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1、
幽門螺旋桿菌尿素酶抗體檢測(cè)操作程序
(膠體金法)
1.目的
用于定性檢測(cè)人血液樣本中的胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體,可用于臨床輔助診斷消化道胃幽門螺旋桿菌感染。
2.范圍
適用于臨床對(duì)幽門螺旋桿菌尿素酶抗體的檢測(cè)。
3. 檢驗(yàn)原理
試劑盒應(yīng)用滲濾式間接法原理,將幽門螺旋桿菌尿素酶固定在硝酸纖維素膜載體上,待檢血清中幽門螺旋桿菌尿素酶抗體IgGY與抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物,加入膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體與復(fù)合物結(jié)合,根據(jù)是否形成肉眼可見的紅色圓斑(T端),判斷結(jié)果。硝酸纖維素膜上的質(zhì)控區(qū)固定有兔抗鼠IgG,加入膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體后與之結(jié)合形成紅色圓
2、斑(C端)。
4.主要組成成分
4.1 反應(yīng)板:4.2cm×2.8cm×0.7cm上下對(duì)合、中央有直徑為0.9±0.05cm小孔的塑料小盒,其內(nèi)主要為固定有油門螺旋桿菌尿素酶抗原的硝酸纖維素膜和吸水材料
4.2 試劑Ⅰ:0.02mol/L PH 7.4 PBS溶液,內(nèi)含吐溫-20.
4.3 試劑Ⅱ:主要含有膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體、穩(wěn)定劑和防腐劑。
5.儲(chǔ)存條件及有效期
產(chǎn)品應(yīng)儲(chǔ)存在2℃-8℃條件中,不能冷凍;有效期9個(gè)月。拆封后未用完的反應(yīng)板應(yīng)放入密封袋2℃-8℃保存,應(yīng)在一個(gè)月內(nèi)用完。
6. 樣本要求
6.1 樣本采集:按照臨床采血技術(shù)規(guī)范操作采集靜脈血,
3、采集的靜脈血置室溫30分鐘或37℃水浴15-20分鐘后,低速離心(2000轉(zhuǎn)/分-3000轉(zhuǎn)/分)5-10分鐘,分離血清。
6.2 樣本保存:若分離后的血清不能及時(shí)檢測(cè),應(yīng)將樣本保存在2℃-8℃條件下,若保存時(shí)間超過7天,則需將樣本保存在-20℃以下并避免反復(fù)凍融,以免抗體效價(jià)降低。
6.3 當(dāng)明顯溶血(血紅蛋白濃度>1.96g/L)、黃疸(膽紅素濃度>40.1umol/L)、高血脂(甘油三酯濃度>7.0mmol/L),影響血清的滲透性并明顯增加反應(yīng)膜的背景顏色,對(duì)結(jié)果的判斷有影響,此類標(biāo)本不宜使用。
7.檢測(cè)步驟
7.1 滴加二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中,待完全滲入;
7.2 滴加100
4、ul血清于反應(yīng)板孔中,待完全滲入;
7.3 滴加二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中,待完全滲入;
7.4 滴加二滴試劑Ⅱ于反應(yīng)板孔中,待完全滲入;
7.5 滴加二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中,待完全滲入;
7.6 操作完成后5分鐘內(nèi)判斷結(jié)果。
8.檢測(cè)結(jié)果的判斷
陽性:反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑,T端出現(xiàn)紅色圓斑,為幽門螺旋桿菌尿素酶抗體陽性。
陰性:反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑,T端不出現(xiàn)紅色圓斑,為幽門螺旋桿菌尿素酶抗體陰性。
失效:反應(yīng)板孔中C端不出現(xiàn)紅色圓斑,或C、T端均不出現(xiàn)紅色圓斑,表示失效。可能是由于操作不正確或試劑盒失效,應(yīng)重試。
9.參考范圍
正常:陰性 異常:陽性。
5、
10.臨床意義
10.1 本方法僅用于定性檢測(cè)人血液中的胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體。
10.2 陽性結(jié)果僅表明:胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體的存在,但不能作為胃幽門螺旋桿菌感染的唯一判斷標(biāo)準(zhǔn),確診應(yīng)結(jié)合臨床癥狀及其他診斷技術(shù)。也可根據(jù)問診結(jié)果,3-6個(gè)月內(nèi)沒有進(jìn)行根除治療者,陽性結(jié)果即為現(xiàn)癥感染;3-6個(gè)月內(nèi)有進(jìn)行根除治療者,陽性結(jié)果為疑似感染,需進(jìn)行其它方法檢測(cè),或過一段時(shí)間進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。
