自身免疫性疾病及其免疫檢測(cè).ppt

常見自身免疫性疾病的自身抗體檢測(cè) 自身抗體 autoantibody 是指抗自身細(xì)胞內(nèi) 細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白 是自身免疫和自身免疫病重要特征之一 某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體 譜 分類 臟器特異性自身抗體臟器非特異性自身抗體 自身免疫性疾病的重要標(biāo)志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動(dòng)性相關(guān)參與免疫病理性損傷 一 自身抗體的特性 自身抗體免疫球蛋白補(bǔ)體淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子 自身免疫性疾病的主要實(shí)驗(yàn)檢測(cè) 1948年Haragraves等發(fā)現(xiàn)LE細(xì)胞現(xiàn)象 1957年Holborow等應(yīng)用IIF檢測(cè)ANA 1961年Beck等發(fā)現(xiàn)ANA不同熒光染色模型 60 70年代IIF ID CIE應(yīng)用 新的自身抗體 1979年Towbin等應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)自身抗體 80年代IB RIP應(yīng)用 蛋白多肽水平認(rèn)識(shí)自身抗原 1987年DNA基因重組技術(shù)開始應(yīng)用自身抗體研究 近十年應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù) 自身抗體研究發(fā)展簡史 抗核抗體 ANA 抗可提取性核抗原抗體 ENA 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 ANCA 類風(fēng)濕因子 RF 抗角蛋白抗體 AKA 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 抗CCP抗體 抗心磷脂抗體 ACLA 常檢測(cè)的自身抗體 常見自身免疫性疾病的標(biāo)志抗體 間接免疫熒光法 IIF ELISA免疫印跡法 Western blot 酶免疫斑點(diǎn)法 檢測(cè)自身抗體常用的方法 抗核抗體 以真核細(xì)胞 如HEp 2細(xì)胞 肝細(xì)胞 的各種細(xì)胞核成分為靶抗原所檢測(cè)的自身抗體的總稱 二 抗核抗體的檢測(cè)與應(yīng)用 抗核抗體譜 以首先檢出該抗體的患者名字命名 如抗Sm 抗Sa抗體等 以相關(guān)疾病命名 如抗Scl 70 抗SS A 抗SS B抗體等 以抗原的部位命名 如抗核仁抗體 抗線粒體抗體 抗核膜抗體 抗細(xì)胞漿抗體等 以抗原的化學(xué)名稱分類命名 如抗DNA 抗RNP 抗組蛋白抗體 抗核小體抗體等 抗核抗體譜的分類和命名 間接免疫熒光法 indirectimmunofluorescence IIF 酶免疫斑點(diǎn)法ELISA免疫印跡法 Western blot 抗核抗體檢測(cè)方法 間接免疫熒光法示意圖 細(xì)胞核細(xì)胞漿細(xì)胞骨架細(xì)胞周期均質(zhì)型核糖體型肌蛋白型中心體型斑點(diǎn)型線粒體型波形纖維蛋白型紡綞體型核仁型高爾基體型細(xì)胞角蛋白型紡綞絲型著絲點(diǎn)型溶酶體型原肌球蛋白型中間體型周邊型顆粒型紐帶蛋白型PCNA型核點(diǎn)型 dots IIF檢測(cè)ANA熒光染色模型 斑點(diǎn)型 nRNP Sm 高滴度的抗U1 nRNP為MCTD的特征 抗Sm抗體對(duì)SLE具有高度特異性 斑點(diǎn)型 SSA SSB 抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡 100 抗SSB抗體幾乎僅見于女性 可出現(xiàn)于SS和SLE 均質(zhì)型 抗dsDNA抗體抗組蛋白抗體 histone 抗ssDNA抗體抗核小體抗體 nucleosome 周邊型 可見于膠原病 PBC CAH等患者 核點(diǎn)型 DOTS 見于SLE SS PBC 風(fēng)濕病 抗著絲點(diǎn)型 PSS局限型標(biāo)志抗體 抗原纖維蛋白型 僅見于5 10 的PSS 男性高于女性 抗RNA多聚酶 型抗體 僅見于硬皮病患者 陽性率為4 抗PM Scl PM 1 抗體 見于重疊綜合征 多發(fā)性肌炎PM 皮肌炎DM 彌漫性PSS 抗Scl 70型 PSS彌漫型的標(biāo)志抗體 增殖細(xì)胞核抗原 型 PCNA SLE特異性抗體 與發(fā)生彌漫性增殖性腎小球腎炎相關(guān) 抗核糖體P蛋白 rib P 抗體 抗線粒體抗體 AMA SLE標(biāo)志抗體 原發(fā)性膽汁性肝硬化標(biāo)志抗體 抗Jo 1抗體 抗高爾基體抗體 多發(fā)性肌炎 PM 標(biāo)志抗體 偶見于SLE和SS 抗肌動(dòng)蛋白抗體 見于自身免疫性慢性活動(dòng)型肝炎 抗雙鏈DNA抗體 抗dsDNA抗體與細(xì)胞核DNA 外圍區(qū) 脫氧核糖磷酸框架結(jié)合 抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標(biāo)志抗體 其抗體滴度與疾病的活動(dòng)程度有相關(guān)性 抗體滴度的動(dòng)態(tài)測(cè)定為監(jiān)控治療提供了有效的實(shí)驗(yàn)室手段 抗雙鏈DNA抗體 檢測(cè)方法及應(yīng)用 間接免疫熒光檢測(cè) 是目前國內(nèi)外臨床常規(guī)檢測(cè)抗dsDNA抗體最常用的方法 抗dsDNA抗體診斷SLE的特異性可達(dá)95 100 但其敏感性僅為30 50 因此抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE的診斷 檢測(cè)方法及應(yīng)用 抗dsDNA抗體 SLE特異性抗體 與病情活動(dòng)度相關(guān) 抗核小體抗體 核小體 nucleosome 是真核生物細(xì)胞核染色質(zhì)的基本單位 凋亡細(xì)胞是核小體的重要來源 當(dāng)SLE患者的吞噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的清除能力受損或降低 導(dǎo)致核小體在患者體內(nèi)大量存積 激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗核小體抗體 Antinucleosomeantibody AnuA 檢測(cè)及應(yīng)用 AnuA的檢測(cè)通常采用ELISA檢測(cè)法 AnuA具有同抗ds DNA抗體相同的診斷特異性 可達(dá)到95 在系統(tǒng)性硬化 SSc 病中可有20 50 低濃度陽性率 其他自身免疫性疾病中該抗體均為陰性 AnuA的表達(dá)與SLE病情活動(dòng)分?jǐn)?shù)相關(guān) 檢測(cè)及應(yīng)用 抗ENA抗體譜 可提取核抗原抗體的總稱臨床常檢測(cè)的抗ENA抗體譜主要包括 抗Sm抗U1 RNP抗SSA抗SSB抗Jo 1抗Scl 70抗rib P蛋白 三 抗ENA抗體譜的檢測(cè)與應(yīng)用 抗可提取性核抗原 ENA 抗體 雙向免疫擴(kuò)散 ID 對(duì)流免疫電泳 CIE 免疫印跡法 Western blot ELISA酶免疫斑點(diǎn)法 ENA檢測(cè)方法 免疫印跡法 SDS PAGE電泳 轉(zhuǎn)移電泳 酶免疫檢測(cè) 免疫印跡法 抗可提取性核抗原 ENA 抗體 抗Sm抗體 SLE標(biāo)記性抗體 20 30 抗nRNP抗體 MCTD95 100 高滴度 抗SSA抗體 PSS60 75 其它CTD 抗SSB抗體 PSS10 40 其它CTD 抗Scl 70抗體 SSc25 75 標(biāo)記性抗體 抗Jo 1抗體 PM DM25 標(biāo)記性抗體 抗rRNP抗體 SLE特異性抗體 10 30 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 anti neutrophilcytoplasmicautoantibodies ANCA 是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原 與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體 對(duì)系統(tǒng)性血管炎 炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義 四 與小血管炎相關(guān)的自身抗體檢測(cè)與應(yīng)用 熒光染色型 靶抗原 胞漿型 cANCA 蛋白酶3 PR3 殺菌 通透性增高蛋白 BPI 核周型 pANCA 髓過氧化物酶 MPO 組織蛋白酶G Cath G 乳鐵蛋白 LF 白細(xì)胞彈性蛋白酶 HLE 非典型型 aANCA 兼有兩種特性 ANCA熒光染色型與靶抗原 周邊型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 pANCA 主要見于炎癥性腸病 潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病 胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 cANCA 主要見于Wegener s肉芽腫及微小多動(dòng)脈炎 ANCA臨床應(yīng)用 髓過氧化物酶 MPO 與顯微鏡下多血管炎 壞死性新月體型腎小球腎炎 過敏性肉芽腫性血管炎相關(guān) 殺菌 通透性增高蛋白 BPI 主要見于肺部炎癥性疾病并與長期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系 蛋白酶3 PR3 與Wegener s肉芽腫 WG 密切相關(guān) 僅cANCA診斷WG的特異性大于90 聯(lián)合PR3可超過95 活動(dòng)期幾乎100 陽性 組織蛋白酶G Cath G 白細(xì)胞彈性蛋白酶 HLE 乳鐵蛋白 LF 可見于SLE IBD PBC PSC等 RA早期診斷相關(guān)自身抗體 抗角質(zhì)層蛋白抗體 AKA 1979年Young等報(bào)告靶抗原 