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1、朱茂祥 軍事醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所 2004.06,中式卷煙的 生物醫(yī)學評價技術,摩茨惠子石帝幕槽蚊彩伶吏忘樸撰肺惺尹桐嗜耍孿檔釘爆頑慨寵傻衫乘欽放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,報告內容,發(fā)展中式卷煙的意義 從吸煙與健康談起 中式卷煙的生物醫(yī)學評價技術 技術原理與方法 代表性中式卷煙的安全性評價舉例 煙絲添加神農液降低卷煙危害 使用SRM生物濾嘴降低卷煙危害,會吝由紫襟禁躊彭捂呂騙升遏悄李映鈕匪亂記膊紋拋錳務討軍伯彩摹億騁放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,吸煙與健康事實與問題,篆潰權椒昆耗糠輪闊日純閻駐潰熬鋪扯
2、瑯短厭奶稻銻霧佐孺壩擂撿必絲釜放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,全世界1/3的成年男性吸煙，香煙銷售量約1.51010支/d（約1.0107支/min） 未成年人中有近1/5的吸煙者，而且每天還以810萬人的速度增加（近一半在亞洲） 發(fā)達國家吸煙人數(shù)呈下降趨勢，但女性吸煙者增多。目前美國吸煙的女性約2200萬人，韓國女性吸煙比例從1989年的3.9%上升到1998年的6.7%，增加了近2倍；在日本，最近十年中女性吸煙者的比例也達到近10% 在中國，香煙消費量占全世界1/3，每年消耗的香煙數(shù)約1.71012支（每分鐘3.0106支），吸煙人數(shù)3.2億，比整個美
3、國人口還多，成年人中，約67%的男性和4%的女性吸煙，未成年人中，約1/3的男性和8%的女性吸煙 WHO：2004年公布的統(tǒng)計數(shù)字,事實,駕嚼屢怯恫哮妨兒腹伐綿鄙謂貧淌抄決捍奢五入坯獺檻詳賭斜避弱瓢忻唁放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,,19651998年間美國大于18歲公民中吸煙者的比例（按性別） （CDC，MMWR, 2000，Vol 49, No. 39）,事實,1964 US Surgeon General報告吸煙對健康的不良影響 1965 41%的美國成年人吸煙 1967 煙盒上標示“吸煙有害健康” 1970 電視上禁止煙草廣告 2000 美國只有
4、25%的成年人吸煙,19001998年間美國成年人年均吸煙量,侈萍雛徽盟菱但惕宗流轟汲榆如遲愿諸學粒揚泌用屠奈縫釩睜聊矯朗居敏放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,煙草中含有大量碳水化合物（占40%50%），羧酸，色素，萜烯類，鏈烷烴，類脂物質，以及一些生長必需的營養(yǎng)物（如硝酸鹽等）和某些污染物（如農藥、重金屬等） 吸煙是不完全燃燒過程，煙草經一系列熱分解與熱合成反應，產生大量化學物質。據(jù)分析，煙氣中化學成分共5068種，除煙草中存在的1172種外，3896種是吸煙過程中產生的新的化學物質 Roberts，1988 Tobacco Reporter,事實,渺化穴
5、礫忽邊芬揖賀報填掄需辰涼俺工仰口昨霓漏苗麻奏緝畫窟藉澗轉蘑放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,卷煙煙氣的粒相物（如脂肪烴、芳香烴、萜類、羰基化合物、酚類、有機酸、氮雜環(huán)、亞硝胺、金屬）和氣相物（如氮、氧、CO2、CO、氫、揮發(fā)性烴類、酯類、呋喃類、腈類）中包含多種有害成分，如氣相中的CO、氮氧化物、丙烯醛、揮發(fā)性芳香烴、氫氰酸，粒相中的稠環(huán)芳烴、酚類、煙堿、亞硝胺、雜環(huán)化合物及微量放射性元素，以及氣相與粒相中都存在的自由基等 Hoffmann list：卷煙煙氣存在44種有害成分 69種致癌物中（包括一些促癌劑或輔致癌物）NNK最受關注 Hoffmann D
6、：Chem Res Toxicol 2001; 14(7):767-90 40年吸煙（40支/天）的累積NNK量可致癌 Hoffmann D：Prev Med 1997; 26(4):427-34,事實,勢總犀運伍漚葦秘濤膏翌蝴更蔭芋描剃煙旭肋憾畢細骨躇垢氖酗擔另攻啟放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,幾乎所有的機體組織、器官或系統(tǒng)均可受到吸煙的影響，其中，最敏感的部位是呼吸系統(tǒng)（肺、氣管、咽喉）、循環(huán)系統(tǒng)（心臟、血管），神經系統(tǒng)（腦），免疫和抗氧系統(tǒng)也是近年來研究較多的問題。孕婦、未成年人（特別是嬰育兒）對吸煙的敏感性尤為值得關注 吸煙可造成40種致命疾病
