高中生物 第一章 第一、二節(jié) 工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生 基因工程的原理和技術(shù)隆課件 浙科版選修3

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1、第一、二節(jié) 工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生 基因工程的原理和技術(shù)考綱要求考綱要求 四年考情四年考情 基因工程的誕生基因工程的誕生 20092009浙江浙江選擇題選擇題 T3T3 基因工程的原理和技術(shù)基因工程的原理和技術(shù) 20122012浙江浙江選擇題選擇題 T6T620112011浙江浙江選擇題選擇題 T6T620102010浙江浙江選擇題選擇題 T2T2一、基因工程的工具一、基因工程的工具1. 1. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶連接酶（1 1）催化圖中）催化圖中過程的酶是過程的酶是_，它識別的序，它識別的序列是列是_，切割位點在，切割位點在G G與與A A之間。之間。

2、（2 2）催化圖中）催化圖中過程的酶是過程的酶是_，和和的特點是堿的特點是堿基可以基可以_，稱為，稱為_。2. 2. 質(zhì)粒質(zhì)粒（1 1）存在位置：位于細菌細胞）存在位置：位于細菌細胞_之外。之外。（2 2）化學(xué)成分：）化學(xué)成分：_分子。分子。（3 3）常用質(zhì)粒：大腸桿菌的質(zhì)粒，常含有）常用質(zhì)粒：大腸桿菌的質(zhì)粒，常含有_基因。基因。 限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶GAATTCGAATTCDNADNA連接酶連接酶互補配對互補配對粘性末端粘性末端擬核擬核雙鏈環(huán)狀雙鏈環(huán)狀DNADNA抗生素抗性抗生素抗性二、基因工程的基本操作步驟二、基因工程的基本操作步驟1. 1. 獲得目的基因獲得目的基因獲取獲取

3、已知序列：已知序列：_合成或者用合成或者用_擴增擴增方法方法 未知序列：從未知序列：從_中獲取中獲取2. 2. 形成重組形成重組DNADNA分子分子（1 1）用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體）用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNADNA，以產(chǎn)生相同的，以產(chǎn)生相同的_。（2 2）用）用_連接兩個切口（即相同的粘性末端），形連接兩個切口（即相同的粘性末端），形成成_分子。分子?；瘜W(xué)方法化學(xué)方法PCRPCR基因文庫基因文庫粘性末端粘性末端DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA3. 3. 將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細胞分子導(dǎo)入受體細胞（1 1）常用的受體細胞

4、：）常用的受體細胞：_、枯草桿菌、酵母菌和動植、枯草桿菌、酵母菌和動植物細胞等。物細胞等。 （2 2）導(dǎo)入方法：用）導(dǎo)入方法：用_處理大腸桿菌，可以增加大腸桿處理大腸桿菌，可以增加大腸桿菌細胞壁的通透性，使重組質(zhì)粒容易進入。菌細胞壁的通透性，使重組質(zhì)粒容易進入。4. 4. 篩選含有目的基因的受體細胞和目的基因的表達篩選含有目的基因的受體細胞和目的基因的表達（1 1）篩選：用含）篩選：用含_的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細胞，選擇含的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細胞，選擇含_的受體細胞。的受體細胞。（2 2）表達：目的基因在）表達：目的基因在_內(nèi)產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)。內(nèi)產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)。 大腸桿菌大腸桿菌氯化鈣氯化

5、鈣抗生素抗生素重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒宿主細胞宿主細胞1. 1. 限制性核酸內(nèi)切酶主要是從真核生物中獲取的。（限制性核酸內(nèi)切酶主要是從真核生物中獲取的。（ ）【分析【分析】限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物中獲取的。限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物中獲取的。2. 2. 基因工程需要的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶、基因工程需要的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連接酶和連接酶和質(zhì)粒。（質(zhì)粒。（ ）【分析【分析】質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，是基因工程的工具之質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，是基因工程的工具之一，但不是工具酶，工具酶包括限制性核酸內(nèi)切酶、一，但不是工具酶，工具酶包括限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連

6、接連接酶。酶。3. 3. 同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割不同的同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割不同的DNADNA分子，產(chǎn)生的粘性分子，產(chǎn)生的粘性末端相同。（末端相同。（ ）【分析【分析】一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識別并切割一種特定的核一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識別并切割一種特定的核苷酸序列，產(chǎn)生相同的粘性末端。苷酸序列，產(chǎn)生相同的粘性末端。4. DNA4. DNA連接酶的作用部位是堿基對之間的氫鍵。（連接酶的作用部位是堿基對之間的氫鍵。（ ）【分析【分析】DNADNA連接酶的作用部位是連接酶的作用部位是DNADNA中相鄰脫氧核苷酸之間的中相鄰脫氧核苷酸之間的化學(xué)鍵，堿基對之間氫鍵的形成不需要酶的催化?；瘜W(xué)鍵

