《藥物分析》第6章：藥物的含量測(cè)定方法.ppt

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1、第6章藥物的含量測(cè)定方法,化學(xué)分析法,,重量分析,容量分析,,含量測(cè)定,儀器分析法,效價(jià)測(cè)定（生物學(xué)法）,紫外,高效液相色譜法,氣相色譜法,,第1節(jié)容量分析法（滴定法）,1.滴定分析：是將一種已知準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴加到被溶液中，直到化學(xué)反應(yīng)完全為止，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和體積求得被測(cè)組份含量的一種方法。 在進(jìn)行滴定分析時(shí)： 一方面要會(huì)配制滴定劑溶液并能準(zhǔn)確 測(cè)定其濃度 另一方面要準(zhǔn)確測(cè)量滴定過(guò)程中所 消耗滴定劑的體積,滴定：將滴定液從滴定管滴加到被測(cè)物質(zhì)溶液中的過(guò)程 化學(xué)計(jì)量點(diǎn) ：滴加的標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)物質(zhì)按照一定的化學(xué)反應(yīng)式定量反應(yīng)完全之點(diǎn) 滴定終點(diǎn) ：在滴定過(guò)程中，指示劑正好發(fā)生顏色變化的轉(zhuǎn)

2、變點(diǎn)。 指示劑：能夠指示終點(diǎn)變化的試劑。 滴定誤差：滴定終點(diǎn)與化學(xué)計(jì)量點(diǎn)不一定恰好符合，它們之間存在著很小的差別，由此引起測(cè)定結(jié)果的誤差稱為滴定誤差。 （6）標(biāo)準(zhǔn)溶液 已知準(zhǔn)確濃度的溶液（mol/L）,2.滴定液的配制和標(biāo)定,基準(zhǔn)物質(zhì)：能用來(lái)直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的化學(xué)試劑 滴定度：每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于被測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量（g或mg），以符號(hào)T表示 直接法（不需標(biāo)定） 間接法（標(biāo)定）：先將其配制成近似于所需濃度的溶液，然后利用基準(zhǔn)物質(zhì)或另一種標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)確定其準(zhǔn)確濃度。,標(biāo)定：用基準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確測(cè)定滴定液濃度的過(guò)程。 校正因子（F）：表示滴定液準(zhǔn)確濃度與標(biāo)示濃度的比值。其范圍應(yīng)在1.050.95之間，

3、超出該范圍應(yīng)加入適當(dāng)?shù)娜苜|(zhì)或溶劑予以調(diào)整，并重新標(biāo)定。,標(biāo)定注意事項(xiàng) ： a.操作中所用的天平、滴定管、容量瓶和移液管均應(yīng)校正合格的。 b.標(biāo)定工作應(yīng)在室溫（1030）下進(jìn)行，并記錄標(biāo)定時(shí)的溫度。 c.根據(jù)滴定液的消耗量選用適宜的滴定管，盛裝滴定液前，先用少量滴定液淋洗三次，盛裝滴定液后，應(yīng)用小燒杯蓋住管口。 d.標(biāo)定中的空白試驗(yàn)，是指在不加供試品或以等量溶劑代替供試液的情況下，按同法滴定所得的結(jié)果。 e.標(biāo)定工作應(yīng)由初標(biāo)者和復(fù)標(biāo)者在相同條件下各做3份平行試驗(yàn)，3份平行試驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不得大于0.1%；初標(biāo)者的平均值和復(fù)標(biāo)者的平均值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）也不得大于0.1%；最

