分解纖維素的微生物的分離 上課用精講

教學(xué)目標(biāo)教學(xué)目標(biāo):1、知道纖維素酶的種類及作用、知道纖維素酶的種類及作用2、初步掌握從土壤中分離出分解纖維、初步掌握從土壤中分離出分解纖維 素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法纖維二糖纖維二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纖維素纖維素真菌、放線菌及細(xì)菌真菌、放線菌及細(xì)菌纖維素酶纖維素酶下列生物能分解纖維素的是（下列生物能分解纖維素的是（ ） 人人 兔兔 牛牛 蘑菇蘑菇 纖維桿菌纖維桿菌A. B.C. D.C兔、牛等草食性動(dòng)物的腸胃中的共生微生物可兔、牛等草食性動(dòng)物的腸胃中的共生微生物可合成纖維素酶分解纖維素。合成纖維素酶分解纖維素。蘑菇、纖維桿菌能分泌纖維素酶分解纖維素；蘑菇、纖維桿菌能分泌纖維素酶分解纖維素；人不能消化纖維素。人不能消化纖維素。在一支試管中添加纖維素酶，在一支試管中添加纖維素酶，另一支試管不添加纖維素酶；另一支試管不添加纖維素酶；思考思考1P27的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？濾濾紙紙崩崩潰潰法法4 4、纖維素酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)：、纖維素酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)： 方法：濾紙崩潰法方法：濾紙崩潰法（二）纖維素分解菌的篩選（二）纖維素分解菌的篩選1、篩選纖維素分解菌的方法、篩選纖維素分解菌的方法_。優(yōu)點(diǎn)：該方法可以通過優(yōu)點(diǎn)：該方法可以通過_反應(yīng)直接篩選。反應(yīng)直接篩選。剛果紅染色法剛果紅染色法顏色顏色2、其原理是：、其原理是：剛果紅剛果紅可以與可以與纖維素纖維素形成形成_，當(dāng)纖維素被，當(dāng)纖維素被_分解后，分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以_為中心的為中心的_，可以通過，可以通過_ 來篩選纖維素分解菌。來篩選纖維素分解菌。紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物纖維素酶纖維素酶纖維素分解菌纖維素分解菌 透明圈透明圈是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈可根據(jù)是否可根據(jù)是否產(chǎn)生產(chǎn)生透明圈透明圈來篩選纖維來篩選纖維素分解菌素分解菌透明圈大的，透明圈大的，分解纖維素的分解纖維素的能力就強(qiáng)啦能力就強(qiáng)啦練一練：練一練：1、下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤的是、下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤的是A、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種B、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁D、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖2、利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，、利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說法錯(cuò)誤的是下列說法錯(cuò)誤的是A、剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物、剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物 B、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物 C、剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物、剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物D、若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩選出、若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩選出了纖維素分解菌了纖維素分解菌( (三三) )、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤土壤取樣取樣選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)梯度梯度稀釋稀釋將樣品涂將樣品涂布到鑒別布到鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基挑選挑選菌落菌落什么樣什么樣的環(huán)境的環(huán)境取樣取樣? 培養(yǎng)的目的培養(yǎng)的目的? ? 選擇培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)特點(diǎn)? ?挑選什挑選什么樣的么樣的菌落菌落? ?鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)的特點(diǎn)? ?如何鑒別如何鑒別? ?根據(jù)根據(jù)：微生物：微生物對(duì)生存環(huán)境的對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；環(huán)境中去找；目的：目的：增加纖維素增加纖維素分解菌的濃度，分解菌的濃度，以以確保能夠從樣品中確保能夠從樣品中分離到所需要的微分離到所需要的微生物；生物；剛果紅染色法剛果紅染色法( (三三) )、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤土壤取樣取樣選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)梯度梯度稀釋稀釋將樣品涂將樣品涂布到鑒別布到鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基挑選挑選菌落菌落旁欄思考旁欄思考1本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程是將土樣制成的尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程是將土樣制成的菌懸液直接涂布在選擇培養(yǎng)基上；菌懸液直接涂布在選擇培養(yǎng)基上；本課題通過選擇培養(yǎng)使細(xì)菌增殖后，再涂布本課題通過選擇培養(yǎng)使細(xì)菌增殖后，再涂布在鑒別培養(yǎng)基上。其它操作基本基本相同。在鑒別培養(yǎng)基上。其它操作基本基本相同。 選擇纖維素豐富的環(huán)境選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落，如樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。 生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土壤中此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境普通環(huán)境旁欄思考旁欄思考2 取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這種選擇的理由是什么？種選擇的理由是什么？根據(jù)根據(jù)微生物對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；微生物對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；【資料一資料一】土壤取樣土壤取樣 人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維素分解菌相對(duì)聚集。素分解菌相對(duì)聚集。 將紙埋于深約將紙埋于深約10cm的腐殖土的腐殖土壤中。壤中。旁欄思考旁欄思考3將濾紙埋在土壤中有什么作用？將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？ 選擇培養(yǎng)的選擇培養(yǎng)的 【資料二資料二】選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供主要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供主要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)纖維素粉纖維素粉 5g碳源（能源）碳源（能源）NaNO3 1g氮源、無機(jī)鹽氮源、無機(jī)鹽KCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g無機(jī)鹽無機(jī)鹽酵母膏酵母膏 0.5g生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子、碳源碳源、氮源、氮源水解酵素水解酵素 0.5g氮素、生長(zhǎng)因子氮素、生長(zhǎng)因子溶解后，蒸餾水定容至溶解后，蒸餾水定容至1000mL水水有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。