消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全

第七章 消毒與滅菌,消毒與滅菌,消毒(disinfection)：殺死物體上病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物。用以消毒的藥品稱為消毒劑(disinfectant)。 滅菌(sterilization)：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細菌芽胞在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌(bacteriostasis)：抑制體內(nèi)或體外細菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素。 防腐(antisepsis)：防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法。細菌一般不死亡。 無菌(asepsis)：不存在活菌。,熱力滅菌法 輻射殺菌法 濾過除菌法 超聲波殺菌法 干燥與低溫抑菌法,第一節(jié) 物理消毒滅菌法,干熱滅菌法 焚燒：廢棄物、尸體 灼燒：接種環(huán)、試管口 干烤：玻璃器皿 紅外線：醫(yī)療器械 濕熱滅菌法巴氏消毒法: 61.1 62.8 30 min 煮沸消毒法: 100 5 min 流通蒸汽消毒法: 100 15 30 min 間歇滅菌法: 100 1530 min 37 過夜100 1530 min 37 過夜 100 1530 min 高壓蒸汽滅菌法: 121.3 15 20 min ( 1.05kg/cm2 ),一. 熱力滅菌法,AUTOCLAVE (PRESSURE STERILIZERS), hospital/autoclave.htm,biology.clc.uc.edu/./ Media_Prep/Media_Prep.htm,熱型 溫度（） 時間（ h ） 布層內(nèi)的溫度（ ） 滅菌效果 20層 40層 100層 濕熱 90105.3 3 101 107 101.5 完全 干熱 130140 4 86 72 70.5 不完全,濕熱與干熱的穿透力及其滅菌效果的比較,紫外線 波長200-300nm的紫外線具有殺菌作用。 其主要作用于DNA，使一條DNA鏈上相鄰的兩個胸腺嘧 啶共價結(jié)合形成二聚體，導(dǎo)致細菌變異和死亡。 電離輻射 高速電子、X射線、射線 微波 波長1mm1m,二. 輻射殺菌法,T-T二聚體的形成導(dǎo)致互補鏈的過早中斷,UV的殺菌機制,flash,濾過除菌法(filtration)：定義。 濾菌器(filter) 薄膜濾菌器：用于除菌的濾膜孔徑0.22m 玻璃濾菌器 石棉濾菌器 素陶瓷濾菌器,三. 濾過除菌法,濾菌器,The filter,http:/sorrel.humboldt.edu/wva1/Bio%20562%20lectures/specimen_prep.html,Bacteria on a membrane filter,http:/sorrel.humboldt.edu/wva1/Bio%20562%20lectures/specimen_prep.html,濾器和層流室,1.濾菌器 (filter）液體除菌 2.空氣除菌采用生物潔凈技術(shù),是一種機械的作用因素，每秒超過2萬次振動的聲波即為超聲波。常用的超聲波發(fā)生器能產(chǎn)生20-100千赫的聲波?？墒辜毦毎诹呀舛劳?。,四. 超聲波殺菌法,干燥法 低溫法：低溫可使細菌的新陳代謝減慢，常用作保存細菌菌種。冷凍真空干燥法是目前保存菌種的最好方法。,五. 干燥低溫抑菌法,消毒劑的種類：酚類、醇類、重金屬鹽類、氧化劑、表面活性劑、烷化劑。,第二節(jié) 化學(xué)消毒滅菌法,（一）高效消毒劑（high-level disinfectants） 1.含氯消毒劑；2.過氧化物消毒劑； 3.醛類消毒劑；4.環(huán)氧乙烷 （二）中效消毒劑 （intermediate-level disinfectants） 1.含碘消毒劑；2.醇類消毒劑 （三）低效消毒劑（low-level disinfectants） 1.季銨鹽類；2.氯已定；3.高錳酸鉀,化學(xué)藥物噴灑、浸泡、熏蒸等達到消毒滅菌目的 （1）醛類消毒劑：甲醛（浸泡、熏蒸）、多聚甲醛、戊二醛等。 （2）含氯消毒劑：二氯異氰尿酸鈉（優(yōu)氯凈）、 次氯酸鈉、漂白粉等，用于環(huán)境消毒。 （3）季銨鹽類消毒劑：新潔爾滅（洗手、淋?。?消毒寧、洗必太、消毒凈 （4）酚類消毒劑：烷基化氯酚烷基化酚、間苯二酚鹵化酚、乙酚甲酚，常用煤酚皂溶液（來蘇兒），常用于腳池、車輛消毒池、地面消毒。 （5）過氧化物類消毒劑：過氧乙酸、過氧化氫、臭氧等，常用于浸泡、噴霧、熏蒸消毒 （6）含碘消毒劑：碘酊、碘伏（碘與表面活性劑等的不定型結(jié)合物能逐漸釋放碘以長時間殺菌） ，常用于消毒皮膚、傷口等。 （7）醇類消毒劑：乙醇、丙醇、丁醇、戊醇等。常用于皮膚消毒。 （8）其它消毒劑：如高錳酸鉀（熏蒸、浸泡、噴灑）、氫氧化鈉（畜舍、地面、用具、腳池）、石灰乳（墻壁、地面）等。,固體二氧化氯消毒劑,消毒滅菌的運用,1.高危器械物品 用時需進入無菌組織 的物品。所有這些物品都應(yīng)該滅菌 2.中危器械物品 用時不進入無菌組織 但接觸黏膜的器械。采用消毒即可 3.低危器械物品 只接觸未損傷皮膚但 不進入無菌組織和不接觸黏膜的物品 一般用后清洗、消毒即可 4.快速周轉(zhuǎn)的醫(yī)療器械,（一）醫(yī)療器械物品的消毒滅菌,（二）室內(nèi)空氣消毒滅菌 1.