高中生物 第一章 第一、二節(jié) 工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生 基因工程的原理和技術(shù)隆課件 浙科版選修3

第一、二節(jié) 工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生 基因工程的原理和技術(shù)考綱要求考綱要求 四年考情四年考情 基因工程的誕生基因工程的誕生 20092009浙江浙江選擇題選擇題 T3T3 基因工程的原理和技術(shù)基因工程的原理和技術(shù) 20122012浙江浙江選擇題選擇題 T6T620112011浙江浙江選擇題選擇題 T6T620102010浙江浙江選擇題選擇題 T2T2一、基因工程的工具一、基因工程的工具1. 1. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶連接酶（1 1）催化圖中）催化圖中過程的酶是過程的酶是_，它識(shí)別的序，它識(shí)別的序列是列是_，切割位點(diǎn)在，切割位點(diǎn)在G G與與A A之間。之間。（2 2）催化圖中）催化圖中過程的酶是過程的酶是_，和和的特點(diǎn)是堿的特點(diǎn)是堿基可以基可以_，稱為，稱為_。2. 2. 質(zhì)粒質(zhì)粒（1 1）存在位置：位于細(xì)菌細(xì)胞）存在位置：位于細(xì)菌細(xì)胞_之外。之外。（2 2）化學(xué)成分：）化學(xué)成分：_分子。分子。（3 3）常用質(zhì)粒：大腸桿菌的質(zhì)粒，常含有）常用質(zhì)粒：大腸桿菌的質(zhì)粒，常含有_基因。基因。 限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶GAATTCGAATTCDNADNA連接酶連接酶互補(bǔ)配對(duì)互補(bǔ)配對(duì)粘性末端粘性末端擬核擬核雙鏈環(huán)狀雙鏈環(huán)狀DNADNA抗生素抗性抗生素抗性二、基因工程的基本操作步驟二、基因工程的基本操作步驟1. 1. 獲得目的基因獲得目的基因獲取獲取 已知序列：已知序列：_合成或者用合成或者用_擴(kuò)增擴(kuò)增方法方法 未知序列：從未知序列：從_中獲取中獲取2. 2. 形成重組形成重組DNADNA分子分子（1 1）用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體）用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNADNA，以產(chǎn)生相同的，以產(chǎn)生相同的_。（2 2）用）用_連接兩個(gè)切口（即相同的粘性末端），形連接兩個(gè)切口（即相同的粘性末端），形成成_分子。分子?；瘜W(xué)方法化學(xué)方法PCRPCR基因文庫基因文庫粘性末端粘性末端DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA3. 3. 將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞分子導(dǎo)入受體細(xì)胞（1 1）常用的受體細(xì)胞：）常用的受體細(xì)胞：_、枯草桿菌、酵母菌和動(dòng)植、枯草桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。物細(xì)胞等。 （2 2）導(dǎo)入方法：用）導(dǎo)入方法：用_處理大腸桿菌，可以增加大腸桿處理大腸桿菌，可以增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，使重組質(zhì)粒容易進(jìn)入。菌細(xì)胞壁的通透性，使重組質(zhì)粒容易進(jìn)入。4. 4. 篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因的表達(dá)篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因的表達(dá)（1 1）篩選：用含）篩選：用含_的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細(xì)胞，選擇含的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細(xì)胞，選擇含_的受體細(xì)胞。的受體細(xì)胞。（2 2）表達(dá)：目的基因在）表達(dá)：目的基因在_內(nèi)產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)。內(nèi)產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)。 大腸桿菌大腸桿菌氯化鈣氯化鈣抗生素抗生素重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒宿主細(xì)胞宿主細(xì)胞1. 1. 限制性核酸內(nèi)切酶主要是從真核生物中獲取的。（限制性核酸內(nèi)切酶主要是從真核生物中獲取的。（ ）【分析【分析】限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物中獲取的。限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物中獲取的。2. 2. 基因工程需要的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶、基因工程需要的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連接酶和連接酶和質(zhì)粒。（質(zhì)粒。（ ）【分析【分析】質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，是基因工程的工具之質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，是基因工程的工具之一，但不是工具酶，工具酶包括限制性核酸內(nèi)切酶、一，但不是工具酶，工具酶包括限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連接連接酶。酶。3. 3. 同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割不同的同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割不同的DNADNA分子，產(chǎn)生的粘性分子，產(chǎn)生的粘性末端相同。（末端相同。（ ）【分析【分析】一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別并切割一種特定的核一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別并切割一種特定的核苷酸序列，產(chǎn)生相同的粘性末端。苷酸序列，產(chǎn)生相同的粘性末端。4. DNA4. DNA連接酶的作用部位是堿基對(duì)之間的氫鍵。（連接酶的作用部位是堿基對(duì)之間的氫鍵。（ ）【分析【分析】DNADNA連接酶的作用部位是連接酶的作用部位是DNADNA中相鄰脫氧核苷酸之間的中相鄰脫氧核苷酸之間的化學(xué)鍵，堿基對(duì)之間氫鍵的形成不需要酶的催化?；瘜W(xué)鍵，堿基對(duì)之間氫鍵的形成不需要酶的催化。5. 5. 基因工程的各操作步驟中均涉及堿基互補(bǔ)配對(duì)。（基因工程的各操作步驟中均涉及堿基互補(bǔ)配對(duì)。