大專《藥物分析》教案

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. 教 案 （大專） 藥 物 分 析 藥學(xué)教研室 肖東 第一章 概 論 組織教學(xué) 1.掌握藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、中國(guó)藥典、藥品檢驗(yàn)程序 2.熟悉藥物分析的性質(zhì)及任務(wù)、藥物分析統(tǒng)計(jì)學(xué)知識(shí) 引入新課 第一節(jié) 中國(guó)藥典 一、基本概念 1.藥物分析：研究化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的合成藥物或天然藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，也研究中藥制劑和生物制品及其制劑有代表性的質(zhì)量控制方法。 2.藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)定GLP；藥品臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范GCP藥品生產(chǎn)3.質(zhì)量管理規(guī)范GMP；藥品經(jīng)營(yíng)質(zhì)量管理規(guī)范GSP；中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范GAP 人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)委員會(huì)ICH 4.藥品標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)涵包括：真?zhèn)舞b別、純度檢查和品質(zhì)要求。決定了藥品的安全性、5.有效性和質(zhì)量可控性。、精確度 藥典規(guī)定取樣量的準(zhǔn)確度和試驗(yàn)精密度。 6.藥典：記載藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的法典；國(guó)家監(jiān)督、管理藥品的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)；法律約束力。 各國(guó)藥典現(xiàn)行版本：ChO2010,EP7,USP34,JP16 二、中國(guó)藥典：1953,63,77,85,90,95,00,05,10。 ChP2010由一部、二部、三部及其增補(bǔ)本組成。 （一部）藥材和飲片、植物油脂和提取物、成方制劑和單味制劑 （二部）化學(xué)藥品、生化藥品、抗生素、放射性藥品、藥用輔料； （三部）生物制品 內(nèi)容分為:凡例、正文、附錄 正文每一品種項(xiàng)含：⑴品名（包括中文名，漢語(yǔ)拼音名與英文名） ⑵有機(jī)藥物的結(jié)構(gòu)式；⑶分子式與分子量； ⑷來(lái)源或有機(jī)藥物的化學(xué)名稱；⑸含量或效價(jià)規(guī)定 ⑹處方；⑺制法；⑻性狀；⑼鑒別；⑽檢查； ⑾含量或效價(jià)測(cè)定；⑿類別；⒀規(guī)格；⒁貯藏； ⒂制劑 三、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)術(shù)語(yǔ)： 1.凡例：為正確使用中國(guó)藥典進(jìn)行藥品質(zhì)量檢定的基本原則。是對(duì)中國(guó)藥典正文、附錄及與質(zhì)量檢定有關(guān)的共性問(wèn)題的統(tǒng)一規(guī)定。 2.正文:（藥品標(biāo)準(zhǔn)）根據(jù)藥物自身的理化與生物學(xué)特性，按照批準(zhǔn)的來(lái)源、處方、生產(chǎn)工藝、貯藏運(yùn)輸條件等所制定的、用于檢測(cè)藥品質(zhì)量是否達(dá)到用藥要求并衡量其質(zhì)量是否均一穩(wěn)定的技術(shù)規(guī)定。 3.附錄：包括制劑通則、通用檢測(cè)方法和指導(dǎo)原則。 1藥品名稱：列入國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的藥品名稱-稱為藥品通用名稱-不得作為藥品商標(biāo)使用。INN-國(guó)際非專利藥名。藥品中文名稱：須按照《中國(guó)藥品通用名稱》(China Approved Drug Names，CADN)。 2.制法：對(duì)藥品生產(chǎn)制備的重要工藝和質(zhì)量管理的要求。 3性狀：外觀性狀、溶解度、物理常數(shù)：熔點(diǎn)、旋光度、吸收系數(shù)等可反映藥品純度。 4鑒別：根據(jù)藥物的某些物理、化學(xué)或生物學(xué)特性進(jìn)行的試驗(yàn)，以判定藥物的真?zhèn)?。區(qū)分藥物類別-一般鑒別試驗(yàn)；證實(shí)具體藥物-專屬鑒別試驗(yàn)。 5檢查：是對(duì)藥物的安全性、有效性、均一性和純度四個(gè)方面的狀態(tài)所進(jìn)行的試驗(yàn)分析 6含量測(cè)定：方法：化學(xué)原料藥-首選容量分析法、制劑-首選色譜法 7制劑規(guī)格：系指每一支、片或其他每一個(gè)制劑單位含有主藥的重量（或效價(jià)）或含量（%）或裝量，即制劑的標(biāo)示量。 8檢查方法和限度：原料藥的含量-按重量計(jì)，制劑的含量限度-指標(biāo)示量的百分含量表示時(shí)，范圍95.0%-105.0% 9標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：標(biāo)準(zhǔn)品：用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按效價(jià)單位(或μg)計(jì)，以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)定.對(duì)照品：化學(xué)藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按干燥品計(jì)算后使用。對(duì)照藥材對(duì)照提取物-中藥檢驗(yàn)。參考品-生物制品 10精確度 （1）稱重和量取：由有效位數(shù)確定：0.1g—可稱取0.06~0.14g；2g—1.5~2.5；2.0—1.95~2.05；2.00—1.995~2.005。 精密稱定-準(zhǔn)確至所取重量的千分之一；稱定-百分之一； 精密量取-移液管的精度要求； 量取-量筒；約-不得超過(guò)規(guī)定量的10%； 恒重-連續(xù)2次重量差小于0.3mg。 空白試驗(yàn)-不加供試品或等量溶劑替代供試液 四、藥品標(biāo)準(zhǔn)制定的原則：科學(xué)性、先進(jìn)性、規(guī)范性、權(quán)威性原料藥的結(jié)構(gòu)確證：1樣品要求：純度>99.0%，雜質(zhì)<0.5%。 