7、，堿基對之間氫鍵的形成不需要酶的催化。5. 5. 基因工程的各操作步驟中均涉及堿基互補配對。（基因工程的各操作步驟中均涉及堿基互補配對。（ ）【分析【分析】將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細胞不涉及堿基互補配對。分子導(dǎo)入受體細胞不涉及堿基互補配對。6.6.（20092009安徽安徽T4CT4C）質(zhì)粒上的標(biāo)記基因可以用于檢測目的基因）質(zhì)粒上的標(biāo)記基因可以用于檢測目的基因是否表達。（是否表達。（ ）【分析【分析】標(biāo)記基因可以用于檢測質(zhì)粒是否進入受體細胞，但不標(biāo)記基因可以用于檢測質(zhì)粒是否進入受體細胞，但不能確定目的基因是否表達。能確定目的基因是否表達。7.7.（20102010廣東廣東T22AT

8、22A）PCRPCR技術(shù)可以用來擴增蛋白質(zhì)。（技術(shù)可以用來擴增蛋白質(zhì)。（ ）【分析【分析】PCRPCR技術(shù)可以用來擴增技術(shù)可以用來擴增DNADNA（目的基因），但不能用來（目的基因），但不能用來擴增蛋白質(zhì)。擴增蛋白質(zhì)。考點考點 一一 基因工程的工具基因工程的工具1. 1. 與與DNADNA有關(guān)的幾種酶的比較有關(guān)的幾種酶的比較項目項目種類種類 作用底物作用底物 作用部位作用部位 作用結(jié)果作用結(jié)果 限 制 性 核限 制 性 核酸內(nèi)切酶酸內(nèi)切酶DNADNA分子分子兩 個 相 鄰兩 個 相 鄰脫 氧 核 苷脫 氧 核 苷酸之間酸之間形成粘性形成粘性末端末端DNADNA連接酶連接酶 DNADNA分子分子

9、片段片段 兩 個 相 鄰兩 個 相 鄰脫 氧 核 苷脫 氧 核 苷酸之間酸之間 形成重組形成重組DNADNA分子分子 項目項目種類種類 作用底物作用底物 作用部位作用部位 作用結(jié)果作用結(jié)果 DNADNA聚合酶聚合酶脫氧核苷脫氧核苷酸酸兩個相鄰兩個相鄰脫氧核苷酸脫氧核苷酸之間之間 形成新的形成新的DNADNA分子分子 DNA(DNA(水解水解) )酶酶 DNADNA分子分子 兩個相鄰脫兩個相鄰脫氧核苷酸氧核苷酸之間之間 形成脫氧核苷酸形成脫氧核苷酸 DNADNA解旋酶解旋酶 DNADNA分子分子 堿基對間的堿基對間的氫鍵氫鍵 形成單鏈形成單鏈DNADNA分子分子 2. 2. 作為載體的條件作為載

10、體的條件（1 1）能在宿主細胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。）能在宿主細胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。（2 2）有一個至多個限制性核酸內(nèi)切酶切割點，以便與外源基）有一個至多個限制性核酸內(nèi)切酶切割點，以便與外源基因連接。因連接。（3 3）具有特殊的標(biāo)記基因，便于篩選。）具有特殊的標(biāo)記基因，便于篩選?！靖呖季尽靖呖季尽浚? 1）限制性核酸內(nèi)切酶切割的是兩個相鄰脫氧核苷酸之間的）限制性核酸內(nèi)切酶切割的是兩個相鄰脫氧核苷酸之間的化學(xué)鍵而不是氫鍵?；瘜W(xué)鍵而不是氫鍵。 （2 2）在切割目的基因和載體時要求用同一種限制性核酸內(nèi)切）在切割目的基因和載體時要求用同一種限制性核酸內(nèi)切酶酶, ,目的是得到相同的粘性末端。目的

11、是得到相同的粘性末端。（3 3）限制性核酸內(nèi)切酶切割位點應(yīng)位于標(biāo)記基因之外，不能）限制性核酸內(nèi)切酶切割位點應(yīng)位于標(biāo)記基因之外，不能破壞標(biāo)記基因，以便進行檢測。破壞標(biāo)記基因，以便進行檢測。【典例【典例1 1】（20122012浙江高考）天然的玫瑰沒有藍色花，這是浙江高考）天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因由于缺少控制藍色色素合成的基因B B，而開藍色花的矮牽牛中，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因存在序列已知的基因B B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍玫瑰，下列。現(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍玫瑰，下列操作正確的是操作正確的是( )( )A. A. 提取矮牽牛藍色花的提取矮牽牛藍色花的

12、mRNAmRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補的，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補的DNADNA，再擴，再擴增基因增基因B BB. B. 利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因取基因B BC. C. 利用利用DNADNA聚合酶將基因聚合酶將基因B B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細胞與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細胞D. D. 將基因?qū)⒒駼 B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細胞直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細胞【解析【解析】選選A A。欲獲得目的基因。欲獲得目的基因B B，可先獲取矮牽牛藍色花的，可先獲取矮牽牛藍色花的mRNAmRNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得互補的，逆轉(zhuǎn)錄