（ ）【分析【分析】將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞不涉及堿基互補(bǔ)配對(duì)。分子導(dǎo)入受體細(xì)胞不涉及堿基互補(bǔ)配對(duì)。6.6.（20092009安徽安徽T4CT4C）質(zhì)粒上的標(biāo)記基因可以用于檢測(cè)目的基因）質(zhì)粒上的標(biāo)記基因可以用于檢測(cè)目的基因是否表達(dá)。（是否表達(dá)。（ ）【分析【分析】標(biāo)記基因可以用于檢測(cè)質(zhì)粒是否進(jìn)入受體細(xì)胞，但不標(biāo)記基因可以用于檢測(cè)質(zhì)粒是否進(jìn)入受體細(xì)胞，但不能確定目的基因是否表達(dá)。能確定目的基因是否表達(dá)。7.7.（20102010廣東廣東T22AT22A）PCRPCR技術(shù)可以用來擴(kuò)增蛋白質(zhì)。（技術(shù)可以用來擴(kuò)增蛋白質(zhì)。（ ）【分析【分析】PCRPCR技術(shù)可以用來擴(kuò)增技術(shù)可以用來擴(kuò)增DNADNA（目的基因），但不能用來（目的基因），但不能用來擴(kuò)增蛋白質(zhì)。擴(kuò)增蛋白質(zhì)?？键c(diǎn)考點(diǎn) 一一 基因工程的工具基因工程的工具1. 1. 與與DNADNA有關(guān)的幾種酶的比較有關(guān)的幾種酶的比較項(xiàng)目項(xiàng)目種類種類 作用底物作用底物 作用部位作用部位 作用結(jié)果作用結(jié)果 限 制 性 核限 制 性 核酸內(nèi)切酶酸內(nèi)切酶DNADNA分子分子兩 個(gè) 相 鄰兩 個(gè) 相 鄰脫 氧 核 苷脫 氧 核 苷酸之間酸之間形成粘性形成粘性末端末端DNADNA連接酶連接酶 DNADNA分子分子片段片段 兩 個(gè) 相 鄰兩 個(gè) 相 鄰脫 氧 核 苷脫 氧 核 苷酸之間酸之間 形成重組形成重組DNADNA分子分子 項(xiàng)目項(xiàng)目種類種類 作用底物作用底物 作用部位作用部位 作用結(jié)果作用結(jié)果 DNADNA聚合酶聚合酶脫氧核苷脫氧核苷酸酸兩個(gè)相鄰兩個(gè)相鄰脫氧核苷酸脫氧核苷酸之間之間 形成新的形成新的DNADNA分子分子 DNA(DNA(水解水解) )酶酶 DNADNA分子分子 兩個(gè)相鄰脫兩個(gè)相鄰脫氧核苷酸氧核苷酸之間之間 形成脫氧核苷酸形成脫氧核苷酸 DNADNA解旋酶解旋酶 DNADNA分子分子 堿基對(duì)間的堿基對(duì)間的氫鍵氫鍵 形成單鏈形成單鏈DNADNA分子分子 2. 2. 作為載體的條件作為載體的條件（1 1）能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。）能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。（2 2）有一個(gè)至多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶切割點(diǎn)，以便與外源基）有一個(gè)至多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶切割點(diǎn)，以便與外源基因連接。因連接。（3 3）具有特殊的標(biāo)記基因，便于篩選。）具有特殊的標(biāo)記基因，便于篩選?！靖呖季尽靖呖季尽浚? 1）限制性核酸內(nèi)切酶切割的是兩個(gè)相鄰脫氧核苷酸之間的）限制性核酸內(nèi)切酶切割的是兩個(gè)相鄰脫氧核苷酸之間的化學(xué)鍵而不是氫鍵?；瘜W(xué)鍵而不是氫鍵。 （2 2）在切割目的基因和載體時(shí)要求用同一種限制性核酸內(nèi)切）在切割目的基因和載體時(shí)要求用同一種限制性核酸內(nèi)切酶酶, ,目的是得到相同的粘性末端。目的是得到相同的粘性末端。（3 3）限制性核酸內(nèi)切酶切割位點(diǎn)應(yīng)位于標(biāo)記基因之外，不能）限制性核酸內(nèi)切酶切割位點(diǎn)應(yīng)位于標(biāo)記基因之外，不能破壞標(biāo)記基因，以便進(jìn)行檢測(cè)。破壞標(biāo)記基因，以便進(jìn)行檢測(cè)。【典例【典例1 1】（20122012浙江高考）天然的玫瑰沒有藍(lán)色花，這是浙江高考）天然的玫瑰沒有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B B，而開藍(lán)色花的矮牽牛中，而開藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因存在序列已知的基因B B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操作正確的是操作正確的是( )( )A. A. 提取矮牽牛藍(lán)色花的提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNAmRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNADNA，再擴(kuò)，再擴(kuò)增基因增基因B BB. B. 利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫中獲利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因取基因B BC. C. 利用利用DNADNA聚合酶將基因聚合酶將基因B B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D. D. 將基因?qū)⒒駼 B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞【解析【解析】選選A A。欲獲得目的基因。欲獲得目的基因B B，可先獲取矮牽牛藍(lán)色花的，可先獲取矮牽牛藍(lán)色花的mRNAmRNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的，逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNADNA，然后再經(jīng)，然后再經(jīng)PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增；基因文技術(shù)擴(kuò)增；基因文庫構(gòu)建時(shí)是將包括目的基因在內(nèi)的各種基因與載體連接起來，庫構(gòu)建時(shí)是將包括目的基因在內(nèi)的各種基因與載體連接起來，形成重組載體，再導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存和擴(kuò)增，提取目的基因時(shí)形成重組載體，再導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存和擴(kuò)增，提取目的基因時(shí)不需使用限制性核酸內(nèi)切酶；不需使用限制性核酸內(nèi)切酶；DNADNA聚合酶用于聚合酶用于DNADNA復(fù)制，不能用復(fù)制，不能用于目的基因于目的基因B B與質(zhì)粒的連接；基因與質(zhì)粒的連接；基因B B與質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒后，與質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒后，才能導(dǎo)入大腸桿菌，但大腸桿菌不能侵染玫瑰細(xì)胞。才能導(dǎo)入大腸桿菌，但大腸桿菌不能侵染玫瑰細(xì)胞?！