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1、第四章,滅菌法,,青島科技大學優(yōu)秀課程教案,,1.各種濕熱滅菌法及其安全操作； 2.F0的意義,本章重點：,本章要求：,1.掌握濕熱滅菌法及其安全操作； 2.掌握無菌操作要點； 3.熟悉干熱滅菌、紫外滅菌、過濾滅菌以及化學滅菌法； 4.了解輻射滅菌及微波滅菌。,第四章 滅菌法,第四章 滅菌法,第四章 滅菌法,目錄：,第一節(jié) F與Fo值在滅菌中的意義與應用,,第二節(jié) 物理滅菌法,第三節(jié) 化學滅菌法,第四節(jié) 無菌操作法,第一節(jié) F與Fo值在滅菌中的意義與應用,滅菌法指殺死或除去所有微生物的方法。,第四章 滅菌法,微生物,細菌 真菌 病毒 芽胞,細菌的芽胞具有較強的抗熱力，不易殺死，藥劑中滅菌效果以
2、殺死芽胞為標準。,對滅菌方法的可靠性進行驗證用F(或F。)值作為驗證滅菌可靠性的參數。,第四章 滅菌法,第四章 滅菌法,對滅菌過程和無菌檢驗中存在局限性的問題,滅菌溫度測量多系滅菌器內的溫度而不是滅菌物體內的溫度,,一、微生物致死時間曲線與D值,微生物死亡速度屬一級過程，在一定溫度下符合下述方程式：,lg Nt=lg N0-Kt/2.303,第四章 滅菌法,第四章 滅菌法,Nt=N0e-Kt,N0為原始的微生物數，Nt為t時殘存的微生物數,,D = t = 2.303/k (LogN-LogNt) =2.303/k Log100Logl0 = 2.303/K,第四章 滅菌法,第四章 滅菌法,D
3、值：,在一定溫度下殺死被滅菌物品中微生物數90所需的時間.,即：,因此，D也可定義為降低微生物一個 對數值所需的時間，如圖所示。,不同滅菌方法不同微生物的D值,第四章 滅菌法,蒸汽滅菌 蒸汽滅菌 蒸汽滅菌 蒸汽滅菌 干熱滅菌 紅外線滅菌,滅菌方法,微生物,溫度（）,介質或樣品,D值（min）,,嗜熱脂肪芽胞桿菌 嗜熱脂肪芽胞桿菌 嗜熱脂肪芽胞桿菌 產芽胞梭狀芽胞桿菌 枯草芽胞桿菌 枯草芽胞桿菌,105 121 121 105 135 160,5%葡萄糖水溶液 5%葡萄糖水溶液 注射用水 5%葡萄糖水溶液 紙 玻璃板,87.8 2.4 3.0 1.3 16.6 18秒,,,,二值,斜率K=log
4、D2-logD1/(T2-T1) (T1 - T2) / logD2-logD1,第四章 滅菌法,z值：為降低一個LogD值所需的溫度數。,LogD溫度圖,在一定溫度范圍內，LogD與T呈直線關系,即z值是降低微生物數90所需要的溫度數。,,,下表是一些藥物溶液的z值。,第四章 滅菌法,,,,不用溶液以濕熱芽胞桿菌測定的Z值,溶液,Z值,,5%葡萄糖水溶液 注射用水 5%葡萄糖乳酸鹽溶液 pH7磷酸緩沖液,10.3 8.4 11.3 7.6,三、F值與F0值,T0是參比溫度(reference temperature) At是測量被滅菌物溫度的時間間隔，一般為0.5-1.0min T 是每個A
5、t測量被滅菌物的溫度.,,第四章 滅菌法,1.F值：,1.F為在一定溫度(T)，給定z值所產生的滅菌效力與參比溫度(T0) 給定z值所產生的滅菌效果相同時所相當的時間(equivalent time)。,以分為單位，F(xiàn)值的數學表達式如下：,F=t10,(二)Fo值。,對于濕熱滅菌，參比溫度規(guī)定為12l，并假沒特別耐濕熱的微生物指示劑(嗜熱脂肪芽胞桿菌)的z值為l0，則,,第四章 滅菌法,F=t10（T121）/10,F。值為一定滅菌溫度(T)z值為10所產生的滅菌效果與121z值10所產生的滅菌效力相同時所相當的時間(分)。,F0是將各種滅菌溫度使微生物的致死 效力轉換為滅菌物品完全暴露于12
