枯草桿菌枯草桿菌（Bacillus subtilis）大腸桿菌大腸桿菌（Escherichia coli）v染色液和試劑：染色液和試劑：革蘭氏染色液、簡單染色液等革蘭氏染色液、簡單染色液等v芽胞、鞭毛、莢膜的示范片芽胞、鞭毛、莢膜的示范片v其他器材：顯微鏡、香柏油、清潔劑、擦鏡其他器材：顯微鏡、香柏油、清潔劑、擦鏡紙等紙等 20詳細課資v簡單染色：簡單染色

17、：（材料：牙垢材料：牙垢）涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色（1-2min）水水洗洗干燥干燥繪圖繪圖v革蘭氏染色：革蘭氏染色：（材料：大腸桿菌材料：大腸桿菌、枯草桿菌、枯草桿菌）涂片涂片干燥干燥固定固定結(jié)晶紫初染結(jié)晶紫初染（1-2min）水洗水洗 碘液媒染碘液媒染（1min）水洗水洗 酒酒精脫色精脫色（30s內(nèi)）內(nèi)）水洗水洗 番紅復染番紅復染（2min）水洗水洗 干燥干燥，判斷菌體的革蘭，判斷菌體的革蘭氏染色結(jié)果氏染色結(jié)果繪圖繪圖四四 實驗方法和步驟：實驗方法和步驟：21詳細課資v觀察標本片觀察標本片細胞結(jié)構(gòu)細胞結(jié)構(gòu)菌名菌名染色方法染色方法圖例圖例芽胞芽胞枯草桿菌枯草桿菌（Bacillus

18、 subtilis）芽胞染色法芽胞染色法鞭毛鞭毛變形桿菌變形桿菌(Proteus vulgaris)鞭毛染色法鞭毛染色法莢膜莢膜圓褐固氮菌圓褐固氮菌（褐球固氮菌）（褐球固氮菌）（Azotobacter chroococcum）負染色法負染色法22詳細課資五五 實驗結(jié)果實驗結(jié)果:u繪圖繪圖u革蘭氏染色的結(jié)果革蘭氏染色的結(jié)果牙垢中的細菌牙垢中的細菌10010枯草桿菌（示芽胞）枯草桿菌（示芽胞）拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)變形桿菌（示鞭毛）變形桿菌（示鞭毛）拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)圓褐固氮菌（示莢膜）圓褐固氮菌（示莢膜）拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)菌名菌名形狀形狀簡圖簡圖顏色顏色革蘭

19、氏染色結(jié)果革蘭氏染色結(jié)果大腸桿菌大腸桿菌枯草桿菌枯草桿菌23詳細課資1.在進行細菌涂片時應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？在進行細菌涂片時應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)？P75(1)2.進行細菌制片時為什么要進行加熱固定？在進行細菌制片時為什么要進行加熱固定？在加熱固定時應(yīng)注意什么？加熱固定時應(yīng)注意什么？P76(2)3.你的革蘭氏染色是否成功？有哪些問題需要你的革蘭氏染色是否成功？有哪些問題需要注意，為什么？注意，為什么？P84(1)4.現(xiàn)有一株未知桿菌，個體明顯大于大腸桿菌，現(xiàn)有一株未知桿菌，個體明顯大于大腸桿菌，請你鑒定桿菌是請你鑒定桿菌是G+還是還是G-，如何確定你的染，如何確定你的染色結(jié)果的正確性？色結(jié)果的正確性？P8

20、4(2)七七思考題：（思考題：（P47）六六分析及討論：分析及討論：24詳細課資實驗四實驗四 放線菌、酵母菌、霉菌個體形態(tài)的觀察放線菌、酵母菌、霉菌個體形態(tài)的觀察四大類微生物菌落形態(tài)的觀察四大類微生物菌落形態(tài)的觀察1.學習放線菌、酵母菌、霉菌的制片方法，學習放線菌、酵母菌、霉菌的制片方法，觀察其個體形態(tài)觀察其個體形態(tài)2.了解四大類微生物的菌落特點，學會從了解四大類微生物的菌落特點，學會從菌落形態(tài)區(qū)分四大類微生物。菌落形態(tài)區(qū)分四大類微生物。實驗項目號：實驗項目號：80000039103實驗類型實驗類型：驗證性驗證性一一實驗目的實驗目的：25詳細課資二二基本原理：基本原理：1.放線菌（放線菌（P7

21、2-73）：）：印片法：印片法：用于觀察氣生菌絲、孢子絲的形態(tài)、孢子用于觀察氣生菌絲、孢子絲的形態(tài)、孢子的排列方式及形態(tài)。的排列方式及形態(tài)。2.酵母菌（酵母菌（P73）：）：用呂氏堿性美蘭染色做用呂氏堿性美蘭染色做水浸片水浸片，可區(qū)分死活細胞：，可區(qū)分死活細胞：死細胞死細胞 藍色藍色 活細胞活細胞 無色無色3.霉菌（根霉）（霉菌（根霉）（P74）：）：挑菌做水浸片直接觀察。挑菌做水浸片直接觀察。26詳細課資青霉青霉根霉根霉曲霉曲霉細黃鏈霉菌（放線菌）細黃鏈霉菌（放線菌）酵母菌酵母菌27詳細課資三三 實驗材料：實驗材料：v菌種：菌種：細黃鏈霉菌（平板）、釀酒酵母（試管斜細黃鏈霉菌（平板）、釀酒酵