净?dòng)探究【互動(dòng)探究】（1 1）藍(lán)色色素位于細(xì)胞的哪一結(jié)構(gòu)中？）藍(lán)色色素位于細(xì)胞的哪一結(jié)構(gòu)中？提示：提示：決定花瓣顏色的色素存在于液泡中，而葉片的顏色由葉決定花瓣顏色的色素存在于液泡中，而葉片的顏色由葉綠體中色素決定。綠體中色素決定。（2 2）擴(kuò)增基因）擴(kuò)增基因B B需用什么技術(shù)？需用什么技術(shù)？提示：提示：PCRPCR技術(shù)可以用于擴(kuò)增目的基因。技術(shù)可以用于擴(kuò)增目的基因?！咀兪接?xùn)練【變式訓(xùn)練】下列說法正確的是（下列說法正確的是（ ）A. DNAA. DNA連接酶連接的是堿基之間的氫鍵連接酶連接的是堿基之間的氫鍵B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)一定是限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)一定是GAATTCGAATTC堿基序列堿基序列C. C. 質(zhì)粒是基因工程中唯一用于運(yùn)載目的基因的載體質(zhì)粒是基因工程中唯一用于運(yùn)載目的基因的載體D. D. 目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)隨載體復(fù)制而復(fù)制目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)隨載體復(fù)制而復(fù)制【解析【解析】選選D D。DNADNA連接酶連接的是粘性末端之間的化學(xué)鍵，而連接酶連接的是粘性末端之間的化學(xué)鍵，而不是堿基之間的氫鍵，不是堿基之間的氫鍵，A A錯(cuò)誤；限制性核酸內(nèi)切酶的種類不同，錯(cuò)誤；限制性核酸內(nèi)切酶的種類不同，識(shí)別的位點(diǎn)也不相同，識(shí)別的位點(diǎn)也不相同，B B錯(cuò)誤；質(zhì)粒是最常用的載體，除此以錯(cuò)誤；質(zhì)粒是最常用的載體，除此以外，還有動(dòng)植物病毒等，外，還有動(dòng)植物病毒等，C C錯(cuò)誤；載體可自我復(fù)制，從而使目錯(cuò)誤；載體可自我復(fù)制，從而使目的基因大量復(fù)制，的基因大量復(fù)制，D D正確。正確?？键c(diǎn)考點(diǎn) 二二 基因工程的基本操作步驟基因工程的基本操作步驟1.1.獲得目的基因獲得目的基因方法一：從基因文庫中獲取。方法一：從基因文庫中獲取。方法二：化學(xué)合成（人工合成）或用方法二：化學(xué)合成（人工合成）或用PCRPCR擴(kuò)增目的基因，有兩擴(kuò)增目的基因，有兩條合成途徑：條合成途徑：（1 1）利用目的基因轉(zhuǎn)錄的）利用目的基因轉(zhuǎn)錄的RNARNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，逆轉(zhuǎn)錄，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，逆轉(zhuǎn)錄成單鏈成單鏈DNADNA，進(jìn)而用，進(jìn)而用PCRPCR擴(kuò)增目的基因。擴(kuò)增目的基因。（2 2）根據(jù)氨基酸序列，推測(cè)出相應(yīng)的）根據(jù)氨基酸序列，推測(cè)出相應(yīng)的mRNAmRNA序列，然后按照堿序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成方法，以單核苷酸為原料合成DNADNA分子。分子。2. 2. 形成重組形成重組DNADNA分子分子3. 3. 將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞分子導(dǎo)入受體細(xì)胞受體細(xì)受體細(xì)胞種類胞種類方法及操作過程方法及操作過程植物植物細(xì)胞細(xì)胞方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法過程：目的基因插入過程：目的基因插入TiTi質(zhì)粒的質(zhì)粒的DNADNA轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入植物細(xì)胞穩(wěn)定維持和表達(dá)穩(wěn)定維持和表達(dá)動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞方法：顯微注射法方法：顯微注射法過程：目的基因的表達(dá)載體提純過程：目的基因的表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫÷眩ㄊ芫眩┞眩╋@微注射顯微注射受精卵發(fā)育受精卵發(fā)育新性狀動(dòng)物新性狀動(dòng)物微生物微生物細(xì)胞細(xì)胞方法：氯化鈣處理法方法：氯化鈣處理法過程：氯化鈣處理細(xì)胞過程：氯化鈣處理細(xì)胞含目的基因的重組質(zhì)含目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入宿主細(xì)胞粒進(jìn)入宿主細(xì)胞4. 4. 篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因的表達(dá)篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因的表達(dá)【高考警示【高考警示】（1 1）由于已分化的動(dòng)物體細(xì)胞全能性難以表達(dá)，所以培育轉(zhuǎn)）由于已分化的動(dòng)物體細(xì)胞全能性難以表達(dá)，所以培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物以受精卵或胚胎干細(xì)胞為受體細(xì)胞?；騽?dòng)物以受精卵或胚胎干細(xì)胞為受體細(xì)胞。（2 2）用于）用于DNADNA分子雜交的基因探針是放射性同位素或熒光標(biāo)記分子雜交的基因探針是放射性同位素或熒光標(biāo)記的目的基因單鏈，而不是雙鏈的目的基因單鏈，而不是雙鏈DNADNA分子。分子?！镜淅镜淅? 2】如圖是將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)爰?xì)菌如圖是將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)爰?xì)菌B B細(xì)胞內(nèi)制造細(xì)胞內(nèi)制造“工程菌工程菌”的示意圖。已知細(xì)菌的示意圖。已知細(xì)菌B B細(xì)胞內(nèi)不含質(zhì)粒細(xì)胞內(nèi)不含質(zhì)粒A A，也不含質(zhì)，也不含質(zhì)粒粒A A上的基因。判斷下列說法正確的是（上的基因。判斷下列說法正確的是（ ）A. A. 將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌B B常用的方法是顯微注射法常用的方法是顯微注射法B. B. 將完成導(dǎo)入過程后的細(xì)菌涂布在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基將完成導(dǎo)入過程后的細(xì)菌涂布在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能生長(zhǎng)的只是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌上，能生長(zhǎng)的只是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌C. C. 