10.3 病人曾經(jīng)感染過幽門螺旋桿菌,其抗體也在較長時(shí)間存在于體內(nèi),因此抗體陽性結(jié)果并不能說明病人正感染著幽門螺旋桿菌。
10.4 陰性結(jié)果表明:樣本中檢測(cè)不到幽門螺桿菌抗體,但不能完全排除胃幽門螺
6、旋桿菌感染的可能性,可能是胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體沒有出現(xiàn)或是抗體水平過低不能被本試劑盒檢測(cè)出來。也可根據(jù)問診結(jié)果,3-6個(gè)月內(nèi)有進(jìn)行治療者,陰性結(jié)果即為根除治療成功;3-6個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行根除治療者,陰性結(jié)果即為未感染幽門螺桿菌。
11.檢驗(yàn)方法的局限性
11.1 本試劑僅用于檢測(cè)幽門螺旋桿菌尿素酶抗體而非直接檢測(cè)幽門螺旋桿菌,因而陽性結(jié)果并不能確診是幽門螺旋桿菌感染。檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考,不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù),為達(dá)到診斷目的,對(duì)患者狀況的診斷應(yīng)結(jié)合患者臨床體征與癥狀和其他的檢測(cè)結(jié)果綜合分析。
11.2 抗體含量低的血清樣本,不能被檢測(cè)出來是可能的。部分幽門螺旋桿菌感染的患者,
7、不產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生少量的抗體。此時(shí),可能顯示陰性結(jié)果。
11.3 當(dāng)檢測(cè)結(jié)果與臨床不符時(shí),應(yīng)用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)或用其他方法確診。
11.4 感染初期,IgG未產(chǎn)生或滴度很低會(huì)導(dǎo)致陰性結(jié)果,應(yīng)提示患者在7-14天內(nèi)復(fù)查,復(fù)查時(shí)同時(shí)平行檢測(cè)上次采集的標(biāo)本以確認(rèn)是否出現(xiàn)血清學(xué)轉(zhuǎn)陽或滴度明顯升高。
11.5 免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者,其血清學(xué)抗體檢測(cè)的參考價(jià)值有限。
12.產(chǎn)品性能指標(biāo)
12.1 滲透時(shí)間:膜的滲透時(shí)間小于60秒。
12.2 符合率:陽性符合率和陰性符合率為100%。
12.3 批內(nèi)精密度:陽性參考品和陰性參考品檢測(cè)的重復(fù)性為100%。
12.4 批間精密度:陽
8、性參考品和陰性參考品檢測(cè)的重復(fù)性為100%。
12.5 最低檢出限:陽性參考品用陰性參考品進(jìn)行倍比稀釋至1:2作為最低檢出限。
12.6 交叉反應(yīng):本試劑盒的檢測(cè)與解脲支原體抗體陽性血清存在交叉反應(yīng),未發(fā)現(xiàn)與以下病原體抗體陽性血清存在交叉反應(yīng):乙肝病毒、丙肝病毒、克萊伯氏菌。
12.7 干擾試驗(yàn):樣本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時(shí)不影響結(jié)果,當(dāng)RF濃度高于350IU/ml時(shí),有假陽性出現(xiàn),ANA、ENA自身抗體,通常不影響試驗(yàn)結(jié)果。血清中膽紅素、血紅蛋白、血脂在通常情況下不會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果,但當(dāng)它們的濃度分別超過40.1umol/L、1.96g/L、7.0mmol/L將干擾結(jié)果
9、觀察,此類標(biāo)本不宜使用。
13.注意事項(xiàng)
13.1 本品僅供體外檢測(cè)之用。
13.2 在盒簽標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。
13.3 血液收集后盡快分離血清或血漿避免溶血,只有清亮的非溶血樣本可用。
13.4 請(qǐng)將低溫保存的血清或血漿樣本恢復(fù)到室溫后使用,不要反復(fù)凍融。
13.5試驗(yàn)中所有樣品均應(yīng)作為傳染性物品處理。
13.6檢測(cè)線的顏色強(qiáng)度隨樣品中幽門螺桿菌尿素酶抗體濃度的變化而變化,但不宜用于檢測(cè)幽門螺桿菌尿素酶抗體的濃度。
14.參考文獻(xiàn):
14.1 尚紅,王毓三,申子瑜主編《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》
14.2 三明博峰生物科技有限公司幽門螺旋桿菌尿素酶抗體檢測(cè)使用說明書
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參考分析#