22、母（試管斜面）、黑根霉（平板）面）、黑根霉（平板）v玻片標本：玻片標本：青霉、黑曲霉青霉、黑曲霉v菌落標本：菌落標本：細菌（大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌）細菌（大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌）放線菌（細黃鏈霉菌）放線菌（細黃鏈霉菌）酵母菌（釀酒酵母）酵母菌（釀酒酵母）霉菌（黑曲霉、黑根霉）霉菌（黑曲霉、黑根霉）v染料：染料：石碳酸復紅、呂氏堿性美蘭、乳酸酚石碳酸復紅、呂氏堿性美蘭、乳酸酚v其他器材：其他器材：28詳細課資1.放線菌（菌種：放線菌（菌種：細黃鏈霉菌平板細黃鏈霉菌平板）印片法：印片法：用接種鏟取一小塊菌苔（連同用接種鏟取一小塊菌苔（連同培養(yǎng)基）放在一塊載玻片上培養(yǎng)基）放在

23、一塊載玻片上取另一塊載玻取另一塊載玻片稍加熱并在其上輕壓片稍加熱并在其上輕壓固定固定用石碳酸復用石碳酸復紅做簡單染色片紅做簡單染色片繪圖繪圖四四 實驗方法和步驟：實驗方法和步驟：29詳細課資2.酵母菌（菌種酵母菌（菌種：釀酒酵母：釀酒酵母）在載玻片上滴一滴美蘭在載玻片上滴一滴美蘭用接種環(huán)取少量酵母菌用接種環(huán)取少量酵母菌與染料混勻與染料混勻蓋上蓋玻片（注意防止氣泡的產(chǎn)生）蓋上蓋玻片（注意防止氣泡的產(chǎn)生）鏡檢鏡檢繪圖繪圖3.霉菌（菌種：根霉）霉菌（菌種：根霉）在載玻片上滴一滴乳酸酚在載玻片上滴一滴乳酸酚用解剖針小心挑取少用解剖針小心挑取少許根霉的菌絲放在染料中許根霉的菌絲放在染料中蓋上蓋玻片（注意

24、防蓋上蓋玻片（注意防止氣泡的產(chǎn)生）止氣泡的產(chǎn)生）鏡檢鏡檢繪繪圖圖4.標本片的標本片的觀察：（青霉、曲霉）觀察：（青霉、曲霉）5.菌落形態(tài)的觀察：菌落形態(tài)的觀察：30詳細課資31詳細課資五五 實驗結(jié)果實驗結(jié)果:1.繪出所觀察微生物的個體形態(tài)圖繪出所觀察微生物的個體形態(tài)圖（細黃鏈霉菌、釀酒（細黃鏈霉菌、釀酒酵母、根霉、青霉、曲霉酵母、根霉、青霉、曲霉，注意標注清楚各部分結(jié)構(gòu)的名，注意標注清楚各部分結(jié)構(gòu)的名稱）稱）菌名菌名拉丁學名拉丁學名放大倍數(shù)放大倍數(shù)32詳細課資2.列表比較四大類微生物的菌落特征列表比較四大類微生物的菌落特征類群類群菌名菌名菌落大小菌落大小干濕干濕顏色顏色表面表面邊緣邊緣厚薄厚薄

25、致密度致密度氣味氣味細菌細菌放線菌放線菌酵母菌酵母菌霉菌霉菌四大類微生物的菌落特征四大類微生物的菌落特征33詳細課資1.根據(jù)你的觀察結(jié)果，呂氏堿性美蘭染色的作用時根據(jù)你的觀察結(jié)果，呂氏堿性美蘭染色的作用時間與酵母菌死活細胞的比例的變化是否有關(guān)系？間與酵母菌死活細胞的比例的變化是否有關(guān)系？試分析原因。試分析原因。P76-（10）2.黑曲霉和黑根霉在個體形態(tài)和菌落形態(tài)上有何區(qū)黑曲霉和黑根霉在個體形態(tài)和菌落形態(tài)上有何區(qū)別？別？P76-（12）七七思考題：思考題：六六分析及討論：分析及討論：34詳細課資實驗五實驗五 顯微鏡直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法及微生物大小的測定及微生物大小的測定（P47-56)1

26、.了解血球計數(shù)板的構(gòu)造和使用方法，學會用血了解血球計數(shù)板的構(gòu)造和使用方法，學會用血球計數(shù)板對酵母菌懸液進行計數(shù)。球計數(shù)板對酵母菌懸液進行計數(shù)。2.學習并掌握用測微尺測定微生物細胞大小的方學習并掌握用測微尺測定微生物細胞大小的方法。法。實驗項目號：實驗項目號：80000039104實驗類型實驗類型：驗證性驗證性一一實驗目的實驗目的：35詳細課資二二基本原理：基本原理：每一個大方格邊長為每一個大方格邊長為1mm，則每一大方格的面積為則每一大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，載，蓋上蓋玻片后，載玻片與蓋玻片之間的高度為玻片與蓋玻片之間的高度為0.1mm，所以計數(shù)室的容積，所以計數(shù)室的容積為為0.1