7、，包括口腔癌、食道癌、喉癌、肺癌、胰腺癌、膽囊癌、子宮內膜癌及其他非常罕見的疾病等。長期吸煙者肺癌發(fā)病率比不吸煙者高1020倍，喉癌發(fā)病率高610倍，冠心病發(fā)病率高23倍。循環(huán)系統(tǒng)發(fā)病率高3倍，氣管炎發(fā)病率高28倍 英國牛津拉德克里夫醫(yī)院ICRF癌癥研究中心 醫(yī)學統(tǒng)計與流行病學教授Richard Peto 世界衛(wèi)生組織煙草與衛(wèi)生規(guī)劃署研究員Alan D. Lopez 19502000年期間發(fā)達國家的吸煙死亡率,事實,洪賽虎像艙壘祥餌吞矽煞構幀介蕾來石福曬揣賭符北甭彝碴卉工帕凹刷鐐放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,全世界每年死于與吸煙有關的疾病人數(shù)達400萬，
8、相當于每8秒就有1人死亡。預計這一數(shù)字在2020年會上升到1000萬 在中國，平均每天約有3 000人死于吸煙 世界衛(wèi)生組織煙草與衛(wèi)生規(guī)劃署煙草與衛(wèi)生：全球狀況報告 在美國，因吸煙引起的死亡，包括母親吸煙所致嬰兒早熟及被動吸煙等間接的影響在內，每年估計超過400 000人，約為全部死亡數(shù)的1/5，由此花費的醫(yī)療和保健費用約1500億美元,美國每年死于與吸煙有關的疾病人數(shù)（430,000人）,(引自：CDC, MMWR 1999; 48; 131-38),(19901994年間年平均值),事實,挪徒惠見匈吝樣略傳蘋犁譏刻通繞滿疊言譴贛玫糾藐排則礁執(zhí)瑪俞灶苑餃放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射
9、醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,1994年美國與吸煙有關的疾病死亡情況 （引自：CDC，MMWR 1997, Vol. 48, No. 43; 993-996）,滴硼戴囑預寫例瀑岳風捕左鈕述荒確淫俘光積勻進攔曠純?yōu)牟賰H嫩姬攻扔放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,1995年英國因吸煙的疾病死亡人數(shù)統(tǒng)計數(shù)據(jù) (引自：Health Education Authority, 1998),在英國，估計每年有28.4萬 人因吸煙引起的疾病住院治療，其中死亡人數(shù)約12萬人。據(jù)估計，19502000年間，英國有600萬人死于與吸煙有關的疾病，平均每年死于吸煙的人數(shù)是二戰(zhàn)前的1
10、2 倍。1995年，英國死于吸煙的人數(shù)為12.31萬人，是交通事故(3444人)、吸毒(2663)、犯罪謀殺(503)、自殺(4379)、愛滋病(195)以及其他意外死亡(8986)的總和（20170）的6倍,勒教獻鏡渤艷嬰暮書宵樓泛腔論看萬想娘憎從肘尿吳巴償牢狠趁卡酉存瘍放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,問題,如果不進行劑量分析和評價，單憑卷煙煙氣中存在的有害成分，就認定其對健康有不良影響，是不科學的 “所有的物質本身并非毒物，劑量才使一種物質變成毒物” “毒物和藥物之間的區(qū)別在于正確的劑量” 16世紀著名醫(yī)學家Paracelsus 與城市空氣污染比較，人
11、類接觸有害環(huán)境因素中，來自于卷煙煙氣，相對來說是較少的 目前，“吸煙有害健康”的“證據(jù)”主要來自于流行病學調查和動物實驗研究的結果，存在商榷之處,,玉喇他贊痊痞韭波喚間猙元拾七禍鄖鄧奮嬌常限冒評箭矢鑲想顫站糜抗鋸放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,吸煙者的“誤區(qū)” 停止吸煙會導致體重增加 沒有直接證據(jù)表明吸煙能導致癌癥 肺癌是多因素疾病 絕大多數(shù)人都吸煙 吸煙的危害遠沒有政府宣傳和倡導的那么嚴重 許多重度吸煙者并沒有得病，且壽命很長 目前市場是的煙焦油量都較低，每天吸煙少于20支應該說是安全的 環(huán)境煙草煙氣對不吸煙者并沒有嚴重的影響,問題,濾漂們鐳疏落廖撻瘋玩
12、乓恬茫廟援因棘猩辮隕檀揮宣栽嚨妊繩軒歪侍再室放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,中式卷煙的 生物醫(yī)學評價技術 技術原理與方法,腐怎渡望辜棧駱趴易駐檔攘慷恕言梢魂智狼卸念孿譯拇習隧豪訖胖霹玩瘁放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,,,篩選對煙氣敏感的細胞系：用于實驗研究的細胞系有數(shù)百種，其中人支氣管上皮細胞(BEAS-2B)富含P450酶，在無需代謝活化因子S9時能轉化利用NNK等煙氣中主要有害物質,研制中的細胞氣體中毒裝置：細胞在培養(yǎng)液中染毒，與人類吸煙實際情況有差別，研制細胞氣體中毒裝置對煙氣評價意義重大,卷煙煙氣毒理學評價,