2結(jié)構(gòu)確證方案：一般項(xiàng)目：有機(jī)光譜分析法：原子發(fā)射光譜法（AES）、原子吸收分光光度法—含金屬藥物中無(wú)機(jī)元素測(cè)定；質(zhì)譜-多肽；單糖-紙、薄層、HPLC、色質(zhì)連用；得意他辦公-凝膠色譜；手性-單晶X射線四圓衍射儀；晶型-粉末X-衍射、IR、熔點(diǎn)、熱分析穩(wěn)定性試驗(yàn)：影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)、長(zhǎng)期試驗(yàn)藥品檢驗(yàn)工作的基本程序：藥品檢驗(yàn)工作的基本程序一般分為取樣、鑒別、檢查、含量測(cè)定、寫出檢驗(yàn)報(bào)告藥品取樣的基本原則：均勻、合理 第二章 藥物的鑒別試驗(yàn) 一、鑒別試驗(yàn)的內(nèi)涵： 1、根據(jù)藥物分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物化學(xué)方法來(lái)判斷藥物真?zhèn)? 2、中國(guó)藥典和世界各國(guó)藥典所收載的藥品項(xiàng)下的鑒別實(shí)驗(yàn)方法均為用來(lái)證實(shí)貯藏在標(biāo)有標(biāo)簽容器中的藥物是否為所標(biāo)示的藥物而不是對(duì)未知物進(jìn)行定性分析. 3、方法應(yīng)為專屬，每個(gè)品種一般2~3次 二、一般鑒別試驗(yàn) 1、有機(jī)氟化物：氧瓶燃燒法—堿性溶液吸收無(wú)機(jī)F—pH4.3茜素氟藍(lán)、硫酸鈰—藍(lán)紫色絡(luò)合物 2、有機(jī)酸鹽：①水楊酸楊：FeCl3，紫色②酒石酸鹽：氨制硝酸銀—水浴—內(nèi)壁銀鏡 3、芳香胺類：NaNO—β萘酚 (重氮化-偶合) 4、托烷生物堿類：發(fā)煙硝酸—水浴—蒸干—?dú)堅(jiān)既堋狵OH一?！钭仙╒itali） 5、焰色反應(yīng)：鈉-鮮黃；鈣—磚紅；鋇—黃綠，綠色玻璃中藍(lán)色 6、銨鹽：NaOH加熱—氨臭 7、硝酸鹽：硫酸+銅絲—加熱—紅棕色氣體 三、藥物鑒別方法： ①化學(xué)法：要求反應(yīng)迅速，現(xiàn)象明顯.包括顯色、沉淀、熒光、氣體生成、試劑褪色、熔點(diǎn)測(cè)定. ⑦光譜法：紫外光譜(測(cè)定λmax或同時(shí)測(cè)定λmin；規(guī)定一定濃度供試液在λmax處的A；規(guī)定λ和E；規(guī)定λ1/λ2；經(jīng)化學(xué)處理后測(cè)定產(chǎn)物的吸收光譜特征)；紅外光譜(專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣) ③色譜：1.薄層色譜TLC：定性參數(shù)為RP值；不同類藥物不能互相干擾；應(yīng)確證TLC的專屬性. 2.HPLC：要求供試品和對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致. ④射線粉末衍射法 ⑤生物學(xué)法：微生物或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)鑒別的方法. 指紋圖譜與特征圖譜鑒別法 ⑦顯微鑒別法鑒別試驗(yàn)一般需要對(duì)方法的專屬性和耐用性進(jìn)行驗(yàn)證 小結(jié)： 作業(yè)：補(bǔ)充的練習(xí)題 5min 15min 10min 30min 5min 20min 5min 第三章 藥物的雜質(zhì)檢查 組織教學(xué) 1.掌握藥物的純度要求 2.掌握雜質(zhì)的檢查方法 3.掌握氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、金屬檢查、砷鹽檢查、酸堿度檢查 復(fù)習(xí)舊課 引入新課 第一節(jié) 概 述 一、雜質(zhì)：Chp將任何影響藥品純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。 二、來(lái)源：1生產(chǎn)過(guò)程引入； 2貯藏過(guò)程中受外界條件影響，引起藥物理化特性變化而產(chǎn)生。 三、分類：按來(lái)源分類 1一般雜質(zhì)(生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中容易引入的雜質(zhì)) 2特殊雜質(zhì)：特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中引入的雜質(zhì)，也常稱為有關(guān)物質(zhì)，這類雜質(zhì)隨藥物的不同而不同。 四、雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。 雜質(zhì)限量=雜質(zhì)最大允許量/供試品量100%雜質(zhì)控制方法： 1限量檢查法：通常不需要測(cè)定準(zhǔn)確含量，只檢查雜質(zhì)是否超過(guò)限量。 （1）對(duì)照法：雜志限量(%)=標(biāo)液濃度*標(biāo)液體積/供試品量*100%。 （2）靈敏度法：在供試品溶液加入一定量試劑，在一定條件下不得有正反應(yīng)出現(xiàn) （3）比較法：取一定量供試品依法檢查，測(cè)定特定待檢雜志參數(shù)與規(guī)定限量比較 三、雜質(zhì)的檢查方法： 1化學(xué)方法：（1）顯色反應(yīng)檢查法（2）沉淀反應(yīng)檢查法（3）生成氣體檢查法（4）滴定法 2色譜方法：TLC、HPLC、GC，雜質(zhì)對(duì)照品法、供試品自身稀釋對(duì)照法。TLC,要求主斑點(diǎn)顏色不得更深。 3光譜法：紫外-可見(jiàn)、紅外、原子吸收分光光度法（用于金屬雜質(zhì)檢查） 4其他方法： （1）熱分析法：熱分析：是在程序控制溫度下，精確記錄物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)隨溫度變化的關(guān)系，研究物質(zhì)在受熱過(guò)程中所發(fā)生的晶形轉(zhuǎn)化、熔融、蒸發(fā)、脫評(píng)價(jià)藥品水等物理變化，或熱分解、氧化、還原等化學(xué)變化，以及伴隨發(fā)生的溫度、能量、或重量改變的方法a.差熱分析(DTA)：在程序控制溫度下測(cè)量試樣與參比物之間溫度差ΛT與溫度關(guān)系的一種技術(shù)b.差示掃描量熱法(DSC)：在程序控制溫度下測(cè)量傳輸給待測(cè)物質(zhì)和參比物的能量差與溫度(或時(shí)間)關(guān)系的一種技術(shù).c.熱重分析法(TGA)：應(yīng)用熱天平在程序控制溫度的條件下測(cè)量物質(zhì)的質(zhì)量隨溫度變化，紀(jì)錄變化曲線(熱重曲線)從而準(zhǔn)確測(cè)量變化和變化速度. （2）酸堿度檢查法 （3）物理性狀檢查法： 第二節(jié) 一般雜質(zhì)檢查 一般雜質(zhì)檢查：檢查內(nèi)容：氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、干燥失重、水分、易炭化物、殘留溶劑、溶液顏色、溶液澄清度。檢查無(wú)機(jī)雜質(zhì)對(duì)評(píng)價(jià)藥品生產(chǎn)工藝狀況有重要意義。 一、氯化物檢查法： 1.原理：藥物中微量氯化物在硝酸酸性條件下與AgNO3反應(yīng)，生成AgCl膠體微粒而顯白色渾濁，與一定量標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液在相同條件下反應(yīng)產(chǎn)生的AgCl渾濁程度比較不得更深。 2方法：樣品溶解/標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液(10μg Cl/ml)，50mL納氏比色管，+稀HNO310mL +水至40mL +AgNO3試液1.0mL +水至50mL ,暗處放置5min，比較.