27、mm3。設(shè)五個中方格中總菌數(shù)為設(shè)五個中方格中總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為菌液稀釋倍數(shù)為B，1.1.顯微鏡直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法:(P52):(P52)36詳細課資 采用目鏡測微尺采用目鏡測微尺和鏡臺測微尺測量和鏡臺測微尺測量微生物細胞的大小。微生物細胞的大小。鏡臺測微尺一般是鏡臺測微尺一般是將將1mm等分為等分為100格，格，因此每格長因此每格長10m，而目鏡測微尺在不而目鏡測微尺在不同放大倍數(shù)下的每同放大倍數(shù)下的每格所代表的長度是格所代表的長度是不同的，使用前須不同的，使用前須用鏡臺測微尺校正，用鏡臺測微尺校正，以求得在一定放大以求得在一定放大倍數(shù)下的實際長度。倍數(shù)下的實際長度。2.微生物

28、大小的測定：微生物大小的測定：(P48)37詳細課資三三 實驗材料：實驗材料：v菌種：菌種：釀釀酒酵母菌懸液，枯草桿菌斜面酒酵母菌懸液，枯草桿菌斜面v其他器材：其他器材：血球計數(shù)板，目鏡測微尺，鏡臺血球計數(shù)板，目鏡測微尺，鏡臺測微尺，顯微鏡，蓋玻片，載玻片，染色液測微尺，顯微鏡，蓋玻片，載玻片，染色液等等38詳細課資1.顯微鏡直接計數(shù)法：顯微鏡直接計數(shù)法：（菌種：釀酒酵母）（菌種：釀酒酵母）鏡檢計數(shù)室鏡檢計數(shù)室加樣品加樣品靜止靜止5分鐘分鐘顯微鏡計數(shù)（每個顯微鏡計數(shù)（每個計數(shù)室選計數(shù)室選5個中格）個中格）記錄結(jié)果記錄結(jié)果清洗血球計數(shù)板清洗血球計數(shù)板2.微生物大小的測定：微生物大小的測定：（菌種

29、：枯草桿菌）（菌種：枯草桿菌）v做枯草桿菌的簡單染色片做枯草桿菌的簡單染色片v安裝目鏡測微尺安裝目鏡測微尺（已安裝好）（已安裝好）并用鏡臺測微尺在各并用鏡臺測微尺在各物鏡下校正目鏡測微尺物鏡下校正目鏡測微尺v在油鏡下測定菌體大?。悍謩e測在油鏡下測定菌體大小：分別測10個菌的寬和長，個菌的寬和長，求平均值，再將所測格數(shù)乘以目鏡測微尺（油鏡）求平均值，再將所測格數(shù)乘以目鏡測微尺（油鏡）下每格代表的長度，即得該菌的實際大小。下每格代表的長度，即得該菌的實際大小。四四 實驗方法和步驟：實驗方法和步驟：39詳細課資五五 實驗結(jié)果實驗結(jié)果:1.顯微鏡直接計數(shù)：顯微鏡直接計數(shù)：計算并報告該菌懸液的濃度：計算

30、并報告該菌懸液的濃度：（寫成科學記數(shù)法，保留（寫成科學記數(shù)法，保留2位有效數(shù)字）位有效數(shù)字）表表1：顯微鏡直接計數(shù)的結(jié)果：顯微鏡直接計數(shù)的結(jié)果A表示五個中方格中的總菌數(shù)；表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。表示菌液稀釋倍數(shù)。各中格菌數(shù)各中格菌數(shù)A 兩室平均兩室平均A值值 B 菌液濃度菌液濃度（菌數(shù)（菌數(shù)/ml）12345第一室第一室第二室第二室40詳細課資2.微生物大小的測定：微生物大小的測定：接物鏡接物鏡物鏡放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)目鏡測微尺格數(shù) 物鏡測微尺格數(shù)物鏡測微尺格數(shù)目尺每格的長度目尺每格的長度（m）低倍鏡低倍鏡高倍鏡高倍鏡油油鏡鏡表表2：用鏡臺測微尺校正目鏡測微

31、尺的結(jié)果：用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺的結(jié)果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均平均寬（格）寬（格）長（格）長（格）表表3：枯草桿菌細胞大小測定的結(jié)果：枯草桿菌細胞大小測定的結(jié)果計算出枯草桿菌的大?。簩捰嬎愠隹莶輻U菌的大小：寬=m 長長=m 表示為：寬表示為：寬長長（保留小數(shù)點后保留小數(shù)點后1位）位）41詳細課資1.根據(jù)你實驗的體會，說明用血球計數(shù)板計數(shù)的根據(jù)你實驗的體會，說明用血球計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差，誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差，力求準確？力求準確？2.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用

