2019-2020年高三生物一輪復(fù)習(xí) 第四十二講 細(xì)胞工程學(xué)案.doc

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2019-2020年高三生物一輪復(fù)習(xí) 第四十二講 細(xì)胞工程學(xué)案 考綱要求 1．植物的組織培養(yǎng)（Ⅱ）。2.動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆（Ⅰ）。3.細(xì)胞融合與單克隆抗體（Ⅱ）。 知識(shí)梳理 一.植物細(xì)胞工程 1.細(xì)胞工程 （1）操作水平：細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平。 （2）目的：按照人的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品。 2.植物細(xì)胞的全能性 （1）概念：具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整生物體的潛能。 （2）原理：細(xì)胞內(nèi)含有本物種的全部遺傳信息。 （3）全能性表達(dá)條件：具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，處于離體狀態(tài)，提供一定的營(yíng)養(yǎng)、激素和其他適宜外界條件。 3.植物組織培養(yǎng)技術(shù) （1）概念理解 ①培養(yǎng)對(duì)象：離體的植物組織、器官或細(xì)胞。 ②培養(yǎng)條件：無菌、人工配制的培養(yǎng)基、相關(guān)激素等人工控制條件。 ③培養(yǎng)結(jié)果：產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。 （2）操作流程 4.植物體細(xì)胞雜交技術(shù) （1）概念：將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。 （2）操作流程 （3）流程分析 ①過程a為去除細(xì)胞壁獲得具有活力的原生質(zhì)體，用到的酶是纖維素酶和果膠酶。 ②過程b是原生質(zhì)體的融合，其原理是細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。 ③誘導(dǎo)b融合的兩種方法：物理法包括離心、振動(dòng)、電激等；化學(xué)法一般用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑。 ④過程c是原生質(zhì)體融合后再生出細(xì)胞壁。 ⑤過程d是植物組織培養(yǎng)技術(shù)，其原理是細(xì)胞的全能性。 （4）意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。 5.植物細(xì)胞工程的應(yīng)用 （1）植物繁殖的新途徑 微型繁殖：保持優(yōu)良品種的遺傳特性，高效快速地實(shí)現(xiàn)大量繁殖 作物脫毒：利用分生區(qū)附近如莖尖組織培養(yǎng)獲得脫毒苗 人工種子：胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等包上人工種皮制成 （2）作物新品種的培育：?jiǎn)伪扼w育種、突變體的利用。 （3）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)：培養(yǎng)到愈傷組織階段。 深度思考 研究人員研究了馬鈴薯莖尖外植體大小對(duì)幼苗的成苗率和脫毒率的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖，請(qǐng)思考。 （1）實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，莖尖大小與脫毒率、成苗率關(guān)系如何？ （2）馬鈴薯脫毒培養(yǎng)中莖尖外植體的適宜大小為多少mm? 提示?。?）據(jù)圖可知，莖尖越小脫毒率越高，成苗率越低。 （2）當(dāng)莖尖大小為0.27 mm時(shí)脫毒率和成苗率相對(duì)都較高。 二.動(dòng)物細(xì)胞工程 1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)——?jiǎng)游锛?xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ) （1）動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程 （2）培養(yǎng)條件 ①無菌、無毒的環(huán)境：對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理，添加抗生素，定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物。 ②營(yíng)養(yǎng)：除正常的有機(jī)和無機(jī)營(yíng)養(yǎng)外，加入血清、血漿等一些天然成分。 ③適宜的溫度和pH：溫度為36.50.5_℃（哺乳動(dòng)物），pH為7.2～7.4。 ④氣體環(huán)境：含95%空氣加5%CO2的混合氣體，其中后者的作用是維持培養(yǎng)液的pH。 （3）應(yīng)用：生物制品的生產(chǎn)、檢測(cè)有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)研究。 2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物 （1）動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過程 （2）原理：動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性。 （3）結(jié)果：產(chǎn)生新個(gè)體。 3.動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備 （1）動(dòng)物細(xì)胞融合 ①原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。 ②融合方法：聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。 ③意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能，也為制造單克隆抗體開辟了新途徑。 （2）單克隆抗體 ①制備過程 ②優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備。 ③用途：作為診斷試劑；用于治療疾病和運(yùn)載藥物。 要點(diǎn)精析 1.植物組織培養(yǎng)的過程 植物組織培養(yǎng)的條件 （1）離體：這是因?yàn)樵谏矬w內(nèi)基因的表達(dá)在空間和時(shí)間上具有選擇性。 （2）營(yíng)養(yǎng)條件：水、無機(jī)鹽、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以及激素（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）。 （3）環(huán)境條件 ①適宜的溫度、pH——確保酶的活性。②無菌——這是因?yàn)榧?xì)菌等微生物繁殖快，消耗營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)多，同時(shí)產(chǎn)生有害的代謝產(chǎn)物，毒害植物細(xì)胞。③光照——這是因?yàn)楣庹沼欣诩?xì)胞內(nèi)葉綠素的形成和光合作用的進(jìn)行?！　　? 2.植物組織培養(yǎng)與植物體細(xì)胞雜交的比較 名稱 植物組織培養(yǎng) 植物體細(xì)胞雜交 原理 細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性 過程 應(yīng)用 ①繁殖 ②培育新品種　 ③生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種 易錯(cuò)警示！　 （1）植物體細(xì)胞雜交獲得的雜種細(xì)胞的類型有三種（以上圖為例）：AA型、BB型、AB型，符合要求的只有AB型，需要進(jìn)行篩選。 （2）雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志：新的細(xì)胞壁的生成。 （3）雜種植株遺傳物質(zhì)的變化：雜種植株的變異類型屬于染色體變異，雜種植株的染色體數(shù)通常是兩親本細(xì)胞染色體數(shù)目之和，雜種植株屬于異源多倍體。 3.比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植與動(dòng)物細(xì)胞融合 比較 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 核移植 動(dòng)物細(xì)胞融合 原理 細(xì)胞增殖 動(dòng)物細(xì)胞核的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性 過程 結(jié)果 相同分化程度的細(xì)胞群 與供體基本相同的個(gè)體 雜交細(xì)胞 關(guān)鍵環(huán)節(jié) 細(xì)胞增殖（分裂）、細(xì)胞癌變 核融合、細(xì)胞分化 人工誘導(dǎo)細(xì)胞膜融合 應(yīng)用 ①生產(chǎn)生物制品 ②基因工程　　 ③檢測(cè)有毒物質(zhì) ①加速良種繁育 ②保護(hù)瀕危物種 ③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 ④提供克隆器官、組織等 獲得雜種細(xì)胞，制 備細(xì)胞產(chǎn)物如單克 隆抗體 特別提醒　細(xì)胞貼壁和接觸抑制 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。 4.植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合（單克隆抗體的制備）的比較 植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合（單克隆抗體的制備） 原理 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖 融合前處理 酶解法（纖維素酶、果膠酶）去除細(xì)胞壁 注射特定抗原，免疫處理正常小鼠 促融方法 （1）物理法：離心、振動(dòng)、電激等； （2）化學(xué)法：聚乙二醇（PEG） （1）物理法、化學(xué)法：與植物細(xì)胞融合相同； （2）生物法：滅活的病毒 意義和用途 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，大大擴(kuò)展雜交的親本組合范圍 （1）制備單克隆抗體； （2）診斷、治療、預(yù)防疾病 　　　 5.制備單克隆抗體過程中兩次篩選的方法及目的 項(xiàng)目 第一次篩選 第二次篩選 篩選原因 誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞 由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞 篩選方法 用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞（“BB”細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞）都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞（“B瘤”細(xì)胞）才能生長(zhǎng) 用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群 篩選目的 得到雜交瘤細(xì)胞 得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 試題精粹 1.（xx湖北七市聯(lián)考，40）育種工作者利用不同的方法進(jìn)行了如下四組實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)據(jù)圖回答問題。 （1）圖Ⅰ過程由番茄韌皮部細(xì)胞形成幼苗A的過程需要經(jīng)過________兩個(gè)關(guān)鍵步驟，該過程依據(jù)的原理是_________。 （2）植物組織培養(yǎng)除了需要提供一定的營(yíng)養(yǎng)、________、溫度和光照外，還必須在________的條件下進(jìn)行。 （3）已知番茄的紅果（Y）對(duì)黃果（y）為顯性，少室（M）對(duì)多室（m）為顯性，控制兩對(duì)相對(duì)性狀的基因分別位于兩對(duì)同源染色體上。用紅果多室（Yymm）番茄植株的花粉進(jìn)行Ⅱ、Ⅲ有關(guān)實(shí)驗(yàn)，則Ⅱ過程中，從花粉形成幼苗B所進(jìn)行的細(xì)胞分裂方式是________。Ⅲ過程中植物體C的基因型為________（細(xì)胞A為兩兩融合細(xì)胞）。 （4）圖Ⅲ、Ⅳ過程中需要去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的______。 （5）在圖中Ⅳ過程中，經(jīng)過鑒別和篩選后，通常植物體D能表現(xiàn)出兩個(gè)親本的遺傳性狀，根本原因是__________。 2.（xx河北衡水中學(xué)調(diào)研）如圖為利用人成纖維細(xì)胞（具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活）和小鼠骨髓瘤細(xì)胞（具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活）進(jìn)行人類基因定位的操作示意圖，請(qǐng)回答： （1）圖示技術(shù)名稱為________，該技術(shù)的基礎(chǔ)是________技術(shù)。 （2）操作所用的成纖維細(xì)胞應(yīng)在________代以內(nèi)；誘導(dǎo)融合運(yùn)用了________原理，該過程中區(qū)別于原生質(zhì)體融合的方法是用________處理。 （3）HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，其中需要加入________等天然物質(zhì)。 （4）培養(yǎng)時(shí)pH一般為________；操作中加入烏本苷的目的是______________。 （5）如表所示為雜交細(xì)胞A、B、C中存在的人類染色體及人類特有的4種酶（“＋”表示存在，“－”表示不存在），這4種酶均為單基因編碼產(chǎn)生，據(jù)表判斷，編碼________酶的基因位于染色體2上。 雜交細(xì)胞 A B C 人類染色體 1 － ＋ ＋ 2 ＋ － ＋ 3 ＋ ＋ － 酶 m ＋ － ＋ n － ＋ ＋ p ＋ － ＋ q － ＋ ＋ 3.細(xì)胞工程根據(jù)操作對(duì)象的不同，可分為植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程兩大領(lǐng)域。近年來，細(xì)胞工程領(lǐng)域成果迭出，方興未艾。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題。 （1）應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖。植物組織培養(yǎng)技術(shù)所依據(jù)的生物學(xué)原理是________。欲利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育無病毒植株，選材時(shí)一般選取________。 （2）應(yīng)用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，能創(chuàng)造出常規(guī)雜交育種無法得到的作物新品種。在進(jìn)行體細(xì)胞雜交之前，必須先利用________酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體。在進(jìn)行原生質(zhì)體間的融合時(shí)，常使用的誘導(dǎo)劑是________。 （3）應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，可以大量地生產(chǎn)各種抗病疫苗。在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)之前，需先用________酶處理組織塊，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，所需氣體主要有________；另外，所用的合成培養(yǎng)基中通常需加入________等一些天然成分。 （4）應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，能為人類提供診治腫瘤的單克隆抗體。制備單克隆抗體過程中，經(jīng)選擇培養(yǎng)得到的雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行________和________，經(jīng)多次篩選可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。與常規(guī)的抗體相比，單克隆抗體具有的顯著特點(diǎn)是________。 4.（xx安徽銅陵期末）人工種子是人們模仿天然種子的結(jié)構(gòu)制造出來的生命有機(jī)體，它能像天然種子一樣萌發(fā)生長(zhǎng)。人工種子的核心部分是胚狀體，其培育過程如圖所示。請(qǐng)回答下列有關(guān)問題。 （1）制作人工種子依據(jù)的原理是________；制作過程的關(guān)鍵是確保無菌操作，其原因是________________。 （2）②表示脫分化的過程，其實(shí)質(zhì)是________；③表示再分化的過程，其實(shí)質(zhì)是________。培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的濃度、________、________影響②、③過程的進(jìn)行。 （3）從保證人工種子正常的生命力以及生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)上來看，人造種皮應(yīng)具有半透性（透水、透氣性）和________的特點(diǎn)。 （4）某二倍體植物的基因型為DdTt，利用花藥離體培養(yǎng)的方法，可培育成“花粉胚”，也可制成人工種子，這種種子萌發(fā)形成的個(gè)體稱為________，從生殖方式看屬于________生殖。 5.人的血清白蛋白在臨床上需求量很大，通常從人血中提取。由于艾滋病病毒（HIV）等人類感染性病原體造成的威脅與日俱增，使人們對(duì)血液制品顧慮重重。如果應(yīng)用一定的生物工程技術(shù)，將人的血清白蛋白基因轉(zhuǎn)入奶牛細(xì)胞中，利用牛的乳腺細(xì)胞生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能。其過程大致如下： a．將人體血清白蛋白基因?qū)搿澳膛Ｅ咛ァ钡募?xì)胞中，形成細(xì)胞①； b．取出細(xì)胞①的細(xì)胞核，注入去核牛卵細(xì)胞中，形成細(xì)胞②； c．電脈沖刺激細(xì)胞②促使其形成早期胚胎； d．將胚胎移植到母牛的子宮內(nèi)，最終發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小牛。 （1）人體血清白蛋白基因通?？