AFP臨床應用及其檢測

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AFP 甲胎蛋白 臨床應用及檢測 黃崇庭2016 6 15于柳州 甲胎蛋白 AFP 甲胎蛋白 又稱甲種胎兒球蛋白 甲型胎兒蛋白 是一種糖蛋白 屬于白蛋白家族 正常情況下 來自胚胎的肝細胞和卵黃囊 胎兒出生約兩周后甲胎蛋白從血液中消失 正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20微克 升 發(fā)現AFP 由Bergstrand和Czar于1956年在胎兒血清中發(fā)現 而前蘇聯的Abelev則于1963年發(fā)現AFP的來源主要為卵黃囊和胎盤 Tatarinov于1964年在原發(fā)性肝癌患者中發(fā)現了高濃度的甲胎蛋白 之后的大量研究證明甲胎蛋白是原發(fā)性肝癌 PHC 重要的血清學標志物 并作為PHC診斷 評價療效給予后的敏感指標應用于臨床 AFP理化性質和生理作用 理化性質甲胎蛋白 Alpha FetalProtein AFP 是一種糖蛋白 分子是單一多肽鏈 屬于白蛋白家族 其主要在胎兒時期的卵黃囊和肝臟細胞中合成 分子量約為6800D AFP中蛋白質占96 碳水化合物占4 生理作用一 胚胎性白蛋白二 生長調節(jié)因子三 配體結合及運輸四 免疫抑制 T淋巴細胞誘導凋亡 AFP在臨床中的應用小結 1 在產檢及兒科疾病中的應用 2 原發(fā)性肝癌敏感的血清學標志物 3 AFP在腫瘤治療中的應用4 作為急性肝功能衰竭患者預后的標志5 在其他腫瘤中的應用 1 AFP在產檢及兒科疾病中的應用 AFP在胚胎發(fā)育期由胎兒卵黃囊和肝臟大量合成 至妊娠12wk左右 卵黃囊退化 胎兒肝臟成為合成的主要場所 胎兒時 其血清濃度很高 1 10g L 出生后12 18W AFP濃度逐漸降至10 g L以下 AFP可用作篩查神經管缺陷 非整倍體的實驗室標志物 在神經管缺損 脊柱裂 無腦兒等病理情況下 AFP可由開放的神經管進入羊水 導致其在羊水中含量顯著升高 先兆子癇 婦嬰輸血 宮內發(fā)育遲緩 胎兒死亡 AFP均有所升高 如果新生兒AFP明顯升高 提示新生兒肝炎 先天性膽道閉鎖或有能分泌AFP的胚胎性惡性腫瘤等 神經管畸形脊柱裂 先兆子癇 胎兒死亡 新生兒肝炎先天性膽道閉鎖惡性葡萄胎 AFP水平下降表明存在染色體異常 非整倍體 如三體 以及Turner s綜合征 腦積水 胎兒生長受限等 唐氏綜合癥腦積水 2 AFP作為原發(fā)性肝癌血清標記物 肝癌 livercancer 是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤 死亡率較高 由肝臟內的細胞所引發(fā)的癌病 稱之為 原發(fā)性肝癌 由身體其他器官的癌癥轉移到肝臟而形成的肝臟惡性腫瘤 稱為繼發(fā)性肝癌 也稱 轉移性肝癌 原發(fā)性肝癌根據組織學分類可以分為 肝細胞型 膽管細胞型 和 混合型 初期癥狀并不明顯 晚期主要表現為肝痛 乏力 消瘦 黃疸 腹水等癥狀 中國是乙肝大國 我國的肝癌多在乙肝肝硬化的基礎上發(fā)展而來 丙肝病人也在逐漸增加 乙肝后也會發(fā)展為肝癌 肝癌按腫瘤形態(tài)基本分型 1 塊狀型 2 結節(jié)型3 彌漫型4 小肝癌 肝癌診斷一般過程 動態(tài)觀察AFP含量的變化 AFP含量大于400 