32、鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？七七思考題：思考題：六六分析及討論：分析及討論：42詳細課資實驗六實驗六 微生物的分離純化及生理生化試驗微生物的分離純化及生理生化試驗1.了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程；過程；2.了解干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的原理，了解干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的原理，掌握其滅菌方法。掌握其滅菌方法。實驗項目號：實驗項目號：80000039105實驗類型實驗類型：綜合性綜合性 一一實驗目的實驗目的：、培養(yǎng)基的配制及滅菌、培養(yǎng)基的配制及滅菌（P15-28）43詳細課資二二基本原理：基本

33、原理：培養(yǎng)基培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖和積是人工配制的適合微生物生長繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，包括累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)，包括碳源、氮源、能碳源、氮源、能源、礦物元素、生長因子和水源、礦物元素、生長因子和水等生長要素。不等生長要素。不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)和同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)和pH的要求是不同的。培的要求是不同的。培養(yǎng)基在使用之前必須要處于無菌狀態(tài)，故要先養(yǎng)基在使用之前必須要處于無菌狀態(tài)，故要先滅菌。滅菌。滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法（滅菌方法：高壓蒸汽滅菌法（121/20min）烘箱干熱滅菌法烘箱干熱滅菌法（160-170/1-2h）原理及適用物品？原理及適用物品？44詳細課資根據(jù)來源可

34、分為根據(jù)來源可分為:天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基(complex/undefined medium):合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基(defined medium):半合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基(semi-defined medium)：根據(jù)使用目的可分為根據(jù)使用目的可分為:（生物生物）鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(differential medium)選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基(selected medium)：根據(jù)形狀可分為根據(jù)形狀可分為:固體培養(yǎng)基（固體培養(yǎng)基（solid medium）：）：半固體培養(yǎng)基（半固體培養(yǎng)基（semi-solid medium）：）：液體培養(yǎng)基（液體培養(yǎng)基（liquid medium）：培養(yǎng)基

35、的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途 45詳細課資三三 實驗材料：實驗材料：藥品試劑：藥品試劑：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基培養(yǎng)基設(shè)備材料：設(shè)備材料：高壓蒸汽滅菌鍋、恒壓干高壓蒸汽滅菌鍋、恒壓干熱滅菌箱、天平、藥匙、電爐、燒杯、熱滅菌箱、天平、藥匙、電爐、燒杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、試管、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、試管、棉塞、培養(yǎng)基、吸管、線繩、標簽等。棉塞、培養(yǎng)基、吸管、線繩、標簽等。46詳細課資配制培養(yǎng)基的一般程序：配制培養(yǎng)基的一般程序：按使用目的選擇培養(yǎng)基按使用目的選擇培養(yǎng)基-按培養(yǎng)基配方稱量各種藥品按培養(yǎng)基配方稱量各種藥品-加熱溶化加熱溶化-調(diào)調(diào)pH（用（用1m

36、ol/L的的HCl或或NaOH)-趁熱分趁熱分裝裝-加棉塞加棉塞-包扎、標注包扎、標注-滅菌滅菌-試管擺斜面試管擺斜面四四 實驗方法和步驟：實驗方法和步驟：47詳細課資每組配制的量：每組配制的量：項目項目培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基名稱配制量及分裝配制量及分裝做法做法滅菌滅菌培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制（每一實驗桌分成三組，每4人一組，分別配制培養(yǎng)基）1.營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂：（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、細菌培養(yǎng)基）(2人）三角瓶：三角瓶：2瓶（150ml/瓶）/2人一組試管斜面：試管斜面：16支（約5ml/支）/2人一組三角瓶：三角瓶：直接稱取相應(yīng)的干粉培養(yǎng)基置于三角瓶內(nèi)，另加0.5%的瓊脂，加水加塞、滅菌試管斜面：

37、試管斜面：每2人一組，稱取100ml量的干粉培養(yǎng)基置于燒杯內(nèi)，另加0.5%的瓊脂，加水煮溶，分裝高壓蒸汽滅菌法（121/20min）2.馬鈴薯培養(yǎng)基馬鈴薯培養(yǎng)基（2 2人）人）無菌水無菌水試管：試管：10支/4人（4.5ml/支）大三角瓶：大三角瓶：1瓶（100ml）/4人自來水分裝、加塞、滅菌即得無菌培養(yǎng)皿無菌培養(yǎng)皿每人10套皿（5套/包）包扎滅菌高壓蒸汽滅菌法或干熱滅菌法（160-170/1-2小時）無菌吸管無菌吸管每人5支1ml的吸管加過濾棉花、包扎滅菌即得48詳細課資1.P20-（2）2.P20-（8）3.P27-（2）4.P27-（3）六六.思考題：思考題：五五.分析及討論：分析及討

