血細(xì)胞染色方法的探討分析研究生物技術(shù)專業(yè)

摘要目的：本論文用不同的染色方法對(duì)血涂片染色，觀察血細(xì)胞的形態(tài)，比較對(duì)血細(xì)胞的不同辨別結(jié)果。方法：通過Giemsa染色法、Wright染色法和 Giemsa-Wright混合液染色3種染色方法對(duì)血涂片進(jìn)行染色和血細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果：在染色時(shí)間上Giemsa 染液染色時(shí)間最長、Wright 染液染色時(shí)間最短、Giemsa-Wright 混合液染色時(shí)間介于兩者之間，Giemsa 染液的細(xì)胞核染色效果好，細(xì)胞質(zhì)界限清晰，但細(xì)胞質(zhì)中的顆粒染色效果較差；Wright 染液染對(duì)細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的顆粒染色效果較好，細(xì)胞質(zhì)的界限不淸；Giemsa-Wright 混合染色具細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的顆粒染色效果較好，細(xì)胞界限清晰。結(jié)論：Giemsa染色法、Wright染色法和 Giemsa-Wright 混合染色三種染色方法均能有效的協(xié)助甄別血細(xì)胞，Giemsa-Wright 混合染色方法相較于前兩種方法染色效果更為明顯，值得廣泛應(yīng)用。關(guān)鍵詞：血細(xì)胞；血涂片；Giemsa染色法；Wright染色法；Giemsa-Wright 混合染色法；細(xì)胞形態(tài)學(xué) ABSTRACTObjective: In this paper, different staining methods were used to stain the blood smears, observe the morphology of blood cells, and compare the different results of blood cells. Methods: The blood smears were stained by Giemsa staining, Wright staining and Giemsa-Wright staining. The morphological changes were observed. Results:The Giemsa-Wright mixture had the shortest staining time, the Giemsa-Wright mixture had the shortest dyeing time, the Giemsa-Wright mixture had the same staining time, and the cytoplasmic boundaries were clear, but the cytoplasm was clear The staining effect of Wright dye on the nucleus and cytoplasm was better, and the cytoplasmic boundaries were not clear. Giemsa-Wright mixed staining had better staining effect on the nuclei and cytoplasm, and the cell boundaries were clear . Conclusion: Giemsa staining method, Wright staining method and Giemsa-Wright hybrid staining method can effectively help to identify blood cells. Giemsa-Wright mixed staining method is more obvious than the first two methods, and it is worthy to be widely used.Key Words: blood cells; blood smear; Giemsa staining; Wright staining; Giemsa-Wright mixed staining; cell morphology目錄摘要IABSTRACTII第一章 緒論1第二章 材料與方法22.1 實(shí)驗(yàn)材料22.1.1 主要儀器22.1.2 試劑及藥品22.1.3主要試劑的配制22.2 實(shí)驗(yàn)方法42.2.1 血涂片的制作42.2.2 Giemsa 染色42.2.3 Wright 染色42.2.4 Giemsa-Wright 染色42.2.5 注意事項(xiàng)5第三章 結(jié) 果53.1 Giemsa 染色53.2 Wright 染色63.3 Giemsa-Wright 染色6第四章 探究不同條件下三種染色方法的效果64.1 不同染色條件下Giemsa的染色效果64.2 不同條件下 Wright染液的染色效果74.3 不同條件下Giemsa-Wright混合染液染色效果7第五章 討 論74.1 Giemsa 氏染色法74.2 Wright 氏染色法84.3 Wright-Giemsa 混合法8附 圖 表11參考文獻(xiàn)14REFERENCES15致謝18第一章 緒論血細(xì)胞存在于血液中,隨著血液的流動(dòng)遍及全身。