(氯化物濃度以50mL中含50～80μg的 Cl為宜)加稀酸排除硝酸銀鹽干擾。 3.注意事項(xiàng)：(1)比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察(2)平行操作原則(3)供試品溶液如帶顏色，可采用內(nèi)消色法(倍量法)；外消色法：如KMnO4中氧化物的檢查，可先和乙醇適量還原后再依法檢查 二、硫酸鹽檢查方法：在稀鹽酸酸性條件下與氯化鋇反應(yīng)，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下產(chǎn)生的硫酸鋇渾濁程度比較。鐵鹽檢查法：鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸鹽作用生成紅色可溶性的硫氰酸鐵配離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后進(jìn)行比色。 三、重金屬(鉛)檢查法：重金屬概念：重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。以鉛限量表示重金屬的限度。 第一法：硫代乙酰胺法。適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。原理：硫代乙酰胺在弱酸性條件下水解，產(chǎn)生硫化氫，與重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，判定供試品中重金屬是否符合限量規(guī)定。 第二法:熾灼后的硫代乙酰胺法含芳環(huán)、雜環(huán)以及難溶于水、稀酸及乙醇的有機(jī)藥物 第三法：硫化鈉法適用于溶于堿性水溶液而難溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的藥物 四、砷鹽檢查法：古蔡氏法：原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，顏色不得更深。試驗(yàn)中醋酸鉛棉花作用：用來(lái)吸收鋅?；蚬┰嚻房赡墚a(chǎn)生的硫化氫氣體。 注意事項(xiàng)： 1.供試品為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等在酸性溶液中生成HS2或SO2，與溴化汞生成黑色硫化汞或金屬汞，干擾砷斑檢測(cè)。應(yīng)先加硝酸使氧化成硫酸鹽； 2供試品為鐵鹽，消耗還原劑，先加酸性氯化亞錫試液使高鐵離子還原為低鐵離子；3環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物要先進(jìn)行有機(jī)破壞(堿和酸)； 4.含銻藥物，銻化氫干擾砷鹽的檢出(SbH3 + HgBr2→SbH2(HgBr) + HBr)，改用白田道夫(Betterdorff)法 五、二乙基二硫代氨基甲酸銀法：原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)氫，與微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷，還原二乙基二硫代氨基甲酸銀，產(chǎn)生紅色膠態(tài)銀，同時(shí)在相同條件下使一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液呈色，用目視比色法或在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度進(jìn)行比較。 六、干燥失重測(cè)定法：主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性成分。干燥失重的量應(yīng)恒重。干燥至恒重的第二次及以后各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥1小時(shí)后進(jìn)行. 1常壓恒溫干燥法：適用于對(duì)熱穩(wěn)定的藥物，如：烏苯美司，卡巴膽堿，尼莫地平.需在105℃下干燥至恒重. 2(恒溫)減壓干燥法：適用于熔點(diǎn)低或受熱易分解的供試品，常用干燥劑為：無(wú)水氯化鈣、硅膠、五氧化二磷. 3.干燥劑干燥法：適用于受熱分解或生化的藥物，常用硅膠、硫酸和五氧化二磷等 七、熾灼殘?jiān)褐赣袡C(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無(wú)機(jī)藥物加熱分解后，高溫?zé)胱扑a(chǎn)生的非揮發(fā)性無(wú)機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽。殘留溶劑測(cè)定法分類： 1有機(jī)溶媒毒性大，且具有致癌作用并對(duì)環(huán)境有害盡量避免使用； 2有機(jī)溶媒對(duì)人有一定毒性應(yīng)限量使用； 3有機(jī)溶媒對(duì)人健康危險(xiǎn)性小推薦使用； 4對(duì)人或環(huán)境無(wú)足夠數(shù)據(jù)證明有危害，應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝特點(diǎn)制定相應(yīng)限度，使其滿足各種相應(yīng)質(zhì)量要求.； 第四章 體內(nèi)藥物分析 一、血樣中蛋白質(zhì)的去除： ①加入與水混溶(1:1~3)的有機(jī)溶劑(乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃等) ②加入中性鹽(1:2)(飽和硫酸銨，硫酸鈉，Mg2+，磷酸根，枸櫞酸鹽等) ③加入強(qiáng)酸(1:0.6)(10%三氯醋酸，65%高氯酸，5%偏磷酸)，可用煮沸分解或加堿中和沉淀法去除. ④加入含鋅鹽(1:2)及銅鹽的沉淀劑 ⑤酶解法(枯草菌溶霉素) 二、尿樣中綴合物的水解：常用酸水解，但酶水解選擇性高，很少使用被測(cè)藥物或共存物降解，故優(yōu)先使用蛋白質(zhì)分離，純化與濃縮： ①液液萃取法(LLE)選擇性高，乙醚，三氯甲烷選用溶劑要求a對(duì)被測(cè)組分溶解度大，沸點(diǎn)低，易于揮發(fā)濃縮；b與水不相混溶c無(wú)毒，化學(xué)穩(wěn)定，不易乳化. ②液固萃取法(LSE)a較少引入雜質(zhì)，b消除了LLE中的乳化現(xiàn)象，c萃取率高d在組后洗脫中多采用水為溶劑系統(tǒng)，大大增強(qiáng)了安全性e處理樣品速度快，并可在室溫下操作. 三、體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn): 1體內(nèi)樣品需經(jīng)分離與濃集，或經(jīng)化學(xué)衍生化處理后才能進(jìn)行分析， 2對(duì)分析方法的靈敏度及專屬性要求較高， 3分析工作量大，測(cè)定數(shù)據(jù)的處理和結(jié)果的闡明比較繁雜 四、定量分析方法的驗(yàn)證：(注：與藥物分析方法驗(yàn)證的不同點(diǎn)) 1.特異性：必須證明所測(cè)定的物質(zhì)是原形藥物或特定的活性代謝物，內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)的代謝物及同時(shí)服用的其他藥物不得干擾樣品的測(cè)定. 2.標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍：必須至少6個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，不許外延.