38、論：49詳細課資實驗六實驗六 微生物的分離純化及生理生化試驗微生物的分離純化及生理生化試驗1.掌握稀釋平板法、平板劃線法分離純化微掌握稀釋平板法、平板劃線法分離純化微生物的原理及方法；生物的原理及方法；2.學習平板菌落計數(shù)法的基本原理和方法，學習平板菌落計數(shù)法的基本原理和方法，并掌握其基本技能。并掌握其基本技能。實驗項目號：實驗項目號：80000039105實驗類型實驗類型：綜合性綜合性 一一實驗目的實驗目的：、微生物的分離純化及活菌計數(shù)（、微生物的分離純化及活菌計數(shù)（P28-34）50詳細課資二二基本原理：基本原理：從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株從混雜微生物群體中獲得只含有某一種

39、或某一株微生物的過程稱為微生物的過程稱為微生物分離與純化微生物分離與純化。微生物在。微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成單個菌落，通過挑取單菌固體培養(yǎng)基上生長形成單個菌落，通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。落而獲得一種純培養(yǎng)。常用方法：常用方法：稀釋平板法、平板劃線法稀釋平板法、平板劃線法基本原理：基本原理：1.選擇合適的培養(yǎng)基配方；選擇合適的培養(yǎng)基配方；2.提供合適的生長環(huán)境，如酸堿度、溫度和氧氣；提供合適的生長環(huán)境，如酸堿度、溫度和氧氣；3.加入某種抑制劑，從而淘汰一些不需要的微生物。加入某種抑制劑，從而淘汰一些不需要的微生物。51詳細課資三三 實驗材料：實驗材料：培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（牛肉膏蛋

40、白胨培養(yǎng)基、細營養(yǎng)瓊脂（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、細菌培養(yǎng)基）、馬鈴薯培養(yǎng)基菌培養(yǎng)基）、馬鈴薯培養(yǎng)基土壤樣品：土壤樣品：從校園采集從校園采集溶液和試劑：溶液和試劑：盛盛4.5ml無菌水試管、盛無菌水試管、盛99ml無菌無菌水三角瓶等。水三角瓶等。其他用品：其他用品：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈等酒精燈等52詳細課資 制備土壤稀釋液制備土壤稀釋液-加樣加樣-倒平板倒平板-倒置培倒置培養(yǎng)養(yǎng)-挑菌劃線純化挑菌劃線純化-鏡檢鏡檢-得到純種得到純種-接種到試管培養(yǎng)接種到試管培養(yǎng)-保藏保藏四四 實驗方法和步驟：實驗方法和步驟：流程：流程：53詳細課資1.制備土壤稀釋液：制備

41、土壤稀釋液：每管各每管各4.5ml無菌水無菌水吸取吸取1ml吸取吸取1ml15-20ml融化并冷卻至融化并冷卻至45的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基54詳細課資2.按下表，根據(jù)所要分離的微生物種類，選擇適當?shù)陌聪卤恚鶕?jù)所要分離的微生物種類，選擇適當?shù)南♂屢簼舛龋∠♂屢簼舛?，吸?ml稀釋液加到滅菌培養(yǎng)皿中，每稀釋液加到滅菌培養(yǎng)皿中，每個稀釋度個稀釋度3個重復；個重復；分離的微生物分離的微生物所用培養(yǎng)基所用培養(yǎng)基稀釋液的濃度稀釋液的濃度培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間培養(yǎng)時間細菌細菌營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂10-5、10-6、10-7371-2天天霉菌霉菌馬鈴薯培養(yǎng)基馬鈴薯培養(yǎng)基10-2、10-3、10-4282-3天天

42、55詳細課資 3.倒入溶化并冷卻到倒入溶化并冷卻到45的相應(yīng)的培養(yǎng)基，迅速混的相應(yīng)的培養(yǎng)基，迅速混勻，待冷凝后倒置于相應(yīng)溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；勻，待冷凝后倒置于相應(yīng)溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；4.培養(yǎng)相應(yīng)時間后觀察平板上菌落的生長情況，區(qū)分培養(yǎng)相應(yīng)時間后觀察平板上菌落的生長情況，區(qū)分細菌、霉菌的菌落，記錄相應(yīng)的菌落數(shù)；細菌、霉菌的菌落，記錄相應(yīng)的菌落數(shù)；5.挑取單菌落挑取單菌落劃線劃線（霉菌的要求點接霉菌的要求點接）純化）純化(每個純每個純種一個編號，編號原則：菌別種一個編號，編號原則：菌別-班別班別-座位號座位號-菌號菌號），），鏡檢，純種移接到試管培養(yǎng)。鏡檢，純種移接到試管培養(yǎng)。幾種劃線方法幾種劃線

43、方法56詳細課資五五 實驗結(jié)果實驗結(jié)果:1.記錄培養(yǎng)后平板上相應(yīng)微生物的的菌落記錄培養(yǎng)后平板上相應(yīng)微生物的的菌落 注：注：CFU/g土樣土樣=每個平板上的菌落平均數(shù)每個平板上的菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋度稀釋度10-510-610-7每個平板上細菌每個平板上細菌的菌落數(shù)的菌落數(shù)1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均細菌細菌CFU/g土樣土樣稀釋度稀釋度10-210-310-4每個平板上霉菌每個平板上霉菌的菌落數(shù)的菌落數(shù)1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均1 2 3 平均平均霉菌霉菌CFU/g土樣土樣57詳細課資2.按照按照P33和和P207-208的方法，分析上面

