自身免疫病及免疫檢驗
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1、免 疫 學(xué) 檢 驗 第 二 十 五 章 自 身 免 疫 病 及 免 疫 檢 驗 目 錄 概 述 1 自 身 免 疫 病 的 發(fā) 病 機 制2 自 身 免 疫 病 檢 驗3 自 身 抗 體 檢 測 實 驗 選 擇 的 原 則4 1.自 身 耐 受 (self-tolerance) 正 常 情 況 下 , 免 疫 系 統(tǒng) 對 宿 主 自 身 的 組 織 和 細胞 不 產(chǎn) 生 免 疫 應(yīng) 答 。 2.自 身 免 疫 (autoimmunity) 當(dāng) 某 種 原 因 使 自 身 耐 受 性 破 壞 時 , 免 疫 系 統(tǒng)就 會 對 自 身 組 織 成 分 、 細 胞 成 分 及 其 產(chǎn) 物 發(fā) 生 免
2、疫 應(yīng) 答 。 第 一 節(jié) 概 述一 、 基 本 知 識 3.自 身 免 疫 病 (autoimmune disease, AID) 自 身 免 疫 應(yīng) 答 過 強 或 持 續(xù) 時 間 過 久 , 表 現(xiàn) 為 質(zhì)和 量 的 異 常 , 所 產(chǎn) 生 的 自 身 抗 體 和 ( 或 ) 自 身 致 敏淋 巴 細 胞 對 表 達 自 身 靶 抗 原 的 細 胞 和 組 織 發(fā) 動 攻 擊 ,導(dǎo) 致 損 傷 或 功 能 障 礙 , 并 出 現(xiàn) 相 應(yīng) 臨 床 癥 狀 。 二 、 自 身 免 疫 病 的 分 類1.按 病 程 分 為 急 性 和 慢 性 兩 種2.按 病 因 清 楚 與 否 分 為 原
3、發(fā) 性 與 繼 發(fā) 性 兩 種3.按 受 累 的 解 剖 系 統(tǒng) 分 為 結(jié) 締 組 織 病 、 神 經(jīng) 肌 肉疾 病 、 消 化 系 統(tǒng) 病 和 內(nèi) 分 泌 疾 病 等4.按 自 身 抗 原 的 分 布 范 圍 分 為 器 官 特 異 性 和 非 器官 特 異 性 兩 類 分 類 疾 病結(jié) 締 組 織 系 統(tǒng) 性 紅 斑 狼 瘡 、 干 燥 綜 合 征 、 類 風(fēng) 濕 性 關(guān) 節(jié) 炎 、 混 合性 結(jié) 締 組 織 病內(nèi) 分 泌 系 統(tǒng) 橋 本 甲 狀 腺 炎 、 G raves病 、 Addison病 、 胰 島 素 依 賴 性糖 尿 病消 化 系 統(tǒng) 萎 縮 性 胃 炎 、 潰 瘍 性 胃
4、 炎 、 原 發(fā) 性 膽 汁 性 肝 硬 化血 液 系 統(tǒng) 惡 性 貧 血 、 自 身 免 疫 性 溶 血 性 貧 血 、 特 發(fā) 性 血 小 板 減 少性 紫 癜心 血 管 系 統(tǒng) 風(fēng) 濕 性 心 肌 炎泌 尿 系 統(tǒng) 腎 小 球 腎 炎呼 吸 系 統(tǒng) 特 發(fā) 性 肺 纖 維 化神 經(jīng) 系 統(tǒng) 重 癥 肌 無 力 、 多 發(fā) 性 神 經(jīng) 炎 皮 膚 蕁 麻 疹 按 發(fā) 病 部 位 的 解 剖 系 統(tǒng) 分 類 器 官 特 異 性 自 身 免 疫 病 器 官 非 特 異 性 自 身 免 疫 病患 者 的 病 變 常 局 限 于某 一 特 定 的 器 官 , 由對 器 官 的 特 異 性 抗 原的
