《酵母細胞的固定化》學案

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1、江蘇省睢寧高級中學 高二生物學習單 酵母細胞的固定化 學習目標: 1.說出固定化酶和固定化細胞的作用、原理和方法。 2 .嘗試制備固定化酵母細胞, 并利用固定化酵母細胞進行酒精發(fā)酵。 學習重點:制備固定化酵母細胞。 學習難點: 制備固定化酵母細胞。 學講過程 一、固定化酶的應(yīng)用實例( P49) 1、高果糖漿是指 。 2、能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖的酶是 。使用固定化酶技術(shù),將這 種酶固定在一種 上,再將這些酶顆粒裝到一個反應(yīng)柱內(nèi), 柱子底 端裝上分布著許多小孔的 。酶顆粒無法通過篩板的 ,而 卻可以自由出入。生產(chǎn)過程

2、中,將葡萄糖溶液從反應(yīng)柱的上端注入,使 葡萄糖溶液流過反應(yīng)柱,與 接觸,轉(zhuǎn)化成果糖,從反應(yīng)柱 的下端流出。反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年,大大降低了生產(chǎn)成本,提高了果糖的 產(chǎn)量和質(zhì)量。 二、固定化細胞技術(shù)( P50) 1、固定化酶和固定化細胞是利用 或 方法將酶或細胞固定在一 定空間內(nèi)的技術(shù),包括 、 和 法。 2、一般來說,酶更適合采用 和 法固定,而細胞多采用 法固定化。這是因為細胞個大,而酶分子很?。粋€大的難以被 或 ,而個小的酶容易從 中漏出。 3、包埋法法固定化細胞即將微生物細胞 包埋在不溶于水的 中。 常用的載體有 、 、

3、、 和 等。 【質(zhì)疑拓展】 〖思考 1〗對固定酶的作用影響較小的固定方法是什么? 〖思考 2〗將谷氨酸棒狀桿菌生產(chǎn)谷氨酸的發(fā)酵過程變?yōu)檫B續(xù)的酶反應(yīng),應(yīng)當固 定( );若將蛋白質(zhì)變成氨基酸, 應(yīng)當固定( )。 【合作探究】 三、實驗操作 ( 一) 制備固定化酵母細胞( P50) 制備固定化酵母細胞需要的材料是 、 和 1. 酵母菌的活化 活化就是處于 狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。 2. 配制物質(zhì)的量嘗試為 0.05mol/L 的 Cacl 2 溶液 3. 配制海藻酸鈉溶液

4、1 江蘇省睢寧高級中學 高二生物學習單 加熱溶化海藻酸鈉時要注意: 4. 海藻酸鈉溶液與酵母菌細胞混合 5. 固定化酵母細胞 以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的 溶液中, 并浸泡 ( 時間)。 ( 二) 用固定化酵母細胞(凝膠珠)發(fā)酵 1. 將固定好的酵母細胞用 沖洗 2-3 次。 2. 發(fā)酵時的溫度就為 ,時間 。 【質(zhì)疑拓展】 〖思考 3〗加熱溶化海藻酸鈉時微火加熱并不斷攪拌的目的是什么? 〖思考 4〗為什么要海藻酸鈉溶液冷卻后才能加入酵母細胞? 〖思考 5〗發(fā)酵過程中錐形瓶

5、為什么要密封? 〖思考 6〗錐形瓶中的氣泡和酒精是怎樣形成的? 〖思考 7〗在利用固定化酶或固定化細胞進行生產(chǎn)的過程中,需要無菌操作嗎? 四、結(jié)果分析與評價 1. 觀察凝膠珠的顏色和形狀 如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色,說明海藻酸鈉的濃度偏低,固定的酵母細胞數(shù)目較少; 如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形,則說明海藻酸鈉的濃度偏高,制作失敗,需要再作嘗試。 2. 觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液 利用固定的酵母細胞發(fā)酵產(chǎn)生酒精,可以看到產(chǎn)生了很多 ,同時會 聞到 。 鞏固練習 1、使用固定化細胞的優(yōu)點是 ( )

6、 A. 能催化大分子物質(zhì)的水解 B.可催化一系列化學反應(yīng) C. 與反應(yīng)物易接近 D .有利于酶在細胞外發(fā)揮作用 2、酶的固定方法不包括 ( ) A. 將酶吸附在固體表面上 B .將酶相互連接起來 C .將酶包埋在細微網(wǎng)格里 D. 將酶制成固體酶制劑,如加酶洗衣粉中的酶 3、下列關(guān)于酶制劑的敘述錯誤的是 ( ) A .酶制劑是包含酶的制品 B .包內(nèi)酶和包外酶均可用于制成酶制品 2 江蘇省睢寧高級中學 高二生物學習單 C .酶制品的生產(chǎn)包括酶的生產(chǎn)、提取、分離純化和固定化等 D .固定化細胞不屬于酶制劑