44、的方法，分析上面的實驗數(shù)據(jù)，報告每克土樣中所含的細的實驗數(shù)據(jù)，報告每克土樣中所含的細菌、霉菌的菌、霉菌的CFU數(shù)。數(shù)。3.描述你所純化得到的菌種的菌落形態(tài)和描述你所純化得到的菌種的菌落形態(tài)和個體形態(tài)。個體形態(tài)。58詳細課資1.怎樣判斷稀釋平板計數(shù)數(shù)據(jù)是否可靠？需要掌握哪怎樣判斷稀釋平板計數(shù)數(shù)據(jù)是否可靠？需要掌握哪幾個關(guān)鍵？幾個關(guān)鍵？P34-（3）2.當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的，而是集當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的，而是集中在一起時，你認為問題出現(xiàn)在哪里？中在一起時，你認為問題出現(xiàn)在哪里？P34-（6）3.一個酵母菌的懸液樣品，分別用血球計數(shù)板直接計一個酵母菌的懸液樣品，分別用血

45、球計數(shù)板直接計數(shù)法和平板菌落計數(shù)法進行計數(shù)，其結(jié)果會有什么數(shù)法和平板菌落計數(shù)法進行計數(shù)，其結(jié)果會有什么不同？原因是什么。試比較這兩種計數(shù)法的優(yōu)缺點。不同？原因是什么。試比較這兩種計數(shù)法的優(yōu)缺點。七七.思考題：思考題：六六.分析及討論：分析及討論：59詳細課資實驗項目號：實驗項目號：80000039105實驗類型實驗類型：綜合性綜合性（一）、實驗目的（一）、實驗目的：、微生物的生理生化試驗、微生物的生理生化試驗1.掌握進行微生物大分子物質(zhì)水解試驗的原理和方法；掌握進行微生物大分子物質(zhì)水解試驗的原理和方法；2.掌握進行抗生素的抗菌試驗的原理和方法。掌握進行抗生素的抗菌試驗的原理和方法。實驗六實驗六

46、 微生物的分離純化及生理生化試驗微生物的分離純化及生理生化試驗一一大分子物質(zhì)的水解試驗及抗生素的抗菌試驗大分子物質(zhì)的水解試驗及抗生素的抗菌試驗（P111）60詳細課資（二）、基本原理：（二）、基本原理：1.大分子物質(zhì)的水解試驗：大分子物質(zhì)的水解試驗：微生物對大分子物質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，微生物對大分子物質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解后，才能被微生物吸必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大分子物質(zhì)為較收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大分子物質(zhì)為較小化合物，使其能被運輸?shù)郊毎麅?nèi)

47、。如淀粉酶將淀粉水解為小小化合物，使其能被運輸?shù)郊毎麅?nèi)。如淀粉酶將淀粉水解為小分子的糊精、雙糖、單糖。蛋白酶水解蛋白質(zhì)為小肽、氨基酸分子的糊精、雙糖、單糖。蛋白酶水解蛋白質(zhì)為小肽、氨基酸等，這些過程均可通過觀察微生物菌落周圍的物質(zhì)變化來證實，等，這些過程均可通過觀察微生物菌落周圍的物質(zhì)變化來證實，如在淀粉平板上淀粉被水解后滴加碘液時會出現(xiàn)不呈藍色的透如在淀粉平板上淀粉被水解后滴加碘液時會出現(xiàn)不呈藍色的透明圈，在明圈，在酪蛋白平板（牛奶平板）上蛋白質(zhì)被分解會出現(xiàn)透明酪蛋白平板（牛奶平板）上蛋白質(zhì)被分解會出現(xiàn)透明圈。圈。2.抗生素的抗菌試驗：抗生素的抗菌試驗：抗生素為某些微生物的次生代謝產(chǎn)物，會積

48、累在培養(yǎng)基質(zhì)抗生素為某些微生物的次生代謝產(chǎn)物，會積累在培養(yǎng)基質(zhì)中。把待試驗的微生物連同培養(yǎng)基塊置于加有供試菌株的平板中。把待試驗的微生物連同培養(yǎng)基塊置于加有供試菌株的平板表面，經(jīng)培養(yǎng)，觀察菌塊周圍是否有抑菌圈出現(xiàn)，就可知道該表面，經(jīng)培養(yǎng)，觀察菌塊周圍是否有抑菌圈出現(xiàn)，就可知道該菌株是否產(chǎn)生相應(yīng)的抗生素。菌株是否產(chǎn)生相應(yīng)的抗生素。61詳細課資（三）、實驗材料：（三）、實驗材料：培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：酪蛋白平板（牛奶平板）、淀粉平板、營酪蛋白平板（牛奶平板）、淀粉平板、營養(yǎng)瓊脂平板養(yǎng)瓊脂平板菌株：菌株：前個實驗分離到的各種菌株（前個實驗分離到的各種菌株（寫明編號寫明編號）、）、大腸桿菌大腸桿菌（Esch