5、 免 疫 應(yīng) 答 引 起 全 身 性 或 系 統(tǒng) 性 自 身免 疫 性 疾 病 ; 患 者 的病 變 可 見 于 多 種 器 官及 結(jié) 締 組 織 ( 結(jié) 締 組織 病 或 膠 原 病 ) 按 自 身 抗 原 的 分 布 范 圍 分 類 器 官 特 異 性病 名 自 身 抗 原橋 本 甲 狀 腺 炎 甲 狀 腺 球 蛋 白 和 甲 狀 腺 微 粒 體甲 狀 腺 功 能 亢 進 (G raves病 ) TSH 受 體Addison病 腎 上 腺 皮 質(zhì) 細 胞自 身 免 疫 性 萎 縮 性 胃 炎 胃 壁 細 胞 、 內(nèi) 因 子潰 瘍 性 結(jié) 腸 炎 結(jié) 腸 黏 膜 細 胞重 癥 肌 無 力 乙
6、 酰 膽 堿 受 體交 感 性 眼 炎 眼 晶 狀 體 蛋 白胰 島 素 依 賴 型 糖 尿 病 胰 島 細 胞胰 島 素 抵 抗 型 糖 尿 病 胰 島 素 受 體 原 發(fā) 性 膽 汁 性 肝 硬 化 小 膽 管 上 皮 細 胞 器 官 非 特 異 性病 名 自 身 抗 原SLE 細 胞 核 成 分 、 細 胞 漿 成 分RA 變 性 IgG 、 類 風(fēng) 濕 相 關(guān) 的 核 抗 原SS 涎 腺 上 皮 細 胞混 合 性 結(jié) 締 組 織 病 細 胞 核 (RNP)自 身 免 疫 性 溶 血 性 貧 血 紅 細 胞特 發(fā) 性 血 小 板 減 少 性 紫 癜 血 小 板特 發(fā) 性 白 細 胞 減
7、少 癥 白 細 胞硬 皮 病 細 胞 核 蛋 白 、 細 胞 核 染 色 體 著 絲 點 多 發(fā) 性 肌 炎 細 胞 核 蛋 白 三 、 自 身 免 疫 病 的 共 同 特 點1. 血 清 中 有 自 身 抗 體 或 自 身 反 應(yīng) 性 致 敏 T淋 巴 細 胞 。自 身 抗 體 和 ( 或 ) 自 身 反 應(yīng) 性 T細 胞 作 用 于 靶 抗 原 所在 的 組 織 細 胞 , 導(dǎo) 致 組 織 損 傷 和 功 能 障 礙 。2.可 復(fù) 制 出 與 AID相 似 的 動 物 模 型 , 并 可 通 過 血 清 或致 敏 的 淋 巴 細 胞 使 疾 病 被 動 轉(zhuǎn) 移 。3 有 一 定 的 遺 傳
8、 傾 向 。 病 情 轉(zhuǎn) 歸 與 自 身 免 疫 反 應(yīng) 的強 度 密 切 相 關(guān) 。4 部 分 自 身 免 疫 病 好 發(fā) 于 女 性 , 且 發(fā) 病 率 隨 年 齡 增長 而 上 升 。5 免 疫 抑 制 劑 治 療 有 效 但 不 能 根 治 。 一 、 自 身 抗 原 形 成第 二 節(jié) 自 身 免 疫 病 的 發(fā) 病 機 制1.隱 蔽 抗 原 的 釋 放 2.自 身 抗 原 改 變交 感 性 眼 炎 3.分 子 模 擬4 表 位 擴 展 2.B細 胞 的 多 克 隆 激 活二 、 免 疫 細 胞 和 免 疫 調(diào) 節(jié) 功 能 的 異 常3.調(diào) 節(jié) 性 T細 胞 的 功 能 異 常1.T、
9、 B細 胞 的 異 常 活 化4. MHC-II類 分 子 異 常 表 達 三 、 遺 傳 因 素自 身 免 疫 病 HLA 基 因 相 關(guān) 系 數(shù)強 直 性 脊 柱 炎 B27 87 4全 身 性 紅 斑 狼 瘡 DR2/DR3 5 81型 糖 尿 病 DR3/DR4 10類 風(fēng) 濕 性 關(guān) 節(jié) 炎 DR4 4 2Graves病 DR3 3橋 本 氏 甲 狀 腺 炎 DR5 3多 發(fā) 性 硬 化 DR2 4 1重 癥 肌 無 力 DR3 2 5HLA 基 因 與 自 身 免 疫 病 相 關(guān) 性 舉 例 四 、 生 理 因 素五 、 環(huán) 境 因 素 1.自 身 免 疫 病 的 發(fā) 病 率 隨