7、 4、如果反應(yīng)物是大分子物質(zhì),采用那種方法催化受限制 ( ) A .直接使用酶 B .使用化學方法結(jié)合的酶 C .使用固定化細胞 D .使用物理吸附法固定的酶 5. 下列關(guān)于酶和細胞的固定敘述不正確的是 ( ) A . 酶分子很小,易采用包埋法 B .酶分子很小,易采用化學結(jié)合或物理吸附法固定的酶 C .細胞個大,難被吸附或結(jié)合 D .細胞易采用包埋法固定 6、關(guān)于固定化酶的敘述不正確的是 ( ) A . 既能與反應(yīng)物接觸,又能與反應(yīng)物分離 B .固定在載體上的酶可被反復(fù)利用 C .可催化一系列反應(yīng) D .酶的活

8、性和穩(wěn)定性受到限制 7、固定化細胞對酶的活性影響最小,根本原因是 ( ) A .避免了細胞破碎、酶的提取純化過程 B .固定化細胞在多種酶促反應(yīng)中連續(xù)發(fā)揮作用 C .促化反應(yīng)結(jié)束后,能被吸收和重復(fù)利用 D .細胞結(jié)構(gòu)保證了各種酶在細胞內(nèi)化學反應(yīng)中有效的發(fā)揮作用 8、關(guān)于酵母細胞活化的說法,不正確的是 ( ) A .酵母細胞活化就是由無氧呼吸變成有氧呼吸 B .活化就是讓處于休眠狀態(tài)的細胞恢復(fù)生活狀態(tài) C .酵母細胞活化所需要的時間較短 D .酵母細胞活化后體積增大 9、下列關(guān)于酶的敘述中正確的是 ( ) A .酶都提取于動

9、植物細胞 B .酶制劑能夠重復(fù)利用 C .果酒和果汁能夠用酶制劑澄清 D .酶固定后稱為酶制劑 10、對配制海藻酸鈉溶液的敘述不準確的是 ( ) A .加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要的一環(huán) B. 海藻酸鈉的濃度涉及固定化細胞的質(zhì)量 C .海藻酸鈉的濃度過高,易形成凝膠珠 D .海藻酸鈉的濃度過低,形成凝膠珠內(nèi)包埋細胞過少 11、目前,日用化工廠大量生產(chǎn)的酶制劑,其中的酶大都來自 ( ) A .化學合成 B. 動物體內(nèi) C. 植物體內(nèi) D. 微生物體 3 江蘇省睢寧高級中學 高二生物學習單

10、 12. 下圖為固定化酶的反應(yīng)柱示意圖,請據(jù)圖回答: (1) 請請在橫線上填出各標號名稱 . ① ________②_________ ③ _________ (2) 與一般酶制劑相比,固定化酶的突出優(yōu)點 是 和 固定化細胞的優(yōu)點是 (3) ③的作用是  ① ② ③ (4) 制作固定葡萄糖異構(gòu)酶所用的方式有 __________ 或 _______________。 (5) 據(jù)圖說出反應(yīng)柱的作用原理 13. 下圖是制備固定化酵母細胞實驗步驟

11、圖解,請據(jù)圖回答: 酵母細胞活化→配制 CaCl2 溶液→配置海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合→固定化酵母細胞 (1) 在_______________狀態(tài)下,微生物處于休眠狀態(tài)?;罨褪亲屘幱谛菝郀顟B(tài)的微生物恢復(fù) _________狀態(tài)?;罨皯?yīng)選擇足夠大的容器,因為酵母細 胞活化 。 (2) 影響實驗成敗的關(guān)鍵步驟是 。 (3) 如果海藻酸鈉濃度過低,形成凝膠珠包埋酵母細胞數(shù)目 。 (4) 觀察形成凝膠珠的顏色和形狀,如果顏色過淺,說明 如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形, 說明 。 (5) 制備固定化酶不宜用包埋法