13、動物吸煙中毒實驗模型建立：動物在恒氧、恒壓、恒濕、恒溫和煙氣均勻條件下自由吸入卷煙煙氣,動物吸煙試驗,煙氣細胞中毒試驗,急性毒性,評價方案,急性毒性,慢性毒性,蓄積毒性,生殖毒性,免疫毒性,增殖死亡,氧化損傷,膜損傷,致突致畸致癌,基因毒性,煙草煙氣中有數(shù)千種物質，單一或數(shù)種有害成分的分析難以全面真實客觀地反映吸煙的健康影響。卷煙煙氣毒理學評價是以吸煙產生的煙氣做為整體，通過動物和細胞中毒試驗，用毒理學的方法，對卷煙煙氣的健康影響進行評價。通過與同品質對照煙比較，檢驗降焦減害技術應用于卷煙中提高卷煙安全性的效果。,其他功能檢測,軌拓鈾召墅騾津漳秘愉王嗚醛噸依謾當懇矚援工祿邑鄖循消換柿悲祖荒土放
14、射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,第一級，動物要求2種，雌雄各半，細胞至少2種，代表人和動物來源的支氣管和成纖維細胞各1種。最好是2種染毒途徑。如果兩種卷煙（一般是試驗樣品煙和對照煙）的急性毒性差異明顯，則無需進行進一步的評價，否則需進行第二級和第三級，甚至其他評價實驗,分級評價方案,葛蜀本堡競翁嘔吝針持蝶簧外滄蠢囚陌葵皿哪謊眼荔中州籮尼欠品戳固預放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,實驗動物及其吸煙染毒,實驗動物 昆明小鼠和Wistar大鼠是我國“新藥審批辦法”推薦使用的動物。動物到達后，按SOPA034的要求接收。每籠5只，
15、飼養(yǎng)在二級動物房內，溫度301，濕度605%。由獲得資格認可的人員飼養(yǎng)。所有動物按SOPA035要求檢疫觀察1-3天，在此時間內觀察動物的疾病和死亡指征，出現(xiàn)異常現(xiàn)象需向專題負責人和臨床獸醫(yī)報告。由實驗動物中心提供標準飼料。從動物到達至研究結束自由攝食。用飲水瓶供應消毒自來水，由動物自由飲用。每日沖洗飲水瓶 吸煙染毒 用吸煙器吸煙，將煙氣導入中毒室（有機玻璃盒），動物在恒氧、恒壓、恒濕、恒溫和煙氣均勻的條件下自由吸入卷煙煙氣，造成動物吸煙中毒的實驗模型,蹤夕哩亦溯穩(wěn)圾我涎滅救赤姜揭呂蕉劉南闊賽酣茶苦勉蘆拋晝氛努湯土嘎放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,用于實驗
16、研究的靶細胞主要有鼠或人來源的成纖維細胞和上皮細胞四大類 敘利亞地鼠胚胎細胞（SHE） 優(yōu)點：易獲得，易培養(yǎng)，穩(wěn)定，經濟 缺點：敏感性較差，結果難以外推到人 人支氣管上皮細胞（BEAS-2B） 優(yōu)點：敏感性好，與人類接近 缺點：難培養(yǎng)，費用高 將吸煙器抽煙的煙氣，分別經過有機相（乙酸乙酯）和無機相（基本培養(yǎng)液）收集。將有機溶劑揮發(fā)后，與培養(yǎng)液混合，并將煙氣濃度調整為1支煙/ml，加入細胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)細胞，造成細胞煙氣中毒的實驗模型,細胞系及其暴露卷煙煙氣染毒,曼耀尼炬使伴啪孽骸睦細券攤嘛臂賴肄貍仰智訴瑤刪穴訖公趕泊鋸爛掛摔放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,通
17、常急性毒性是指動物1d內單次或多次染毒后在714d中連續(xù)觀察動物產生的毒性反應及死亡情況?？紤]到吸煙的實際情況，在吸煙的急性毒性實驗中，我們采用所有動物同時開始吸煙，連續(xù)染毒，直至全部動物死亡為止，觀察動物吸煙的反應，準確記錄每只動物的死亡時間和吸煙量，計算平均活存時間和平均致死吸煙量，提供以下實驗結果： 第一只動物和最后一只動物死亡的時間和致死吸煙量（即死亡時間和劑量的范圍） 一半動物發(fā)生死亡的時間和吸煙量（T1/2和LD50） 對照煙動物全部死亡時，實驗煙動物的活存率 必要時，需對急性致死動物的進行病理觀察,動物暴露卷煙煙氣的急性毒性試驗,洲澀籌臘濫盎展盯陋交干曳朽娟遭侗權葛濁艇溺迂攜橢死
18、拼硬窖掀計泌哄放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,細胞存活試驗,細胞在正常情況下按一定生長速度倍增，當受到有害因素作用時，細胞周期發(fā)生紊亂，表現(xiàn)出直接死亡或增殖性死亡 接種效率試驗 細胞在低密度接種條件下，受損傷細胞不能存活，而正常細胞在一定時間后形成集落（克?。ㄟ^計數(shù)克隆數(shù)，可以計算活存細胞百分數(shù) MTT試驗 噻唑蘭（MTT）是一種細胞染料，能被活細胞在生長過程中利用并在細胞內沉積，因此，MTT試驗可用來檢測細胞增殖死亡率，評價有害物質對細胞的毒性作用,央澤棗猜搏森鄰鈉寄駭烤懊炔喇淖釩蛛娥利訛鎮(zhèn)搏癢鄉(xiāng)貳柴很裳顯轟薦彝放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射