g L 影像學檢查 B超 CT及磁共振成像等 肝癌 持續(xù)一個月以上 懷疑 確診 肝癌腫瘤標記物 肝癌腫瘤血清學標記物包括 AFP 是目前使用最廣 最經典的原發(fā)性肝癌特異性標記物 GP73 是一種跨膜糖蛋白 在研究成人巨細胞性肝炎病原體時首次發(fā)現 在正常肝臟組織 GP73主要表達于膽管上皮細胞 而在肝細胞則無表達或表達很少 但在HBV及腺病毒感染的肝組織中 肝細胞高表達GP73 但膽管細胞表達不明顯示 早期肝癌GP73在敏感度和特異度優(yōu)于AFP 有望成為新的更有效的標記物 SF 是人體含鐵最豐富的一種棕色蛋白復合物 存在網狀內皮系統(tǒng)如肝 脾 骨髓等處 當肝癌擠壓肝細胞使之壞死或肝癌伴有肝硬化時 儲存于肝臟中的SF大量流入血循環(huán)中 引起血清SF升高 鐵蛋白有H和L兩種亞基形式 H亞基和鐵的親和力小 L亞基和鐵親和力大 正常人肝臟的鐵蛋白是以L亞基為主 而肝癌患者肝臟的鐵蛋白是以H亞基為主 H亞基鐵蛋白亦被稱作酸性鐵蛋白 AIF 被視為一種肝細胞癌的標志物 AFU 是一種溶酶體酸性水解酶 廣泛分布于人體各種組織及體液中 其中以肝 腎等組織活性較高 細胞內的AFU主要位于溶酶體內 AFU對小細胞肝癌及AFP陰性的肝癌診斷價值較大 其血清水平與腫瘤大小無關 升高幅度與AFP無相關性 國內有研究者對24例肝細胞癌患者進行血清AFU和AFP相關研究 發(fā)現AFU診斷敏感性為87 特異性為78 而AFP則分別為68 和89 提示AFP診斷的敏感性高但特異較AFP低 聯合檢測可提高肝癌的早期診斷率 根據AFP肝癌的診斷標準是 AFP定量 400ng ml持續(xù)一個月以上 凡SGPT正常 AFP 200ng ml持續(xù)8周 并能排除妊娠 活動性肝炎 生殖腺胚胎性腫瘤 即可診斷肝癌 但不是所有肝癌患者AFP水平者都是增高的 約70 左右肝癌病人AFP陽性 所以AFP不高 亦不能否定肝癌 大量臨床研究表明 慢性肝炎和肝硬化患者 AFP常呈低濃度增高 200ng ml 并持續(xù)陽性 低持陽 低持陽1年內肝癌出現率為44 49 表明早期表達AFP的肝細胞是癌前病變的征象之一 AFP可成為肝癌化學預防的依據 早期肝癌與非癌肝病的鑒別診斷 在非惡性肝病中約有15 51 慢性肝病及33 急性肝炎AFP含量超過正常水平 兩者鑒別如下 SGPT數倍于正常者多為活動性肝病 如SGPT 200單位以上者 以肝炎可能性為大 而SGPT400ng ml者多為肝癌 肝癌AFP定量呈上升曲線 肝病則隨病情穩(wěn)定AFP降至正常 AFP在腫瘤細胞中高效特異性表達 因此將外源治療基因或細胞因子置于AFP特異性啟動子或增強子的下游 原發(fā)性肝癌中特異性的反式作用因子作用于該啟動子 激活轉錄 實現目的基因的選擇性表達 可克服原發(fā)性肝癌基因治療有效性低 不良反應大的弊端 AFP可以作為抗癌藥物結合物的載體 依據腫瘤細胞表面AFP受體過表達 將AFP與細胞毒性藥物偶聯 AFP通過受體介導的胞吞途徑結合并選擇性地進入腫瘤細胞 從而將結合的藥物特異性地送到靶細胞發(fā)揮作用 且對于由于膜受體和 或轉運體的高表達而引起耐藥的人類腫瘤細胞具有較高的療效 3 AFP在腫瘤治療中的應用 4 作為急性肝功能衰竭患者預后的標志 重型肝炎患者在發(fā)生肝細胞炎癥壞死后能否有效的再生 與其預后有關 AFP增高者 預后較好 原因在于 1 