filaggrin 40KD 抗核周因子 APF 1964年Nienhuis等報(bào)告靶抗原 profilaggrin 37 41KD 及其降解產(chǎn)物 抗聚角蛋白微絲蛋白抗體 AFA 1993年Simon等報(bào)告靶抗原 filaggrin 40KD 抗Sa抗體 1994年Despres等報(bào)告靶抗原 50 55KD非酰基多肽 半抗原 瓜氨酸 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 抗CCP抗體 1998Schellekens 五 與RA相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用 類風(fēng)濕因子 rheumatoidfactor RF 為抗變性IgGFc的自身抗體 主要是IgM型致病機(jī)理 RF與體內(nèi)變性IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物 激活補(bǔ)體或被吞噬細(xì)胞吞噬 產(chǎn)生炎性介質(zhì)導(dǎo)致組織炎性損傷 使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎 1 膠乳顆粒凝集實(shí)驗(yàn)定性 半定量 敏感性和特異性不高 測(cè)定IgM RF2 速率散射比濁法 ARRAY IMAGE 定量 準(zhǔn)確 快速 測(cè)定IgM RF3 ELISA定量 準(zhǔn)確 可測(cè)定不同類型的RF 檢測(cè)方法 1 RF在RA SLE PSS等多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出 臨床應(yīng)用 2 RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān) IgM RF效價(jià) 80IU ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時(shí)通常提示患者預(yù)后不良 3 IgG RF與RA患者的滑膜炎 血管炎和關(guān)節(jié)癥狀密切相關(guān) 常伴隨IgM RF同時(shí)出現(xiàn) 在正常人及非RA患者中很難檢出 4 IgA RF與RA患者關(guān)節(jié)癥狀的嚴(yán)重程度及骨質(zhì)破壞有顯著相關(guān)性 AKA主要見于RA 陽性率36 59 特異性95 99 其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn) 高滴度可預(yù)示較嚴(yán)重的RA類型 抗角蛋白抗體 AKA 常用方法 ELISA臨床意義 RA特異性自身抗體 敏感性65 85 特異性為94 98 高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關(guān)節(jié)侵蝕的危險(xiǎn)因子之一 定量檢測(cè)有助于判斷預(yù)后 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 抗CCP抗體 自身免疫性肝病是與自身免疫密切相關(guān)的特殊類型的肝病 其診斷和治療完全不同于一般的慢性病毒性肝炎自身免疫性肝炎 AIH 原發(fā)性膽汁性肝硬化 PBC 原發(fā)性硬化性膽管炎 PSC 重疊綜合征 六 與自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用 在多種累及肝膽疾患的自身免疫疾病中 自身抗體在發(fā)病機(jī)制中起重要作用 自身免疫性肝病具有相對(duì)特異性自身抗體譜 自身抗體檢測(cè)對(duì)自身免疫性肝病的診斷及鑒別診斷具有重要意義 自身免疫性肝病與自身抗體 自身免疫性肝病及其自身抗體譜 疾病類型相關(guān)自身抗體自身免疫性肝炎 AIH 型AIHANA ASMA 型AIHanti LKM 1anti LC 1 型AIHanti SLA 可溶性肝抗原 原發(fā)性膽汁性肝硬化 PBC AMA M2 M4 M8 M9 anti gp210 sp100ACA原發(fā)性硬化性膽管炎 PSC pANCA 自身免疫性肝病及其自身抗體譜 抗甲狀腺球蛋白抗體 TGAb 抗甲狀腺過氧化物酶抗體 TPOAb 抗促甲狀腺素受體抗體 TSH RAb 七 與橋本甲狀腺炎相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用 重癥肌無力 MG 自身抗體譜 抗骨胳肌抗體 ASA 抗乙酰膽堿受體 AchR 抗體多發(fā)性硬化 MS 自身抗體譜 抗髓鞘堿性蛋白 MBP 抗體 抗腦苷脂抗體 抗神經(jīng)結(jié)苷脂抗體急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病 格林 巴利綜合征 自身抗體譜 抗髓鞘糖脂抗體 抗髓鞘硫脂抗體 八 與神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性相關(guān)自身抗體的檢測(cè)與應(yīng)用 大多數(shù)自身免疫患者血清中可測(cè)到高效價(jià)的自身抗體 