將完成導(dǎo)入過程后的細(xì)菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，將完成導(dǎo)入過程后的細(xì)菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能生長(zhǎng)的就是導(dǎo)入了質(zhì)粒能生長(zhǎng)的就是導(dǎo)入了質(zhì)粒A A或重組質(zhì)粒的細(xì)菌或重組質(zhì)粒的細(xì)菌D. D. 目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是受體細(xì)胞能在含有氨芐青霉素目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是受體細(xì)胞能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)【解析【解析】選選C C。若導(dǎo)入了質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，由于含有抗四環(huán)。若導(dǎo)入了質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，由于含有抗四環(huán)素基因，細(xì)菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。但重組質(zhì)粒的素基因，細(xì)菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。但重組質(zhì)粒的抗氨芐青霉素基因被破壞，故轉(zhuǎn)化的細(xì)菌不能在含氨芐青霉素抗氨芐青霉素基因被破壞，故轉(zhuǎn)化的細(xì)菌不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)?！净?dòng)探究【互動(dòng)探究】（1 1）圖中哪些基因?yàn)闃?biāo)記基因？）圖中哪些基因?yàn)闃?biāo)記基因？提示：提示：抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因?？顾沫h(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。（2 2）將完成導(dǎo)入過程后的細(xì)菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，）將完成導(dǎo)入過程后的細(xì)菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能生長(zhǎng)的是否就是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌？能生長(zhǎng)的是否就是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌？提示：提示：不一定。導(dǎo)入質(zhì)粒不一定。導(dǎo)入質(zhì)粒A A和重組質(zhì)粒的細(xì)菌均含有抗四環(huán)素和重組質(zhì)粒的細(xì)菌均含有抗四環(huán)素基因，可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)?；?，可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)?！咀兪接?xùn)練【變式訓(xùn)練】下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是( )( )A. A. 目的基因的核苷酸序列都是已知的目的基因的核苷酸序列都是已知的B. B. 接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物成為一個(gè)新物種接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物成為一個(gè)新物種C. C. 可從人肝臟細(xì)胞中提取胰島素原的可從人肝臟細(xì)胞中提取胰島素原的mRNAmRNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得人胰，逆轉(zhuǎn)錄獲得人胰島素原基因島素原基因D. D. 培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)常選擇受精卵作為受體細(xì)胞培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)常選擇受精卵作為受體細(xì)胞【解析【解析】選選D D。目的基因是所需要的基因，有的目的基因的核。目的基因是所需要的基因，有的目的基因的核苷酸序列是已知的，但許多目的基因的核苷酸序列是未知的，苷酸序列是已知的，但許多目的基因的核苷酸序列是未知的，A A項(xiàng)錯(cuò)誤；接受外源基因的生物只是發(fā)生了基因重組，并未與項(xiàng)錯(cuò)誤；接受外源基因的生物只是發(fā)生了基因重組，并未與原物種產(chǎn)生生殖隔離，故并沒有成為一個(gè)新物種，原物種產(chǎn)生生殖隔離，故并沒有成為一個(gè)新物種，B B項(xiàng)錯(cuò)誤；項(xiàng)錯(cuò)誤；肝臟細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，其核基因中的人胰島素原基因不肝臟細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，其核基因中的人胰島素原基因不表達(dá)，故不可能從人肝臟細(xì)胞中提取出胰島素原的表達(dá)，故不可能從人肝臟細(xì)胞中提取出胰島素原的mRNAmRNA，C C項(xiàng)項(xiàng)錯(cuò)誤；由于動(dòng)物體細(xì)胞的全能性不易表達(dá)，所以培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)錯(cuò)誤；由于動(dòng)物體細(xì)胞的全能性不易表達(dá)，所以培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)常選擇受精卵作為受體細(xì)胞，物時(shí)常選擇受精卵作為受體細(xì)胞，D D項(xiàng)正確。項(xiàng)正確。 1.1.下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述，錯(cuò)誤的是下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述，錯(cuò)誤的是（ ）A. A. 一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列列B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響C. C. 限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別和切割限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別和切割RNARNAD. D. 限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取【解析【解析】選。