建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但標(biāo)準(zhǔn)曲線不包括零點(diǎn).精密度與準(zhǔn)確度：RSD<15%，準(zhǔn)確度在85%—115%. 3.定量下限：是標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)，要求至少能滿足測(cè)定3—5個(gè)半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度，或Cmax的1/10—1/20時(shí)的藥物濃度. 4.樣品的穩(wěn)定性：根據(jù)具體情況，對(duì)含藥生物樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時(shí)間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時(shí)間. 5.提取回收率：一般低于100％，須穩(wěn)定.應(yīng)考察高、中、低三個(gè)濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)一致、精密和可重現(xiàn).質(zhì)控樣品：將已知量的待測(cè)藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于質(zhì)量控制. 小結(jié)： 作業(yè)：補(bǔ)充的練習(xí)題 5min 25min 40min 15min 5min 第五章 芳酸類藥物 組織教學(xué) 1.掌握苯甲酸類、水楊酸類藥物鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定 3.熟悉其他芳酸類藥物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、鑒別 復(fù)習(xí)舊課 引入新課 代表藥物：水楊酸類：水楊酸，阿司匹林，對(duì)氨基水楊酸，二氟尼柳，貝諾酯 苯甲酸類：苯甲酸，甲芬那酸，丙磺舒 其他芳酸類：氯貝丁酯，布洛芬 一、理化性質(zhì) (1)酸性：羧酸、與堿成鹽，可溶于水；較強(qiáng)酸性，大多藥物原料藥可在中性乙醇或甲醇，丙酮等水溶性有機(jī)溶劑中，用氫氧化鈉直接滴定法測(cè)定含量 (2)水解性：酯鍵或酰胺鍵發(fā)生水解反應(yīng) (3)吸收光譜特性：苯環(huán)和特征取代基 :UV、IR吸收 (4)基團(tuán)或元素特性：a對(duì)乙酰氨基酚的酚-OH和水楊酸的鄰羥苯甲酸與三價(jià)鐵顯色，b 酮洛芬的二苯甲酮與苯肼顯色；c美洛昔康硫元素?zé)岱纸夂螽a(chǎn)生的 硫化氫與醋酸鉛生成PbS↓黑色 三、鑒別試驗(yàn) 1. FeCl3反應(yīng) (1)水楊酸反應(yīng)：水楊酸的水溶液加三氯化鐵試液，即生成紫堇色配位化合物。 中性或弱酸性(pH 4~6)條件下進(jìn)行，強(qiáng)酸中配位化合物可分解；本反應(yīng)極靈敏，宜在稀溶液中進(jìn)行。阿司匹林加水煮沸使水解生成水楊酸后，可與三氯化鐵試液反應(yīng)顯紫堇色；雙水楊酯在氫氧化鈉試液中煮沸后與三氯化鐵試液反應(yīng)呈紫色；二氟尼柳溶于乙醇后與三氯化鐵試液反應(yīng)呈深紫色。 (2)酚羥基反應(yīng) 對(duì)乙酰氨基酚的水溶液加三氯化鐵試液即顯藍(lán)紫色。 吡羅昔康與美洛昔康噻嗪環(huán)上的烯醇式羥基具有酚羥基的性質(zhì)，亦可在三氯甲烷溶液中與三氯化鐵生成紅色配位化合物，分別顯玫瑰紅色和淡紫紅色。 2. 縮合反應(yīng) 酮洛芬具有二苯甲酮結(jié)構(gòu)，在酸性條件下可與二硝基苯肼縮合生成橙色偶氮化合物。取本品，加乙醇溶解后，加二硝基苯肼試液，加熱至沸，放冷即產(chǎn)生橙色沉淀。 3.重氮化-偶合反應(yīng)：對(duì)乙酰氨基酚具潛在的芳伯氨基，在稀鹽酸中加熱水解生成對(duì)氨基酚，具有游離芳伯氨基結(jié)構(gòu)，在酸性溶液中與亞硝酸鈉試液進(jìn)行重氮化反應(yīng)，生成的重氮鹽再與堿性β-萘酚偶合生成紅色偶氮化合物。 4.水解反應(yīng)：阿司匹林與碳酸鈉試液加熱水解，得水楊酸鈉及醋酸鈉，加過(guò)量稀硫酸酸化后，則生成白色水楊酸沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣。 2 CH3COONa + H2SO4 → 2 CH3COOH +Na2SO4 雙水楊酯與氫氧化鈉試液煮沸后，加稀鹽酸，即生成白色水楊酸沉淀；沉淀在醋酸銨試液中可溶解。 5.氧化反應(yīng)甲芬那酸溶于硫酸后，與重鉻酸鉀反應(yīng)顯深藍(lán)色，隨即變?yōu)樽鼐G色。 吲哚美辛溶液在硫酸存在下，與重鉻酸鉀溶液共熱，應(yīng)顯紫色；在鹽酸溶液中與亞硝酸鈉溶液反應(yīng)顯綠色，放置后漸變黃色。 6.特征元素的反應(yīng) (1)氯元素的鑒別 含氯藥物與堿共熱分解產(chǎn)生氯化物，顯氯化物的鑒別反應(yīng)。如雙氯芬酸鈉，與碳酸鈉熾灼灰化，加水煮沸、濾過(guò)后，濾液顯氯化物鑒別反應(yīng) (2)硫元素的鑒別 美洛昔康中含二價(jià)硫高溫分解產(chǎn)生硫化氫氣體，遇醋酸鉛生成硫化鉛黑色沉淀。如美洛昔康于試管中熾灼，產(chǎn)生的氣體使?jié)駶?rùn)的醋酸鉛試紙顯黑色。 7光譜法：(1)紫外可見(jiàn)分光光度法：a最大吸收波長(zhǎng)法雙氯芬酸鈉 萘普生 吡羅昔康 美洛昔康b最大與最小吸收波長(zhǎng)法，布洛芬c吸光度法甲芬那酸，d吸光度比值法，二氟尼柳(2)紅外分光光度法8.色譜法：(1)薄層色譜法：二氟尼柳，美洛昔康(2)HPLC：阿司匹林 甲芬那酸 雙氯芬酸鈉 布洛芬 萘普生 吲哚美辛 對(duì)乙酰氨基酚 三、特殊雜質(zhì)檢查 1阿司匹林：游離水楊酸 ：乙酰化不完全 + 水解（精制、制劑、貯藏）產(chǎn)生，有毒性，酚羥基易氧化成有色醌類化合物，變色 。ChP 2010前用水楊酸與Fe3+ 生成紫堇色配離子的原理, 用稀硫酸鐵銨溶液顯色法檢查，供試品溶液制備過(guò)程中阿司匹林水解產(chǎn)生新的游離水楊酸。 所以ChP2010 ：1%冰醋酸甲醇溶液（防阿司匹林水解）制備供試品溶液采HPLC檢查，ODS為填充柱，乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)303nm，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，游離水楊酸不得超過(guò)0.1% ，2雙水楊酯中游離水楊酸：利用水楊酸與三價(jià)鐵生成有色配離子的原理, 用硝酸鐵溶液顯色, 在530nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度, 限度為0.5%; 雙水楊酯片同法檢查, 限度1.5% 3二氟尼柳：有關(guān)物質(zhì)A和B的檢查：自身對(duì)照法 a 有關(guān)物質(zhì)A的檢查—TLC(正相): 極性較小的雜質(zhì)-單1雜質(zhì)的限量為0.5%。b有關(guān)物質(zhì)B的檢查——HPLC(反相):極性較大的雜質(zhì)峰面積和不得大于對(duì)照溶液主峰面積0.5% 四、含量測(cè)定：基于游離羧基的酸性，和芳環(huán)紫外吸收特性，主要用酸堿滴定法，制劑的檢查性定量測(cè)定，如溶出度（釋放度）含量均勻度等，用紫外可見(jiàn)分光光度法，制劑含量測(cè)定用紫外可見(jiàn)分光光度法和高效液相色譜法。