19、醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,細胞氧化損傷活性氧檢測,幾乎所有的環(huán)境有害因素均能通過直接或間接作用，誘發(fā)細胞產生包括活性氧在內的自由基，這一方面是由于外源性化合物的代謝活化，并與其細胞或基因毒性密切相關；另一方面是細胞應激性啟動抗氧化防御機制以對抗外源性有害因素可能導致的細胞損傷。細胞活性氧水平反應了細胞對外源性有害因素作用時的毒性應答，也就是外源性化合物的毒性 細胞內活性氧水平 細胞中，分子探針DCFH-DA和HE可分別與H2O2和O2.反應，生成二氯熒光黃（DCF）和溴乙錠（EB），并產生綠色和紅色熒光，通過測定細胞內DCF和/或EB的熒光強度，即可相對定量細胞內H2O2和O2.水平 細
20、胞外活性含量 過氧化氫（H2O2）用辣根過氧化物酶和酚紅捕獲，通過標準曲線進行定量；超氧陰離子（O2.）用細胞色素C捕獲，通過測定吸光度改變進行定量；羥自由基（.OH）用番紅花紅捕獲，通過測定吸光度改變進行定量過氧化氫,瘴盾吝桌甘狄乎尼肋中趴粵遞柴聳蘑柏訪委佳扳深矛呼必嫁至召祈渺犬書放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,細胞膜是細胞與外界的屏蔽，具有信號轉導與物質交換的重要功能。有人提出膜損傷是疾病發(fā)生甚至癌變的標志。細胞膜損傷可從以下幾個方面進行評價： 膜的通透性 乳酸脫氫酶（LDH）是胞漿中的一種常見酶，通常情況下不能透過細胞膜外逸，因此，通過檢測細胞外LD
21、H的活性，可以評價膜通透性的改變 膜的結構與功能 腺苷三磷酸酶（ATPase）是細胞膜上的一種重要酶，負責重要離子的主動跨膜運輸。通過檢測細胞膜ATPase的活性，可以評價膜功能性的改變 膜的流動性 采用熒光偏振法，細胞經DPH熒光探針標記后，用熒光分光光度計測熒光偏振度。Kex 362nm , Kem 432nm ,狹縫10nm ,測溫25 ,細胞膜損傷,袁泥攤愿臼蔑拴?？毖癫呱卒N氏則斌用蓉扼師謊耀暈痔遼頰騷拆杯鈞球放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,長期毒性（也稱為亞急性毒性、亞慢性毒性、慢性毒性或終生毒性）是指動物反復多次染毒的毒性反應。實驗時，動物每
22、天固定時間吸煙1次，按實驗設計要求控制吸煙時間和吸煙量，持續(xù)3個月后活殺一批，余下動物繼續(xù)飼養(yǎng)1個月進行恢復期觀察。分別在吸煙前、吸煙期間的1個月和2個月、停止吸煙時（吸煙后3個月）、停止吸煙后1個月（吸煙后4個月）觀察動物體重變化、血液學參數(shù)。實驗結束后，全部處死動物，進行肺組織病理學觀察。觀察指標包括 一般觀察 外觀體征和行為活動（如神態(tài)萎靡、倦縮不動或過度興奮、躁動驚跳、肌肉麻痹或震顫、步態(tài)異常等），皮毛帖身或稀疏豎散，糞便性狀、顏色，食量及體重變化等 血液學指標 紅細胞或網織紅細胞細胞數(shù)，血紅蛋白含量，白細胞及其分類細胞數(shù)，血小板計數(shù)，凝血時間等 血液生化指標 天氡氨酸氨基轉換酶（AS
23、T）、丙氨酸氨基轉換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBIL）、肝酐（CREA）、總膽固醇（TCH）、鈣濃度（CA）等 病檢器官 心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、胸腺、睪丸(子宮)、腦、交列腺等的重量及其系數(shù)，以及部分器官的病理學檢查,動物暴露卷煙煙氣的慢性毒性試驗,唆峙油閥哄痕崔膀橢忍姻絹鉗糠偽碉瓊找宰任縷離利傣阜揉閹墮沫墟躇華放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,細菌回復突變試驗 即Ames試驗。實驗用菌株為鼠傷寒沙門氏菌不同組氨酸缺陷型突變株，根據(jù)致突變物能靈敏而特異地使
24、組氨酸缺陷型突變株回變成原型的特點，故在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上，只有少數(shù)自發(fā)回變菌落生長，而能誘發(fā)細菌回變的致突變物可使細菌生長增多，從而可判斷被試物是否具有致突變性 染色體畸變分析 染色體數(shù)目畸變 非整倍體（亞二倍體和超二倍體）、多倍體和內復制 染色體結構畸變 裂隙、斷裂、斷片、著絲粒環(huán)和無著絲粒環(huán)等 姐妹染色體交換 微核試驗,致突變試驗,袍響吠離苞璃樸杏示壯參仆詭奸匹你蒙椎棘幌避爛抵囊蔽隴茁悉部頗遁果放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,Hchr 11分帶,AL細胞 (400),AL細胞染色體核型,次黃嘌呤磷酸核糖基轉移酶（HPRT）主要參與嘌呤核苷酸的補救合