物理消毒法 紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；濾過除菌：空氣通過孔徑小于0.2 m的高效過濾裝置以除去細菌和帶菌塵埃 2化學(xué)消毒法 化學(xué)消毒劑噴霧和熏蒸：過氧乙酸噴霧、熏蒸；過氧化氫噴霧；二氧化氯溶液噴灑；中草藥點燃煙熏。 （三）手和皮膚的消毒 用肥皂和流動水經(jīng)常并正確洗手 病原微生物污染時應(yīng)用消毒劑消毒,（四）黏膜的消毒 （五）病人排泄物與分泌物的消毒滅菌 （六）病人污染物品的消毒 （七）飲水的消毒 （八）環(huán)境的消毒,消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時間 微生物的種類與數(shù)量 微生物對消毒劑的敏感性高低排序如下：真菌、細菌繁殖體、有包膜病毒、無包膜病毒、分枝桿菌、細菌芽胞。 溫度 酸堿度 有機物,第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素,第四節(jié) 病原微生物實驗室生物安全,生物安全（biosafety）是生物技術(shù)安全（safety of biotechnology）的簡稱 狹義地指現(xiàn)代生物技術(shù)的研究、開發(fā)、應(yīng)用及轉(zhuǎn)基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生潛在的危害。 廣義地指與生物有關(guān)的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風(fēng)險。,病原微生物所致的安全問題，如病原微生物實驗室的安全隱患、生物武器、生物恐怖、重大傳染病的暴發(fā)流行等，也是人類社會所面臨的最現(xiàn)實的生物安全問題。 病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散和防感染。 關(guān)于病原微生物實驗室生物安全,我國法令包括對病原微生物的分類管理，對實驗室的分級管理,實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任等,一、病原微生物的分類,根據(jù)傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，病原微生物分為四類： 第一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。 第二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。,第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物,第三類是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況下對人、動物或環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。 第四類是指在通常情況下不會引起人或動物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。,二、病原微生物實驗室的分級,一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。 從事高致病性病原微生物相關(guān)實驗活動應(yīng)當(dāng)有名以上的工作人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實驗活動。應(yīng)有健全安全保衛(wèi)制度 。,實驗室工作人員應(yīng)掌握實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知識和實際操作技能。應(yīng)有符合要求的防護用品，應(yīng)建立健康檔案；進行預(yù)防接種。 實驗室應(yīng)有科學(xué)、嚴格的管理制度，定期對實驗室設(shè)施設(shè)備、材料等進行檢查、維護和更新，應(yīng)對廢水、廢氣以及其他廢物進行合理處置，防止環(huán)境污染。,生物安全,三、實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任,實驗室感染控制工作包括定期檢查實驗室的生物安全防護、病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實驗室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實施情況。 實驗室發(fā)生高致病性病原微生物泄漏時，預(yù)防、控制措施包括：封閉被病原微生物污染的實驗室或可能造成病原微生物擴散的場所；開展流行病學(xué)調(diào)查；對病人進行隔離治療，對相關(guān)人員進行醫(yī)學(xué)檢查；對密切接觸者進行醫(yī)學(xué)觀察；進行現(xiàn)場消毒；對染疫或者疑似染疫的動物采取隔離、撲殺等措施。,監(jiān)督的主要內(nèi)容是監(jiān)督病原微生物實驗室執(zhí)行國家有關(guān)法律、行政法規(guī)、國家標準和要求的記錄、檔案及報告的情況 法律責(zé)任的核心是承擔(dān)造成傳染病傳播、流行或者其他嚴重后果的法律責(zé)任。,思考題,常用的消毒劑有哪些種類? 簡述化學(xué)消毒劑的殺菌機制。 濕熱滅菌有哪些方法? 各有何用途? 筒述紫外線殺菌的作用機制和注意事項。 在溫度和時間相同的情況下，為什么濕熱滅菌法的效果比干熱法好? 當(dāng)從事病原生物學(xué)安全實驗室工作時，應(yīng)考慮哪些與生物安全相關(guān)的問題？,名詞：消毒、滅菌、無菌、無菌操作、防腐 常用的消毒滅菌的物理方法有哪些？ 常用的熱力消毒滅菌所用的溫度和時間？ 紫外線殺菌的機理 影響化學(xué)消毒劑效果的因素,思考題,