10、年 齡 增 長 呈 上 升 趨 勢 ; 2.自 身 免 疫 病 的 發(fā) 病 也 具 有 明 顯 的 性 別 差 異 , 女性 發(fā) 病 率 較 高 自 身 免 疫 病 的 發(fā) 生 與 日 曬 、 潮 濕 、 寒 冷 等 環(huán) 境 因素 可 能 有 關(guān) 。 1.自 身 抗 體 介 導(dǎo) 細 胞 破 壞 六 、 自 身 免 疫 病 的 病 理 損 傷 機 制病 理 機 制 : II型 超 敏 反 應(yīng)常 見 疾 病 : 新 生 兒 溶 貧 、 重 癥 肌 無 力 、Graves病 自 身 免 疫 性 溶 血 性 貧 血 重 癥 肌 無 力 Graves病 3.自 身 反 應(yīng) 性 T細 胞 引 發(fā) 炎 癥
11、性 損 傷 2.循 環(huán) 免 疫 復(fù) 合 物 介 導(dǎo) 組 織 損 傷 病 理 機 制 : III型 超 敏 反 應(yīng)病 理 機 制 : IV型 超 敏 反 應(yīng) 抗 核 抗 體 ( antinuclear antibody, ANA) 是 以 真 核 細 胞 的 核 成 分 為 靶 抗 原 的 自 身 抗 體 的總 稱 ; 在 某 些 因 素 作 用 下 改 變 細 胞 核 某 些 成 分 性 質(zhì) ,激 發(fā) 機 體 產(chǎn) 生 許 多 抗 不 同 核 成 分 的 抗 體 。第 三 節(jié) 自 身 免 疫 病 檢 驗一 、 自 身 抗 體 的 檢 測( 一 ) 抗 核 抗 體 檢 測 l ANA主 要 是 I
12、gG, 也 有 IgM、 IgA、 IgD和 IgE;l ANA無 器 官 特 異 性 和 種 屬 特 異 性 ;l ANA主 要 存 在 于 血 清 中 ;l 將 檢 出 ANA作 為 AID存 在 的 依 據(jù) 。 抗 DNA抗 體 : 抗 dsDNA/抗 nDNA、 抗 ssDNA/抗 dDNA等 抗 組 蛋 白 抗 體 (AHA): 抗 H1、 抗 H2A、 抗 H2B、 抗 H3、 抗 H4抗 體 等 抗 非 組 蛋 白 抗 體 : 抗 nRNP/抗 U1RNP、 抗 Scl-70、 抗 SSA、 抗 Sm、 抗 SSB、 抗 Jo-1、 抗 Rib抗 體 、 AnuA、 抗 DNP、
13、 抗 DM53抗 體 抗 RANA抗 體 、 抗 著 絲 點 、 抗 Ku抗 體 等 抗 核 仁 抗 體 : 抗 PM-Scl抗 體 、 抗 Th/To抗 體 、 抗 U3-RNP、 抗 4-6-S-RNA抗 體 等1.ANA的 類 型 和 臨 床 意 義 ANA譜 抗 天 然 DNA (native DNA,nDNA) 抗 體 , 又 稱 抗 雙 鏈DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗 體 。 抗 變 性 DNA (denatured DNA,dDNA) 抗 體 , 又 稱 抗 單 鏈DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗 體 。對 S
14、LE有 高 特 異性 ;SLE診 斷 標(biāo) 準(zhǔn) 之一 緩 解 期 降 低70% 90%SLE活 動 期 增 高 藥 物 療 效抗 dsDNA抗 體 抗 DNA抗 體 抗 組 蛋 白 抗 體 ( anti-histonic antibody,AHA) : 由 H1、 H2A、 H2B、 H3和 H4五 個 亞 單 位 , 各 自 都 有 特 異 性 抗 體 ; AHA檢出百分率 抗dsDNA507090100 藥 物 誘 導(dǎo)性 狼 瘡 只能 檢 出 此 SLEAHA AHA 抗 組 蛋 白 抗 體 可 提 取 性 核 抗 原 (extractable nuclear antigen, ENA) 是