以哺乳動(dòng)物來說，扮演了主要的免疫的角色的是血細(xì)胞中的白細(xì)胞【1】。白細(xì)胞能在病菌侵入人體時(shí)，穿過毛細(xì)血管壁，聚集到病菌入侵部位，將病菌包圍并吞噬。要從根本上解決疾病的危害，必須對(duì)不同種類生物的免疫機(jī)制進(jìn)行深入研究，因此對(duì)血細(xì)胞的研究在生物免疫反應(yīng)科研進(jìn)程中起著至關(guān)重要的作用，但目前對(duì)很多類生物的血細(xì)胞的分類及其功能研究仍然不是很充分，不同研究者之間尚未達(dá)成共識(shí)，這對(duì)地球上生物免疫學(xué)的研究造成了很大的障礙【2-4】。近百年來國內(nèi)外的學(xué)者應(yīng)用光鏡、電鏡、組織化學(xué)、免疫學(xué)單克隆抗體、物理染色等技術(shù)對(duì)血細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察分類，觀察細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。尤其是血細(xì)胞染色法簡便易于操作，對(duì)于動(dòng)物的生理和病理研究具有十分重要的意義,特別是對(duì)于與血液及細(xì)胞免疫相關(guān)的疾病的鑒定意義重大，血細(xì)胞染色觀察至今仍是最基本的診斷手段。 血細(xì)胞涂片染色效果的好壞,對(duì)于細(xì)胞的形態(tài)觀察和分類具有決定性的意義【5-7】。通過研究血細(xì)胞染色方法，來進(jìn)一步分析血細(xì)胞對(duì)免疫反應(yīng)的作用，對(duì)于解決人類和其他生物的疾病具有重大的意義。 本文就三種血細(xì)胞染色方法進(jìn)行探討，觀察三種方法下血細(xì)胞的不同染色效果以及各自對(duì)細(xì)胞分類影響。 第二章 材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1 主要儀器培養(yǎng)皿 保溫箱分析檢測的儀器滅菌箱臺(tái)式離心機(jī) 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板顯微鏡2.1.2 試劑及藥品姬姆氏色素(BS) 鐘樓區(qū)北港海拓實(shí)驗(yàn)儀器經(jīng)營部瑞氏色素(BS)上海展云化工有限公司磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、甲醛 連云港市德邦精細(xì)化工有限公司乙醇、二甲苯、鹽酸、氫氧化鈉連云港市德邦精細(xì)化工有限公司 2.1.3主要試劑的配制（1） Giemsa染液的配制 取姬姆氏色素(BS) 0.5g放入研缽中，先加入少量甘油，研磨至無顆粒為止，然后再將全部甘油倒入，放56溫箱中2小時(shí)后，加入甲醇33ml，將配制好的染液密封保存棕色瓶內(nèi)(最好于04保存)【8-11】。（2） Wright 染液的配制 將瑞氏色素(BS) 0.1g放入清潔干燥研缽中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，將已溶解的染料倒入棕色試劑瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，60ml的甲醇全部用完為止。染液配好后放于室溫下，一周后即可使用。新配制染液效果較差，放置時(shí)間延長，染色效果越好。久置應(yīng)密封，以免甲醇揮發(fā)或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油23ml，除可防止甲醇過早揮發(fā)外，也可使細(xì)胞著色清晰。（3） Giemsa-Wright染液的配制 取 姬姆氏色素(BS)、瑞氏色素(BS)各1g，放入研缽，慢慢把10ml甘油倒入研缽內(nèi)，仔細(xì)研磨至完全溶解，然后加入500ml甲醛，將配制好的染液密封保存棕色瓶內(nèi)。（4） Sorensen緩沖液的配制 稱取磷酸二氫鉀（無水）1 g，磷酸氫二鈉（無水）1 g；加蒸餾水至1000 ml使其溶解。配好后磷酸鹽緩沖溶液應(yīng)校正PH值，其范圍在PH6.47.0即可，后塞緊瓶口備用。2.2 實(shí)驗(yàn)方法2.2.1 血涂片的制作 用蘸有體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精的脫脂棉,對(duì)將要取血的部位（如指尖）進(jìn)行消毒；用已消毒的針尖刺破指尖的皮膚；擠出一滴血,滴在已消毒的載玻片上； 另取一片載玻片作推片,將推片自血滴左側(cè)向右移動(dòng)；當(dāng)血滴均勻地附著在兩片之間后,再將推片向左平穩(wěn)地推移（兩片成3045度夾角）； 推出均勻的血膜【12】。2.2.2 Giemsa 染色 染色方法: 待血涂片干燥后，將涂片放入濕盒，加 4 6 滴 Giemsa 染色液覆蓋血膜，染色 35 分鐘，然后加 8 12 滴Sorensen緩沖液染色 25 分鐘，自來水沖洗，晾干，封藏。