13、獲得互補的DNADNA，然后再經(jīng)，然后再經(jīng)PCRPCR技術(shù)擴增；基因文技術(shù)擴增；基因文庫構(gòu)建時是將包括目的基因在內(nèi)的各種基因與載體連接起來，庫構(gòu)建時是將包括目的基因在內(nèi)的各種基因與載體連接起來，形成重組載體，再導(dǎo)入受體菌中儲存和擴增，提取目的基因時形成重組載體，再導(dǎo)入受體菌中儲存和擴增，提取目的基因時不需使用限制性核酸內(nèi)切酶；不需使用限制性核酸內(nèi)切酶；DNADNA聚合酶用于聚合酶用于DNADNA復(fù)制，不能用復(fù)制，不能用于目的基因于目的基因B B與質(zhì)粒的連接；基因與質(zhì)粒的連接；基因B B與質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒后，與質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒后，才能導(dǎo)入大腸桿菌，但大腸桿菌不能侵染玫瑰細胞。才能導(dǎo)入大腸

14、桿菌，但大腸桿菌不能侵染玫瑰細胞?！净犹骄俊净犹骄俊浚? 1）藍色色素位于細胞的哪一結(jié)構(gòu)中？）藍色色素位于細胞的哪一結(jié)構(gòu)中？提示：提示：決定花瓣顏色的色素存在于液泡中，而葉片的顏色由葉決定花瓣顏色的色素存在于液泡中，而葉片的顏色由葉綠體中色素決定。綠體中色素決定。（2 2）擴增基因）擴增基因B B需用什么技術(shù)？需用什么技術(shù)？提示：提示：PCRPCR技術(shù)可以用于擴增目的基因。技術(shù)可以用于擴增目的基因。【變式訓(xùn)練【變式訓(xùn)練】下列說法正確的是（下列說法正確的是（ ）A. DNAA. DNA連接酶連接的是堿基之間的氫鍵連接酶連接的是堿基之間的氫鍵B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點一定是限制性核

15、酸內(nèi)切酶的識別位點一定是GAATTCGAATTC堿基序列堿基序列C. C. 質(zhì)粒是基因工程中唯一用于運載目的基因的載體質(zhì)粒是基因工程中唯一用于運載目的基因的載體D. D. 目的基因在宿主細胞內(nèi)隨載體復(fù)制而復(fù)制目的基因在宿主細胞內(nèi)隨載體復(fù)制而復(fù)制【解析【解析】選選D D。DNADNA連接酶連接的是粘性末端之間的化學(xué)鍵，而連接酶連接的是粘性末端之間的化學(xué)鍵，而不是堿基之間的氫鍵，不是堿基之間的氫鍵，A A錯誤；限制性核酸內(nèi)切酶的種類不同，錯誤；限制性核酸內(nèi)切酶的種類不同，識別的位點也不相同，識別的位點也不相同，B B錯誤；質(zhì)粒是最常用的載體，除此以錯誤；質(zhì)粒是最常用的載體，除此以外，還有動植物病毒

16、等，外，還有動植物病毒等，C C錯誤；載體可自我復(fù)制，從而使目錯誤；載體可自我復(fù)制，從而使目的基因大量復(fù)制，的基因大量復(fù)制，D D正確。正確?？键c考點 二二 基因工程的基本操作步驟基因工程的基本操作步驟1.1.獲得目的基因獲得目的基因方法一：從基因文庫中獲取。方法一：從基因文庫中獲取。方法二：化學(xué)合成（人工合成）或用方法二：化學(xué)合成（人工合成）或用PCRPCR擴增目的基因，有兩擴增目的基因，有兩條合成途徑：條合成途徑：（1 1）利用目的基因轉(zhuǎn)錄的）利用目的基因轉(zhuǎn)錄的RNARNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，逆轉(zhuǎn)錄，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，逆轉(zhuǎn)錄成單鏈成單鏈DNADNA，進而用，進而用PCRPCR擴增目的基

17、因。擴增目的基因。（2 2）根據(jù)氨基酸序列，推測出相應(yīng)的）根據(jù)氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNAmRNA序列，然后按照堿序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)基互補配對原則，推測出結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成方法，以單核苷酸為原料合成DNADNA分子。分子。2. 2. 形成重組形成重組DNADNA分子分子3. 3. 將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細胞分子導(dǎo)入受體細胞受體細受體細胞種類胞種類方法及操作過程方法及操作過程植物植物細胞細胞方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法過程：目的基因插入過程：目的基因插入TiTi質(zhì)粒的質(zhì)粒的DNA