49、erichia coli）、青霉、青霉(Penicillium sp.)、細黃鏈霉菌（細黃鏈霉菌（Stretomyces griseus）、枯草桿菌）、枯草桿菌溶液和試劑：溶液和試劑：路哥氏碘液路哥氏碘液其他用品：其他用品：無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒精無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈等燈等62詳細課資點接微生物菌種點接微生物菌種30培養(yǎng)培養(yǎng)2天天觀察透明圈大小觀察透明圈大小酪蛋白平板酪蛋白平板1.蛋白質(zhì)水解試驗：蛋白質(zhì)水解試驗：（自己分離的細菌、霉菌和枯草桿菌對照自己分離的細菌、霉菌和枯草桿菌對照）2.淀粉水解試驗：淀粉水解試驗：（自己分離的細菌、霉菌和枯草桿菌對照自己分離的細菌、霉

50、菌和枯草桿菌對照）30培養(yǎng)培養(yǎng)2天天加碘液，加碘液，觀察透明圈大小觀察透明圈大?。ㄋ模?、實驗方法和步驟：（四）、實驗方法和步驟：點接微生物菌種點接微生物菌種63詳細課資3.抗生素的抗菌試驗：抗生素的抗菌試驗：（自己分離的霉菌和青霉、細黃鏈霉菌對照自己分離的霉菌和青霉、細黃鏈霉菌對照）加加0.2ml大腸桿菌懸液大腸桿菌懸液涂布均勻涂布均勻挑取菌塊置于培養(yǎng)基表面挑取菌塊置于培養(yǎng)基表面營養(yǎng)瓊脂平板營養(yǎng)瓊脂平板37培養(yǎng)培養(yǎng)2天天觀察抑菌圈大小觀察抑菌圈大小64詳細課資（五）、實驗結(jié)果（五）、實驗結(jié)果:表表1 大分子物質(zhì)水解結(jié)果記錄表大分子物質(zhì)水解結(jié)果記錄表微生物類型微生物類型菌株名或編號菌株名或編號蛋

51、白質(zhì)水解試驗蛋白質(zhì)水解試驗淀粉水解試驗淀粉水解試驗抗生素的抑菌試驗抗生素的抑菌試驗細菌細菌-枯草桿菌枯草桿菌-放線菌放線菌細黃鏈霉菌細黃鏈霉菌-霉菌霉菌青霉青霉-將實驗結(jié)果填入表將實驗結(jié)果填入表1，“+”或或“+”表示陽性，表示陽性，“-”表示陰性表示陰性65詳細課資 在選擇平板上形成的透明圈的大小是否就能作為在選擇平板上形成的透明圈的大小是否就能作為產(chǎn)酶能力的直接證據(jù)？透明圈的大小還受什么因素的產(chǎn)酶能力的直接證據(jù)？透明圈的大小還受什么因素的影響？影響？（七）、思考題：（七）、思考題：（六）、（六）、分析及討論：分析及討論：66詳細課資（一）、實驗目的（一）、實驗目的：二、糖發(fā)酵試驗、檸檬酸鹽

52、試驗和半固體穿刺法二、糖發(fā)酵試驗、檸檬酸鹽試驗和半固體穿刺法（P115-121）1.了解糖發(fā)酵試驗、了解糖發(fā)酵試驗、檸檬酸鹽試驗檸檬酸鹽試驗的原理，掌握的原理，掌握通過這些試驗鑒別不同微生物的方法。通過這些試驗鑒別不同微生物的方法。2.學習半固體穿刺法觀察細菌的運動性及細菌的學習半固體穿刺法觀察細菌的運動性及細菌的生長與氧的關(guān)系生長與氧的關(guān)系67詳細課資（二）、基本原理：（二）、基本原理：1.乳糖發(fā)酵試驗：乳糖發(fā)酵試驗：（不同的微生物對不同糖的利（不同的微生物對不同糖的利用能力是不同的）用能力是不同的）在糖發(fā)酵管中加入溴甲酚紫（在糖發(fā)酵管中加入溴甲酚紫（pH6.8 紫色）紫色）-從而判斷是否產(chǎn)

53、酸從而判斷是否產(chǎn)酸在糖發(fā)酵管中加入倒置的杜氏小盲管，觀察有無在糖發(fā)酵管中加入倒置的杜氏小盲管，觀察有無氣泡產(chǎn)生氣泡產(chǎn)生-從而判斷是否產(chǎn)氣從而判斷是否產(chǎn)氣68詳細課資2.檸檬酸鹽試驗：檸檬酸鹽試驗：細菌分解培養(yǎng)基中的檸檬酸鹽和磷酸銨后細菌分解培養(yǎng)基中的檸檬酸鹽和磷酸銨后產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高。培養(yǎng)升高。培養(yǎng)基中加入基中加入1%的溴麝香草酚藍指示劑（的溴麝香草酚藍指示劑（pH7.6 藍色藍色）69詳細課資3.細菌的運動性及細菌的生長與氧的關(guān)系：細菌的運動性及細菌的生長與氧的關(guān)系：（半固（半固體穿刺法）體穿刺法）運動性：運動性：能運動（有鞭毛）沿穿刺線擴散生長；