2.2.3 Wright 染色 染色方法: 將血涂片放入濕盒，加入數(shù)滴 Wright 染色液，使染液將涂片完全覆蓋，染色2 分鐘，然后加等量的Sorensen緩沖液 ，靜止 3 分鐘，自來水沖洗，晾干，封藏。2.2.4 Giemsa-Wright 染色 染色方法: 待血膜干燥后，滴加 Giemsa-Wright染色液 4 5 滴，染色 3 分鐘，然后加Sorensen緩沖液 2 3 倍，混勻，染色 15分鐘，自來水沖洗，晾干，封藏。2.2.5 注意事項(xiàng)（1）PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。由于細(xì)胞中各種蛋白均為兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定。對(duì)某一蛋白質(zhì)而言，如環(huán)境PH<PI（蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)），則該蛋白質(zhì)帶正電荷，即在酸性環(huán)境中正電荷增多，易與酸性伊紅結(jié)合，染色偏紅；相反，則易與美藍(lán)天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。為此，應(yīng)使用清潔中性的玻璃片，稀釋液必須用PH：6.46.8的確良緩沖液。沖洗玻片必須用流水【13】。（2） 未干透的血膜不能染色，否則染色時(shí)血膜易脫落。（3） 染色時(shí)間與染液濃度、染色溫度成反比；而與細(xì)胞數(shù)量成正比。（4）沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)用流水沖去，以防染料沉淀在血膜上。（5） 如血膜上有染料顆粒沉積，可加少許甲醇溶解，但需立即用水沖洗掉甲醇，以免脫色。（6）染色過淡，可以復(fù)染。復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液，創(chuàng)造良好的染色環(huán)境，而后加染液，或加染液與緩沖液的混合液，不可先加染液。（7） 染色過深可用水沖洗或浸泡水中一定時(shí)間，也可用甲醇脫色。（8）染色偏酸或偏堿時(shí)，均應(yīng)更換緩沖液再重染。 第三章 結(jié) 果3.1 Giemsa 染色 顯微鏡下觀察血涂片，紅細(xì)胞呈粉紅色，在厚薄均勻處，略有碟狀感。白細(xì)胞漿中顆粒清楚，并顯示出各種細(xì)胞特有的色彩。細(xì)胞核染紫紅色或藍(lán)紫色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。粒細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞本身的界限分明 ( 圖版 : 圖G1 圖G4 ) ，但細(xì)胞質(zhì)中的顆粒染色較差，分辨的不是十分清晰【13-16】。3.2 Wright 染色 顯微鏡下觀察血涂片，血膜外觀染成淡紫紅色。顯微鏡下，紅細(xì)胞呈粉紅色，在厚薄均勻處，略有碟狀感。白細(xì)胞漿中顆粒清楚，并顯示出各種細(xì)胞特有的色彩。細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。該 結(jié) 果 與Giemsa 滴染相似，粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的顆粒著色較好，但細(xì)胞核不如 Giemsa 滴染時(shí)清晰( 圖版 : 圖W1 圖W4) ，細(xì)胞質(zhì)界限不是十分清晰，有時(shí)看不到細(xì)胞質(zhì)界限【17】。3.3 Giemsa-Wright 染色 顯微鏡下觀察血涂片，紅細(xì)胞呈桔紅色 ；中性粒細(xì)胞核藍(lán)色 ，顆粒呈紫色 ；嗜酸性粒細(xì)胞核呈藍(lán)色 ，顆粒呈紅色或桔紅色；嗜堿性粒細(xì)胞核呈暗藍(lán)紫色,，顆粒呈深藍(lán)黑色；淋巴細(xì)胞核深藍(lán)紫色,，胞質(zhì)天藍(lán)色；單核細(xì)胞核藍(lán)紫色，胞質(zhì)灰藍(lán)色。其中以嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞顆粒最清晰。Giemsa-Wright 滴染時(shí)，染色時(shí)間介于 Giemsa 和 Wright 染色之間，其結(jié)果是粒細(xì)胞 的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)分均著色較好，細(xì)胞質(zhì)中的顆粒成分和細(xì)胞界限均清洗可見 ( 圖版：圖G-W1圖G-W4)。第四章 探究不同條件下三種染色方法的效果4.1不同染色條件下Giemsa的染色效果 采用Giemsa染液,在不同染液用量、染色時(shí)間、分色方式和分色時(shí)間等條件下,對(duì)血涂片進(jìn)行染色。顯微鏡下觀察血細(xì)胞的染色效果，部分結(jié)果見表1。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中我們還對(duì)比了不同溫度條件下姬姆薩染液的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)38條件下的染色效果比25條件下的效果好。