4、后結(jié)果按初、復(fù)標(biāo)二者的平均值計(jì)算，取4位有效數(shù)字。 f.配制后的滴定液按藥典規(guī)定的貯藏條件儲(chǔ)存，并在瓶外貼上標(biāo)簽，注明滴定液名稱、標(biāo)示濃度、真實(shí)濃度或F值、配制和標(biāo)定日期、標(biāo)定時(shí)的溫度、配制者、標(biāo)定者、復(fù)標(biāo)者等。 g.當(dāng)?shù)味ㄒ簶?biāo)定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（一般不超過(guò)3個(gè)月）、或標(biāo)定與使用時(shí)的溫度超過(guò)10時(shí)，應(yīng)加溫度補(bǔ)償值或重新進(jìn)行標(biāo)定，。 h.當(dāng)?shù)味ㄒ撼霈F(xiàn)渾濁或其他異常情況時(shí)，不得使用。倒出剩余的滴定液不得再倒回原瓶，避免污染。,3.滴定的分類,按反應(yīng)方式分類： 直接滴定法：滴定液與被測(cè)物質(zhì)直接反應(yīng) 間接滴定法：包括剩余滴定和置換滴定,,,含量%=,含量%=,按反應(yīng)類型分： 酸堿滴定：在水溶液中以酸堿中和反應(yīng)

5、來(lái)測(cè)定物質(zhì)含量的方法 配位（絡(luò)合）滴定法：以形成穩(wěn)定配合物的配位反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析法。 用于金屬離子的測(cè)定 采用金屬指示劑（如鉻黑T），如EDTA（乙二胺四醋酸二鈉） 氧化還原滴定法： 碘量法：如碘滴定液、硫代硫酸鈉滴定液、淀粉指示劑 鈰量法：以硫酸鈰Ce（S04）2作為滴定液 、鄰二氮菲作指示劑 亞硝酸鈉滴定法： 溴量法 ：Na2S2O3滴定液 、Br2滴定液,沉淀滴定法：以沉淀反應(yīng)為基礎(chǔ)，多以硝酸銀為滴定液，也稱銀量法。按所用指示劑的不同分為 鉻酸鉀指示劑法 鐵銨礬指示劑法 吸附指示劑法 非水滴定法：在非水溶劑（有機(jī)溶劑與不含水的無(wú)機(jī)溶劑）中進(jìn)行滴定分析的方法。 非水堿量法：是以冰醋酸為

6、溶劑，高氯酸為滴定液，甲紫微指示劑，測(cè)定弱堿性藥物及其鹽類 非水酸量法：是在堿性溶液中，以甲醇鈉為滴定液，麝香草酚藍(lán)為指示劑，二甲基甲酰胺等為溶劑，滴定弱酸性藥物,第2節(jié) 分光光度法,分光光度法: 是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。 光是電磁波,常用的波長(zhǎng)范圍為： (1)200400nm----紫外光區(qū)； (2)400760nm----可見(jiàn)光區(qū)； (3)7602500nm（12800cm-14000cm-1）----近紅外光區(qū) （4）2.525m（按波數(shù)計(jì)為4000cm-1400cm-1）----紅外光區(qū)。,紫外-可見(jiàn)分光光度法

7、,物質(zhì)吸收紫外和可見(jiàn)光區(qū)的電磁波產(chǎn)生的吸收光譜 進(jìn)行定性和定量分析的方法 1.基本原理：朗伯比耳定律 A為吸收度； T為透光率； L為液層厚度，單位為cm ； E為吸收系數(shù)，常用的是百分吸收系數(shù)()，其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1(g/ml)，液層厚度為1cm時(shí)的吸收度值； C為100ml溶液中所含被測(cè)物質(zhì)的量g（按干燥品或無(wú)水物計(jì)算）,,2.儀器的基本結(jié)構(gòu) 光源：200400nm為紫外光區(qū)（氘燈）、400850nm為可見(jiàn)光區(qū) （鎢燈） 3.儀器的校正和檢定 （1）波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度 （2）吸收度的準(zhǔn)確度 （3）雜散光的檢查,4.吸光度的測(cè)定 中國(guó)藥典20