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶的來源和作用特點(diǎn)。選。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶的來源和作用特點(diǎn)。限制性核酸內(nèi)切酶主要存在于微生物中，具有一般酶的特點(diǎn)：限制性核酸內(nèi)切酶主要存在于微生物中，具有一般酶的特點(diǎn)：高效性、專一性高效性、專一性( (只能切割只能切割DNA)DNA)、易受環(huán)境影響等。、易受環(huán)境影響等。2. 2. 下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是( )( )A. A. 載體上的標(biāo)記基因有利于促進(jìn)目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)載體上的標(biāo)記基因有利于促進(jìn)目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)B. B. 用逆轉(zhuǎn)錄法合成胰島素原基因時(shí)可以從胰島用逆轉(zhuǎn)錄法合成胰島素原基因時(shí)可以從胰島細(xì)胞中提取細(xì)胞中提取相關(guān)的模板相關(guān)的模板C. C. 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，引起受體細(xì)胞的變異屬于基因目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，引起受體細(xì)胞的變異屬于基因突變突變D. D. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA聚合酶是基因工程中兩類常用的聚合酶是基因工程中兩類常用的工具酶工具酶【解析【解析】選選B B。載體上的標(biāo)記基因是為了便于檢測(cè)目的基因是。載體上的標(biāo)記基因是為了便于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，引起受體細(xì)胞的否導(dǎo)入受體細(xì)胞；目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，引起受體細(xì)胞的變異屬于基因重組；基因工程中兩類常用的工具酶是限制性核變異屬于基因重組；基因工程中兩類常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶。連接酶。3. 3. 下列有關(guān)基因工程的敘述錯(cuò)誤的是下列有關(guān)基因工程的敘述錯(cuò)誤的是 ( )( )A. A. 最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒B. B. 工具酶主要有限制性核酸內(nèi)切酶和工具酶主要有限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶連接酶C. C. 該技術(shù)人為地增加了生物變異的范圍，實(shí)現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)該技術(shù)人為地增加了生物變異的范圍，實(shí)現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)的交換的交換D. D. 基本原理是基本原理是DNADNA具有雙螺旋結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達(dá)具有雙螺旋結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達(dá)方式相同方式相同【解析【解析】選選D D?；蚬こ痰幕驹硎腔蛑亟M，不同生物的?；蚬こ痰幕驹硎腔蛑亟M，不同生物的DNADNA具有相同的結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達(dá)方式相同是基因具有相同的結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達(dá)方式相同是基因工程賴以完成的基礎(chǔ)；基因工程中的工具酶是限制性核酸內(nèi)切工程賴以完成的基礎(chǔ)；基因工程中的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和酶和DNADNA連接酶，最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒；該技術(shù)可連接酶，最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒；該技術(shù)可克服生殖隔離現(xiàn)象，實(shí)現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)交換，按照人的意愿使克服生殖隔離現(xiàn)象，實(shí)現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)交換，按照人的意愿使生物發(fā)生變異。生物發(fā)生變異。4. 4. 在基因工程中用來完成基因剪接的工具是（在基因工程中用來完成基因剪接的工具是（ ）A. A. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶連接酶B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶和水解酶限制性核酸內(nèi)切酶和水解酶C. C. 限制性核酸內(nèi)切酶和載體限制性核酸內(nèi)切酶和載體 D. DNAD. DNA連接酶和載體連接酶和載體【解析【解析】選選A A。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶和。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶的有關(guān)連接酶的有關(guān)知識(shí)。解答本題的關(guān)鍵是知識(shí)。解答本題的關(guān)鍵是“剪接剪接”二字，是既剪又接。限制性二字，是既剪又接。限制性核酸內(nèi)切酶是剪切基因的核酸內(nèi)切酶是剪切基因的“剪刀剪刀”，DNADNA連接酶是將連接酶是將DNADNA末端之末端之間的縫隙間的縫隙“縫合縫合”起來的起來的“基因的針線基因的針線”。所以，剪接工具是。所以，剪接工具是限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶。連接酶。5. 5. 下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述中正確的是下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述中正確的是 （ ）A.A.重組重組DNADNA技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連接酶連接酶和載體和載體B. B. 所有的限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序所有的限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列列 C. C. 選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D. D. 只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá) 【解析【解析】選選C C。