18、DNA轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細胞導(dǎo)入植物細胞穩(wěn)定維持和表達穩(wěn)定維持和表達動物動物細胞細胞方法：顯微注射法方法：顯微注射法過程：目的基因的表達載體提純過程：目的基因的表達載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫÷眩ㄊ芫眩┞眩╋@微注射顯微注射受精卵發(fā)育受精卵發(fā)育新性狀動物新性狀動物微生物微生物細胞細胞方法：氯化鈣處理法方法：氯化鈣處理法過程：氯化鈣處理細胞過程：氯化鈣處理細胞含目的基因的重組質(zhì)含目的基因的重組質(zhì)粒進入宿主細胞粒進入宿主細胞4. 4. 篩選含有目的基因的受體細胞和目的基因的表達篩選含有目的基因的受體細胞和目的基因的表達【高考警示【高考警示】（1 1）由于已分化的動物體細胞全能性難以表達，所以培育

19、轉(zhuǎn)）由于已分化的動物體細胞全能性難以表達，所以培育轉(zhuǎn)基因動物以受精卵或胚胎干細胞為受體細胞。基因動物以受精卵或胚胎干細胞為受體細胞。（2 2）用于）用于DNADNA分子雜交的基因探針是放射性同位素或熒光標(biāo)記分子雜交的基因探針是放射性同位素或熒光標(biāo)記的目的基因單鏈，而不是雙鏈的目的基因單鏈，而不是雙鏈DNADNA分子。分子?！镜淅镜淅? 2】如圖是將人的生長激素基因?qū)爰毦鐖D是將人的生長激素基因?qū)爰毦鶥 B細胞內(nèi)制造細胞內(nèi)制造“工程菌工程菌”的示意圖。已知細菌的示意圖。已知細菌B B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A A，也不含質(zhì)，也不含質(zhì)粒粒A A上的基因。判斷下列說法正確的是（上的基因。判

20、斷下列說法正確的是（ ）A. A. 將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細菌將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細菌B B常用的方法是顯微注射法常用的方法是顯微注射法B. B. 將完成導(dǎo)入過程后的細菌涂布在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基將完成導(dǎo)入過程后的細菌涂布在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能生長的只是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細菌上，能生長的只是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細菌C. C. 將完成導(dǎo)入過程后的細菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，將完成導(dǎo)入過程后的細菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能生長的就是導(dǎo)入了質(zhì)粒能生長的就是導(dǎo)入了質(zhì)粒A A或重組質(zhì)粒的細菌或重組質(zhì)粒的細菌D. D. 目的基因成功表達的標(biāo)志是受體細胞能在含有氨芐青霉素目的基因成功表達的標(biāo)志是受體細胞能在含

21、有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長的培養(yǎng)基上生長【解析【解析】選選C C。若導(dǎo)入了質(zhì)粒或重組質(zhì)粒，由于含有抗四環(huán)。若導(dǎo)入了質(zhì)粒或重組質(zhì)粒，由于含有抗四環(huán)素基因，細菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長。但重組質(zhì)粒的素基因，細菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長。但重組質(zhì)粒的抗氨芐青霉素基因被破壞，故轉(zhuǎn)化的細菌不能在含氨芐青霉素抗氨芐青霉素基因被破壞，故轉(zhuǎn)化的細菌不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長。的培養(yǎng)基上生長。【互動探究【互動探究】（1 1）圖中哪些基因為標(biāo)記基因？）圖中哪些基因為標(biāo)記基因？提示：提示：抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因?？顾沫h(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。（2 2）將完成導(dǎo)入過程后的細菌涂布在含有四環(huán)素的

22、培養(yǎng)基上，）將完成導(dǎo)入過程后的細菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能生長的是否就是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細菌？能生長的是否就是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細菌？提示：提示：不一定。導(dǎo)入質(zhì)粒不一定。導(dǎo)入質(zhì)粒A A和重組質(zhì)粒的細菌均含有抗四環(huán)素和重組質(zhì)粒的細菌均含有抗四環(huán)素基因，可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長?；?，可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長。【變式訓(xùn)練【變式訓(xùn)練】下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是( )( )A. A. 目的基因的核苷酸序列都是已知的目的基因的核苷酸序列都是已知的B. B. 接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物成為一個新物種接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物成為一個新物種C. C. 可從人

23、肝臟細胞中提取胰島素原的可從人肝臟細胞中提取胰島素原的mRNAmRNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得人胰，逆轉(zhuǎn)錄獲得人胰島素原基因島素原基因D. D. 培育轉(zhuǎn)基因動物時常選擇受精卵作為受體細胞培育轉(zhuǎn)基因動物時常選擇受精卵作為受體細胞【解析【解析】選選D D。目的基因是所需要的基因，有的目的基因的核。目的基因是所需要的基因，有的目的基因的核苷酸序列是已知的，但許多目的基因的核苷酸序列是未知的，苷酸序列是已知的，但許多目的基因的核苷酸序列是未知的，A A項錯誤；接受外源基因的生物只是發(fā)生了基因重組，并未與項錯誤；接受外源基因的生物只是發(fā)生了基因重組，并未與原物種產(chǎn)生生殖隔離，故并沒有成為一個新物種，原物種產(chǎn)生生殖隔