分解纖維素的微生物可以大量繁殖。（2）若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)）若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)控制的變量是將的作用，應(yīng)控制的變量是將_改為改為_。C、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？的作用？葡萄糖葡萄糖纖維素粉纖維素粉用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對(duì)照用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對(duì)照答：（答：（1）自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通）自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到制，因此可以起到“濃縮濃縮”的作用的作用旁欄思考旁欄思考4為什么選擇培養(yǎng)能夠?yàn)槭裁催x擇培養(yǎng)能夠“濃縮濃縮”所需的微生物？所需的微生物？【資料三資料三】剛果紅染色法剛果紅染色法方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)紅進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅在倒平板時(shí)就加入剛果紅漂洗作用漂洗作用,氯化鈉可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去氯化鈉可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去,這這樣就留下大大小小的透明圈樣就留下大大小小的透明圈,大的透明圈當(dāng)然分解大的透明圈當(dāng)然分解纖維素的能就強(qiáng)。纖維素的能就強(qiáng)。方法一中方法一中NaCl溶液的作用？溶液的作用？培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生長(zhǎng)因子碳源、氮源、生長(zhǎng)因子KH2PO4 0.25g無機(jī)鹽無機(jī)鹽土豆汁土豆汁 100mL碳源、生長(zhǎng)因子碳源、生長(zhǎng)因子瓊脂瓊脂 15g凝固劑凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至餾水定容至1000mL氫元素、氧元素氫元素、氧元素鑒別鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉水溶性羧甲基纖維素鈉)染色法染色法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)顏色反應(yīng)基顏色反應(yīng)基本上是纖維本上是纖維素分解菌的素分解菌的作用作用操作繁瑣操作繁瑣剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜生混雜操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便不存在菌落不存在菌落混雜問題混雜問題 產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，也產(chǎn)生模糊透明圈， 有些微生物能降解色素，有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。形成明顯的透明圈。思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足方法一：方法一：先先培養(yǎng)微生物，培養(yǎng)微生物，再加入剛果再加入剛果紅進(jìn)行顏色紅進(jìn)行顏色反應(yīng)反應(yīng)方法二：方法二：在在倒平板時(shí)就倒平板時(shí)就加入剛果紅加入剛果紅挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 挑取產(chǎn)生挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。一般即為分解纖維素的菌落。 接種到接種到纖維素分解菌的纖維素分解菌的選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)基上，在基上，在30300 0C C37370 0C C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)。練一練練一練 1、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪 一生物學(xué)觀點(diǎn)？（一生物學(xué)觀點(diǎn)？（ ）A.生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn) B.生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)C.生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn) D.生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)2、從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是（、從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是（ ） 土壤取樣土壤取樣 梯度稀釋梯度稀釋 選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 菌懸液涂布平板菌懸液涂布平板 挑選出單個(gè)菌落挑選出單個(gè)菌落 A、 B、 C、 D、3、有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是（、有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是（ ）A、可以增加纖維素分解菌的濃度、可以增加纖維素分解菌的濃度B、可以減少纖維素分解菌的濃度、可以減少纖維素分解菌的濃度C、所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基、所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基D、所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基、所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基CBA四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 1.1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落出菌落 對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基制作合格。培養(yǎng)基制作合格。 如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。了分解纖維素的微生物。 2.2.分離的結(jié)果是否一致分離的結(jié)果是否一致 由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。等不同的分離結(jié)果。 1.為了確定分離得到的是纖維素分解菌，為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行還需要進(jìn)行_實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有發(fā)酵方法有_ _ 發(fā)酵和發(fā)酵和_ _ 發(fā)酵。發(fā)酵。2.2.纖維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的纖維素所產(chǎn)生的_ _ 含量進(jìn)行定量測(cè)定。含量進(jìn)行定量測(cè)定。