重組。重組DNADNA技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連接酶，載體不是酶；限制性核酸內(nèi)切酶具有專一性，不連接酶，載體不是酶；限制性核酸內(nèi)切酶具有專一性，不同的限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別不同的核苷酸序列；目的基因進(jìn)入同的限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別不同的核苷酸序列；目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞，不一定能夠成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)。受體細(xì)胞，不一定能夠成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)。6. 6. 通過通過DNADNA重組技術(shù)使原有基因得以改造的動(dòng)物稱為轉(zhuǎn)基因動(dòng)重組技術(shù)使原有基因得以改造的動(dòng)物稱為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。運(yùn)用這一技術(shù)可使羊奶中含有人體蛋白質(zhì)，如圖表示這一物。運(yùn)用這一技術(shù)可使羊奶中含有人體蛋白質(zhì)，如圖表示這一技術(shù)的基本過程，在該工程中所用的基因技術(shù)的基本過程，在該工程中所用的基因“剪刀剪刀”能識(shí)別的序能識(shí)別的序列和切點(diǎn)是列和切點(diǎn)是-G-GGATCC-GATCC-，請(qǐng)回答：，請(qǐng)回答：(1)(1)從羊染色體中從羊染色體中“剪下剪下”羊蛋白質(zhì)基因的酶是羊蛋白質(zhì)基因的酶是_，人體蛋白質(zhì)基因人體蛋白質(zhì)基因“插入插入”后連接在羊體細(xì)胞染色體中需要的酶后連接在羊體細(xì)胞染色體中需要的酶是是_。(2)(2)請(qǐng)畫出質(zhì)粒被切割形成粘性末端的過程圖。請(qǐng)畫出質(zhì)粒被切割形成粘性末端的過程圖。(3)(3)人體蛋白質(zhì)基因之所以能連接到羊的染色體人體蛋白質(zhì)基因之所以能連接到羊的染色體DNADNA中，原因是中，原因是_，人體蛋白質(zhì)基因?qū)胙蚣?xì)，人體蛋白質(zhì)基因?qū)胙蚣?xì)胞時(shí)常用的工具是胞時(shí)常用的工具是_。(4)(4)此過程中目的基因的檢測(cè)與表達(dá)中的表達(dá)是指此過程中目的基因的檢測(cè)與表達(dá)中的表達(dá)是指_?！窘馕觥窘馕觥浚? 1）剪下目的基因需要用限制性核酸內(nèi)切酶，與受）剪下目的基因需要用限制性核酸內(nèi)切酶，與受體體DNADNA連接需要用連接需要用DNADNA連接酶。連接酶。（2 2）首先要按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，由已知的一條鏈完成質(zhì)）首先要按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，由已知的一條鏈完成質(zhì)粒雙鏈上的堿基序列，再根據(jù)切點(diǎn)寫出切割形成的粘性末端。粒雙鏈上的堿基序列，再根據(jù)切點(diǎn)寫出切割形成的粘性末端。（3 3）要求回答基因能夠拼接的原因，不同生物的）要求回答基因能夠拼接的原因，不同生物的DNADNA化學(xué)組成化學(xué)組成和空間結(jié)構(gòu)相同，即都具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。目的和空間結(jié)構(gòu)相同，即都具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞需要先與載體結(jié)合，最常用的載體是質(zhì)粒，基因?qū)胧荏w細(xì)胞需要先與載體結(jié)合，最常用的載體是質(zhì)粒，也可以用動(dòng)物病毒。也可以用動(dòng)物病毒。（4 4）基因的表達(dá)是指基因通過控制蛋白質(zhì)的合成來控制生物）基因的表達(dá)是指基因通過控制蛋白質(zhì)的合成來控制生物的性狀，即通過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。的性狀，即通過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。答案：答案：(1)(1)限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶 DNADNA連接酶連接酶(2)(2)(3)(3)具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)( (有互補(bǔ)的堿基序列有互補(bǔ)的堿基序列) )質(zhì)?；騽?dòng)物病毒質(zhì)粒或動(dòng)物病毒(4)(4)人體蛋白質(zhì)基因在羊體細(xì)胞內(nèi)控制合成人體蛋白質(zhì)人體蛋白質(zhì)基因在羊體細(xì)胞內(nèi)控制合成人體蛋白質(zhì) 7. (20117. (2011浙江高考浙江高考) )將將adaada( (腺苷酸脫氨酶基因腺苷酸脫氨酶基因) )通過質(zhì)粒通過質(zhì)粒pET28bpET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯(cuò)誤導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯(cuò)誤的是的是( )( )A. A. 每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒B. B. 每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)C. C. 每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)至少插入一個(gè)每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)至少插入一個(gè)adaadaD. D. 每個(gè)插入的每個(gè)插入的adaada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子【解析【解析】選選C C。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中并成功表達(dá)，說明。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中并成功表達(dá)，說明大腸桿菌內(nèi)至少含有一個(gè)重組質(zhì)粒；每個(gè)重組質(zhì)粒都含有目的大腸桿菌內(nèi)至少含有一個(gè)重組質(zhì)粒；每個(gè)重組質(zhì)粒都含有目的基因基因adaada，則該重組質(zhì)粒至少含一個(gè)能被該限制性核酸內(nèi)切酶，則該重組質(zhì)粒至少含一個(gè)能被該限制性核酸內(nèi)切酶切割的位點(diǎn)；限制性核酸內(nèi)切酶具有特異性，種類不同，識(shí)別切割的位點(diǎn)；限制性核酸內(nèi)切酶具有特異性，種類不同，識(shí)別的位點(diǎn)不同，切割出的粘性末端也就不同，因此并不是每個(gè)位的位點(diǎn)不同，切割出的粘性末端也就不同，因此并不是每個(gè)位點(diǎn)都能插入點(diǎn)都能插入adaada；根據(jù)題干信息，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌成；根據(jù)題干信息，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌成功表達(dá)出腺苷酸脫氨酶，說明插入的功表達(dá)出腺苷酸脫氨酶，說明插入的adaada至少表達(dá)出一個(gè)腺苷至少表達(dá)出一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子。