12、,為什么? 4 江蘇省睢寧高級中學 高二生物學習單 參考答案 (一)能否有一種方法使酶發(fā)揮它的優(yōu)點,而沒有這些缺點? 酶既能與反應(yīng)物接觸, 又能與產(chǎn)物分離, 同時,固定在載體上的酶還可以被反復(fù)利用。 細胞中有多種酶,能否用固定化酶類似的技術(shù)來處理細胞? 成本低,操作更容易 (二)果糖含量為 42%的糖漿 葡萄糖異構(gòu)酶 顆粒狀的載體上 篩板

13、 葡萄糖異構(gòu)酶 (三)物理 化學 包埋 化學結(jié)合法 物理吸附法 化學結(jié)合法、 物理吸附法 包埋法 難以化學結(jié)合 吸附 包埋料中 均勻 多孔性載體 明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素 和聚丙烯酰胺等 (四)干酵母 CaCl 2 海藻酸鈉溶液 休眠 微火加熱并不斷攪拌,防止海藻酸南焦糊 CaCl 2 30 分鐘 25 ℃ 24h 。 思考 1 吸附法 思考2 細胞酶 思考 3 防止海藻酸南焦糊 思考 4 防止高溫殺死酵母細胞 思考 5 酵母菌的酒精發(fā)酵需要缺氧條件 思考 6 酵母菌進行無氧呼吸產(chǎn)生的。

14、 思考 7 需要。 BDDCA CDACC D 12、答案: (1)反應(yīng)柱; 固定化酶; 分布著小孔的篩板 (2)既能與反應(yīng)物接觸,又能與反應(yīng)物分離; 能被反復(fù)利用,成本更低,操作更容易 (3)酶顆粒無法通過篩板上的小孔,反應(yīng)溶液可自由出入。 (4)將酶相互連接起來;將酶吸附在載體表面上 (5)反應(yīng)物溶液從反應(yīng)柱上端注入,使反應(yīng)物溶液流過反應(yīng)柱,與固定化酶接觸,得到產(chǎn)物,從反應(yīng)柱下端流出。 13、答案: (1)缺水; 正常生活狀態(tài); 體積增大 (2)配制海藻酸鈉溶液; (3) 少 (4)固定化酵母細胞數(shù)目較少; 海藻

15、酸鈉濃度偏高,制作失敗 (5)因為酶分子很小,容易從包埋材料中露出 5 江蘇省睢寧高級中學 高二生物學習單 參考答案 (五)能否有一種方法使酶發(fā)揮它的優(yōu)點,而沒有這些缺點? 酶既能與反應(yīng)物接觸, 又能與產(chǎn)物分離, 同時,固定在載體上的酶還可以被反復(fù)利用。 細胞中有多種酶,能否用固定化酶類似的技術(shù)來處理細胞? 成本低,操作更容易 (六)果糖含量為 42%的糖漿 葡萄糖異構(gòu)酶 顆粒狀的載體上 篩板 葡萄糖異構(gòu)酶 (七)物理 化學 包埋 化學結(jié)合法 物理吸附法 化學結(jié)合法、 物理吸附法 包埋法 難以化

16、學結(jié)合 吸附 包埋料中 均勻 多孔性載體 明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素 和聚丙烯酰胺等 (八)干酵母 CaCl 2 海藻酸鈉溶液 休眠 微火加熱并不斷攪拌,防止海藻酸南焦糊 CaCl 2 30 分鐘 25 ℃ 24h 。 思考 1 吸附法 思考2 細胞酶 思考 3 防止海藻酸南焦糊 思考 4 防止高溫殺死酵母細胞 思考 5 酵母菌的酒精發(fā)酵需要缺氧條件 思考 6 酵母菌進行無氧呼吸產(chǎn)生的。 思考 7 需要。 BDDCA CDACC D 14、答案: (1)反應(yīng)柱; 固定化酶; 分布著小孔的篩板 (2)既能與反應(yīng)物接觸,又能與反應(yīng)物分離; 能被反復(fù)利用,成本更低,操作更容易 (3)酶顆粒無法通過篩板上的小孔,反應(yīng)溶液可自由出入。 (4)將酶相互連接起來;將酶吸附在載體表面上 (5)反應(yīng)物溶液從反應(yīng)柱上端注入,使反應(yīng)物溶液流過反應(yīng)柱,與固定化酶接觸,得到產(chǎn)物,從反應(yīng)柱下端流出。 15、答案: (1)缺水; 正常生活狀態(tài); 體積增大 (2)配制海藻酸鈉溶液; (3) 少 (4)固定化酵母細胞數(shù)目較少; 海藻酸鈉濃度偏高,制作失敗 (5)因為酶分子很小,容易從包埋材料中露出 6

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