24、離，故并沒有成為一個新物種，B B項錯誤；項錯誤；肝臟細胞是高度分化的細胞，其核基因中的人胰島素原基因不肝臟細胞是高度分化的細胞，其核基因中的人胰島素原基因不表達，故不可能從人肝臟細胞中提取出胰島素原的表達，故不可能從人肝臟細胞中提取出胰島素原的mRNAmRNA，C C項項錯誤；由于動物體細胞的全能性不易表達，所以培育轉(zhuǎn)基因動錯誤；由于動物體細胞的全能性不易表達，所以培育轉(zhuǎn)基因動物時常選擇受精卵作為受體細胞，物時常選擇受精卵作為受體細胞，D D項正確。項正確。 1.1.下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述，錯誤的是下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述，錯誤的是（ ）A. A. 一種限制

25、性核酸內(nèi)切酶只能識別一種特定的脫氧核苷酸序一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識別一種特定的脫氧核苷酸序列列B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響C. C. 限制性核酸內(nèi)切酶能識別和切割限制性核酸內(nèi)切酶能識別和切割RNARNAD. D. 限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取【解析【解析】選。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶的來源和作用特點。選。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶的來源和作用特點。限制性核酸內(nèi)切酶主要存在于微生物中，具有一般酶的特點：限制性核酸內(nèi)切酶主要存在于微生物中，具有一般酶的特點：高效性、專一性高效性、專一性( (只能切割只能切割DN

26、A)DNA)、易受環(huán)境影響等。、易受環(huán)境影響等。2. 2. 下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是( )( )A. A. 載體上的標(biāo)記基因有利于促進目的基因在受體細胞中表達載體上的標(biāo)記基因有利于促進目的基因在受體細胞中表達B. B. 用逆轉(zhuǎn)錄法合成胰島素原基因時可以從胰島用逆轉(zhuǎn)錄法合成胰島素原基因時可以從胰島細胞中提取細胞中提取相關(guān)的模板相關(guān)的模板C. C. 目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的變異屬于基因目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的變異屬于基因突變突變D. D. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA聚合酶是基因工程中兩類常用的聚合酶是基因工程

27、中兩類常用的工具酶工具酶【解析【解析】選選B B。載體上的標(biāo)記基因是為了便于檢測目的基因是。載體上的標(biāo)記基因是為了便于檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的否導(dǎo)入受體細胞；目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的變異屬于基因重組；基因工程中兩類常用的工具酶是限制性核變異屬于基因重組；基因工程中兩類常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶。連接酶。3. 3. 下列有關(guān)基因工程的敘述錯誤的是下列有關(guān)基因工程的敘述錯誤的是 ( )( )A. A. 最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒B. B. 工具酶主要有限制性核酸內(nèi)切酶和工具酶主

28、要有限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶連接酶C. C. 該技術(shù)人為地增加了生物變異的范圍，實現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)該技術(shù)人為地增加了生物變異的范圍，實現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)的交換的交換D. D. 基本原理是基本原理是DNADNA具有雙螺旋結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達具有雙螺旋結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達方式相同方式相同【解析【解析】選選D D。基因工程的基本原理是基因重組，不同生物的?；蚬こ痰幕驹硎腔蛑亟M，不同生物的DNADNA具有相同的結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達方式相同是基因具有相同的結(jié)構(gòu)以及遺傳信息傳遞和表達方式相同是基因工程賴以完成的基礎(chǔ)；基因工程中的工具酶是限制性核酸內(nèi)切工程賴以完成的基礎(chǔ)；基因

29、工程中的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和酶和DNADNA連接酶，最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒；該技術(shù)可連接酶，最常用的載體是大腸桿菌的質(zhì)粒；該技術(shù)可克服生殖隔離現(xiàn)象，實現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)交換，按照人的意愿使克服生殖隔離現(xiàn)象，實現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)交換，按照人的意愿使生物發(fā)生變異。生物發(fā)生變異。4. 4. 在基因工程中用來完成基因剪接的工具是（在基因工程中用來完成基因剪接的工具是（ ）A. A. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶連接酶B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶和水解酶限制性核酸內(nèi)切酶和水解酶C. C. 限制性核酸內(nèi)切酶和載體限制性核酸內(nèi)切酶和載體 D. DNAD. DNA連接酶和載體連接

30、酶和載體【解析【解析】選選A A。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶和。本題考查限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶的有關(guān)連接酶的有關(guān)知識。解答本題的關(guān)鍵是知識。解答本題的關(guān)鍵是“剪接剪接”二字，是既剪又接。限制性二字，是既剪又接。限制性核酸內(nèi)切酶是剪切基因的核酸內(nèi)切酶是剪切基因的“剪刀剪刀”，DNADNA連接酶是將連接酶是將DNADNA末端之末端之間的縫隙間的縫隙“縫合縫合”起來的起來的“基因的針線基因的針線”。所以，剪接工具是。所以，剪接工具是限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶。連接酶。5. 5. 下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述中正確的是下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述中正確的是 （ ）A