酸脫氨酶分子。8. (20108. (2010浙江高考浙江高考) )在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過程中，下列操作錯(cuò)誤的是因煙草過程中，下列操作錯(cuò)誤的是( )( )A. A. 用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B. B. 用用DNADNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C. C. 將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D. D. 用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞【解析【解析】選。構(gòu)建重組選。構(gòu)建重組DNADNA分子時(shí)，需用同種限制性核酸內(nèi)分子時(shí)，需用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體，再用切酶切割目的基因和載體，再用DNADNA連接酶連接形成重組連接酶連接形成重組DNADNA分分子，而煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是子，而煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是RNARNA，所以，所以A A項(xiàng)錯(cuò)誤。重組項(xiàng)錯(cuò)誤。重組DNADNA分子形成后要導(dǎo)入受體細(xì)胞分子形成后要導(dǎo)入受體細(xì)胞( (若是植物細(xì)胞，則可導(dǎo)入其原若是植物細(xì)胞，則可導(dǎo)入其原生質(zhì)體生質(zhì)體) )，若導(dǎo)入的受體細(xì)胞是體細(xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)可獲得轉(zhuǎn)，若導(dǎo)入的受體細(xì)胞是體細(xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)可獲得轉(zhuǎn)基因植物。目的基因?yàn)榭钩輨┗颍晕闯晒?dǎo)入目的基基因植物。目的基因?yàn)榭钩輨┗颍晕闯晒?dǎo)入目的基因的細(xì)胞不具有抗除草劑的能力，可用含除草劑的培養(yǎng)基篩選因的細(xì)胞不具有抗除草劑的能力，可用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞。轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞。9.9.（20092009浙江高考）下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是浙江高考）下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是( )( )A. A. 目的基因和受體細(xì)胞均可來自動(dòng)、植物或微生物目的基因和受體細(xì)胞均可來自動(dòng)、植物或微生物B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶是兩類常用的工具酶連接酶是兩類常用的工具酶C. C. 人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性D. D. 載體上的抗性基因有利于篩選含重組載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNADNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)基因的表達(dá)【解析【解析】選選D D。由于大腸桿菌中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞。由于大腸桿菌中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，在核糖體上合成的蛋白質(zhì)不能進(jìn)行肽鏈的折疊等加工程序，器，在核糖體上合成的蛋白質(zhì)不能進(jìn)行肽鏈的折疊等加工程序，因此人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性。因此人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性。載體上的抗性基因有利于篩選含重組載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNADNA的細(xì)胞，但它和目的的細(xì)胞，但它和目的基因是相互獨(dú)立的，不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。基因是相互獨(dú)立的，不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。10. 10. （20102010江蘇高考）下表中列出了幾種限制酶（限制性核江蘇高考）下表中列出了幾種限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖酸內(nèi)切酶）識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1 1、圖、圖2 2中箭頭表示相關(guān)中箭頭表示相關(guān)限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題：限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題：（1 1）一個(gè)圖）一個(gè)圖1 1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaSma切割前后，分別含有切割前后，分別含有_個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。（2 2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaSma酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越粒的熱穩(wěn)定性越_。（3 3）用圖中的質(zhì)粒和外源）用圖中的質(zhì)粒和外源DNADNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaSma切割，原因是切割，原因是_。