羧基：酸堿滴定、非水滴定，酯基：剩余酸堿滴定苯環(huán)：紫外分光光度法、HPLC。 1.酸堿滴定法：a非水溶液滴定法-吡羅昔康-吡啶環(huán)顯堿性, 可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定。b直接滴定法：（苯甲酸鈉）原料藥分析(采用中性乙醇防止阿司匹林水解)c水解后剩余量滴定法-阿司匹林-兩步滴定法：（阿司匹林片和腸溶片含量）第一步中和制劑中酸性物質(zhì)，消除干擾。二步水解與滴定，水解后剩余量滴定法。d剩余量滴定法-美洛昔康-水及與水混溶的有機(jī)溶劑中難溶,溶于氫氧化鈉滴定液后鹽酸回滴定，特點(diǎn)：簡(jiǎn)單，但專屬性差，易受阿司匹林的降解產(chǎn)物水楊酸及醋酸的干擾，故不適用于水楊酸含量較高的樣品測(cè)定 2.高效液相色譜法 ：流動(dòng)相中添加冰醋酸是為抑制阿司匹林的解離, 消除色譜峰拖尾; 同時(shí), 流動(dòng)相及供試液中的醋酸也可抑制阿司匹林的水解，增加溶液穩(wěn)定性。D為稀釋體積(ml,D=50100/5=1000);標(biāo)示量為栓劑規(guī)格(mg/支) 第六章 苯乙胺類擬腎上腺素藥物 代表藥物：腎上腺素 鹽酸克倫特羅 硫酸沙丁胺醇 鹽酸麻黃堿 間羥胺 鹽酸異丙腎上腺素 鹽酸多巴胺 硫酸特布他林 一、理化性質(zhì) 1，弱堿性：,烴胺基側(cè)鏈，仲胺氮－弱堿性，游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；其鹽可溶于水 2，酚羥基特性：鄰苯二酚（或苯酚）結(jié)構(gòu)，與金屬離子絡(luò)合呈色；在空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深；在堿性溶液中更易變色 3，光學(xué)活性：手性碳原子，具有旋光性, 4紫外吸收特性紫外、紅外吸收特性進(jìn)行定性、定量分析。 5苯環(huán)取代基特性：如鹽酸克倫特羅芳伯氨基； 二、鑒別反應(yīng) 1、與三氯化鐵的反應(yīng)(鄰苯二酚)：腎上腺素：+ 0.1mol/L鹽酸液→翠綠；+氨試液→紫紅色。鹽酸異丙腎上腺素：深綠色，+加新制5％NaHCO3→藍(lán)紫色，紅色。重酒石酸去甲腎上腺素：翠綠色，+5％NaHCO3→藍(lán)色，紅色。鹽酸去氧腎上腺素：紫色。 2、與甲醛－硫酸反應(yīng)：腎上腺素-紅色；鹽酸異丙腎上腺素-棕色，暗紫色 ；重酒石酸去甲腎上腺素-淡紅色；鹽酸去氧腎上腺素-玫瑰紅，橙紅，深棕紅。 3氧化反應(yīng)：臨酚羥基→[O]→醌類結(jié)；a腎上腺素→H2O2→血紅色→放置→棕色；b鹽酸異丙腎上腺素→I2 H+→淡紅色、c重酒石酸去甲腎上腺素在酸性條件下穩(wěn)定，幾乎不被氧化。 4，氨基醇—雙縮脲：苯環(huán)側(cè)鏈有氨基醇乙醚層水層 5，Rimini：脂肪伯胺，亞硝酸鐵氰化納，丙酮，NaHCO3 三、特殊雜質(zhì) 1．酮體檢查：酮體在310nm處有紫外吸收而藥物沒(méi)有。（腎上腺素 鹽酸異丙腎上腺素 重酒石酸去甲腎上腺素 鹽酸去氧腎上腺素 鹽酸甲氧明） 2. 光學(xué)純度檢查：大多數(shù)苯乙胺類擬腎上腺素藥物分子結(jié)構(gòu)中存在手性碳原子，通過(guò)比旋度測(cè)定控制藥物的質(zhì)量。 3有關(guān)物質(zhì)：去O N：TLC;其他：HPLC （鹽酸氨溴索-HPLC 鹽酸苯乙雙胍-紙色譜法 其他均為TLC） 四、含量測(cè)定 1原料藥：多用非水滴定，也用溴量法，亞硝酸鈉法和提取酸堿滴定法 2制劑：提取酸堿滴定法、UV、 比色、HPLC法 非水溶液滴定法：（原料藥：腎上腺素 鹽酸克倫特羅 硫酸沙丁胺醇 鹽酸麻黃堿 間羥胺 鹽酸異丙腎上腺素 鹽酸多巴胺 硫酸特布他林 重酒石酸去甲腎上腺素 鹽酸去氧腎上腺素 鹽酸甲氧明 鹽酸苯乙雙胍 鹽酸偽麻黃堿 鹽酸多巴酚丁胺）原理：在冰醋酸中堿性加強(qiáng)；冰醋酸為溶劑，滴定液：高氯酸；指示劑結(jié)晶紫（鹽酸甲氧明以萘酚苯甲醇指示終點(diǎn)）；加入醋酸汞冰醋酸消除氫鹵酸的干擾，終點(diǎn)判定：指示劑法、電位滴定法。非水溶劑種類：酸性-冰醋酸，堿性-二甲基甲酰胺，兩性-甲醇，惰性-甲苯，三氯甲烷，甲苯適用范圍：PKb>8有機(jī)弱堿性藥物及其鹽類，PKb8-13用本法，PKb8-10時(shí)冰醋酸作溶劑PKb10-12冰醋酸與醋酐>12醋酐。也可在冰醋酸中加入甲酸使滴定突躍增大 溴量法：（原料藥：鹽酸去氧腎上腺素 重酒石酸間羥胺）：分子中的苯酚結(jié)構(gòu)，在酸性溶液中酚羥基的鄰、對(duì)位活潑氫能與過(guò)量的溴定量的發(fā)生溴代反應(yīng)，再以碘量法測(cè)定剩余的溴，根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉滴定液的量，即可算供試品含量。 紫外分光光度法及比色法：（制劑）利用分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基與鐵離子絡(luò)合呈色，測(cè)定鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反應(yīng)呈色，測(cè)定鹽酸克倫特羅栓劑。 4，亞硝酸鈉法 5提取酸堿滴定法：游離出原藥 6，HPLC 小結(jié)： 作業(yè)：補(bǔ)充的練習(xí)題 5min 10min 20min 10min 10min 30min 5min 第八章 對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類 組織教學(xué) 1.掌握芳胺類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 2.掌握芳胺類藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定 復(fù)習(xí)舊課 引入新課 一、對(duì)氨基苯甲酸酯類：苯佐卡因，鹽酸普魯卡因，鹽酸氯普魯卡因胺，鹽酸丁卡因等局麻藥酰苯胺類：（水解后顯芳伯胺特性）鹽酸利多卡因，鹽酸布比卡因，鹽酸羅哌卡因，對(duì)乙酰氨基酚，醋氨苯砜 （一）理化性質(zhì):芳伯胺基（除鹽酸丁卡因外，仲胺基）特性：顯重氮化偶合反應(yīng)。 1.芳伯氨基：重氮化－偶合反應(yīng)；用NaNO2滴定可測(cè)含量，與芳醛縮合成Schiff堿；易氧化變色等。 2.水解：因分子中有酯鍵，故易水解.水解反應(yīng)速度快慢受光、熱或堿性條件影響；鹽酸丁卡因→BABA，其余藥物→PABA 3.弱堿性：叔胺氮原子，生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)，非水溶劑滴定 4.溶解性：游離堿，油狀液體或低熔點(diǎn)固體難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；鹽酸鹽白色結(jié)晶粉末，具一點(diǎn)的熔點(diǎn)，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑 5，重金屬離子反應(yīng)酰胺基上的N可在水溶液中與銅離子或鈷離子絡(luò)合，形成有色配位化合物沉淀，溶于氯仿呈色 6，吸收光譜特性：苯環(huán)及相應(yīng)取代基于脂烴胺側(cè)鏈，有UV,IR行為。 （二）鑒別反應(yīng) 1、重氮化-偶合反應(yīng)Ar-NH2 --Hcl、/NaNO2→重氮鹽—OH—和β-萘酚→橙黃-猩紅色沉淀. a直接法(苯佐卡因、鹽酸普魯卡因) 橙黃-猩紅色沉淀。 b間接法(鹽酸丁卡因無(wú)芳伯胺基酸性條件乳白色沉淀)紅色. 2、三氯化鐵反應(yīng)（對(duì)乙酰氨基酚）：具酚羥基的芳胺類藥物+FeCl3→藍(lán)紫色配合物 3、與重金屬離子的反應(yīng) a鹽酸利多卡因的鑒別(具有芳酰胺結(jié)構(gòu)):硫酸銅/碳酸鈉試液→藍(lán)紫色配合物→顯黃色(溶于氯仿)///氯化鈷/酸性溶液→亮綠色細(xì)小鈷鹽沉淀↓ b.鹽酸普魯卡因胺的鑒別(具有芳酰胺結(jié)構(gòu)):濃過(guò)氧化氫/加熱至沸→羥肟酸 三氯化鐵→羥肟酸鐵變紫紅色，隨即變?yōu)榘底厣磷睾谏? c.與汞離子反應(yīng)：芳酰胺類，如鹽酸利多卡因 ，硝酸汞/硝酸→煮沸變黃色；對(duì)氨基苯甲酸酯類，如苯佐卡因：硝酸汞/硝酸→煮沸變紅色或橙黃色. 4、水解產(chǎn)物反應(yīng)： a.鹽酸普魯卡因(的鑒別)＋10％氫氧化鈉溶液→白色↓(普魯卡因)加熱變?yōu)橛蜖钗?；繼續(xù)加熱→ 蒸氣(二乙氨基乙醇)↑能使?jié)櫇竦募t色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；加熱至油狀物消失→放冷、加鹽酸酸化→白色↓(對(duì)氨基苯甲酸)能溶于過(guò)量的鹽酸. b.苯佐卡因(鑒別)＋氫氧化鈉試液5ml 煮沸→乙醇，加入碘試液/加熱→ 黃色↓并發(fā)生碘仿臭氣. 5、制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)： a.鹽酸利多卡因/鹽酸布比卡因 三硝基苯酚→ (濾過(guò)，用水洗滌沉淀后105℃干燥)三硝基苯酚利多卡因(mp. 228~232℃)/ (80℃干燥)三硝基苯酚布比卡因(mp. 194℃). b.鹽酸丁卡因 25％硫氰酸銨溶液/5％醋酸溶液→ 白色晶體，洗滌80℃干燥后得丁卡因硫氰酸鹽( mp. 131℃ )。 （三）特殊雜質(zhì) 1鹽酸普魯卡因(對(duì)氨基苯甲酸)： a雜質(zhì)來(lái)源：水解產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 。結(jié)果導(dǎo)致注射液變黃、療效下降、毒性增加。原料藥及注射用滅菌粉末中雜質(zhì)限量 ：0.5%。注射液中雜質(zhì)限量： 1.2% b檢查： （1）HPLC雜質(zhì)對(duì)照品法。固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(68∶32)；檢測(cè)波長(zhǎng)：279；系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：理論板數(shù)按對(duì)氨基苯甲酸峰計(jì)算不低于2000；鹽酸普魯卡因峰和對(duì)氨基苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于2.0 ；外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。 （2）TLC法：硅膠H板，苯-HAc二甲氨基苯甲醛顯色3有關(guān)物質(zhì)和光解物檢查：4-氨基-2-氯苯甲酸降解 2，對(duì)乙酰氨基酚：1）乙醇溶液的澄清度與顏色2）有關(guān)物質(zhì)：TLC，雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色，個(gè)數(shù)3 ）對(duì)氨基酚 與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)顯藍(lán)色，不得更深 含量測(cè)定1亞硝酸鈉滴定法：原理：芳伯氨基藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量反應(yīng)，生成重氮鹽，用永停法電位法或內(nèi)指示劑法外指示劑法（KI-淀粉） 指示反應(yīng)終點(diǎn)。 條件： A.加入適量溴化鉀加快反應(yīng)速度，增加NO+濃度 B.加入適量鹽酸加快反應(yīng)速度 C.反應(yīng)溫度越高反應(yīng)越快，但溫度高時(shí)重氮鹽分解加快，HNO2也會(huì)揮發(fā) D.滴定速度不宜太快，滴定管尖端插入液面下滴定。 示例8-5 鹽酸普魯卡因的含量測(cè)定： 取本品約0.6g，精密稱定，照永停滴定法，在15?25℃，用亞硝酸鈉滴定液滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于27.28mg的C13H20N2O2?HCl。永停滴定法：鉑－鉑電極系統(tǒng)。用亞硝酸鈉液滴定，終點(diǎn)前，溶液中無(wú)亞硝酸，線路無(wú)電流，電流計(jì)指針零。終點(diǎn)時(shí)溶液中有微量亞硝酸存在，電極即起氧化還原反應(yīng)，線路中有電流通過(guò)，此時(shí)電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，不再回復(fù)，即為終點(diǎn)。 2非水滴定法(鹽酸丁卡因、鹽酸利多卡因、鹽酸妥卡因：三者結(jié)晶紫顯色藍(lán)綠 鹽酸布比卡因：萘酚苯甲醇顯色綠色)滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氫鹵酸的干擾 a非水滴定法中常見(jiàn)酸根的影響及其消除方法 氫鹵酸根：算性強(qiáng)，無(wú)法完全滴定，消除方法：加入氯化汞的冰醋酸溶液。硝酸根：滴定產(chǎn)生硝酸，會(huì)氧化顯色劑影響顯色劑顯色，消除方法：改用電位法滴定。 b比較直接滴定法和兩部滴定法測(cè)定阿司匹林含量?jī)?yōu)缺點(diǎn)：直接滴定法：阿司匹林中性乙醇溶解后其中的羧基和氫氧化鈉反應(yīng)，酚酞指示終點(diǎn)?？焖俸?jiǎn)便，不能排除水楊酸干擾。兩部滴定法：先中和酸性雜質(zhì)和羧酸，然后定量加入過(guò)量的氫氧化鈉，定量與酯鍵反應(yīng)，剩余的用酸滴定至終點(diǎn)即可，可消除水楊酸干擾，但操作較麻煩。 第九章 二氫吡啶類藥物 一、二氫吡啶類理化性質(zhì)： 1二氫吡啶環(huán)的還原性， 2硝基的氧化性， 3二氫吡啶環(huán)氨基質(zhì)子解離性， 4穩(wěn)定性，光化學(xué)反應(yīng) 5旋光性， 6吸收光譜特性 二、鑒別反應(yīng)： 1亞鐵鹽反應(yīng)：硝基氧化性→紅棕色氫氧化鐵沉淀 2氫氧化鈉試液：藥物丙酮溶液→橙紅色 （鑒別硝苯地平、尼群地平、尼索地平） 3沉淀反應(yīng)：與金屬鹽形成沉淀HgCl白色 碘化鉍甲 橙紅色 4重氮化偶合反應(yīng)：苯環(huán)硝基在酸性下被鋅粉還原為芳伯氨基，可用重氮化偶合反應(yīng)鑒別 5分光光度法：紫外紅外有關(guān)物質(zhì)檢查：分子內(nèi)部因發(fā)生光化學(xué)歧化作用，降解為硝苯吡啶衍生物及亞硝苯吡啶衍生物，大多采用HPLC法，亦分為對(duì)照品法和自身對(duì)照法. 三含量測(cè)定;鈰量法：利用還原性，以Ce(SO4)2為標(biāo)準(zhǔn)溶液的滴定法，Ce4+變?yōu)镃e3+。鄰二氮菲為指示液，強(qiáng)酸條件，橙紅色消失 小結(jié)： 作業(yè)：額外布置的作業(yè) 5min 15min 10min 10min 20min 25min 5min 第十章 巴比妥及苯并二氮雜坐類鎮(zhèn)靜催眠 組織教學(xué) 1.