31、.A.重組重組DNADNA技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連接酶連接酶和載體和載體B. B. 所有的限制性核酸內(nèi)切酶只能識別同一種特定的核苷酸序所有的限制性核酸內(nèi)切酶只能識別同一種特定的核苷酸序列列 C. C. 選用細菌作為重組質(zhì)粒的受體細胞是因為細菌繁殖快選用細菌作為重組質(zhì)粒的受體細胞是因為細菌繁殖快D. D. 只要目的基因進入了受體細胞就能成功實現(xiàn)表達只要目的基因進入了受體細胞就能成功實現(xiàn)表達 【解析【解析】選選C C。重組。重組DNADNA技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA連接酶，載體不

32、是酶；限制性核酸內(nèi)切酶具有專一性，不連接酶，載體不是酶；限制性核酸內(nèi)切酶具有專一性，不同的限制性核酸內(nèi)切酶識別不同的核苷酸序列；目的基因進入同的限制性核酸內(nèi)切酶識別不同的核苷酸序列；目的基因進入受體細胞，不一定能夠成功實現(xiàn)表達。受體細胞，不一定能夠成功實現(xiàn)表達。6. 6. 通過通過DNADNA重組技術(shù)使原有基因得以改造的動物稱為轉(zhuǎn)基因動重組技術(shù)使原有基因得以改造的動物稱為轉(zhuǎn)基因動物。運用這一技術(shù)可使羊奶中含有人體蛋白質(zhì)，如圖表示這一物。運用這一技術(shù)可使羊奶中含有人體蛋白質(zhì)，如圖表示這一技術(shù)的基本過程，在該工程中所用的基因技術(shù)的基本過程，在該工程中所用的基因“剪刀剪刀”能識別的序能識別的序列和切

33、點是列和切點是-G-GGATCC-GATCC-，請回答：，請回答：(1)(1)從羊染色體中從羊染色體中“剪下剪下”羊蛋白質(zhì)基因的酶是羊蛋白質(zhì)基因的酶是_，人體蛋白質(zhì)基因人體蛋白質(zhì)基因“插入插入”后連接在羊體細胞染色體中需要的酶后連接在羊體細胞染色體中需要的酶是是_。(2)(2)請畫出質(zhì)粒被切割形成粘性末端的過程圖。請畫出質(zhì)粒被切割形成粘性末端的過程圖。(3)(3)人體蛋白質(zhì)基因之所以能連接到羊的染色體人體蛋白質(zhì)基因之所以能連接到羊的染色體DNADNA中，原因是中，原因是_，人體蛋白質(zhì)基因?qū)胙蚣殻梭w蛋白質(zhì)基因?qū)胙蚣毎麜r常用的工具是胞時常用的工具是_。(4)(4)此過程中目的基因的檢測與表達

34、中的表達是指此過程中目的基因的檢測與表達中的表達是指_。【解析【解析】（1 1）剪下目的基因需要用限制性核酸內(nèi)切酶，與受）剪下目的基因需要用限制性核酸內(nèi)切酶，與受體體DNADNA連接需要用連接需要用DNADNA連接酶。連接酶。（2 2）首先要按照堿基互補配對原則，由已知的一條鏈完成質(zhì)）首先要按照堿基互補配對原則，由已知的一條鏈完成質(zhì)粒雙鏈上的堿基序列，再根據(jù)切點寫出切割形成的粘性末端。粒雙鏈上的堿基序列，再根據(jù)切點寫出切割形成的粘性末端。（3 3）要求回答基因能夠拼接的原因，不同生物的）要求回答基因能夠拼接的原因，不同生物的DNADNA化學(xué)組成化學(xué)組成和空間結(jié)構(gòu)相同，即都具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)

35、構(gòu)基礎(chǔ)。目的和空間結(jié)構(gòu)相同，即都具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。目的基因?qū)胧荏w細胞需要先與載體結(jié)合，最常用的載體是質(zhì)粒，基因?qū)胧荏w細胞需要先與載體結(jié)合，最常用的載體是質(zhì)粒，也可以用動物病毒。也可以用動物病毒。（4 4）基因的表達是指基因通過控制蛋白質(zhì)的合成來控制生物）基因的表達是指基因通過控制蛋白質(zhì)的合成來控制生物的性狀，即通過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。的性狀，即通過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。答案：答案：(1)(1)限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶 DNADNA連接酶連接酶(2)(2)(3)(3)具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)( (有互補的堿基序列有互補