發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶 液體液體 固體固體 五、課題延伸五、課題延伸分解分解纖維纖維素的素的微生微生物的物的分離分離纖維素酶纖維素酶種類、作用、催化種類、作用、催化剛果紅染色剛果紅染色篩選原理篩選原理實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)設(shè)設(shè)計(jì)計(jì)土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)純化培養(yǎng)純化培養(yǎng)前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纖維素土壤富含纖維素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鑒別染色鑒別分離出分解菌分離出分解菌課堂總結(jié)課堂總結(jié)比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目 分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型類型目的目的鑒鑒定定培培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理現(xiàn)象現(xiàn)象方法方法將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有尿素做氮源的選擇尿素做氮源的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有纖維素粉做碳源的纖維素粉做碳源的選擇培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)基上固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基篩選菌株篩選菌株選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng),濃縮所需微生物濃縮所需微生物比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)原理原理培養(yǎng)基類培養(yǎng)基類型型目的目的鑒鑒定定培培養(yǎng)養(yǎng)基基原原理理現(xiàn)現(xiàn)象象方方法法在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，的堿性增強(qiáng)，pHpH升高。在培升高。在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如果果pHpH升高指示劑會(huì)變紅升高指示劑會(huì)變紅剛果紅可以與纖維素形成剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶催化分解后紅色纖維素酶催化分解后紅色復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基上就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解上就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈菌為中心的透明圈觀察菌落周圍是否有著色的觀察菌落周圍是否有著色的環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌觀察菌落周圍是否出現(xiàn)觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈來篩選纖維素分解菌透明圈來篩選纖維素分解菌脲酶檢測(cè)法脲酶檢測(cè)法剛果紅染色法剛果紅染色法 【練一練練一練】 有些微生物能合成纖維素酶，通過對(duì)這些有些微生物能合成纖維素酶，通過對(duì)這些微生物的研究和作用，使人們能夠利用秸稈等微生物的研究和作用，使人們能夠利用秸稈等廢棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。廢棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。研究人員用化合物研究人員用化合物A、硝酸鹽、磷酸鹽以及微、硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功的篩選到能產(chǎn)生纖量元素配制的培養(yǎng)基，成功的篩選到能產(chǎn)生纖維素酶的微生物。分析回答問題。維素酶的微生物。分析回答問題。 (1)培養(yǎng)基中加入的化合物培養(yǎng)基中加入的化合物A是是_，為微，為微生物的生長(zhǎng)提供生物的生長(zhǎng)提供_，這種培養(yǎng)基屬于，這種培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 (2)為了篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物，向培為了篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物，向培養(yǎng)基中加入養(yǎng)基中加入_。纖維素纖維素碳源碳源選擇選擇剛果紅剛果紅 (3)在篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物之前，可在篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物之前，可用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，增加微生物的濃度。為獲得用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，增加微生物的濃度。為獲得純凈的菌株，常采用平板劃線的方法進(jìn)行接種，純凈的菌株，常采用平板劃線的方法進(jìn)行接種，此過程所用的接種工具是此過程所用的接種工具是_，操作時(shí)采，操作時(shí)采用用_滅菌的方法；還可用滅菌的方法；還可用_ 的的方法接種。方法接種。 (4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理后才能倒掉，這樣做的目的是處理后才能倒掉，這樣做的目的是 _。接種環(huán)接種環(huán)灼燒灼燒稀釋涂布平板稀釋涂布平板防止造成環(huán)境污染防止造成環(huán)境污染20092009年年40.40.【生物生物選修選修1 1生物技術(shù)實(shí)踐生物技術(shù)實(shí)踐】（1515分）分） （1 1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。 （2 2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_（消毒、滅菌）；操（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_；靜止空氣中的細(xì)菌；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能能_。 溫度溫度酸堿度酸堿度易培養(yǎng)易培養(yǎng)生活周期短生活周期短滅菌滅菌消毒消毒損傷損傷DNADNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)鏈接高考鏈接高考（3 3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的_。（。（4 4）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的_。（。（5 5）培）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是_。（6 6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過培養(yǎng)物必須經(jīng)過_處理后才能丟棄，以防止培處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。養(yǎng)物的擴(kuò)散。比例合適比例合適鑒定（或分類）鑒定（或分類）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間, ,觀觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生. .滅菌滅菌1111年年39.39.【生物生物 選修選修1 1：生物技術(shù)實(shí)踐（：生物技術(shù)實(shí)踐（1515分）分）有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出高的土壤污染。某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：效降解原油的菌株?；卮饐栴}：在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即方法有兩種，即 和和 。 石油石油選擇選擇平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力 。通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中實(shí)驗(yàn)室常用通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有的滅菌方法有 、 和和 。無菌技術(shù)要求試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈無菌技術(shù)要求試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈 附近附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。強(qiáng)強(qiáng)灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌法干熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法火焰火焰