15、 鹽 水 可 提 取 性 核 抗 原 的 總 稱 , 是 非 組 蛋 白 的 核 蛋白 , 屬 酸 性 核 蛋 白 抗 原 , 由 許 多 小 分 子 量 的 RNA和 多 肽 組 成 。 抗 ENA抗 體 對 類 風(fēng) 濕 有 特 異 診 斷 價 值 的 ENA: 抗 nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗 體 ; 抗 Sm抗 體 ; 抗 SSA抗 體 ; 抗 SSB抗 體 ; 抗 Scl-70抗 體 ; 抗 Jo-1抗 體 ; 抗 核 糖 體 抗 體 。 核 蛋 白 (DNP) 由 DNA和 蛋 白 質(zhì) 組 成 。 DNP抗 原 有 不溶 性 及 可 溶 性 兩 種 , 分 別 產(chǎn)
16、生 相 應(yīng) 的 抗 體 。 檢 出百 分率 抗DNP20406080 SLE非 活 動 期 SLE活 動 期 抗 不 溶 性 DNP抗 體抗DNP抗DNP100 RA滑膜 液 中抗DNP抗 可 溶 性 DNP抗 體 ( 1) 抗 DNP抗 體 抗 核 小 體 抗 體 ( anti-nucleosome antibody, AnuA)l核 小 體 是 細 胞 核 染 色 質(zhì) 的 基 本 組 成 單 位 ;l細 胞 凋 亡 致 核 小 體 大 量 蓄 積 , 并 誘 導(dǎo) B細 胞 產(chǎn) 生 AnuAlAnuA是 SLE特 異 的 標(biāo) 志 性 抗 體 ???dsDNA抗 體 抗 核 小 體 抗 體 抗
17、 dsDNA和 抗 Sm陰 性 的 SLE陽 性率 為 60% 80%, 特 異 性 97%。 ( 2) 抗 核 小 體 抗 體 常 見 AID的 ANA陽 性 檢 出 率疾 病 ANA( %) 疾 病 ANA( %)SLE 95 SS 70 80MCTD 95 PM/DM 30PSS 85 95 RA 20 30 2.ANA的 檢 測 方 法 l 稀 釋 患 者 血 清 可 做 定 量 檢 測 , 1:80稀 釋 仍 呈 陽 性 對 診 斷SLE有 較 大 參 考 價 值 。 ( 1) 間 接 熒 光 免 疫 法 抗 核 抗 體 核 型 與 相 關(guān) 疾 病核 型 熒 光 圖 形 抗 體 相
18、關(guān) 疾 病周 邊 型 核 周 環(huán) 狀 熒 光 抗 dsDNA SLE、 慢 活 肝 炎均 質(zhì) 型 核 呈 均 質(zhì) 熒 光 抗 DNA、 AHA、 AnuA SLE、 RA、 PSS、 慢 性肝 病斑 點 型 核 內(nèi) 顆 粒 狀 熒 光 抗 ENA MCTD、 SLE、 PSS、 SS、 PM核 仁 型 核 仁 有 熒 光 抗 核 仁 抗 體 PSS、 雷 諾 現(xiàn) 象 、 SLE著 絲 點 型 核 漿 細 小 相 同 顆 粒熒 光 抗 著 絲 點 PSS、 CREST綜 合 征 均 質(zhì) 型 抗 核 抗 體 核 型 著 絲 點 型核 仁 型斑 點 型 用 間 接 ELISA檢 測 抗 dsDNA抗
19、 體 、 抗 組 蛋白 抗 體 和 抗 核 小 體 抗 體 。( 2) ELISA法 SDS-PAGE 加 待 檢 血 清形 成 分 子 大 小 不 同 區(qū) 帶 分 離電 轉(zhuǎn) 移PVDF膜 或 NC膜抗 ENA與 相 應(yīng) 抗 原 特 異 結(jié) 合抗 人 IgGHRPENA抗 ENA抗 人 IgGHRP( 3) 免 疫 印 跡 法 顯 色 并 判 讀 結(jié) 果 l 類 風(fēng) 濕 因 子 (rheumatoid factor, RF): 抗 變 性 IgG的 自 身 抗 體 , 可 為 19S的 IgM, 也 可 為 7S的 IgG和 IgA。 可 與 人 變 性 IgG結(jié) 合 , 但 不 與 正 常