掌握巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 2.掌握丙二酰脲鑒別、鈉鹽鑒別、取代基鑒別 3.掌握銀量法測(cè)定含量 復(fù)習(xí)舊課 引入新課 第一節(jié) 巴比妥類藥物分析 一、主要性質(zhì)：環(huán)狀酰胺類鎮(zhèn)靜催眠藥 1.基本母核：丙二酰脲基團(tuán)—決定共性. 2.取代基—決定個(gè)性.性質(zhì)：酮式—烯醇式互變 .①弱酸性，可用于該類藥物的分離，鑒別，檢查和含量測(cè)定 ②與金屬離子反應(yīng)：專屬性不強(qiáng)，用于鑒別和含量測(cè)定. A與銀鹽反應(yīng)：在Na2CO3溶液中，最初生成白色沉淀，振搖后可溶解，之后生成白色沉淀，不再溶解. B與銅鹽反應(yīng)：在吡啶溶液中生成烯醇式異構(gòu)體，并與銅形成穩(wěn)定的配合物，巴比妥類呈紫色，含硫巴比妥呈綠色. C與汞鹽呈白色沉淀(氨試液中溶解) D、與鈷鹽反應(yīng)：無(wú)水條件下與鈷鹽在堿性溶液中生成紫堇色配合物.E與香草醛反應(yīng)：丙二酰脲中的氨與香草醛在弄硫酸存在下縮合，生成棕紅色產(chǎn)物. 二、特殊雜質(zhì)檢查——苯巴比妥. ①酸度檢查，甲基橙不得顯紅色（控制苯基丙二酰脲）. ②乙醇溶液澄清. ③中性或堿性物質(zhì)檢查（2-苯基丁酰脲、2-苯基丁酰胺不溶于氫氧化鈉但溶于乙醚），提取重量法測(cè)雜質(zhì)含量. 三、苯巴比妥含量測(cè)定：銀量法、溴量法、酸堿滴定法、UV法、HPLC、GC、提取重量法. 1.銀量法：以硝酸銀為滴定液，以沉淀反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析. ①此法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，巴比妥類藥物的分解產(chǎn)物或其他一些可能存在的雜質(zhì)不與硝酸銀反應(yīng). ②采用甲醇及3%無(wú)水碳酸鈉溶劑系統(tǒng)，采用Ag-玻璃電極系統(tǒng)電位法指示終點(diǎn). ③每毫升硝酸銀滴定液相當(dāng)于22.63mg異戊巴比妥. 2.溴量法： ①凡在5取代位基團(tuán)中含有不飽和雙鍵的巴比妥藥物，其雙鍵可以與溴定量發(fā)生加成反應(yīng). ②采用過(guò)量定量溴反應(yīng)，再用KI滴定剩余溴生成碘，再用硫代硫酸鈉滴定， ③操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，針對(duì)結(jié)構(gòu)中雙鍵特征，可與其他巴比妥類藥物區(qū)別 第二節(jié) 苯并二氮卓類藥物 一、化學(xué)性質(zhì): ①具弱堿性，故可用非水滴定法進(jìn)行滴定; ②水解性在強(qiáng)酸性溶液中本類藥物可水解-二苯甲酮衍生物。 二、化學(xué)鑒別方法 ①沉淀反應(yīng)：可與生物堿沉淀劑（碘化鉍甲）作用生成橙紅色沉淀（氯氮卓） ②硫酸熒光反應(yīng)：本類藥物溶于硫酸之后，在356nm下顯不同色熒光：地西泮黃綠、氯氮卓黃色. 特征基團(tuán)反應(yīng) ①氯化物鑒別（地西泮）氧瓶燃燒法 ②芳伯胺反應(yīng)即重氮化-偶合反應(yīng)（鑒別奧沙西泮、艾司唑侖）色譜法（TLC） 三、特殊雜志檢查 1、氯氮卓（TLC、HPLC） 2、三唑侖（GC） 四、含量測(cè)定 1、非水溶液滴定法（堿量法、酸量法） 2、紫外 3、HPLC（RP） 第十一章 吩噻嗪類藥物 一、主要理化性質(zhì)： 1、紫外吸收光譜特征：硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)偽介系統(tǒng)，一般在紫外已有3個(gè)吸收峰，205nm，254nm，300nm，最強(qiáng)峰在254nm附近. 2、紅外吸收光譜特征：由于R,R’不同，具有不同的IR光譜，明顯指紋差異. 3、與金屬離子配合顯色：二價(jià)硫可與鈀離子形成有色配位化合物，而氧化的砜與亞砜無(wú)此反應(yīng)，專屬性強(qiáng). 4、氧化顯色：二價(jià)硫易被氧化.櫻紅->紅色(鑒別). 二、鑒別試驗(yàn)： ①化學(xué)法： 1、與生物堿沉淀劑 2、氧化顯色（用于鑒定） 3、與鈀離子配合呈色反應(yīng)（鑒別不受亞砜和砜干擾） 4、與含鹵素取代基反應(yīng)（1、焰色反應(yīng) 奮乃靜（氯元素—綠色）2、顯色反應(yīng)（F有機(jī)破壞，酸性條件與茜素鋯—黃色） 5、Cl化物鑒別（⑴硝酸銀沉淀 ⑵MnO2氧化還原） ②光譜法：Uv（205nm、254nm，300nm最大吸收，避光操作），IR（主要方法） ③色譜法： 1、TLC（加堿液減輕拖尾） 2、HPLC (鹽酸氟奮乃靜) ④其他方法：熔點(diǎn)測(cè)定 三、含量測(cè)定： 1、酸堿滴定（非水溶液、乙醇-水溶液中氫氧化鈉滴定） 2、分光光度法（直接、提取后/雙波長(zhǎng)、二階導(dǎo)數(shù)、鈀離子比色法） 3、HPLC（RP、離子對(duì)） 4、LC-MS 小結(jié)： 作業(yè)：補(bǔ)充的作業(yè) 5min 30min 25min 25min 5min 第十四章 抗生素類藥物的分析 組織教學(xué) 1.掌握β-內(nèi)酰胺類藥物的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定 2.熟悉抗生素類藥物的質(zhì)量分析方法 3.熟悉氨基糖苷類藥物的鑒別和含量測(cè)定 復(fù)習(xí)舊課 引入新課 第一節(jié) 概 述 一、抗生素：在低微濃度下即可對(duì)某些生物的生命活動(dòng)有特定抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱. 二、特點(diǎn)（與化學(xué)藥相比）： ①化學(xué)純度低 ②活性組分易發(fā)生變異 ③穩(wěn)定性差. 第二節(jié) β-內(nèi)酰胺類： 一、基本結(jié)構(gòu) 青霉素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻唑環(huán)， 頭孢菌素：β-內(nèi)酰胺環(huán)和氫化噻嗪環(huán) 1.性質(zhì)： ①酸性：大多數(shù)青霉素能與無(wú)機(jī)堿或某些無(wú)機(jī)堿成鹽 ②旋光性 ③紫外吸收：具苯環(huán)取代基的青霉素類(側(cè)鏈取代基有共軛系統(tǒng))，頭孢菌素類(母核有共軛結(jié)構(gòu)) ④β-內(nèi)酰胺類的不穩(wěn)定性：β-內(nèi)酰胺環(huán)是最不穩(wěn)定的地方，如與酸、堿、青霉素酶、羥胺及某些金屬離子（銅、鉛、汞和銀）等作用時(shí)，易發(fā)生水解和分子重排，導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺環(huán)的破壞而失去活性。干燥條件穩(wěn)定，溶液很不穩(wěn)定，但青霉素水溶液在PH6~6.8時(shí)較為穩(wěn)定. 二、鑒別試驗(yàn)： ①色譜法（HPLC、TLC） ②光譜法（IR、UV：水解產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)鑒定法） ③呈色反應(yīng)(i)羥肟酸鐵反應(yīng)(ii)雙縮脲反應(yīng)(iii)茚三酮反應(yīng).