（4 4）與只使用）與只使用EcoREcoR相比較，使用相比較，使用BamHBamH和和Hind Hind 兩種限制兩種限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）同時(shí)處理質(zhì)粒、外源酶（限制性核酸內(nèi)切酶）同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNADNA的優(yōu)點(diǎn)在于的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止可以防止_。（5 5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入合，并加入_酶。酶。（6 6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了_。（7 7）為了從）為了從cDNAcDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在_的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)。的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)?！窘馕觥窘馕觥浚? 1）質(zhì)粒切割前是雙鏈環(huán)狀）質(zhì)粒切割前是雙鏈環(huán)狀DNADNA分子，所有磷酸基團(tuán)分子，所有磷酸基團(tuán)參與形成磷酸二酯鍵，故不含游離的磷酸基團(tuán)。從圖參與形成磷酸二酯鍵，故不含游離的磷酸基團(tuán)。從圖1 1可以看可以看出，質(zhì)粒上只含有一個(gè)出，質(zhì)粒上只含有一個(gè)SmaSma的切點(diǎn)，因此被該酶切割后，質(zhì)的切點(diǎn)，因此被該酶切割后，質(zhì)粒變?yōu)榫€性雙鏈粒變?yōu)榫€性雙鏈DNADNA分子，因每條鏈上含有一個(gè)游離的磷酸基分子，因每條鏈上含有一個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，因此切割后含有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。團(tuán)，因此切割后含有兩個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。（2 2）由題目可知，）由題目可知，SmaSma識(shí)別的識(shí)別的DNADNA序列只有序列只有G G和和C C，而，而G G和和C C之之間可以形成三個(gè)氫鍵，間可以形成三個(gè)氫鍵，A A和和T T之間可以形成二個(gè)氫鍵，所以之間可以形成二個(gè)氫鍵，所以SmaSma酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性就越高。酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性就越高。（3 3）質(zhì)粒抗生素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，標(biāo)記基因和外源）質(zhì)?？股乜剐曰?yàn)闃?biāo)記基因，標(biāo)記基因和外源DNADNA目目的基因中均含有的基因中均含有SmaSma酶切位點(diǎn)，都可以被酶切位點(diǎn)，都可以被SmaSma破壞，故不能破壞，故不能使用該酶剪切質(zhì)粒及含有目的基因的使用該酶剪切質(zhì)粒及含有目的基因的DNADNA。（4 4）只使用）只使用EcoREcoR，則質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端相同，則質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端相同，用連接酶連接時(shí)，會(huì)產(chǎn)生質(zhì)粒和目的基因自身連接物，而利用用連接酶連接時(shí)，會(huì)產(chǎn)生質(zhì)粒和目的基因自身連接物，而利用BamHBamH和和Hind Hind 剪切時(shí)，質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端不剪切時(shí)，質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端不同，用同，用DNADNA連接酶連接時(shí)，不會(huì)產(chǎn)生自身連接產(chǎn)物。連接酶連接時(shí)，不會(huì)產(chǎn)生自身連接產(chǎn)物。（5 5）質(zhì)粒和目的基因連接后獲得重組質(zhì)粒，該過程需要）質(zhì)粒和目的基因連接后獲得重組質(zhì)粒，該過程需要DNADNA連連接酶作用，故混合后加入接酶作用，故混合后加入DNADNA連接酶。連接酶。（6 6）質(zhì)粒上的抗生素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，用于鑒別和篩選）質(zhì)粒上的抗生素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，用于鑒別和篩選含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的受體細(xì)胞。含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的受體細(xì)胞。（7 7）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體后，）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體后，含有重組質(zhì)粒的個(gè)體才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作為唯一含有重組質(zhì)粒的個(gè)體才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作為唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細(xì)胞，含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞才能存活，碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細(xì)胞，含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞才能存活，不含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞因不能獲得碳源而死亡，從而達(dá)到篩選不含有重組質(zhì)粒的細(xì)胞因不能獲得碳源而死亡，從而達(dá)到篩選目的。目的。答案：答案：（1 1）0 0、2 2 （2 2）高）高（3 3）SmaSma會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNADNA中的目的基因中的目的基因（4 4）質(zhì)粒和含目的基因的外源）質(zhì)粒和含目的基因的外源DNADNA片段自身環(huán)化片段自身環(huán)化（5 5）DNADNA連接連接（6 6）鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞）鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞（7 7）蔗糖為唯一含碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）蔗糖為唯一含碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)