8、10版對(duì)吸光度的測(cè)定做了以下要求： （1）溶劑： （2）空白試驗(yàn)校正： （3）測(cè)定波長(zhǎng)的檢查 （4）供試品溶液的濃度： 應(yīng)考慮使吸光度在0.30.7范圍內(nèi) （5）狹縫寬度的選擇,5.應(yīng)用 （1）鑒別和檢查：比較吸收光譜的特征參數(shù)、吸光度比值、吸收光譜的一致性 （2）含量測(cè)定： a.對(duì)照品比較法： b.吸收系數(shù)法 ： c.標(biāo)準(zhǔn)曲線法： 借助電腦的Excel電子表格計(jì)算,含量%=,6.注意事項(xiàng) （1）空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過(guò)濾，并棄去初濾液。 （2）測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池。 （3）在測(cè)定時(shí)或改測(cè)其它

9、檢品時(shí)，應(yīng)用待測(cè)溶液沖洗吸收池34次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損），放入樣品室每次方向應(yīng)一致。 （4）取吸收池時(shí)，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時(shí)用測(cè)定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。若吸收池內(nèi)外壁沾污，用脫脂棉纏在細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕擦試，再用純化水沖凈。 （5）務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護(hù)光學(xué)元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作。 （6）儀器經(jīng)過(guò)搬動(dòng)請(qǐng)及時(shí)檢查并糾正波長(zhǎng)精度，并應(yīng)經(jīng)常校準(zhǔn)波長(zhǎng)精度。,第3節(jié) 色譜分析法,色譜法的分離過(guò)程：是被分

10、離組分在互不相溶的兩相間分配平衡的過(guò)程，由于混合物中各組分的分配系數(shù)不同，或被吸附劑吸附能力的不同，則被流動(dòng)相攜帶移動(dòng)的速度也不同，達(dá)到分離的目的。 液相色譜法：以液體為流動(dòng)相 氣相色譜法：以氣體為流動(dòng)相,一、高效液相色譜法,高效液相色譜法：采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱將待測(cè)組分進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。 化學(xué)鍵合相色譜：最廣泛的 將固定相的官能團(tuán)鍵合在載體上，形成的固定相 ，一般屬于分配色譜法，不易流失,（一）基本概念： 1.色譜圖：信號(hào)---時(shí)間曲線 2.基線：無(wú)樣品時(shí)，用流動(dòng)相沖洗檢測(cè)出的流出曲線，一般平行于時(shí)間軸 3.噪聲：基線信號(hào)的波動(dòng) 4.漂移：基線隨時(shí)間的變化

11、 5.色譜峰： 6.拖尾因子：衡量色譜峰的對(duì)稱性， 應(yīng)為0.95-1.05 7.峰寬： 8.半峰寬 9.標(biāo)準(zhǔn)偏差 10.峰面積 11.保留時(shí)間 12.理論塔板數(shù)（柱效）：表示色譜柱的分離效率,（二）基本原理 待分離物質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配時(shí)，在固定相中溶解度較小的組分，在色譜柱中向前遷移速度較快；在固定相中溶解度較大的組分，在色譜柱中向前遷移速度較慢，從而達(dá)到分離的目的。 依固定相與流動(dòng)相極性的不同，分為正相色譜和反相色譜 1.正相色譜法 流動(dòng)相極性小于固定相 一般用極性物質(zhì)作固定相，非極性溶劑(如苯、正己烷等)作流動(dòng)相，主要用于分離極性化合物，極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。 2.反相

12、色譜法 流動(dòng)相極性大于固定相 一般用非極性物質(zhì)作固定相，極性溶劑(如水、甲醇、己腈等)作流動(dòng)相，主要用于分離非極性或弱極性化合物，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。,（三）固定相和流動(dòng)相,1.固定相 常用化學(xué)鍵合相，分極性和非極性鍵合相，如十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18或ODS）和辛基硅烷鍵合硅膠（C8）為最常用的非極性鍵合相，用于反相色譜法； 氨基和氰基硅烷鍵合相為常用的極性鍵合相，用于正相色譜法。 2.流動(dòng)相 有機(jī)溶劑+水混合 一般為色譜純?cè)噭?，?jīng)0.45um的微孔濾膜過(guò)濾，需脫氣處理,（四）儀器的基本結(jié)構(gòu),日本島津液相色譜儀,1.色譜柱,柱管-不銹鋼，填充硅膠和化學(xué)鍵合固定相 內(nèi)