特別是有些自身抗體的檢測(cè)已納入某些自身免疫性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)中 自身抗體檢測(cè)已是臨床免疫檢測(cè)的一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo) 第五節(jié)自身抗體檢測(cè)的臨床應(yīng)用 篩查性試驗(yàn)與確診性試驗(yàn)項(xiàng)目的合理組合選擇相關(guān)的自身抗體檢測(cè)項(xiàng)目切忌盲目的全面檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)同步設(shè)置陽性和陰性對(duì)照 一 自身抗體檢測(cè)的一般原則 95 99 可排除SLE SLE治療緩解病情特重 大量IC沉積消耗抗體 低滴度常見于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作為診斷SLE的依據(jù)ENA抗體譜檢測(cè) 不能排除抗dsDNA Sm rib抗體 可幫助診斷 ANA初篩 二 實(shí)驗(yàn)室方法的選擇及結(jié)果的確認(rèn) ANA在自身免疫性疾病中的檢出率 第六節(jié)自身免疫性疾病的相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測(cè) 在自身免疫病患者體內(nèi) 因有多種自身抗原的存在 自身抗體的種類也可有交叉重疊現(xiàn)象 故實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)出多種自身抗體陽性時(shí)還必須結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行綜合分析 自身抗體 免疫球蛋白 II型及III型自身免疫病消耗補(bǔ)體 補(bǔ)體 監(jiān)測(cè)病情 一 免疫球蛋白及補(bǔ)體檢測(cè)及臨床意義 淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能 反應(yīng)患者體內(nèi)免疫細(xì)胞狀態(tài) 二 淋巴細(xì)胞檢測(cè)及臨床意義 細(xì)胞因子介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)或應(yīng)用治療 監(jiān)測(cè)病情或指導(dǎo)治療 三 細(xì)胞因子檢測(cè)及臨床意義 CIC與多種自身免疫病相關(guān) 輔助診斷疾病 四 循環(huán)免役復(fù)合物檢測(cè)及臨床意義 1 區(qū)分自身免疫和自身免疫性疾病 2 自身免疫性疾病分為幾類 其代表性疾病有哪些 3 ANA有哪些種類 它們?cè)贏ID及SLE診斷中的價(jià)值如何 4 自身免疫病的發(fā)病機(jī)制是什么 5 自身免疫性疾病根據(jù)超敏反應(yīng)類型可分為幾類 代表性疾病有哪些 6 常見的免疫熒光法檢測(cè)ANA的核型有哪些 有何臨床意義 7 抗ENA抗體譜的可檢測(cè)自身抗體項(xiàng)目包括哪些 有何臨床意義 8 SLE和RA診斷的篩查試驗(yàn)和確診試驗(yàn)分別是什么 9 小血管炎相關(guān)的自身抗體和自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體檢測(cè)項(xiàng)目分別有哪些 10 自身免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)有哪些 思考題 自身免疫性疾病是自身免疫應(yīng)答引起的疾病 其體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)自身成份的自身抗體或自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞 自身抗體是自身免疫性疾病診斷的重要標(biāo)志 IIF檢測(cè)的ANA結(jié)果及其熒光模型在自身免疫性疾病的臨床診斷與鑒別診斷中是重要的篩選試驗(yàn) 抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標(biāo)志抗體 抗Sm抗體是SLE的血清標(biāo)志抗體 高滴度的抗RNP抗體是診斷MCTD的重要血清學(xué)依據(jù) 抗SSA Ro抗體和抗SSB La抗體與干燥綜合癥密切相關(guān) 抗Jo 1抗體常見于多發(fā)性肌炎 抗Scl 70抗體幾乎僅見于進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮病 其他疾病相關(guān)的自身抗體還有 與小血管炎相關(guān)的抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 抗磷脂抗體 與RA相關(guān)的RF 抗角蛋白抗體 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 與自身免疫性肝病相關(guān)的抗平滑肌抗體 抗線粒體抗體等 小結(jié)