6、1 使微生物的致死效力。,F。還可認為是以相當于12l 熱力滅菌時殺死容器中全部微 生物所需要的時間,,F。值的意義：,第四章 滅菌法,不受包裝材料的影響,第二節(jié) 物理滅菌法,繁殖型細菌： 100以上 1h,第四章 滅菌法,一干熱滅菌法,USB：輸液瓶250,耐熱性細菌芽胞：,大腸桿菌內毒素:,120不死亡，140前后則殺菌效率急劇增長,250時F值為750分， 210時F值為1950分。,缺點:穿透力死，溫度不易均勻， 滅菌溫度過高不適用于橡膠、 塑料及大部分藥品,SDA？,GMH系列對開門干熱滅菌烘箱,以電能為熱源（干熱），可長期在250溫度下滅菌，為消除熱源提供了可靠的保證。 工作溫度由
7、程序設計或（根據要求）采用PLC電腦控制，對內部溫度可自動記錄。 出風口裝有高效空氣過濾器，防止了外界對內部的污染。 內部裝有高溫高效過濾器，內部循環(huán)熱風經高溫高效空氣過濾器過濾，保證了進入有效空間的熱風達到100級潔凈要求。,二濕熱滅菌法,（一） 熱壓滅菌法 （二）流通蒸氣滅菌和煮沸滅菌法 (三)低溫間歇滅菌法 (四)影響濕熱滅菌的因素 1微生物的種類和數量 2注射液的性質 3藥物的穩(wěn)定性,第四章 滅菌法,,CG系列純蒸汽滅菌柜,第四章 滅菌法,KJG系列快速冷卻滅菌柜,SYG系列水浴式滅菌柜,AJG系列安瓿檢漏滅菌柜,,三、紫外線滅菌法 特點：表面,第四章 滅菌法,四過濾除菌法
8、 微孔薄膜作滅菌濾器，孔徑0.22um濾膜。 材料：聚四氟乙烯,五、輻射滅菌法 射線殺菌。射線由放射性同位素C060產生。,射線適用于較厚樣品的滅菌，維生素類、抗菌素、 激素、肝素、羊腸線、醫(yī)療器械等物質的滅菌。,六、微波滅菌法、高速熱風滅菌法,第三節(jié) 化學滅菌法,一、氣體滅菌法 1.環(huán)氧乙烷(Ethylene 0 xide),第四章 滅菌法,性質：室溫下無色，沸點10.8， 沸點以下為無色透明液體， 1ml水中可溶195ml(20 ，760mmHg) 環(huán)氧乙烷，有較強的擴散和穿透能力，作用快。,環(huán)氧乙烷滅菌箱,1滅菌機理,環(huán)氧乙烷屬烷化劑,,第四章 滅菌法,CH2-CH2 + R-SH,
9、,R-S-(CH2CH2OH),,,O,細菌蛋白質分子 酶 核酸,氨基 羥基 羧基 巰基,,與環(huán)氧乙烷結合,,2.應用范圍,第四章 滅菌法,熱敏感的固體藥物,塑料容器、 塑料管道、 聚乙烯、 聚氯乙烯薄膜包裝的藥物；,紙、橡膠制品、注射器、衣服、敷料、皮革制品,對細菌(包括結核桿菌)芽胞、 真菌、立克次氏體和病毒等 各種微生物均有殺滅作用， 屬于廣譜殺菌劑。,3環(huán)氧乙烷滅菌應用注意事項,,第四章 滅菌法,(2)環(huán)氧乙烷對塑料、橡膠紙板穿透力強，親和力也強， 故滅菌完畢后需通空氣12-24小時驅除。,(1)環(huán)氧乙烷具可燃性，當與空氣混合、空氣含量達3.0(vv)時即可爆炸,方案,,應用時需用CO
10、2或鹵代烴(氟利昂、溴烷等)稀釋,環(huán)氧乙烷l0，加CO2 90; 環(huán)氧乙烷10-12，氟利昂88-90等,第四章 滅菌法,材料對環(huán)氧乙烷的吸收情況,,,,材料 吸收的量,材料 吸收的量,PE（聚乙烯） 2 PVC(聚氯乙烯） 19.2 紙板 10.4,,棉花 4.1 羊毛 4.1 丁腈橡膠 15.2,,4影響環(huán)氧乙烷滅菌效果的因素,(1)濃度：,第四章 滅菌法,(2)溫度：55。,850-900mg/L，滅菌時間3h， 濃度為450mg/L，滅菌時間5h。,(3) 壓力:,5環(huán)氧乙烷滅茵的操作程序,HO-CH2-CH2-OH,第四章 滅菌法,滅菌器內密閉、
11、抽空，通入混合氣， 保持一定濃度、溫度及相對濕度,滅菌結束后的殘余環(huán)氧乙烷通入水內，使成乙二醇排放,,CH2-CH2+H20,,,,O,,第四章 滅菌法,6毒性,表現(xiàn)為惡心、嘔吐、意識模糊等癥狀，并損害皮膚及眼粘膜，可產生水泡或結膜炎。 應用時要注意滅菌成品作殘余量檢查。,第四章 滅菌法,環(huán)氧乙烷對中樞神經系統(tǒng)有麻醉作用， 與大劑量環(huán)氧乙烷接觸可發(fā)生急性中毒,(二)甲醛(Formaldehyde),甲醛滅菌力強，使菌體蛋白質產生不可逆變性，為廣譜殺菌劑，廣泛用于無菌操作室的滅菌。 甲醛溶液加熱熏蒸，每M3空間用40甲醛溶液30ml。 甲醛對粘膜有強烈的刺激性，滅菌后剩余的甲醛氣體可排除。,第四