ⅳ各種鹽的反應(yīng)，鉀鈉離子火焰反應(yīng) 三、特殊雜質(zhì)的檢查： 1.HPLC法 ①聚合物(為致敏物質(zhì)，嚴(yán)重可影響用藥安全性) (i)方法：分子排阻色譜法，離子交換色譜法，反響高效液相色譜法 (ii)來(lái)源：內(nèi)來(lái)源：藥物自身聚合物—生產(chǎn)貯存過(guò)程中，或使用不當(dāng)產(chǎn)生.外來(lái)源：蛋白多肽多糖及其與藥物的結(jié)合物—發(fā)酵中純化不當(dāng). (iii)定量方法： ①自身對(duì)照外標(biāo)法.凝膠對(duì)藥物的吸附作用大于對(duì)高分子雜質(zhì)的吸附作用，高分子雜質(zhì)先流出，一般用于Sephadex G-10凝膠色譜系統(tǒng)中高分子雜質(zhì)的檢查。 ②主成分自身對(duì)照法，一般用于高分子雜質(zhì)含量較低的品種。③面積歸一化法 ④限量法，規(guī)定不得檢出保留時(shí)間小于對(duì)照品保留時(shí)間的組分，一般用于混合物中高分子物質(zhì)的控制。 ②有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體：(i)有關(guān)物質(zhì)—多為降解產(chǎn)物，中間體，影用藥安全性(ii)異構(gòu)體—低效.無(wú)效異構(gòu)體影響效價(jià). 四、含量測(cè)定： 1.HPLC法：應(yīng)用越來(lái)越廣泛，是分離分析法，專屬性強(qiáng). 2.酸堿滴定法（苯唑西林鈉） 3.紫外-可見(jiàn)分光光度法 4.碘量法（芐星青霉素）青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，其降解產(chǎn)物消耗碘。反應(yīng)兩步進(jìn)行：一是按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行；二是青霉噻唑烷酸在酸性條件下被碘氧化的反應(yīng)受溫度、pH、時(shí)間等諸多因素影響，故耗碘量沒(méi)有固定的量關(guān)系。因此試驗(yàn)過(guò)程中要嚴(yán)格控制溫度，同時(shí)采用與青霉素標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測(cè)定，則可抵消上述可變因素的影響。碘與青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，溫度在24～26℃為最好。1摩爾青霉素能吸收8摩爾的碘,故本法的靈敏度較高。 5.汞量法（青霉素鈉、青霉素鉀）青霉素分子不與汞鹽反應(yīng)，而其堿性水解產(chǎn)物青霉噻唑酸及繼續(xù)水解生成的青霉胺都能與汞鹽定量反應(yīng)，根據(jù)消耗的汞鹽量可以計(jì)算青霉素的含量。 第二節(jié) 氨基糖苷類 一、化學(xué)結(jié)構(gòu)：以堿性環(huán)己多元醇為苷元，與氨基糖縮合而成的苷. 二、性質(zhì)： ①溶解度及堿性：水溶解性良好 ②具有旋光性 ③苷的水解與穩(wěn)定性，強(qiáng)酸，強(qiáng)堿均可使其溶解 ④UV,鏈霉素在230nm處有紫外吸收. 三、鑒別試驗(yàn) ①茚三酮反應(yīng)：生成藍(lán)紫色縮合物 ②N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)：生成櫻紅色 ③麥芽酚反應(yīng)：紫紅色 ④坂口反應(yīng)生成橙紅色化合物 ⑤硫酸鹽反應(yīng) .⑥Molisch試驗(yàn)-藍(lán)色 ⑦色譜法：TLC、HPLC ⑧光譜法：IR、UV組分測(cè)定用HPLC法測(cè)定慶大霉素C各組分含量，其無(wú)紫外吸收，故需進(jìn)行衍生化處理，采用歸一化法測(cè)定慶大霉素含量，用峰高歸一化法計(jì)算。 四、含量測(cè)定微生物檢定法和HPLC法 第三節(jié) 四環(huán)素 一、性質(zhì)： 1)為兩性化合物，臨床多用鹽酸鹽 2)具有旋光性 3)存在共軛體系，有紫外吸收 4)穩(wěn)定性：①差向異構(gòu)化性質(zhì)：四環(huán)素類抗生素在弱酸性（Ph2.0-6.0）中發(fā)生差向異構(gòu)化，四環(huán)素、金霉素產(chǎn)生差向四環(huán)素ETC和差向金霉素（具藍(lán)色熒光）；土霉素、多西霉素、美他環(huán)素不發(fā)生。四環(huán)素在堿性產(chǎn)生異四環(huán)素。②四環(huán)素降解 酸性降解：在酸性條件下（PH＜2）四環(huán)素、金霉素生成脫水四環(huán)素ATC和脫水金霉素。堿性降解：在堿性溶液中，生成無(wú)活性的具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的異構(gòu)體。 二、鑒別實(shí)驗(yàn) 1、HPLC 2、TLC，用硅藻土作載體，為了獲得較好的分離，在黏合劑中加有甘油以及中性的EDTA緩沖液，EDTA可克服因痕量金屬離子存在而引起的斑點(diǎn)拖尾現(xiàn)象。 3、IR 4、UV 5、顯色法：a濃硫酸反應(yīng)；b FeCl3反應(yīng). 第十八章制劑分析概論 一、藥物制劑分析的特點(diǎn) 1)比原料藥物分析復(fù)雜 2)測(cè)定項(xiàng)目和要求不同：若原料中的檢查項(xiàng)目在制劑生產(chǎn).貯藏和使用過(guò)程中不再產(chǎn)生，則不在制劑中檢查 3)雜質(zhì)限量要求不同 4)分析方法的要求不同鑒別試驗(yàn)從化學(xué)法、光譜法、色譜法及其他方法中選用2~4種不同原理組成一組鑒別試驗(yàn)。 二、片劑的常規(guī)檢查項(xiàng)目 1)重量差異：按規(guī)定稱量方法測(cè)得片劑每片的重量與平均片重之間的差異程度 2)含量均勻度 對(duì)小劑量口服固體制劑、粉霧劑或注射用無(wú)菌粉針劑 每片含量偏離標(biāo)志量的程度 取10片 3)崩解時(shí)限：固體制劑在規(guī)定介質(zhì)中，以規(guī)定的方法進(jìn)行檢查，崩解溶散并通過(guò)篩網(wǎng)所需時(shí)間的限度→6片 4)溶出度的檢查(針對(duì)難溶性藥物)：籃法、槳法、小杯法，藥物從片劑等固體制劑在規(guī)定溶劑中溶出的速率和程度→6份， 5)釋放度測(cè)定：第一法-緩控釋制劑，第二法-腸溶制劑。 三、注射劑的檢查項(xiàng)目： 1)裝量：必須保證注射液注射用量不少于標(biāo)志量；內(nèi)容物吸盡；注入經(jīng)標(biāo)化的量入式量筒內(nèi) 2)滲透壓摩爾濃度， 3)可見(jiàn)異物-第一法燈檢法，第二法光散射法， 4)無(wú)菌檢查：陰性、陽(yáng)性對(duì)照 5)熱原：家兔法 6）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查：凝膠法、光度測(cè)定法 7)不溶性微粒-第一法光阻法，第二法顯微計(jì)數(shù)法. 四、制劑中常見(jiàn)干擾及排除： 片劑 1)糖類：會(huì)干擾氧化還原滴定，可采用弱氧化劑硫酸鈰代替高錳酸鉀 2)硬脂酸鎂：Mg2+會(huì)干擾配位滴定法，硬脂酸根離子可干擾非水滴定法：a加掩蔽劑掩蔽Mg2+b若主藥含量大，硬脂酸鎂含量小，可不考慮對(duì)非水滴定的影響c脂溶性藥先有機(jī)溶劑提取 小結(jié)： 作業(yè)：補(bǔ)充的練習(xí)題 5min 10min 25min 20min 10min 15min 5min .