38溫度條件下尤以下四種情況染色效果為佳,可以對(duì)血細(xì)胞的種類進(jìn)行明確區(qū)分:染色20min,分色1min；染色10min，水洗分色；珍適量染料染2030min；染色2030min，50%乙醇分色5s。4.2不同條件下 Wright染液的染色效果 采用 Wright染液:緩沖液=1:2的比例，改變?nèi)旧珪r(shí)間、分色方式和分色時(shí)間等染色條件,對(duì)血涂片進(jìn)行染色,顯微鏡下觀察染色效果,部分結(jié)果見表2。由表2可知,瑞氏染液在25染色15min后,用95%或者50%的乙醇分色5s的染色條件下可以取得較好的染色效果。4.3不同條件下Giemsa-Wright混合染液染色效果 比較采用Giemsa-Wright混合染液,通過改變?nèi)旧珪r(shí)間、染色溫度,分色方式和分色時(shí)間、染液用量和濃度等染色條件,對(duì)血涂片進(jìn)行染色。顯微鏡下觀察染色效果。部分結(jié)果見表3，由表3可知,25下混合染液在以下三種染色條件下可以取得較好的染色效果:混合染液:緩沖液=l:2，25染10min水洗；適量混合染液25染10min,水洗；25染15min，50%乙醇洗5s。 第五章 討 論血細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察 ,是研究動(dòng)物免疫的一個(gè)重要環(huán)節(jié),血涂片染色的質(zhì)量,直接影響到觀察結(jié)果。正常情況下 ,染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有密切關(guān)系, 即染液愈濃 , 室溫愈低 ,細(xì)胞愈多 ,則所需的染色時(shí)間愈長。因此要想染出結(jié)果比較理想的血涂片, 必須根據(jù)具體情況靈活掌握, 必要時(shí)沖洗前在低倍鏡下觀察有核細(xì)胞是否染色清楚,核著色是否分明【18】。4.1 Giemsa 氏染色法 Giemsa 氏染色法優(yōu)點(diǎn)是從對(duì)血涂片的染色結(jié)果可以看到，細(xì)胞核染色清晰，細(xì)胞界限分明。由于 Giemsa 染液在染色過程中不會(huì)揮發(fā)，血涂片在染色過程中不易污染，染色過程易控制，染色效果對(duì)染液 pH 值要求高，對(duì)該血細(xì)胞的染色以 pH6.8染色效果最好；缺點(diǎn)是從結(jié)果可以看到，Giemsa 氏染色法對(duì)粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的顆粒成分的染色不是十分清晰，染色時(shí)間長。由于本實(shí)驗(yàn)也使用了以蒸餾水沖洗后，短暫地浸入加進(jìn)幾滴的碳酸鋰的蒸餾水中，以辨別染成紅色的結(jié)構(gòu); 而以用水沖洗后，短暫地浸入加進(jìn)幾滴稀鹽酸的蒸餾水中，以辨別染成藍(lán)色的結(jié)構(gòu)，但 Giemsa 氏染色法對(duì)粒細(xì)胞中的顆粒顯示仍然不是十分理想，故在血涂片染色時(shí)不建議使用。4.2 Wright 氏染色法 Wright 氏染色法優(yōu)點(diǎn)是從對(duì)血涂片的染色結(jié)果優(yōu)點(diǎn)是從對(duì)血涂片的染色結(jié)果可以看到，對(duì)粒細(xì)胞質(zhì)中的顆粒成分染色十分清晰，染色時(shí)間短，結(jié)果出現(xiàn)的快；缺點(diǎn)是對(duì)細(xì)胞核的染色不如 Giemsa 氏染色法染的清晰，細(xì)胞界限不清，再之，Wright 染色液中由于沒有加入甘油，則易使染液揮發(fā)而造成血涂片的污染，從而使其染色過程不易掌握。由于該方法所使用的試劑配制簡單，染色時(shí)間短等特點(diǎn)，可以用于血細(xì)胞的染色和血細(xì)胞類型的辨別，尤其可以在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，用于血細(xì)胞的辨別。4.3 Wright-Giemsa 混合法 Wright-Giemsa 混合法優(yōu)點(diǎn)是從血涂片的染色結(jié)果可以看到，Wright-Giemsa 混合法不僅對(duì)粒細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的顆粒成分著色清晰，同時(shí)細(xì)胞界限也較為分明，該方法起到了2 種染液互補(bǔ)的作用； 缺點(diǎn)，染液易揮發(fā)和變性快，易污染，為了避免該缺點(diǎn)，使用 Wright-Giemsa 染液時(shí)，第一，要在濕盒中進(jìn)行; 第二，在滴染時(shí)要多加入幾滴染液； 第三，在血涂片染色結(jié)束后，要盡快用水沖洗，用自來水沖洗要比用蒸餾水或緩沖液沖洗更方便和徹底，可通過調(diào)節(jié)自來水的水壓，及時(shí)沖去結(jié)合尚未牢固的染料沉渣，以減少污染。該法不僅可以廣泛用于血細(xì)胞的染色和血細(xì)胞的類型識(shí)別，同時(shí)也可以在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中廣泛使用，是廣泛研究血細(xì)胞的一個(gè)較好的染色方法。 