AFP能促進肝細胞生長因子受體表達 從而促進肝細胞增殖 分化 再生 2 AFP出現于有絲分裂旺盛的肝細胞和 或 幼稚肝細胞 在急性病毒性肝炎 活動性慢性乙型肝炎和肝硬化時 AFP升高標志肝細胞再生活躍 3 AFP具有促進細胞增殖的作用 1 各種源于內胚層的胃腸道腫瘤 2 內胚竇瘤 卵黃囊瘤 3 生殖細胞癌等 5 AFP在其他腫瘤中的應用 總結血清甲胎蛋白陽性增高的原因 肝癌 陽性率80 90 隨著病情惡化它在血清中的含量會急劇增加 急性肝炎慢性肝炎肝硬化 孕婦 其他腫瘤的肝轉移 一過性升高隨著病情的恢復 血清甲胎蛋白值會下降 生殖細胞腫瘤陽性率50 AFP陽性 AFP應用注意事項 1 部分肝硬化病人會長期出現AFP達到上千 但多年都沒有肝癌的跡象 2 同時發(fā)現約20 的晚期肝癌病人 直至病故前 AFP仍不超過10 3 AFP與腫瘤大小有一定的相關性 即腫瘤越小 陽性率越低 4 AFP也與病理類型相關 癌細胞分化I級和II級 AFP相對較低 級時相對較高 AFP目前的檢測方法 1 化學發(fā)光免疫分析 CLIA 是采用現代全自動儀器操作控制 單克隆抗體標記發(fā)光物質吖啶酯或堿性磷酸酶促化學發(fā)光最新的微磁粒子標記反應的技術 是光的高靈敏性 單克隆抗體高特異性結合的自動化 智能化程序的現代免疫定量技術 目前以電化學發(fā)光免疫分析為代表 實現了免疫測定的自動化 具有測定結果穩(wěn)定 線性范圍寬 測定速度快 試劑保存期長等優(yōu)點 但檢測成本高 2 時間分辨熒光免疫分析法 TRFIA TRFIA的基本原理是以具有獨特熒光特性的鑭系元素及其螯合物為標記物 用時間分辨熒光免疫分析檢測儀測定最后產物中的熒光強度 根據產物熒光強度和相對熒光強度的比值 判斷反應體系中分析物的濃度 從而達到定量分析的目的 TRFIA同樣需要昂貴的檢測儀器 檢測的成本也高 不適合用于篩查大范圍人群血清AFP 3 放射免疫分析 IA 具有較高的靈敏度和檢測的準確度 可以滿足臨床檢測要求 且檢測成本較適中 但該法采用放射性元素標記抗體 試劑中存在放射性物質環(huán)境污染的潛在危險性及標記物半衰期短 保存時間短 批間差異大的缺點 4 酶法檢測 ELISA 多采用雙抗體夾心法的反應原理檢測待測樣本中AFP含量 包括定性試驗和定量檢測 操作簡單 具有較高的靈敏度 不需要特殊的儀器 檢測費用低 適合自然人群早期肝癌的普查 是發(fā)現早期肝癌的重要手段之一 不足之處是檢測過程中影響因素較多 重復性不高 檢測范圍較窄 定性試驗結果的判斷受主觀人為因素的影響 每次定量檢測必須做標準曲線 5 金標快速檢測以膠體金作為指示標記 交聯 AFP單克隆抗體 與血清中AFP結合 形成雙抗體夾心一步法 是當前國際上最簡便理想的AFP檢測方法 金標法是一種定性的檢測方法 具有簡單 方便 快速的特點 不需要使用儀器進行輔助 僅憑肉眼就可以對檢測結果進行觀察 十分有利于健康體檢篩查中應用 其優(yōu)點是在檢測AFP上具有較高的特異性 準確性 檢測成本低 檢測時間短 操作人員無需特殊的培訓即可完成檢測 不足之處是敏感性不高 無法定量檢測 6 透射比濁法將AFP抗體吸附于乳膠顆粒上 通過抗原抗體形成免疫復合物 造成吸光度變化 實現了生化儀測定的自動化 具有測定結果穩(wěn)定 線性范圍寬 測定速度快 試劑保存期長等優(yōu)點 而且檢測成本高 與發(fā)光相關性好 Thankyou 祝愿每個人都有一個健康的肝臟