12、章 滅菌法,(三)其它,丙二醇： 具有不揮發(fā)性和無引火性等特點，室內空氣滅菌，殺菌力雖不及甲醛，但對人無害。 三甘醇： 無色粘稠濃體，沸點285，溶于水，使用方法與丙二醇同。對粘膜、眼部無刺激性，對金屬制品、醫(yī)療器械均無影響。,第四章 滅菌法,二化學殺菌劑的應用(液體等）,0.1-0.2%新潔爾滅溶液， 2左右的酚或煤酚皂溶液， 75酒精等。,第四章 滅菌法,特點：不能殺死芽胞，僅對繁殖體有效。,用于物體表面 濃度不宜過高。,注意：,常用：,臭氧滅菌箱,第四節(jié) 無菌操作法,1967年WHO制訂GMP對藥品生產環(huán)境提出了要求； 七十年代開始空氣潔凈技術成為各國GMP中的內容之一。,第四章 滅菌法
13、,一、空氣潔凈技術,創(chuàng)造潔凈的空氣環(huán)境(潔凈空氣室、、潔凈工作臺)， 以保證產品純度，提高成品率,二、空氣潔凈技術中常用的術語,潔凈度：是指潔凈空氣環(huán)境中空氣含塵量的多少的程度。,第四章 滅菌法,檢徑：是指塵粒由某種測定方法測出的長度尺寸， 不含有具體的幾何形狀，單位用微米（um)表示。,含塵濃度：含塵濃度是指單位體積空氣中所含浮游塵粒的數量， 以粒/L或mg/m2表示。,全面凈化和局部凈化： 潔凈區(qū)，控制區(qū)等。 (一)潔凈室標準: 目前國際上對潔凈室尚無統(tǒng)一的標準。 (二)潔凈室含塵濃度的測定 1塵埃粒子計數器測定法 能測出最小粒徑為0.3um,第四章 滅菌法,,2.濾膜顯微鏡計數法
14、: 將空氣中的塵埃收集在薄膜過濾器上，用光學顯微鏡計算出塵埃數。,第四章 滅菌法,131型：白底黑格膜和無網格膜，帶3mm寬度粉紅色的疏水邊緣,特點：可直接觀察到塵埃的形狀、大小、 色澤等物理性質， 為極寶貴的資料，其它方法達不到。,缺點：取樣計數過程復雜，時間長， 對潔凈度要求高，操作人員須經過 專門訓練。,硝酸纖維素網格濾膜,白底黑格膜(114型)、灰底白格膜(130型)、,,,各國潔凈室標準 美國聯(lián)邦標準（ USA Federal Standard ） 209E （ 1992 年） GGMP(1989)FRANCE AFNOR(1981) GERMANY VDI 2083(1990) J
15、APAN,,第四章 滅菌法,,,,,,,五、潔凈室設計,分級：塵粒個數/體積： (美） 0.5um 5um 活微生物數/m3 l0萬級 3.5萬 個/ L l0萬級 3500個/ L 20個/ L 500 l萬級 350個/ L 2個/ L 100 100級 3.5個/ L 0 5 (一)生產工藝要求 生產車間根據工藝流程和生產要求進行合理分區(qū)，對每個“區(qū)域”要確定不同的控制級別，從而對土建工程的要求、管道、設備的布置、溫度、濕度、照明、震動條件等再進行設計。,第四章 滅菌法,一般生產區(qū)(General)：無潔凈室級
16、別規(guī)定，原料、割瓶、成品檢漏、燈檢、參觀走廊等。 控制區(qū)(Contro1)：l0萬級 潔凈區(qū)(Clean)：控制1萬級，為一般無菌工作區(qū) 無菌區(qū)(Sterile)：控制100級。,第四章 滅菌法,要求：各個區(qū)域用顏色線條分開，工作服的顏色、質料也不同， 避免混雜。,(二)土建要求,郊外，環(huán)境幽靜、空氣清潔，建筑面積為廠區(qū)面積的15，最多不超過30，廠區(qū)內無泥土外露地面可見，大面積草坪，不種花。 1.墻：堅實表面、光滑無隙。 2.天頂：各種管道和照明設施都裝在天花板吊頂內，吊頂約為3m，天花板能減少噪音。在墻外設維修走廊。 3.地板：無積水現(xiàn)象。,第四章 滅菌法,(三)公用工程要求,(1)潔凈室的門: 密閉，人、物流進出口 (2)照明光度 (3)紫外光燈 (4) 應采用蒸餾水或無鹽水、去離子水清洗潔凈室表面。（可否用自來水？為什么？）,第四章 滅菌法,
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