筆者認(rèn)為Wright-Giemsa混合染色法之所以染色效果較好 ,主要是因?yàn)閃right染色法對(duì)粒細(xì)胞的特異性顆粒著色性比姬姆薩染色法好, 但核的染色卻不如姬姆薩染色法；而Giemsa薩染色法對(duì)細(xì)胞核著色較好 ,結(jié)構(gòu)顯示較清晰,而胞漿和特異性顆粒則染色較差。因此,采用Wright-Giemsa混合染色法可兼取二者之長,使血涂片染色效果更為理想。應(yīng)注意的是玻片必須清潔, 配制染料需用優(yōu)質(zhì)甲醇,稀釋染液需用緩沖液, 沖洗需用中性流水 ,才能保證各種細(xì)胞著色正常。 第六章 結(jié) 論 通過實(shí)驗(yàn)和觀察，我們發(fā)現(xiàn)Giemsa 染液染色時(shí)間較長，對(duì)細(xì)胞核染色效果較好，細(xì)胞質(zhì)界限清晰，但對(duì)細(xì)胞質(zhì)中的顆粒染色較差； Wright 染液染色時(shí)間較短，對(duì)細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的顆粒染色效果較好，但細(xì)胞質(zhì)的界限不淸; Giemsa-Wright 混合染色具備了兩種染液的優(yōu)點(diǎn)，時(shí)間介于兩者之間，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的顆粒染色效果較好，細(xì)胞界限清晰，該法可用于血細(xì)胞中的廣泛研究【19-20】。通過實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)對(duì)于血細(xì)胞的著色,染液的濃度對(duì)染色結(jié)果影響很大。染色時(shí)應(yīng)先滴加緩沖液,再滴加染液,以避免細(xì)胞染色過深。對(duì)于染色后的分色,如果用95%的乙醇分色,其脫色效果過強(qiáng),一般不推薦使用；用50%乙醇分色,其脫色效果適中,可供調(diào)節(jié)的范圍較大,是首選分色劑；而用緩沖液分色的效果不很理想,細(xì)胞類型區(qū)分不夠鮮明。附 圖 表 圖版：血細(xì)胞染色方法的比較表1 38不同染色條件下姬姆薩染液部分染色結(jié)果染色程序顆粒著色細(xì)胞核著色細(xì)胞質(zhì)著色備注染色30min,95%乙醇浸泡5s紫紅/紅淡藍(lán)/淡藍(lán)紫無色部分細(xì)胞顆粒染色過度,將核掩蓋染色30min,50%乙醇浸泡5s紅藍(lán)包藍(lán)紫色微紅三種細(xì)胞類型可以較好區(qū)分染色2min,50%乙醇沖洗分色紅包淡紫天藍(lán)色/藍(lán)色微藍(lán)/無色三種細(xì)胞類型可以較好區(qū)分染色20min,50%乙醇浸泡分色5-9s紅包深紅紫紅微藍(lán)部分細(xì)胞顆粒染色過度,將核掩蓋染色20min,PBS分色1min紅紫紅/紅淡紅脫色較好染色20min,PBS分色2min紫紅/紅紫/紅淡紅脫色較好適量染料,染20min,水洗紅/紅黑天藍(lán)/紫紅淡紅部分細(xì)胞顆粒染色過度染色10min,水洗紅/紅黑天藍(lán)/藍(lán)紫微藍(lán)三種細(xì)胞類型可以較好區(qū)分表2 25不同染色條件下瑞氏染液部分染色結(jié)果染色程序顆粒著色細(xì)胞核著色細(xì)胞質(zhì)著色備注染色10min,水洗紅或紅黑深紅淡紅顆粒染色過深染色10min,50%乙醇分色5s紅包淡紫色藍(lán)色/天藍(lán)微紅分色稍過度染色15min,50%乙醇分色5s深紅包紅色藍(lán)色/天藍(lán)微紅三種細(xì)胞類型可以較好區(qū)分染色15min,95%乙醇分色5s鮮紅/紫紅藍(lán)色微紫三種細(xì)胞類型可以較好區(qū)分表3 25不同染色條件下混合染料部分染色效果染色程序顆粒著色細(xì)胞核著色細(xì)胞質(zhì)著色備注染色10min,水洗紅黑/紅紅褐色淡紅染色過深適量混合染液1:2,染10而n,水洗紅/淡紫淡藍(lán)色微紅染色過淺1:2,染10而n,水洗紅/紫紅藍(lán)紫色淡紫部分細(xì)胞的顆粒將核掩蓋適量混合染液染色10而n,水洗紅/紫紅藍(lán)/藍(lán)紫淡紅/淡紫部分細(xì)胞的顆粒將核掩蓋染色10而n,50%乙醇分色5s紅/紫紅藍(lán)紫淡紫部分細(xì)胞的顆粒將核掩蓋染色15而n,95%乙醇洗55淡紅/無色淡紫微紫分色過度參考文獻(xiàn)1周永燦,邢玉娜,馮全英等.魚類血細(xì)胞研究進(jìn)展J.海南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2003,21(2):171-176.2 周賢君,代應(yīng)貴,王開功等.低等脊椎動(dòng)物血細(xì)胞研究概況J.水利漁業(yè),2008,28(2):9-12. 3 余燕萍,石安靜.貝類血細(xì)胞研究進(jìn)展J.動(dòng)物學(xué)雜志,1998,(5):40-44.4 孫敬鋒,吳信忠.貝類血細(xì)胞及其免疫功能研究進(jìn)展J.水生生物學(xué)報(bào),2006,30(5):601-607.5李瓊芬.