20、IgG發(fā) 生 凝 集 。 RF可 在 RA患 者 檢 出 , 約 70% 90%的 血 清 、 約 60%的滑 膜 液 可 檢 出 IgG類 的 RF;( 二 ) 類 風(fēng) 濕 因 子 測 定 l IgG類 抗 體 與 相 應(yīng) 抗 原 結(jié) 合 后 發(fā) 生 變 性 ;l炎 癥 過 程 亦 可 發(fā) 生 IgG變 性 , 構(gòu) 成 自 身 抗 原 , 刺激 機 體 產(chǎn) 生 各 種 抗 IgG抗 體 ;l滑 膜 液 中 的 IgG類 RF與 變 性 IgG結(jié) 合 可 形 成 中 等大 小 的 免 疫 復(fù) 合 物 , 相 比 血 清 中 的 IgM類 RF更 易致 病 。 RF檢 測 方 法 最 常 采 用
21、 的 檢 測 方 法 。 以 吸 附 在 聚 苯 乙 烯 膠 乳 顆 粒 上 的 IgG作 診斷 試 劑 , 與 待 檢 血 清 中 的 RF結(jié) 合 后 , 出 現(xiàn) 膠乳 凝 集 顆 粒 。 此 法 的 靈 敏 度 和 特 異 性 不 高 , 且只 能 檢 出 血 清 中 的 IgM類 的 RF。1.間 接 膠 乳 凝 集 試 驗 稀 釋 待 檢 血 清 至 一 定 濃 度 后 , 加 入 定 量 的變 性 IgG診 斷 試 劑 , 即 用 透 射 比 濁 或 速 率 散 射 比濁 儀 , 檢 測 血 清 中 的 RF。 此 法 快 速 、 敏 感 性 高 、精 密 度 高 、 穩(wěn) 定 性 好
22、 、 可 定 量 分 析 , 但 仍 只 能檢 測 IgM類 RF。 2.免 疫 比 濁 法 IgM、 IgG和 IgA類 RF可 用 ELISA檢 測 , 臨床 上 多 采 用 雙 抗 原 夾 心 法 或 間 接 ELISA進 行 測定 。 3. ELISA法 ( 三 ) 其 他 自 身 抗 體 測 定其 他 自 身 抗 體 的 檢 測 方 法 與 臨 床 意 義自 身 抗 體 的 類 型 檢 測 方 法 臨 床 意 義抗 甲 狀 腺 球 蛋 白 抗 體 (A-TG ) 熒 光 免 疫 法 、 ELISA、 RIA 橋 本 甲 狀 腺 炎抗 甲 狀 腺 過 氧 化 物 酶 抗 體 ELISA
23、 G raves 病 ,橋 本 甲 狀 腺 炎抗 乙 酰 膽 堿 受 體 抗 體 (AchR-Ab) ELISA、 RIA 重 癥 肌 無 力抗 平 滑 肌 抗 體 (SMA) 熒 光 免 疫 法 、 ELISA、 RIA 自 身 免 疫 性 肝 炎 ,慢 性 活 動 性 肝 炎 ,原 發(fā) 性 膽 汁 性 肝 硬 化抗 線 粒 體 抗 體 (AMA) 熒 光 免 疫 法 、 ELISA、 RIA RA, SS, SLE, 原 發(fā) 性 膽 汁 性 肝 硬 化 ,慢 性 活 動 性 肝 炎 ,持 續(xù) 性 肝 阻 塞 抗 胃 壁 細 胞 抗 體 熒 光 免 疫 法 惡 性 貧 血抗 胰 島 素 抗
24、體 ( IAA) ELISA 胰 島 素 依 賴 性 糖 尿 病抗 精 子 抗 體 ( AsAb) ELISA、 熒 光 免 疫 法 不 育 癥 ,不 孕 癥抗 紅 細 胞 抗 體 直 接 凝 集 試 驗 、 Coombs試 驗 新 生 兒 溶 血 ,自 身 免 疫 性 溶 血 性 貧 血抗 血 小 板 抗 體 ELISA法 、 ABC-ELISA法 原 發(fā) 性 血 小 板 減 少 性 紫 癜 、 輸 血 史抗 心 磷 脂 抗 體 ( ACA) RIA、 ELISA SLE, 血 栓 ,自 發(fā) 性 流 產(chǎn) ,血 小 板 減 少抗 腎 小 球 基 底 膜 抗 體 (G BM-Ab) 熒 光 免