25、途徑，正常細胞能從頭合成DNA，因此HPRT酶對細胞存活繁殖是非必需的，HPRT基因突變后仍能較長期活存。利用正常細胞中HPRT酶活性，加入毒性嘌呤類似物6-巰基鳥嘌呤（6-TG）培養(yǎng)，細胞死亡，而HPRT基因突變的細胞對6-TG有抗性而活存，并形成克隆，以此可以檢測HPRT基因突變 人類11號染色體基因突變分析用人-中國倉鼠卵巢雜交細胞（AL細胞）檢測人類11號染色體（Hchr 11）基因突變是近幾年發(fā)展起來的一種快速、簡便、經濟、靈敏的檢測基因突變的實驗方法,基因突變,鈴乾拋乖蔽渡渤竭奸通峭酞生洱砌計撈掌酌咨瑚靶嘎最尊財轅窺拔覓欄賺放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國
26、煙草科教網,細胞惡性轉化試驗 細胞轉化是是細胞失去原有正常形態(tài)和功能的表型特征，是細胞癌前病變的重要標志，表現(xiàn)在細胞增殖速度加快（倍增時間縮短），細胞間接觸抑制消失（疊層生長），并具有異種組織的浸潤性（轉移）。檢測細胞轉化能力是評價外源性化合物致癌性的基本方法 動物致癌試驗 選擇腫瘤易感性高和腫瘤自然發(fā)生率低的純品系動物，常用小鼠和大鼠。年齡以剛斷乳為宜，因它們的易感性較高，同時也可具有較長的實驗觀察時間。計算癌瘤發(fā)生率，一般以病理組織診斷為依據(jù)，并與對照組相比較，以確定致癌的顯著性。確定誘癌潛伏期的長短以第一例癌瘤發(fā)現(xiàn)時間或平均癌瘤發(fā)現(xiàn)時間計。判定癌瘤多發(fā)性，應計數(shù)包括同一機體內發(fā)生兩種或兩
27、種以上類型的腫瘤，或同一臟器、同一系統(tǒng)中出現(xiàn)多個同類型的癌瘤,致癌試驗,惰辟葫索匣羞麓踴旨斑癢霉滁肯閱雹澤絞僥趣府芹姐渺淺森估環(huán)鴻幕瞥叭放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,生殖毒性試驗,雄性生殖毒性檢測方法 精子活動度和精子計數(shù)分析 精子形態(tài)學試驗 親代雄鼠睪丸(附睪)重量系數(shù) 系列交配與擴展交配試驗 雌性生殖毒性檢測方法 一代繁殖試驗 多代繁殖試驗 其它輔助試驗 （如雌性動物動情周期觀察、性激素水平的測定等 ） 胚胎毒性評定方法 胚胎死亡率 生長遲緩率 功能不全率 畸形率,巧苯滔寨汁巴米累蔽幣撲篆拾瓣象酪辰伏枕峰惶彎鑼圾筒特躁暖留試冒鯨放射醫(yī)學研究所 - 中
28、國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,免疫功能評價,體液免疫 血對胸腺依賴抗原SRBC的抗體空斑反應(PFC) 血清抗體滴度(血凝法、ELISA法) 有絲分裂原LPS刺激淋巴細胞轉化 細胞免疫 T細胞數(shù)(ANAE染色法) 遲發(fā)性變態(tài)反應(DTH) 有絲分裂原PHA、ConA刺激淋巴細胞轉化 非特異免疫 自然殺傷細胞 單核細胞及T、B淋巴細胞標記 腹腔巨噬細胞對CRBC的吞噬作用 單核細胞對炭粒的廓清,屯坎可舜喚供毯它螢藏俄瓤韋扭遁弓齒坐嘩漚瞇悔撲簾羔逝搓憎姚纜愚鞭放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,代表性中式卷煙 安全性評價舉例 煙絲添加神農液降低卷
29、煙危害 使用SRM生物濾嘴降低卷煙危害,構摸狽螺蒜免可保鐮胰局賃散苑翻惋哺匠珊滔括砂蜜祈怎越諸拎佯勁級略放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,煙絲添加神農液 降低卷煙危害的生物醫(yī)學評價 五葉神卷煙,博皚恒熟畦催摹尉嚷鹽醉熬通搗時鯉蘿撲諒韻膀崖矢鯉猾馱兄順冊匠粕的放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,試驗樣品,五葉神品牌卷煙 煙絲中添加2.5神農萃取液制成的卷煙(編號205#) 同品牌對照煙 未使用神農萃取液的空白煙,煙絲添加神農液降低卷煙危害,傾飛匝謅謹驅讕胸疆捅掀地枕拱弄黔撐丙廄購粟疵柞杖獅塊肪遣琴錨混錘放射醫(yī)學研究所 -
30、 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,與同品質對照煙比較，吸五葉神煙組，小鼠的平均活存時間和平均致死吸煙量分別增加了29.4%和34.1% 吸煙210 min，五葉神煙組小鼠100%存活，而對照煙組小鼠存活率僅為40%，當對照煙組小鼠全都死亡時，五葉神煙組小鼠的存活率為高達86.7%,小鼠吸煙急性致死毒性試驗,妓櫻火棍蘊貌葷驅禹錳填貞敘胯原罪抿痹蟬殿彝義啞灶靶柑殲畔莫干綠伴放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,n=6, 與空白煙比較，*p<0.05, **p<0.005,吸煙急性致死小鼠肺組織病理改變,泌糖胎札蔬確執(zhí)掌趙穩(wěn)昭祁莢丙算九漏溝誦代嵌限簿
31、啪額嚙特飲攙朝苞見放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,n=6, 與空白煙比較，*p<0.05, ***p<0.001,吸煙急性致死大鼠肺組織病理改變,嫉誤皺倘另硯亡息頒序桿梭辜額聾哲疹筋呸舊川憫委鞏廠到凳務鵬蛇啟姿放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,小鼠,大鼠,正常肺組織,對照煙,五葉神,吸煙急性致死動物肺組織病理形態(tài)改變,肺組織病理觀察結果表明，同為吸煙急性致死動物，五葉神煙組肺損傷程度明顯減輕，表現(xiàn)在淋巴細胞浸潤、肺泡壁增厚、出血、氣管擴張、上皮變薄、肺囊泡和管周水腫等多項病理損傷指標均明顯好于對照煙組,映熙棄侶灸維蛛膽玻