36、的堿基序列) )質(zhì)粒或動物病毒質(zhì)?；騽游锊《?4)(4)人體蛋白質(zhì)基因在羊體細胞內(nèi)控制合成人體蛋白質(zhì)人體蛋白質(zhì)基因在羊體細胞內(nèi)控制合成人體蛋白質(zhì) 7. (20117. (2011浙江高考浙江高考) )將將adaada( (腺苷酸脫氨酶基因腺苷酸脫氨酶基因) )通過質(zhì)粒通過質(zhì)粒pET28bpET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是的是( )( )A. A. 每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質(zhì)粒每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質(zhì)粒B. B. 每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點

37、C. C. 每個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點至少插入一個每個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點至少插入一個adaadaD. D. 每個插入的每個插入的adaada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子【解析【解析】選選C C。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中并成功表達，說明。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中并成功表達，說明大腸桿菌內(nèi)至少含有一個重組質(zhì)粒；每個重組質(zhì)粒都含有目的大腸桿菌內(nèi)至少含有一個重組質(zhì)粒；每個重組質(zhì)粒都含有目的基因基因adaada，則該重組質(zhì)粒至少含一個能被該限制性核酸內(nèi)切酶，則該重組質(zhì)粒至少含一個能被該限制性核酸內(nèi)切酶切割的位點；限制性核酸內(nèi)切酶具有特異性，種類不同，識別切割的位點；限

38、制性核酸內(nèi)切酶具有特異性，種類不同，識別的位點不同，切割出的粘性末端也就不同，因此并不是每個位的位點不同，切割出的粘性末端也就不同，因此并不是每個位點都能插入點都能插入adaada；根據(jù)題干信息，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌成；根據(jù)題干信息，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌成功表達出腺苷酸脫氨酶，說明插入的功表達出腺苷酸脫氨酶，說明插入的adaada至少表達出一個腺苷至少表達出一個腺苷酸脫氨酶分子。酸脫氨酶分子。8. (20108. (2010浙江高考浙江高考) )在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過程中，下列操作錯誤的是因煙草過程中，下列操作錯誤的是( )( )A.

39、A. 用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B. B. 用用DNADNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C. C. 將重組將重組DNADNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D. D. 用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細胞用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細胞【解析【解析】選。構(gòu)建重組選。構(gòu)建重組DNADNA分子時，需用同種限制性核酸內(nèi)分子時，需用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體，再用切酶切割目的基因和載體，再用DNADNA連接酶連接形成重組連接酶連接形成重組DNADNA分分子，而煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)

40、是子，而煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是RNARNA，所以，所以A A項錯誤。重組項錯誤。重組DNADNA分子形成后要導(dǎo)入受體細胞分子形成后要導(dǎo)入受體細胞( (若是植物細胞，則可導(dǎo)入其原若是植物細胞，則可導(dǎo)入其原生質(zhì)體生質(zhì)體) )，若導(dǎo)入的受體細胞是體細胞，經(jīng)組織培養(yǎng)可獲得轉(zhuǎn)，若導(dǎo)入的受體細胞是體細胞，經(jīng)組織培養(yǎng)可獲得轉(zhuǎn)基因植物。目的基因為抗除草劑基因，所以未成功導(dǎo)入目的基基因植物。目的基因為抗除草劑基因，所以未成功導(dǎo)入目的基因的細胞不具有抗除草劑的能力，可用含除草劑的培養(yǎng)基篩選因的細胞不具有抗除草劑的能力，可用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細胞。轉(zhuǎn)基因煙草細胞。9.9.（20092009浙江高考）下

41、列關(guān)于基因工程的敘述，錯誤的是浙江高考）下列關(guān)于基因工程的敘述，錯誤的是( )( )A. A. 目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物B. B. 限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA連接酶是兩類常用的工具酶連接酶是兩類常用的工具酶C. C. 人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性D. D. 載體上的抗性基因有利于篩選含重組載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNADNA的細胞和促進目的的細胞和促進目的基因的表達基因的表達【解析【解析】選選D D。由于大腸桿菌中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體

42、等細胞。由于大腸桿菌中沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細胞器，在核糖體上合成的蛋白質(zhì)不能進行肽鏈的折疊等加工程序，器，在核糖體上合成的蛋白質(zhì)不能進行肽鏈的折疊等加工程序，因此人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性。因此人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原無生物活性。載體上的抗性基因有利于篩選含重組載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNADNA的細胞，但它和目的的細胞，但它和目的基因是相互獨立的，不能促進目的基因的表達?；蚴窍嗷オ毩⒌?，不能促進目的基因的表達。10. 10. （20102010江蘇高考）下表中列出了幾種限制酶（限制性核江蘇高考）下表中列出了幾種限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）識別

43、序列及其切割位點，圖酸內(nèi)切酶）識別序列及其切割位點，圖1 1、圖、圖2 2中箭頭表示相關(guān)中箭頭表示相關(guān)限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）的酶切位點。請回答下列問題：限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）的酶切位點。請回答下列問題：（1 1）一個圖）一個圖1 1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaSma切割前后，分別含有切割前后，分別含有_個游離的磷酸基團。個游離的磷酸基團。（2 2）若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的）若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的SmaSma酶切位點越多，質(zhì)酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越粒的熱穩(wěn)定性越_。（3 3）用圖中的質(zhì)粒和外源）用圖中的質(zhì)粒和外源DNADNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用構(gòu)建重組質(zhì)粒，不