梢詮幕蛭膸?kù)中獲取，含有一種生物所有基因的文庫(kù)稱為________，獲得人體血清白蛋白基因后可以利用________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，該技術(shù)要用到一種特殊的________酶。當(dāng)受精卵分裂到囊胚期時(shí)，需要取囊胚的________細(xì)胞做DNA分析，進(jìn)行性別鑒定，以確保發(fā)育成熟的牛能分泌乳汁。 （2）實(shí)驗(yàn)過程b利用的技術(shù)是________，胚胎工程操作中終端的環(huán)節(jié)是________。 （3）該過程培養(yǎng)的牛被稱為克隆牛。與其相比，試管牛培育過程特有的生物技術(shù)是________。 （4）若將早期胚胎分離成若干個(gè)胚胎細(xì)胞，讓其分別發(fā)育成小牛，這些小牛的基因型________（填“相同”或“不同”），此項(xiàng)技術(shù)稱為________，在對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行操作時(shí)，需要特別注意的問題是________，否則會(huì)影響胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。 6.細(xì)胞融合技術(shù)有著廣泛應(yīng)用。下圖表示細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過程，據(jù)圖回答相關(guān)問題。 （1）若a、b分別是基因型為yyRr和YYrr兩個(gè)玉米品種的花粉，且這兩對(duì)基因分別位于兩對(duì)同源染色體上?？茖W(xué)家分別將它們的花粉除去細(xì)胞壁，然后誘導(dǎo)其融合，再把這些融合細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，培育出了玉米新品種。 ①這兩個(gè)品種的花粉可用化學(xué)誘導(dǎo)劑________誘導(dǎo)融合，共可產(chǎn)生________種基因型的融合細(xì)胞（僅考慮兩兩融合），這些融合細(xì)胞經(jīng)過脫分化形成________，再經(jīng)培養(yǎng)可以得到________種不同于親本基因型的玉米新品種。 ②若想培育出基因型為yyRR的玉米植株，也可直接用yyRr植株的花粉培養(yǎng)，再經(jīng)過________處理并篩選獲得，這種方法叫做________。 （2）若a、b表示番茄和馬鈴薯兩種植物的體細(xì)胞，請(qǐng)據(jù)圖回答問題。 ①在“番茄—馬鈴薯”雜種植株的培育過程中，運(yùn)用了植物細(xì)胞工程中的________技術(shù)，植物體細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是________。 ②a、b細(xì)胞融合之前，要用到的酶是________，酶處理后得到________。 （3）若a、b分別為骨髓瘤細(xì)胞和已免疫的B淋巴細(xì)胞，請(qǐng)據(jù)圖回答問題。 ①為了能充分發(fā)揮上述兩種細(xì)胞各自的特點(diǎn)，經(jīng)特殊處理，在促細(xì)胞融合因子的作用下，兩種細(xì)胞發(fā)生融合，形成圖中的d細(xì)胞，d細(xì)胞的特點(diǎn)是____________________。 由d細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比較，具有_______________等特點(diǎn)。 ②下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解，請(qǐng)用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來：________。 高考真題 1.（xx廣東理綜，29）鐵皮石斛是我國(guó)名貴中藥，生物堿是其有效成分之一，應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖（簡(jiǎn)稱PLBs，類似愈傷組織）生產(chǎn)生物堿的實(shí)驗(yàn)流程如下。 在固體培養(yǎng)基上，PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培養(yǎng)時(shí)間的變化如下圖所示，請(qǐng)回答下列問題。 （1）選用新生營(yíng)養(yǎng)芽為外植體的原因是___________________，誘導(dǎo)外植體形成PLBs的過程稱________。 （2）與黑暗條件下相比，PLBs在光照條件下生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在________________，________________，________________。 （3）脫落酸（ABA）能提高生物堿含量，但會(huì)抑制PLBs的生長(zhǎng)。若采用液體培養(yǎng)，推測(cè)添加適量的ABA可提高生物堿產(chǎn)量。 同學(xué)們擬開展探究實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該推測(cè)，在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案時(shí)探討了以下問題： ①ABA的濃度梯度設(shè)置和添加方式：設(shè)4個(gè)ABA處理組，1個(gè)空白對(duì)照組，3次重復(fù)。因ABA受熱易分解，故一定濃度的無菌ABA母液應(yīng)在各組液體培養(yǎng)基________后按比例加入。 ②實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和取樣：實(shí)驗(yàn)50 d完成，每10 d取樣，將樣品（PLBs）稱重（g/瓶）后再測(cè)定生物堿含量。如初始（第0天）數(shù)據(jù)已知，實(shí)驗(yàn)過程中還需測(cè)定的樣品數(shù)為________。 ③依所測(cè)定數(shù)據(jù)確定適宜的ABA濃度和培養(yǎng)時(shí)間：當(dāng)某3個(gè)樣品（重復(fù)樣）的________________________時(shí)，其對(duì)應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間是適宜培養(yǎng)時(shí)間。 2.