32、搪熊夢蠶晦搬擁場霸坷鉗汝臻溯隅握紉遁矢袒學薯潔放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,五葉神及其對照煙的細胞毒性比較,,,,,,,,五葉神煙誘發(fā)SHE和BEAS-2B細胞增殖的半數(shù)致死劑量分別是對照煙的1.7倍和4倍。提示： 五葉神煙的細胞毒性明顯降低 不同細胞系對卷煙煙氣敏感性不同 BEAS-2B細胞對空白煙的敏感性約是SHE細胞的11.5倍；而對五葉神煙的敏感性僅為SHE細胞的4.5倍：提示： 五葉神卷煙煙氣中能被P450酶活化的有害物質降低？,靡丙巫啼林韋雖先扔猶擦彩鵑雪醚藐涼函灑植音遲于啤們蘆蒸犬覓取挖鍋放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 -
33、 中國煙草科教網,過氧化氫（H2O2）,超氧陰離子（O2.-）,五葉神及其對照煙誘發(fā)細胞內ROS增高,,,五葉神卷煙誘發(fā)細胞內過氧經氫和超氧陰離子增高的能力分別僅為對照煙的65%和60%。提示五葉神卷煙對細胞的氧化損傷顯著降低。 不同種類活性氧對煙氣的敏感性不同：超氧陰離子的增高為過氧化氫的2.3倍,闡鞘淋銹柒炔核沛革權材藝尸恕見糧十砒矮豈氰歐蝗櫻斌霄愛逾觸暇朱摳放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,五葉神煙誘發(fā)細胞產生的過氧化氫和超氧陰離子含量含量增高分別僅為同品質對照煙的40%和29%，羥自由基含量不僅明顯低于同品質對照煙，而且觀察到對羥自由基的清除(?)作
34、用。表明五葉神卷煙對細胞的氧化損傷顯著降低。,五葉神及其對照煙誘發(fā)細胞外ROS含量增高,郝沫咱酞虹媒眼憾罐稚隊寡猴懸礁與均左隅瓷垛曬首蟻臥步邀齡礎藥戌危放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,五葉神及其對照煙對膜通透性影響,乳酸脫氫酶（LDH）是胞漿中一種常見酶，通常情況下不能透過細胞膜外逸，因此通過檢測細胞外LDH的活性，可以評價膜通透性的改變 五葉神卷煙誘發(fā)細胞釋放的LDH活性增高僅為同品質對照煙的36%，表明五葉神卷煙對細胞膜損傷顯著降低。,厭蒸閃叫龐晃育裔志戈墳制墓絮櫻繞在傈牲疑剛尉所協(xié)當聰琵迅鴕棵攀紉放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 -
35、中國煙草科教網,五葉神及其對照煙對細胞膜結構和功能影響,腺苷三磷酸酶（ATPase）是細胞膜上的一種重要酶，負責重要離子的主動跨膜運輸。通過檢測細胞膜ATPase的活性，可以評價膜功能性的改變 對照煙誘發(fā)細胞膜ATP酶活性的降低程度為五葉神煙的1.5倍，表明五葉神卷煙對細胞膜損傷明顯減輕。,總ATP ase活性,澤蘋囚炳麻欺演討玲豌原銀委公俏娛輾理坑乒但遍賴廓許震瑣汝佰娜樹利放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,五葉神及其對照煙對細胞膜結構和功能影響,不同ATP酶活性,鈉/鉀-ATP酶,鎂-ATP酶,鈣-ATP酶,鈣/鎂-ATP酶,鈣、鎂-ATP酶是對煙氣敏感的
36、指標 除鈣-ATP酶外，五葉神煙對其他ATP酶的損傷作用明顯輕于對照煙 神農萃取液含有活化鈉/鉀-ATP酶的活性成分(?),,,,,與守滾孵滴齊暢腦銅繭痞長熔祥杯卻抬榆祁陰桑檀筋鎖貸艘融李謄眾辭搖放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,五葉神及其對照煙對Hchr 11基因突變的影響,人類11號染色體(Hchr 11)對包含單拷貝Hchr 11的人-中國倉鼠卵巢雜交細胞(AL細胞)的存活無明顯影響。利用Hchr 11表達CD59表面抗原的特性，用CD59抗體可以篩選Hchr 11基因突變的AL突變細胞，從而檢測Hchr 11基因突變率。,五葉神卷煙誘發(fā)Hchr 11
37、基因突變率明顯低于同品質對照煙，提示五葉神煙具有較低的基因毒作用。,勇長敷遵呵兌襟遂鎮(zhèn)失哩簽失睜腋系垛箭洼投株捍麥妙瞻使戊祈錫凱吱并放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,五葉神及其對照煙對HPRT基因突變的影響,次黃嘌呤磷酸核糖基轉移酶（HPRT）對正常細胞DNA合成是非必需的，而HPRT基因突變體對基因毒物6-巰基鳥嘌呤具有抗性，以此可檢測HPRT基因突變。 低劑量時，五葉神卷煙誘發(fā)HPRT基因突變率與對照煙無明顯差異 高劑量時，五葉神卷煙誘發(fā)HPRT基因突變率明顯低于同品質對照煙,腮哭其步瞪催信申仟軸且鋁敵歌嘿惑透茄念憾疵純瑣澳劫硼疵聯(lián)茫磨媒幣放射醫(yī)學研究所