44、能使用SmaSma切割，原因是切割，原因是_。（4 4）與只使用）與只使用EcoREcoR相比較，使用相比較，使用BamHBamH和和Hind Hind 兩種限制兩種限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）同時處理質(zhì)粒、外源酶（限制性核酸內(nèi)切酶）同時處理質(zhì)粒、外源DNADNA的優(yōu)點在于的優(yōu)點在于可以防止可以防止_。（5 5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入合，并加入_酶。酶。（6 6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了_。（7 7）為了從）為了從cDNAcDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，

45、將重組文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在_的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。【解析【解析】（1 1）質(zhì)粒切割前是雙鏈環(huán)狀）質(zhì)粒切割前是雙鏈環(huán)狀DNADNA分子，所有磷酸基團分子，所有磷酸基團參與形成磷酸二酯鍵，故不含游離的磷酸基團。從圖參與形成磷酸二酯鍵，故不含游離的磷酸基團。從圖1 1可以看可以看出，質(zhì)粒上只含有一個出，質(zhì)粒上只含有一個SmaSma的切點，因此被該酶切割后，質(zhì)的切點，因此被該酶切割后，質(zhì)粒變?yōu)榫€性雙鏈粒變?yōu)榫€性雙鏈DNA

46、DNA分子，因每條鏈上含有一個游離的磷酸基分子，因每條鏈上含有一個游離的磷酸基團，因此切割后含有兩個游離的磷酸基團。團，因此切割后含有兩個游離的磷酸基團。（2 2）由題目可知，）由題目可知，SmaSma識別的識別的DNADNA序列只有序列只有G G和和C C，而，而G G和和C C之之間可以形成三個氫鍵，間可以形成三個氫鍵，A A和和T T之間可以形成二個氫鍵，所以之間可以形成二個氫鍵，所以SmaSma酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性就越高。酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性就越高。（3 3）質(zhì)?？股乜剐曰驗闃?biāo)記基因，標(biāo)記基因和外源）質(zhì)?？股乜剐曰驗闃?biāo)記基因，標(biāo)記基因和外源DNADNA目目的基因

47、中均含有的基因中均含有SmaSma酶切位點，都可以被酶切位點，都可以被SmaSma破壞，故不能破壞，故不能使用該酶剪切質(zhì)粒及含有目的基因的使用該酶剪切質(zhì)粒及含有目的基因的DNADNA。（4 4）只使用）只使用EcoREcoR，則質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端相同，則質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端相同，用連接酶連接時，會產(chǎn)生質(zhì)粒和目的基因自身連接物，而利用用連接酶連接時，會產(chǎn)生質(zhì)粒和目的基因自身連接物，而利用BamHBamH和和Hind Hind 剪切時，質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端不剪切時，質(zhì)粒和目的基因兩端的粘性末端不同，用同，用DNADNA連接酶連接時，不會產(chǎn)生自身連接產(chǎn)物。連接酶連接時，不會

48、產(chǎn)生自身連接產(chǎn)物。（5 5）質(zhì)粒和目的基因連接后獲得重組質(zhì)粒，該過程需要）質(zhì)粒和目的基因連接后獲得重組質(zhì)粒，該過程需要DNADNA連連接酶作用，故混合后加入接酶作用，故混合后加入DNADNA連接酶。連接酶。（6 6）質(zhì)粒上的抗生素抗性基因為標(biāo)記基因，用于鑒別和篩選）質(zhì)粒上的抗生素抗性基因為標(biāo)記基因，用于鑒別和篩選含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的受體細胞。含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的受體細胞。（7 7）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體后，）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體后，含有重組質(zhì)粒的個體才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作為唯一含有重組質(zhì)粒的個體才能吸收蔗糖，因此可利用蔗

49、糖作為唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細胞，含有重組質(zhì)粒的細胞才能存活，碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)受體細胞，含有重組質(zhì)粒的細胞才能存活，不含有重組質(zhì)粒的細胞因不能獲得碳源而死亡，從而達到篩選不含有重組質(zhì)粒的細胞因不能獲得碳源而死亡，從而達到篩選目的。目的。答案：答案：（1 1）0 0、2 2 （2 2）高）高（3 3）SmaSma會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNADNA中的目的基因中的目的基因（4 4）質(zhì)粒和含目的基因的外源）質(zhì)粒和含目的基因的外源DNADNA片段自身環(huán)化片段自身環(huán)化（5 5）DNADNA連接連接（6 6）鑒別和篩選含有目的基因的細胞）鑒別和篩選含有目的基因的細胞（7 7）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)