54、能運動（有鞭毛）沿穿刺線擴散生長；不運動（無鞭毛）沿穿刺線生長不運動（無鞭毛）沿穿刺線生長生長與氧的關(guān)系：生長與氧的關(guān)系：好氧性：好氧性：厭氧性：厭氧性：兼氧性：兼氧性：70詳細課資三三 實驗材料：實驗材料：培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：乳糖發(fā)酵試管、乳糖發(fā)酵試管、檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面、檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面、營養(yǎng)肉湯半固體培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯半固體培養(yǎng)基菌株：菌株：前個實驗分離到的細菌菌株（寫明編號）前個實驗分離到的細菌菌株（寫明編號）其他用品：其他用品：酒精燈、接種環(huán)、接種針、恒溫培酒精燈、接種環(huán)、接種針、恒溫培養(yǎng)箱等養(yǎng)箱等71詳細課資（四）、實驗方法和步驟：（四）、實驗方法和步驟：培養(yǎng)基培養(yǎng)基-標記標記-接種接種

55、-37培養(yǎng)培養(yǎng)2天天-觀觀察察-記錄結(jié)果記錄結(jié)果（五）、實驗結(jié)果（五）、實驗結(jié)果:記錄試驗結(jié)果于表記錄試驗結(jié)果于表2 表表2 試驗結(jié)果試驗結(jié)果結(jié)論：結(jié)論：乳糖發(fā)酵試驗乳糖發(fā)酵試驗檸檬酸鹽試驗檸檬酸鹽試驗細菌的運動性細菌的運動性細菌的生長與氧的關(guān)系細菌的生長與氧的關(guān)系現(xiàn)象現(xiàn)象結(jié)果結(jié)果72詳細課資 根據(jù)細菌在半固體營養(yǎng)瓊脂試管穿刺接種的培根據(jù)細菌在半固體營養(yǎng)瓊脂試管穿刺接種的培養(yǎng)結(jié)果，你怎樣判斷該菌株的運動性及其生長與氧養(yǎng)結(jié)果，你怎樣判斷該菌株的運動性及其生長與氧的關(guān)系？說明理由。的關(guān)系？說明理由。（七）、思考題：（七）、思考題：（六）、分析及討論：（六）、分析及討論：總結(jié)你在這個大實驗中用什么方

56、法分離、純總結(jié)你在這個大實驗中用什么方法分離、純化到了什么微生物，有什么特性?；搅耸裁次⑸?，有什么特性。u整個大實驗的總結(jié)整個大實驗的總結(jié)73詳細課資實驗七實驗七1.蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及初步鑒定蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選及初步鑒定2.高溫淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及初步鑒定高溫淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及初步鑒定3.抗藥性突變菌株的篩選及初步鑒定抗藥性突變菌株的篩選及初步鑒定4.自生固氮菌的篩選及初步鑒定自生固氮菌的篩選及初步鑒定 自主性實驗，以下專題任選其一：自主性實驗，以下專題任選其一：通過自主設(shè)計實驗，讓同學們能綜合運用前面學過的通過自主設(shè)計實驗，讓同學們能綜合運用前面學過的實驗技能，掌握進行科學研究的方法

57、。實驗技能，掌握進行科學研究的方法。74詳細課資1.1.分組與選題：分組與選題：學生自由組合（每組學生自由組合（每組5-65-6人），從人），從以上的專題中任選以上的專題中任選1 1個。個。2.提交實驗方案：提交實驗方案：根據(jù)所選的專題通過小組討論設(shè)根據(jù)所選的專題通過小組討論設(shè)計實驗方案。該方案，在第十周之前提交，經(jīng)老計實驗方案。該方案，在第十周之前提交，經(jīng)老師審核后可開始實驗。實驗方案盡可能詳細，包師審核后可開始實驗。實驗方案盡可能詳細，包括要配制什么培養(yǎng)基（配方），試管三角瓶培養(yǎng)括要配制什么培養(yǎng)基（配方），試管三角瓶培養(yǎng)皿等的用量都要計劃清楚。實驗的樣品自己采集皿等的用量都要計劃清楚。實驗的樣品自己采集，每組至少兩個不同的樣品。，每組至少兩個不同的樣品。75詳細課資3.實驗：實驗：第第11周至第周至第13周為實驗時間，由學周為實驗時間，由學生獨立完成。生獨立完成。4.答辯：答辯：第第14周每組交一份研究論文式的實周每組交一份研究論文式的實驗報告（含摘要、前言、材料與方法、實驗報告（含摘要、前言、材料與方法、實驗結(jié)果、討論與結(jié)論，參考文獻），并以驗結(jié)果、討論與結(jié)論，參考文獻），并以小組為單位進行答辯（做小組為單位進行答辯（做PPT），答辯成），答辯成績作為實驗考核的重要參考?？冏鳛閷嶒灴己说闹匾獏⒖?。76詳細課資77詳細課資