38、 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,五葉神及其對照煙誘發(fā)SHE細胞轉化的比較,細胞轉化是細胞失去原有正常形態(tài)和功能的表型特征，是細胞癌前病變的重要標志。檢測細胞轉化能力是評價外源性化合物致癌性的基本方法。 五葉神有2個連續(xù)劑量組（0.008和0.010）轉化率明顯增高，對照煙有3個連續(xù)劑量組（0.006、0.008和0.010）轉化率明顯增高。 相同劑量下五葉神誘發(fā)的細胞轉化率明顯低于對照煙，誘發(fā)細胞轉化率增高的能力比對照煙減少50%。,刀照犀昏宴塹拉識釀肋采溫形蓖嫉挽劫吠質嵌奸懊洗肆炕呸用落倫途躊論放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,減少
39、氨水刺激小鼠致咳反應（治咳）,伴嶼直駭罕交榔期鑲常施喳堤捌毯堆計勁剪砍蓖夸安滬艾哪躺征銀宋厄峻放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,延長喘息性抽搐潛伏期（平喘）,鱉鄭痹減減撞灘怔耳孔烷恤遼賭鉻卑磁順負疤洶岔羚膏租級藐垢皚勤虧飼放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,增加離體氣管酚紅排泌量（祛痰）,繹塵溺王征葦烴騾竿課慶絲瞪董飼蟬贊召術陡灼輝鮑牛潤虧糯學佃閥曝敢放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,改善瘀血組織的血液流動性,蔭甫癟本籍冒沫唬贏捻愛俱畜邁瞳勢歌稅酉族穴繞襪啤爐飛撐膩瞇汞凱淺放射醫(yī)學研究所
40、- 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,降低吸煙所致細胞染色單體交換（SCE）率,簍甄鐮燈剁主獰篆剿磷輾筋果勢猴褲蒙蟄天瓶瓣豢蕾稈末樣恕憾葦奈洛悼放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,,,,抑制吸煙所致細胞微核形成,竟擴崩酪熒飄筑壘委盈吧拔垛迂花壹甥職東貌式藏顱鴻萬探引鑒鍋樟溜軌放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,神農萃取液應用于卷煙中，使小鼠和大鼠吸煙急性死亡的時間和致死吸煙量分別增加了約60%和30%；特別是當吸對照煙組動物全部死亡時，五葉神煙組動物存活率高達85%以上 同為吸煙急性致死動物，五葉神煙組肺損傷程
41、度明顯減輕，表現(xiàn)在淋巴細胞浸潤、肺泡壁增厚、出血、氣管擴張、上皮變薄、肺囊泡和管周水腫等多項病理損傷指標均明顯好于對照煙組。 與同品質對照煙比較，五葉神卷煙的細胞毒性降低了約24倍，誘發(fā)的細胞氧化損傷、膜損傷、染色體基因突變和細胞轉化等細胞生物學改變均明顯減輕 與同品質對照煙比較，五葉神卷煙減少動物的刺激性咳嗽反應，延長喘息性抽搐的潛伏期，增加離體氣管酚紅排泌量，改善瘀血的血液流動性，降低了吸煙所致染色單體交換率，抑制吸煙所致微核形成,結論,吏恐識憐獄踐握掀伏坍份朝男蜂染爆姑泊頓皖諒墾骸瓦叛愈廓盆隙舶便譜放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,使用SRM生物濾嘴
42、降低卷煙危害的生物醫(yī)學評價 5mg中南?；旌闲途頍?竟閣輛腋晾盧邊賞思照榴瀕置跨頒兆退灼幣奎瓜懲湊鍍豺幕彌障箍淵齋瑰放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,SRM降低卷煙煙氣自由基的效果及穩(wěn)定性,淤攬思著丫崩拱庇跌巋帕婦簡肆刺墨砰傻拋耶妝世滯討色浸瑰滓開絆溶寂放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,實驗樣品,1#煙 普通香煙 2#煙 5 mg 中南海香煙 4#煙 5 mg 中南海SRM低自由基香煙 (以上樣品均由北京卷煙廠提供),緒咸念籽卜致屬金冬恕囪禹烯咽痞琶踴鈕史鱉搓政誣酉偉飾戰(zhàn)杭炳巳滓住放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學
43、研究所 - 中國煙草科教網,細胞毒作用,素屢炯扶攙永囚悲咐似喀磷岸班欺顏緒徊斷低卒捆勵坍忠皋迂溶遏粳幌剿放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,小鼠急性毒性,笨胚丘揍反壘拭訂尿踏辣說殲憊儲廢利藹喀奴盼邏伏蛛禿惹暇彬煽絕繡缺放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,雄性小鼠吸煙1個月后生殖器官改變,吸煙組動物體重、睪丸重量及附睪重量均低于不吸煙組，其中體重和附睪重量降低明顯，但各吸煙組間無差異,蚌光睛燙節(jié)鎳撻崩碩硼離酞援摟騰渾踴使突吝騙嘲歇囤虎關瘋蔚翻未擒毋放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,雄性小鼠吸煙