13、徑4.6mm 長(zhǎng)15cm、20cm和25cm的三種， 如安捷倫色譜柱、迪馬色譜柱、迪馬鉆石柱等。,色譜柱的維護(hù),1.最好使用預(yù)柱保護(hù)分析柱； 2.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是27.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍； 3.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化； 4.樣品要采用0.22或0.45m濾膜過(guò)濾，流動(dòng)相采用0.45m濾膜過(guò)濾并脫氣； 5.每次做完分析，要進(jìn)行沖洗：分析用流動(dòng)相中若無(wú)酸、堿、鹽類物質(zhì)，建議用90甲醇沖洗3060min；如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，要先用10甲醇沖洗1小時(shí)左右，再梯度走到90甲醇沖洗3060min（若用多元泵）。 若長(zhǎng)時(shí)間不用該色譜柱，要沖洗好后，用

14、純甲醇或乙腈封存； 6.若流動(dòng)相中用到離子對(duì)試劑，更應(yīng)該好好沖洗，且該色譜柱最好作為專用，不能再做其它物質(zhì)分析用； 7.普通C18柱盡量避免在40以上的溫度下分析； 8.壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)。,2.檢測(cè)器,常用紫外檢測(cè)器 其次有二極管陣列檢測(cè)器(DAD) 熒光檢測(cè)器 示差折光檢測(cè)器 蒸發(fā)光散射檢側(cè)器 電化學(xué)檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器等,（五） 系統(tǒng)適用性試驗(yàn),定義：指用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)， 應(yīng)符合要求。 包括理論板數(shù) 分離度 重復(fù)性 拖尾因子等,1.理論板數(shù)(N) ： 說(shuō)明分離過(guò)程，色譜柱的塔板數(shù)越多，柱效越高 2.分離度(R)：應(yīng)大于1.5 3.重復(fù)性：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0

15、% 4.拖尾因子(T) ：符合規(guī)定,（六）在雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定中的應(yīng)用,1.內(nèi)標(biāo)法,2.外標(biāo)法,進(jìn)樣操作,3.加校正因子的主成分自身對(duì)照法（測(cè)定雜質(zhì)含量） 4.不加校正因子的主成分自身對(duì)照法（無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品） 5.面積歸一化法（只能用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量 ）,二、氣相色譜法,1.分離原理 注入進(jìn)樣口的樣品經(jīng)加熱氣化后，被載氣帶入色譜柱，由于其分配系數(shù)的不同進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)入檢測(cè)器，信號(hào)記錄儀、積分儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。分配系數(shù)小的組分先流出，分配系數(shù)大的組分后流出。,2.色譜儀的基本結(jié)構(gòu) 由載氣源、進(jìn)樣器、色譜柱、柱溫箱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成,1.載氣（流動(dòng)相）：,如氦

16、、氮和氫等 2.進(jìn)樣器 ：直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣 微量注射器,3. 固定相和載體 色譜柱為填充柱或毛細(xì)管柱 常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例組成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。 *新填充柱和毛細(xì)管柱在使用前需老化以除去殘留溶劑及低分子量的聚合物，色譜柱如長(zhǎng)期未用，使用前應(yīng)老化處理，使基線穩(wěn)定。,毛細(xì)管柱和填充柱,4. 檢測(cè)器 火焰離子化檢測(cè)器（FID)、 熱導(dǎo)檢測(cè)器(TCD)、 氮磷檢測(cè)器（NPD)、 火焰光度檢測(cè)器(FPD)、 電子捕獲檢測(cè)器(ECD)、 質(zhì)譜檢測(cè)器(MS),有機(jī)溶劑的氣相分離圖譜,3.色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 同高效液相色譜法 4.在雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定中的應(yīng)用 （1）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量 （2）外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量 （3）面積歸一化法 上述13法的具體內(nèi)容均同高效液相色譜法 （4）標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法,