血涂片觀察血細(xì)胞在臨床診斷中的重要性J.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2011,30(21):104.6盧金金.分析血涂片觀察血細(xì)胞在臨床診斷中的重要性J.中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè),2013,(29):148-149.7周暉.常見蝦蟹血細(xì)胞染色觀察及分類研究D.暨南大學(xué),2004.8王傳航,姚懷國.瑞氏-吉姆薩染色法和改良巴氏染色法對(duì)精子形態(tài)染色效果的比較C./中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第十五次男科學(xué)術(shù)大會(huì)論文集.2015:110-112.9魯懷偉,胡曉文,徐傲等.不同染色方法對(duì)肺孢子菌的診斷作用比較J.臨床輸血與檢驗(yàn),2012,14(2):147-148.10常永紅,王峰.兩種染色方法對(duì)染色體片染色效果比較J.醫(yī)學(xué)信息,2015,(45):402-403.11徐廣有,張翠香,馮化杰等.吉姆薩染色法對(duì)大腦組織凋亡細(xì)胞的染色J.解剖學(xué)雜志,2005,28(3):362-363.窗體頂端12 周海良,戴啟宇,于賀軍等.介紹一種末梢血片血細(xì)胞單一染色法J.臨床軍醫(yī)雜志,2000,28(2):69-70.13 李順義.染色技術(shù)在血細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究中的價(jià)值C./第二屆世界華人臨床生化和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)大會(huì)暨第六屆全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編.2004:24-26. 14 王強(qiáng),崔智芳,王云麗等.中華稻蝗血細(xì)胞染色方法的比較J.應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào),2011,48(4):841-844. 15 周暉,陳剛.魚類和蝦蟹血細(xì)胞染色方法J.海洋與漁業(yè),2006,(7):14,36. 16 周暉,謝數(shù)濤,龍思思等.克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)血細(xì)胞染色方法的研究J.生態(tài)科學(xué),2003,22(2):130-132.17 宋曉穎,袁寶軍,郝冀洪等.血涂片常規(guī)染色的歷史變遷與發(fā)展前景J.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2015,(9):962-967.18 趙捷,李順義.介紹一種快速血細(xì)胞染色法J.疑難病雜志,2002,1(1):50-50.19 李順義,郝冀洪.紡織染料在血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用J.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(9):967-969.20 畢召輝.血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)在發(fā)熱疾病診斷中的價(jià)值J.吉林醫(yī)學(xué),2012,33(9):1835-1835.REFERENCES1. Journal of Hainan University (Natural Science Edition),2003,21 (2): 171-176.2 Zhou Xianjun, on behalf of the expensive, Wang Kai Gong, etc. Low vertebrate blood cell research overview J. Water Conservancy, 2008,28 (2): 9-12.3 Yu Yanping, Shi Anjing. Shellfish blood cell research progress J. Acta Zoologica Sinica, 1998, (5): 40-44.4 Sun Jingfeng, Wu Xinzhong. Shellfish blood cells and its immune function research progress J. Chinese Journal of Aquatic Biology, 2006,30 (5): 601-607.5 Li Qiongfen. Blood smear to observe the importance of blood cells in clinical diagnosis J. Inner Mongolia Traditional Chinese Medicine, 2011,30 (21): 104.6 Lu Jinjin. Analysis of blood smear to observe the importance of blood cells