25、疫 法 G oodpasture綜 合 征 ,狼 瘡 腎 炎 二 、 細 胞 檢 查( 一 ) 淋 巴 細 胞 檢 測1 特 異 性 致 敏 淋 巴 細 胞2 淋 巴 細 胞 數(shù) 量 和 比 例如 淋 巴 細 胞 轉(zhuǎn) 化 試 驗 或 吞 噬 細 胞 移 動 抑 制 試 驗檢 測 淋 巴 細 胞 的 總 數(shù) 、 T、 B細 胞 分 類 與 計 數(shù) 、CD4/CD8亞 群 比 例 等 進 行 ( 二 ) 狼 瘡 ( lupus erythmatosus, LE) 細胞 試 驗 LE細 胞 為 胞 漿 內(nèi) 含 有 大 塊 狀 聚 合 DNA的 中 性 粒 細胞 。 有 75 80 的 SLE病 人
26、LE呈 陽 性 , RA、 結(jié) 節(jié) 性動 脈 炎 、 多 發(fā) 性 硬 化 癥 、 硬 皮 病 、 部 分 肝 炎 、 皮 肌炎 和 變 態(tài) 反 應(yīng) 病 等 偶 爾 亦 可 呈 陽 性 反 應(yīng) 。 三 、 免 疫 復(fù) 合 物 和 補 體 檢 測四 、 細 胞 因 子 檢 測 1.CK在 自 身 免 疫 病 的 免 疫 病 理 損 傷 中 有 重 要 作 用 。 2.檢 測 CK, 對 研 究 疾 病 的 發(fā) 生 機 制 、 了 解 病 情 、 指導(dǎo) 治 療 均 有 意 義 。 對 診 斷 部 分 自 身 免 疫 病 和 判 斷 疾 病 的 活 動 情況 有 一 定 的 意 義 。 1.篩 選 試
27、 驗 與 確 診 性 試 驗 的 合 理 組 合 。2.結(jié) 合 臨 床 癥 狀 選 擇 性 檢 測 相 關(guān) 的 自 身 抗 體 。3.切 忌 盲 目 的 全 面 檢 測 自 身 抗 體 。4.通 常 以 抗 核 抗 體 作 為 篩 選 試 驗 , ANA在 許 多 AID中 可 呈 陽 性 。5.ANA陽 性 時 , 再 進 行 針 對 特 異 性 靶 抗 原 成 分 的 自 身 抗 體 的 檢 測 , 達 到 明 確 診 斷 的 目 的 。 第 四 節(jié) 自 身 抗 體 的 檢 測 實 驗 選 擇 的 原 則 一 、 自 身 抗 體 檢 測 的 一 般 原 則 二 、 實 驗 室 方 法 的
28、選 擇 及 結(jié) 果 的 確 認IIF法 篩 選 試 驗 ANA抗 dsDNA IB法ELISA法IFA法特 異 性 實 驗抗 原 基 質(zhì) 片 (如 Hep-2、 小鼠 肝 印 片 /切 片 ), 加 入 自身 抗 體 后 與 抗 原 相 結(jié) 合 ,再 與 熒 光 標(biāo) 記 的 抗 抗 體 結(jié)合 , 根 據(jù) 細 胞 的 熒 光 著 色進 行 定 性 、 定 位 分 析 。 以 特 異 性 純 化 抗 原 包 被載 體 , 檢 測 特 異 性 自 身抗 體 ; 但 特 異 性 抗 原 不易 純 化 或 不 明 確 , 用ELISA和 IBT等 檢 測 自身 抗 體 存 在 一 定 誤 差 。 小 結(jié) 自 身 免 疫 病 是 由 于 某 種 原 因 使 自 身 免 疫 應(yīng) 答 過強 或 持 續(xù) 時 間 過 久 , 表 現(xiàn) 為 質(zhì) 和 量 的 異 常 , 所 產(chǎn)生 的 自 身 抗 體 和 ( 或 ) 自 身 致 敏 淋 巴 細 胞 對 表 達自 身 靶 抗 原 的 細 胞 和 組 織 發(fā) 動 攻 擊 , 導(dǎo) 致 損 傷 或功 能 障 礙 , 并 出 現(xiàn) 相 應(yīng) 臨 床 癥 狀 。
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