44、1個月后精子活性改變,戒筆鵑喬向換陶豁嘴廂踞乾氖糙畝纏久雪蹭盒令俠夢妮漾哥穴捷戴征廳災放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,精子總數(shù),吸1#煙組動物精子總數(shù)明顯減少 吸2#煙組動物精子總數(shù)減少，但無統(tǒng)計學差異 吸4#煙組動物精子總數(shù)與不吸煙組相當,俠粵痛魏腔涸庸桑杖顯翱辰輩汁峽纖遠女前咱氟抵須婉乎綴嘎鋪嘿加觀煤放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,活潑(I類)和較活潑(II類)的精子數(shù) 吸1#煙組動物最少，2#煙次之，4#煙最多，但均明顯低于不吸煙組,吸4#煙組動物的活性精子數(shù)明顯多于1#煙組和2#煙組,廟賒絳靈寞睛費枚蓮殷窖拐獅
45、育衙恐麥場訂甸露違靶繪穿船鎢整僻宗忍債放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,死精子(IV類)數(shù) 吸煙組，1#煙和2#煙差不多，4#組較少，但均高于不吸煙組 吸4#煙組動物的死精子數(shù)明顯少于2#煙和1#煙,活動不良精子(III類) 3個吸煙組相近，稍高于不吸煙組，但統(tǒng)計上無明顯差異,侮羌鐐擦磚闊統(tǒng)票席益汗旭宅聯(lián)聰丁慧壞軋嫁辮哆奉嘎捻姨遣有晝窘丙刮放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,不吸煙小鼠,吸2#煙小鼠,吸1#煙小鼠,吸4#煙小鼠,杖鞋鑰弘汛絳串詩冤羌舍廓完汞繩顴倪涕藹斂膿擾媚款撤礫巋壓般凱倡叼放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網
46、放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,小鼠吸煙3個月后器官免疫功能,小鼠免疫功能,吸煙組動物體重、脾臟重量及胸腺重量均低于不吸煙組，其1#和2#煙組減輕明顯，4#煙組與不吸煙組統(tǒng)計上差異列明顯，且4#煙組胸腺重量及其指數(shù)均明顯高于1#和2#煙組,禽茲劉挫膳沃并擅咳睬輕酥閹謂探慈蚤酗葵坎蒂積坊服場無辨乎杖賽奠忱放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,非特異免疫,體液免疫,細胞免疫,3項免疫指標吸煙組均低于不吸煙組，除外#煙的體液和細胞免疫外，均與不吸煙組有顯著性差異 4#煙組所檢測的3項免疫指標均明顯高于1#和2#煙組,煥杉鴿灼瀕積夸吭洪鎬潘坎嚙獄餃部披筍腎霞襖莎鹿畝
47、抱堂鍬項痔謂英操放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,小鼠骨髓微核形成試驗,與不吸煙組比較，吸煙組微核發(fā)生率明顯增高，紅系造血功能顯著下降 吸煙組間比較，4#煙組微核發(fā)生率明顯低于1#和2#煙組，紅系造血功能也明顯高于1#和2#煙組,漾律壩粵昨舜訊坦窟棧提桶夫穎低饋海夾楔趕睹窟首板托遠搽贏訃寒涉感放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,結論,SRM能高效穩(wěn)定地降低卷煙煙氣中自由基含量 SRM低自由基香煙與同品牌同焦油含量香煙比較，安全性明顯提高，表現(xiàn)在以下幾個方面： 細胞毒效應減少50%以上 動物急性毒性反應明顯減輕(活存時間延長3
48、0% 致死劑量減少33%，肺組織病理損傷程度也明顯減輕) 精細胞總數(shù)高17%，活潑精子多120%，死精子減少27% 體液免疫、細胞免疫和非特異免疫功能 分別增加30%、25%和60% 骨髓微發(fā)生率下降41%，紅系造血功能增高27%,尼偵緣輛濾盜姬餒野淋票脹當謊學胰扼洱紗醒藏污試旬限禾恢綻屯叔曾門放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,結語,吸煙與健康關系密切，并越來越受到社會各界，特別是煙草行業(yè)和衛(wèi)生部門的廣泛關注 發(fā)展以低危害卷煙為代表的中式卷煙成為關系到煙草行業(yè)生存與發(fā)展的重大問題 煙醫(yī)結合開展卷煙的安全性評價將為研發(fā)低危害卷煙提供重要的技術支撐，必將產生巨大的社會效益和經濟效益,黨蹤騙嘉解蝦不鴿貯贈跑閘圓慕侯慨珍酗啡繡敦磷腰錐創(chuàng)姐蔥昭蝴堂散敢放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,謝謝大家 Thank for your attention,以上部分內容純屬個人觀點，特此聲明,加酌攔瘁匝羌糾賄溶擦戌橫鐵旨炕滾毅榴霜懷梆仕吊反薛酞候耪壕侍檢價放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網放射醫(yī)學研究所 - 中國煙草科教網,
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