in clinical diagnosis J. China Health Industry, 2013, (29): 148-149.7 Zhou Hui. Common shrimp and crab blood cell staining observation and classification D. Jinan University, 2004.8 Wang Chuanhang, Yao Huaiguo. Wright-Giemsa staining and improved Papanicolaou staining on the sperm morphology of the results of the comparison C. Chinese Medicine Society of the fifteenth male academic conference Proceedings .2015: 110 -112.9 Lu Huaiwei, Hu Xiaowen, Xu Ao, etc. Comparison of different staining methods on the diagnosis of Pneumocystis aeruginosa J. Clinical blood transfusion and testing, 2012,14 (2): 147-148.10 Chang Yonghong, Wang Feng. Comparison of two dyeing methods for chromosome staining J. Medical Information, 2015, (45): 402-403.11 Xu Guangyou, Zhang Cuixiang, Feng Huajie et al. Giemsa staining on the brain tissue apoptosis of cells J .Actoberat, 2005,28 (3): 362-363.The top of the form12 Zhou Hailiang, Dai Qiyu, Yu Hejun, etc. Introduce a single bloodstaining method for peripheral blood cells J. Journal of Clinical Military Medicine, 2000,28 (2): 69-70.13 Li Shunyi. The value of dyeing technology in the study of blood cell morphology C .2 The second session of the World Chinese Clinical Biochemistry and Laboratory Medicine Conference and the Sixth National Laboratory Medical Academic Conference papers .2004: 24-26 The14 WANG Qiang, CUI Zhi-fang, WANG Yun-li et al. Comparison of blood cell staining methods of Oxya chinensis J. Journal of Applied Ecology, 2011,48 (4): 841-844.15 Zhou Hui, Chen Gang. Blood and shrimp and crab blood cell staining method J. Ocean and Fishery, 2006, (7): 14,36.16 Zhou Hui, Xie Ditao, Long Si Si, etc. Procragarus clarkii (Procambarus clarkii) blood cell staining method J. Ecological Science, 2003,22 (2): 130-132.17 Song Xiaoying, Yuan Baojun, Hao Jihong, etc. Blood smear conventional staining of the historical changes and development prospects J. Laboratory Medicine, 2015, (9): 962-967.18 Zhao Jie, Li Shunyi. Introduction of a rapid blood cell staining J. Journal of Difficult Diseases, 2002,1 (1): 50-50.19 Li Shunyi, Hao Jihong. Textile dyes in the blood cell morphology test J. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 2005,28 (9): 967-969.20 Bi Zhaohui. Blood cell morphology test in the diagnosis of fever in the value of J. Jilin Medical, 2012,33 (9): 1835-1835.