（xx全國(guó)課標(biāo)Ⅰ，40）某研究者用抗原（A）分別免疫3只同種小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測(cè)定各小鼠血清抗體的效價(jià)（能檢測(cè)出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)），結(jié)果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞（染色體數(shù)目40條），并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞（染色體數(shù)目60條）按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測(cè)，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞。 回答下列問題。 （1）制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí)，所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過______次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是________小鼠，理由是______________。 （2）細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有________________，體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是_________。 （3）雜交瘤細(xì)胞中有________個(gè)細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 （4）未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是________________。 3.（xx海南卷，31）單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV1）可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV1的單克隆抗體可快速檢測(cè)HSV1。 回答下列問題： （1）在制備抗HSV1的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV1蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗________的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了________反應(yīng)，再?gòu)男∈蟮腳_______中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的________細(xì)胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是______________。 （2）若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的_______________中使其增殖，再?gòu)腳_____________中提取、純化獲得。 （3）通過上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV1蛋白，其原因是該抗體具有________________和________________等特性。 4.（xx.重慶卷.7）（10分）xx年埃博拉病在非洲蔓延，我國(guó)派出醫(yī)療隊(duì)首次在境外組建醫(yī)院，幫助治療埃博拉疫情。 （1）研究表明，埃博拉病毒侵入機(jī)體后，通過靶向感染、破壞吞噬細(xì)胞等，使其不能暴露病毒的＿＿＿＿＿，以致感染信息不能呈遞給＿＿＿＿＿，阻止正常激活細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答過程，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)該病毒的＿＿＿＿免疫功能下降。因此，病毒在體內(nèi)快速增殖、致病。 （2）對(duì)志愿者接種埃博拉試驗(yàn)疫苗后，機(jī)體免疫系統(tǒng)能產(chǎn)生相應(yīng)抗體，還能產(chǎn)生的免疫細(xì)胞有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 （3）用埃博拉病毒的某種蛋白免疫小鼠，通過＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)獲得雜交瘤細(xì)胞，用于生產(chǎn)單克隆抗體治療該病。 5.（xx.福建卷.33）【生物-現(xiàn)代生物科技專題】（10分） GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖1所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。請(qǐng)回答： （1）在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是。 （2）構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時(shí)，需選擇圖1中的限制酶進(jìn)行酶切。 （3）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種：?jiǎn)蝹€(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切，并對(duì)酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析，結(jié)果如圖2所示。圖中第 泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。 （4）將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后，為了檢測(cè)GDNF基因是否成功表達(dá)，可用相應(yīng)的 與提取的蛋白質(zhì)雜交。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定的密度時(shí)，需進(jìn)行培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞，用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn)。