胡蘿卜素含量的測定.ppt

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高效液相色譜法測定β—胡蘿卜素含量,一、實驗目的二、實驗原理三、實驗儀器材料四、實驗操作步驟五、實驗結果六、實驗思考題,實驗指導,,,,1、實驗目的,1、理解高效液相色譜法的目的和意義；2、理解和掌握高效液相色譜法的原理和方法；3、掌握高效液相色譜儀的操作。,,,,2、實驗原理,高效液相色譜儀的組成與工作主要流程如下圖所示：,,,,β-胡蘿卜素含量測定原理β-胡蘿卜素為脂溶性維生素A的前體，存在于各種動植物體內(nèi)，可以直接用有機溶劑提取后進行檢測，然后利用反相色譜法分析。,,,,3、.實驗儀器和材料,,,,,儀器：高效液相色譜儀紫外檢測器等。試劑材料：β-胡蘿卜素；乙酸乙酯；正己烷；色譜甲醇；新鮮胡蘿卜。,4、實驗操作步驟：,（1）標準溶液的配制：精確稱取100mg的含量為30%的β-胡蘿卜素標準品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量瓶中。進樣時取1ml，稀釋定容到100ml。,（2）樣品的制備：取樣品，搗碎成漿狀，稱取10g，加甲醇、正己烷各10ml研磨。過濾后，濾液以及用乙酸乙酯洗滌渣的濾液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。,,,,色譜條件,色譜柱：C18柱；流動相：甲醇；流速：1.5ml/min；紫外檢測波長：440nm；進樣量：20微升。樣品進樣前需要用0.45微米的濾膜過濾，裝入進樣瓶中。,5、實驗結果和計算,HPLC外標法定量式中m：10g(mL)樣品中β-胡蘿卜素含量（mg）；m1：標樣進樣體積中β-胡蘿卜素含量（mg）；m2：樣品稱樣質量（g或mL）；A1：標樣峰面積值；A2：樣品峰面積；V1：樣品進樣質量（μL）；V2：樣品定容體積（mL）。,,,,實驗注意事項,1、樣品的預處理；2、流動相的過濾脫氣處理；3、色譜條件的選擇。,思考題：,1、高效液相色譜儀的組成與工作主要流程？2、高效液相色譜的特點？3、進行高效液相色譜儀檢測β-胡蘿卜素時要對待測樣品進行哪些預處理？4、色譜圖中β-胡蘿卜素吸收峰峰高、峰面積與樣品中β-胡蘿卜素濃度和純度有何關系？,